首页 > 文献资料
-
降糖消渴颗粒含药血清对C2C12细胞胰岛素抵抗的影响
目的:研究降糖消渴颗粒含药血清(JGDS)对骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖消耗量及葡萄糖摄取率的影响.方法:JGDS处理棕榈酸、小牛血清白蛋白(BSA)诱导而致胰岛素抵抗(IR)的C2C12骨骼肌细胞;通过检测培养液中的葡萄糖含量反映葡萄糖消耗量;2-NBDG葡萄糖摄入法观察细胞对葡萄糖的摄取率.结果:0.25mmol/L棕榈酸和1％BSA培养16h,使得C2C12骨骼肌细胞葡萄糖消耗量与葡萄糖摄取率显著下降(P＜0.05),造成骨骼肌细胞IR模型,JGDS干预可使IR模型骨骼肌细胞葡萄糖消耗量显著增加,与正常血清相比,差异具有统计学意义(P＜0.05),且该作用呈现一定的剂量依赖性;JGDS可增加IR骨骼肌细胞模型葡萄糖转运率,与模型组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:降糖消渴颗粒含药血清能显著增加IR的C2C12骨骼肌细胞的葡萄糖消耗和摄取,这可能是降糖消渴颗粒改善骨骼肌IR的机制之一.
-
NO抑制体外IFN-γ刺激成肌细胞/肌管NLRP3炎性小体活化
目的 观察一氧化氮供体硝普钠(SNP)、一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME)对体外炎性培养(IFN-γ刺激)成肌细胞/肌管NLRP3炎症小体活化的影响.方法 利用IFN-γ刺激小鼠C2C12成肌细胞/肌管,qPCR和Western blot分析炎性小体(ASC、NLRP3、caspase-1)的形成及活化、ELISA检测细胞培养上清IL-1β的分泌.进一步利用L-NAME和SNP处理IFN-γ诱导的C2C12细胞/肌管,分析炎性小体的形成、活化及IL-1β的分泌.结果 IFN-γ刺激培养后,成肌细胞/肌管中NLRP3、ASC和mature-caspase-1表达水平上调(P＜0.01).较之未刺激的细胞,IFN-γ诱导会显著上调成肌细胞/肌管培养基中的IL-1β浓度(P＜0.01).SNP处理后6h,分化肌管(IFN-γ刺激48 h)内炎性小体(ASC、NLRP3、caspase-1) mRNA和蛋白水平较单纯刺激细胞显著下调(P＜0.01),L-NAME则上调ASC、NLRP3、caspase-1表达水平(P＜0.05).与上述结果一致,SNP和L-NAME处理同时分别下调或上调培养基中IL-1β浓度(P＜0.05).结论 在炎性条件下,成肌细胞/肌管具备合成并活化NLRP3炎性小体的能力.NO对炎性小体的形成及活化有一定的抑制作用.
-
不同基质材料修饰的Sylgard184与C2C12细胞的相容性
目的 筛选能提高硅酮橡胶弹性体(Sylgard184)与C2C12相容性的理想基质材料. 方法Sylgard184双组分以10:1的比例均匀混合,倒入6孔板的其中4孔,室温下静置固化,其余2孔做为空白对照培养组(A组);固化后的Sylgard184表面依次经过以下处理:I型胶原包被(B组)、层黏连蛋白包被(C组)、多聚赖氨酸包被(D组);未经包被(E组),每组共6个样本.在不同基质材料修饰的Sylgard 184表面培养C2C12细胞,利用倒置显微镜观察5组C2C12细胞的增殖、分化状态,流式细胞术(FCM)检测增殖培养48h后C2C12细胞的分裂增殖情况,RT-PCR检测增殖和分化培养48h后C2C12细胞内MyoD、myogenin mRNA的表达.结果 Sylgard184材料存在细胞毒性,E组接种的C2C12细胞在24h内全部漂浮死亡;D组的大多数细胞出现死亡,仅少数贴壁存活;而B、C两组材料包被后明显减少Syhgard 184的毒性,增强其表面与C2C12细胞的相容性,且C组细胞处于合成期的百分比以及增殖期的MyoD和分化期Myogenin基因mRNA的表达水平均显著高于A、B两组(P<0.05). 结论 经层黏连蛋白包被后的Sylgard184表面更有利于C2C12细胞的增殖及分化活性的表达.
关键词： 细胞基质 Sylgard184 相容性 流术细胞术 C2C12细胞 -
人重组趋化素样因子1在果蝇S2细胞中的表达和功能研究
目的 在果蝇S2细胞中表达人趋化素样因子1(chemokine-like factor 1,CKLF1),并对其分泌形式进行功能研究.方法 构建pMT/V5-His-CKLF1表达质粒,转染S2细胞,筛选并鉴定阳性细胞克隆,用兔抗人CKLF1多肽抗体对其培养上清进行Western blot检测,并分析其趋化活性和促C2C12细胞增殖活性.结果 RT-PCR证明CKLF1在S2细胞中高效转录;通过Western blot在细胞培养上清中可检测到表达的重组CKLF1蛋白;其对人外周血中性粒细胞和淋巴细胞有较弱的趋化活性,对C2C12细胞具有增殖促进作用.结论 在果蝇S2细胞中成功表达了人重组CKLF1,并证实其存在分泌形式且具有趋化活性和促C2C12细胞增殖活性.
-
丝裂原活化蛋白激酶信号通路对软脂酸培养的肌细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子表达的调控作用
目的 研究软脂酸对C2C12细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子(PGC-1α)表达的影响,揭示丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路与PGC-1α表达的关系,寻找软脂酸诱导C2C12细胞PGC-1α表达变化的上游调节通路. 方法 检测软脂酸培养的C2C12细胞PGC-1α、细胞外信号调节激酶(ERK)、jnk氨基末端激酶(JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)及其磷酸化蛋白phosp-38MAPK(P-p38MAPK)的表达变化.寻找发生变化的MAPKs信号通路,用筛选到的p38MAPK抑制剂进行干预,分为对照(Con)组、软脂酸(Palmitate)组、p38MAPK抑制剂组和Palmitate+ p38MAPK抑制剂组,测定PGC-1α、p38MAPK总蛋白及其P-p38MAPK的表达. 结果 软脂酸培养的C2C12细胞PGC-1α蛋白表达下降,呈时间依赖性;ERK、phospho-ERK、JNK、phospho-JNK及p38MAPK表达无变化,P-p38MAPK表达升高.用p38MAPK抑制剂干预C2C12细胞,PGC-1α表达在Palmitate组低,p38MAPK抑制剂组和Palmitate+ p38MAPK抑制剂组较Palmitate组升高,p38MAPK抑制剂组高.结论 软脂酸诱导的PG C-1α表达下降可能由p38MAPK信号通路调控.
-
VEGF通过MAPK途径上调MC3T3-E1及C2C12细胞中Cbfal基因的表达
目的 研究生长因子VEGF对Cbfal的调节作用及其与MAPK信号传导通路的关系.方法 采用瞬时转染技术和RT-PCR方法.结果 在MC3T3-E1细胞中,VEGF(1×10-8～1×10-6g·L-1)作用24小时能够增加Cbfal基因启动子活性,相对荧光素酶活性分别为对照组的1.29(P<0.05),1.28(P<0.01)和1.40(P<0.05).而加入PD98059(10μmol/L)后不但抑制了Cbfal基因启动子活性的基础表达,而且完全阻断了VEGF所诱导的Cbfal基因启动子活性的增加(P<0.05).C2C12细胞中不同浓度的VEGF处理组,其相对荧光素酶活性与对照组相比未见显著性差异.MC3T3-E1细胞中,VEGF处理前后,MC3T3-E1细胞中Cbfal基因mRNA的表达水平未见显著变化.C2C12细胞中,VEGF处理后,第2天和第3天Cbfal基因mRNA的表达由处理前的32.63±4.41,分别增加至46.56±2.70(P<0.01)和50.35 ±5.62(P<0.05).PD98059阻断了C2C12细胞中VEGF对Cbfal基因mRNA表达的上调作用.结论 VEGF部分通过MAPK信号传导通路增加MC3T3-E1和C2C12细胞中小鼠Cbfal基因启动子活性及mRNA的表达.
-
电刺激C2C12细胞时活性氧生成的变化
目的:利用电刺激使C2C12细胞产生收缩运动,实时观察细胞内活性氧(ROS)生成的时相变化.方法:利用培养的C2C12细胞,电刺激使其产生收缩运动,测定细胞ROS生成速率、线粒体MDA含量、总SOD活性和胞浆内Na+,K+-ATPase活性.结果:(1)以45V、20ms、5 Hz的强度刺激C2C12细胞,细胞内ROS生成迅速增加,在刺激60min时ROS的生成速率呈显著性升高(P＜0.01),然后缓慢下降,继续刺激到120min时,ROS生成再次升高(P＜0.01),随后迅速下降.(2)线粒体总SOD活性逐渐升高,至150min和180min时都与对照组相比有显著性差异(P＜0.05);MDA量在90min时略有升高,随后下降,但无显著性差异.(3)电刺激C2C12细胞引起胞浆内Na+,K+-ATPase活性升高,刺激至180min时与刺激90min时相比酶活性显著下降(P＜0.05).结论:利用电刺激C2C12细胞模型,可实时测定收缩细胞的ROS生成速率变化,为运动性ROS产生的机理提供了直接证据.
-
棕榈酸急性、慢性刺激对小鼠骨骼肌细胞腺苷酸活化蛋白激酶活性的影响
目的:探讨棕榈酸急性、慢性刺激对小鼠骨骼肌细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)活性的影响.方法:以体外培养并诱导分化成熟的C2C 12小鼠骨骼肌细胞为研究对象,观察棕榈酸急性(5-30 mins)或慢性(16 h)刺激对AMPK蛋白活性的影响.小鼠骨骼肌细胞AMPK蛋白磷酸化水平的测定采用免疫印迹法.结果:(1)棕榈酸急性刺激下,C2C12细胞AMPK蛋白活性水平成时间-浓度依赖性增加.其中当300 μM棕榈酸刺激15分钟时,与对照组相比,AMPK蛋白活性水平显著增加(P＜0.05);(2)与对照组相比,16 h棕榈酸慢性刺激可诱导C2C 12细胞AMPK蛋白活性水平显著增加(P＜0.05).结论:棕榈酸急性、慢性刺激均能诱导骨骼肌细胞AMPK活性增加,可以为一次性或持续性高脂膳食引起的血浆游离饱和脂肪酸过多造成的骨骼肌胰岛素抵抗的在体研究,提供简便实用的骨骼肌细胞模型.
关键词： 棕榈酸 磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶 C2C12细胞 -
牛蒡子苷对分化的小鼠C2C12细胞的影响
目的 观察牛蒡子中木脂素成分牛蒡子苷对C2C12成肌细胞及分化后肌细胞生长的影响并探讨其作用机制.方法 以0、0.01、0.1、1、10、100和1000 ng/ml共7种剂量大豆苷原和牛蒡子苷分别处理体外培养的C2C12成肌细胞和经2％马血清诱导分化的肌细胞.大豆苷元作为对照,采用四唑盐(MTT)比色法检测C2C12成肌细胞增殖能力,以诱导分化后的肌细胞内蛋白含量和磷酸肌酸激酶含量变化为指标观察大豆苷原和牛蒡子苷对分化后的肌细胞生长的影响,采用real-time PCR分析C2C12细胞中雌激素受体β(ER β)mRNA表达量.结果 牛蒡子苷和大豆苷原终浓度为10 ng/ml时均能极显著促进C2C12成肌细胞增殖(P＜0.01),促进肌细胞总蛋白质的合成(P＜ 0.01),促进肌细胞肌酸激酶的活性(P＜0.01),促进肌细胞中ER β mRNA表达量极显著上升.结论 牛蒡子苷可提高C2C12成肌细胞的增殖和分化后的肌细胞肥大,促进骨骼肌细胞肥大型生长.这种促生长作用是通过直接作用于肌细胞上的ER β介导的,提示牛蒡子苷有望开发为一种新型的绿色有效的生理调节剂.
-
应用细胞模型探讨TAZ激活剂对肌萎缩的作用
目的 应用糖皮质激素致C2C12细胞肌管形成萎缩模型,探讨TAZ激活剂对肌萎缩的治疗作用.方法 C2C12细胞按分化培养液中的不同处理分为对照组、地塞米松处理组和地塞米松联合不同浓度IBS008738处理组,荧光显微镜下观察分化后肌管并行免疫染色,用Image J软件测量其直径并计算融合指数.用Real time PCR及Western blot法分析肌萎缩标记基因MuRF1及Atrogin-1的mRNA及蛋白表达水平.结果 IBS008738显著地抵抗地塞米松所致肌管直径及融合指数的减低,下调萎缩相关基因的表达,且其作用有剂量依存性.结论 IBS008738对糖皮质激素肌萎缩有潜在治疗价值.
-
红色发光二极管照射对C2C12细胞增殖的光生物调节作用
目的:采用小鼠成肌细胞C2C12作为模型,观察光生物调节作用对他汀类药物引起的肌病的作用.方法:实验于2004-09/2005-01在华南师范大学激光运动医学实验室完成.C2C12细胞用浓度分别为2.0×10-5,2.0×10-6,2.0×10-7,2.0×10-8mol/L的辛伐他汀培养,然后用强度分别为0,0.229,0.506,0.848,1.401,1.670 mW/cm2的红色发光二极管[波长(640±15)nm]照射2 d,15 min/d.用甲基噻唑基四唑比色法评价细胞增殖.结果:浓度为2.0×10-6,2.0×10-7,2.0×10-8 mol/L的辛伐他汀对C2C12的增殖没有影响,无光生物调节作用;浓度为2.0×10-5 mol/L的辛伐他汀抑制C2C12的增殖,发光二极管强度为0,0.229,0.506,0.848,1.401,1.670 mW/cm2时C2C12细胞增殖吸光度百分率分别降为(37.2±8.4)%,(58.4±24.9)%,(37.0±8.6)%,(63.0±8.8)%,(59.2±12.6)%,(28.9±20.3)%.强度为0.848 mW/cm2的红色发光二极管照射2 d,15 min/d可促进被抑制的C2C12增殖效应.结论:红色发光二极管可以促进被辛伐他汀抑制的C2C12细胞的增殖作用,对服用他汀类药物引起的肌病可能有光生物调节作用.
-
miRNA-31-5p在过量维甲酸抑制C2C12细胞增殖中的调控机制研究
目的 探讨miRNA-31-5p在过量维甲酸(Retinoic acid,RA)抑制小鼠肌原细胞系C2C12增殖中的作用机制.方法 在10 μmol/L RA及无RA条件下,qPCR检测C2C12细胞增殖过程中miRNA-31-5p及抗肌营养不良蛋白(dystrophine,Dmd)表达的水平;分别转染miRNA-31-5p mimics(miRNA-31-5p mimics组)、miRNA-31-5p inhibitor(miRNA-31-5p inhibitor组)、Duplex N.C(Duplex N.C组)及N.C inhibitor(N.C inhibitor组).用细胞增殖/毒性检测实验(CCK-8)检测0h,24 h,36 h及48 h的OD值,5-溴脱氧尿嘧啶核苷掺入实验(BrdU)检测48 h细胞中BrdU阳性细胞比率.在10 μmol/L RA条件下,qPCR检测C2C12细胞在下调miRNA-31-5p后,Dmd表达水平变化.结果 在10 μmol/L RA条件下,细胞中miRNA-31-5p在36 h及48 h的表达水平均明显高于相同时间点正常条件下的表达水平,P＜0.01;Dmd在36 h及48 h的表达水平均明显低于相同时间点正常条件下的表达水平,P＜0.01.CCK-8结果显示在0 μmol/L RA条件下,miRNA-31-5p过表达抑制C2C12细胞增殖,10 μmol/L RA条件下,细胞的增殖活性进一步降低;0μmol/L RA条件下,miRNA-31-5p低表达促进C2C12细胞增殖,10 μmol/L RA作用下,miRNA-31-5p inhibitor组细胞增殖活性在第48 h显著高于N.C inhibitor组,P＜0.01.10 μmol/L RA的作用下,miRNA-31-5p mimics组细胞BrdU阳性率与Duplex N.C组比降低27.6％,P＜0.05;miRNA-31-5p inhibitor组细胞BrdU阳性率与N.C inhibitor组相比升高24.1％,P＜0.05.转染48 h后,miRNA-31-5p inhibitor组Dmd的相对表达量较N.C inhibitor组明显上调,P＜0.01;在10 μmol/L RA作用下,miRNA-31-5p inhibitor组细胞Dmd的表达升高,与MC inhibitor组相比差异具有显著性意义.结论 miRNA-31-5p可参与10 μmol/L RA导致的C2C12细胞增殖抑制,而其可能的分子机制是通过对Dmd靶向作用实现的.
关键词： miRNA-31-5p 维甲酸 C2C12细胞 细胞增殖 -
肌肉生长抑制素前肽基因转染对C2C12成肌细胞糖代谢的影响
目的 探讨肌肉生长抑制素前肽(myostatin propeptide,MPRO)对C2C12成肌细胞葡萄糖摄取、氧化及糖原合成的影响及其作用机制.方法 诱导成熟的C2C12成肌细胞分为对照组、胰岛素组、绿色荧光蛋白(GFP)组、胰岛素+GFP组、MPRO组及胰岛素+MPRO组,经相应处理后应用2-脱氧-右旋-[1-14C]葡萄糖检测MPRO对C2C12细胞葡萄糖摄取、氧化及糖原合成的影响,应用Western印迹法检测胰岛素信号通路活性.结果 与对照组相比,胰岛素组及胰岛素+GFP组葡萄糖摄取及糖原合成量明显增加(P＜0.05);胰岛素+ MPRO组C2C12细胞葡萄糖摄取量及糖原合成较胰岛素组显著增加(P＜0.05);但MPRO及胰岛素对葡萄糖的氧化无明显影响(P＞0.05).Western印迹结果显示,与对照组相比,胰岛素组及胰岛素+GFP组胰岛素信号通路中的信号分子胰岛素受体β(IRβ)、胰岛素受体底物1(IRS-1)、蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)磷酸化水平及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、细胞膜葡萄糖转运体4(Glut4)的表达显著增高(P＜0.05),转染MPRO后上述基因的蛋白磷酸化和表达水平升高更显著(P＜0.05).结论 MPRO在C2C12可能通过激活IRS-1/PI3K/Akt信号通路增加胰岛素刺激的葡萄糖摄取及糖原合成.
-
组蛋白H3K27乙酰化与H3S28磷酸化改变引起心脏发育相关基因的表达变化
目的 通过改变组蛋白H3K27和S28位点整体修饰水平并检测心脏发育相关基因表达,初步探索位点修饰对基因表达的影响,阐明位点修饰在先天性心脏病(CHD)发病中的可能机制.方法 ①使用丁酸钠、姜黄素、佛波酯处理培养的C2C12细胞;Western Blot检测组蛋白H3K27乙酰化(H3K27ac)和H3S28磷酸化(H3S28ph)水平;实时荧光定量PCR检测心脏相关基因表达情况.②对培养细胞行丁酸钠和姜黄素浓度梯度处理,检测位点修饰及表达差异相关心脏基因表达.采用Pearson相关检验位点修饰与基因表达的关系.结果 ①丁酸钠处理后的C2C12细胞H3 K27 ac水平较对照组明显上调[(1.90±0.04)vs(1.09±0.01),P＜0.05],伴H3S28ph水平明显下调[(0.04±0.01)vs(0.73±0.01),P＜0.05)];姜黄素组H3 K27 ac水平(0.04±0.00)较对照组明显下调(P＜0.05),伴H3S28ph水平上调[(0.97 ±0.06)vs(0.73 ±0.01),P＜0.05)];佛波酯组H3S28ph(1.67 ±0.00)和H3 K27 ac水平(1.58±0.03)较对照组上调(P＜0.05).②丁酸钠与姜黄素浓度梯度处理后,H3K27ac、H3S28ph水平与给药浓度的指数有显著的相关性(R2分别为0.993和0.966).在检测的8个心脏相关基因中,药物处理后均产生了表达改变,差异有统计学意义(ANOVAP＜0.05);丁酸钠梯度处理的细胞cTnT、Cx43和Six1基因表达与H3 K27ac水平呈负相关(R2分别为0.709、0.713和0.651),与H3S28 ph水平呈正相关(R2分别为0.866、0.822和0.766).姜黄素梯度处理未有显著的相关性(R2＜0.5).结论 组蛋白H3K27和H3S28位点修饰状态的变化影响心脏发育相关基因的表达,可能是CHD的潜在发病机制.
-
LncRNA AK051397在BMP-2诱导的C2C12成骨分化中的作用
目的 研究骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)诱导后表达上调的LncRNAAK051397在C2C12成骨分化过程中的作用.方法 BMP-2诱导C2C12成骨分化过程,实时定量PCR技术与碱性磷酸酶(ALP)染色检测成骨相关指标.对C2C12细胞在BMP-2诱导下,成骨分化过程中的LncRNAs表达变化进行芯片分析(ArrayStar LncRNA Array),筛选出表达明显上调的LncRNAs,后采用siRNA干扰的方法下调LncRNAs表达后分析其对成骨分化过程的影响.结果 BMP-2诱导C2C12成骨分化过程中,成骨指标ALP、SPT增高,成肌指标MYOG降低.芯片结果表明,LncRNAAK051397在BMP2诱导后表达明显上调,处理组与未处理组相比升高4.9倍(P＜0.05).干扰AK051397后成骨分化指标ALP、SP7表达下降,MYOG表达上升.结论 LncRNAAK051397在C2C12细胞中具有促进成骨分化的作用,同时也具有抑制细胞成肌分化的作用.
-
Smurf1拮抗BMP-2对C2C12细胞的诱导成骨作用
目的 研究Smad泛素化调节因子1(Smurf1)对基因重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)诱导成骨作用的影响.方法 通过将质粒pcDEF3-Smurf1临时转染C2C12细胞并应用实时PCR和Western免疫印迹法鉴定其表达Smurf1,空载体pcDNA3.1作为阴性对照;然后用比色法测定细胞碱性磷酸酶活性和实时PCR分析细胞碱性磷酸酶、骨钙素、成骨转录因子Osterix基因表达,观察Smurf1对rhBMP-2诱导C2C12细胞向成骨细胞分化的影响.同时在相差显微镜下观察细胞形态的变化.结果 Smurf1在C2C12细胞可以通过临时转染获得很好的表达.尽管在细胞形态上没有明显的差别,但Smurf1转染的C2C12细胞在rhBMP-2作用48 h后,细胞碱性磷酸酶活性以及细胞碱性磷酸酶、骨钙素、成骨转录因子Osterix基因表达均较对照组明显下降.结论 Smurf1在BMP诱导成骨过程中发挥着负性调节作用.
关键词： 骨形态发生蛋白2 Smad泛素化调节因子1 转染 C2C12细胞 -
低氧促进C2C12细胞增殖及相关机制探讨
目的:探讨低氧对小鼠骨骼肌成肌细胞系C2C12细胞增殖的影响及其增殖的可能相关机制. 方法:采用血细胞计数板法和流式细胞仪观察低氧(10%O2)对C2C12细胞数量和增殖指数的影响;用RT-PCR和Western blot方法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α) mRNA和蛋白水平的表达. 结果:低氧组细胞较常氧组细胞数量和增殖指数增加(P＜0.01);HIF-1α mRNA和蛋白水平变化在常氧组和低氧组细胞中无显著差异. 结论:低氧可促进C2C12细胞的增殖,其增殖机制可能不是直接通过HIF-1α mRNA和(或)蛋白水平量的多少来调控.
-
日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa抗原编码基因在C2C12细胞内的表达
目的为探索日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa抗原(Sj22.6)编码基因用作核酸疫苗的可行性.方法以PCR法对此编码基因改造后将其亚克隆入真核表达载体质粒pCMV-β并转化入大肠杆菌JM109进行大量扩增.将提纯的pCMV/Sj22.6基因重组质粒在体外转化C2C12真核细胞.结果免疫组化试验证明,该重组质粒能够在体外培养的C2C12细胞中表达Sj22.6抗原.结论表明该重组质粒有用作真核疫苗的可能性.
-
壳聚糖水凝胶的研制及其与C2C12细胞粘附、支持作用的实验研究
研制可注射的壳聚糖水凝胶材料,并对该材料的理化特性进行检测,同时检验其是否能粘附并支持C2C12细胞生长.对不同温度下的壳聚糖溶液进行pH值的测定,并以壳聚糖溶液和β-甘油磷酸钠溶液为原料,制备温敏性壳聚糖水凝胶,对该材料的粘度及37℃成胶时间进行测定,显微镜下观察水凝胶材料的结构,通过C2C12细胞在其表面上的粘附与生长情况,判定该材料是否具有良好的细胞相容性.结果表明:该材料具有温度敏感性,即室温下为液态,37℃变为固态.当壳聚糖溶液浓度为2%时,加入45%β-甘油磷酸钠溶液后的成胶作用时间短,约为15 min.C2C12细胞在壳聚糖水凝胶材料上的粘附与生长情况良好.壳聚糖水凝胶可作为可注射性组织工程化心肌的支架材料,用于携带有效细胞进行缺血性心脏病的治疗.
-
高铁应激对小鼠成肌细胞C2C12线粒体自噬和凋亡的影响
目的 观察高铁培养环境下小鼠成肌细胞C2C12生物学活性指标的变化,探讨高铁应激对骨骼肌细胞生物学活性的影响和相关机制.方法 体外培养小鼠成肌细胞C2C12,在马血清诱导作用下分化为骨骼肌细胞,以不同浓度(50、100、200 μmol/L)枸橼酸铁铵(FAC)干预,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率,活性氧(ROS)检测试剂盒检测细胞内ROS水平,线粒体荧光探针标记线粒体,流式细胞仪检测细胞内线粒体相对含量,Western blot法检测细胞内自噬相关蛋白轻链蛋白3Ⅰ、Ⅱ(LC3 Ⅰ、LC3Ⅱ)、B淋巴细胞瘤2/腺病毒相互作用蛋白3及其同族体(BNIP3、BNIP3L)的表达;Western blot法分别检测细胞色素C(Cyt C)在细胞质和线粒体内的表达,使用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC 2.5 mmol/L)和FAC共同干预,再次检测细胞的增殖、凋亡指标.结果 C2C12细胞在FAC干预后,细胞的增殖活性随FAC干预浓度增加呈浓度依赖性下降(P＜0.01),凋亡率呈浓度依赖性升高(P＜0.01);ROS水平呈浓度依赖性升高(P＜0.01);线粒体含量呈浓度依赖性升高(P＜0.01);LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ、BNIP3、BNIP3L蛋白的表达呈浓度依赖性增加(P＜0.01);Cyt C胞质/线粒体蛋白的表达呈浓度依赖性增加(P＜0.01);加入NAC后,FAC+ NAC组、FAC组细胞增殖活性终值分别为1.46 ±0.05、0.63 ±0.04;凋亡率分别为4.72±0.57、15.78±0.57,两组比较均有统计学意义(P＜0.01).结论 高铁应激环境可抑制骨骼肌细胞的活性,其机制可能与高铁介导的氧化水平增加并进一步激活线粒体自噬和凋亡有关.
