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加参方对AngⅡ诱导的H9c2大鼠心肌细胞凋亡的干预作用研究
目的:观察加参方对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的H9c2大鼠心肌细胞凋亡的干预作用,并探讨其作用机制.方法:H9e2大鼠心肌细胞常规培养,用AngⅡ(1×10-6mol/L)建立心肌细胞凋亡模型,加参方0.3mg/mL干预24h,MTT法检测加参方对细胞活力的影响,DAPI染色镜下观察细胞核形态改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率.荧光定量PCR测定凋亡相关因子Caspase-3、Bax、Bcl-2、p53 mRNA表达.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关因子Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达.结果:与模型组比较,加参方能干预AngⅡ诱导心肌细胞发生凋亡,提高心肌细胞活性,降低心肌细胞凋亡率(P＜0.05);下调促凋亡因子Caspase-3、Bax、p53 mRNA和蛋白的表达,上调抑凋亡因子Bcl-2 mRNA和蛋白的表达(P＜0.05).结论:加参方可明显干预AngⅡ诱导H9c2大鼠心肌细胞发生凋亡,其机制可能与调节凋亡相关因子Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达有关.
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丹参总酚酸及三七总皂苷配伍对缺氧复氧损伤心肌细胞的保护作用研究
目的:探索丹参总酚酸及三七总皂苷配伍对心肌细胞缺氧复氧(hypoxia-reoxygenation,HR)损伤的保护作用机制.方法:采用缺氧复氧损伤H9c2细胞模型,MTT法测定丹参总酚酸、三七总皂苷配伍对细胞活力的影响,并测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,评价丹参总酚酸、三七总皂苷配伍对心肌细胞的保护作用；采用Hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡,并用流式细胞术检测不同药物干预后心肌细胞凋亡率；采用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3的表达情况；定磷法检测细胞内Na+,K+-ATPase,Ca2+,Mg2+-ATPase的变化,化学发光法检测细胞内ATP含量的变化.结果:丹参总酚酸、三七总皂苷分别在0.05 ～0.5,5 ～50 mg·L-1配伍时对缺氧复氧损伤的心肌细胞具有浓度依赖性的协同保护作用；丹参总酚酸与三七总皂苷均能减轻缺氧复氧导致的心肌细胞的凋亡并且改善心肌细胞的能量代谢,配伍后作用更为明显.结论:丹参总酚酸、三七总皂苷配伍具有协同增效作用,可通过抑制细胞凋亡和改善能量代谢对抗缺氧复氧对心肌细胞的损伤.
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CGRP通过NOS/NO通路抑制低氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡
目的 研究降钙素基因相关肽(CGRP)是否通过调节一氧化氮(NO)抑制低氧心肌细胞的凋亡.方法 选用H9c2细胞建立低氧损伤模型,CGRP和/或一氧化氮合酶(NOS)抑制剂(L-NAME)预处理细胞,检测低氧后细胞存活率,NOS、NO和凋亡相关蛋白表达水平.结果 低氧使心肌细胞存活率降低(P＜0.05),诱导性一氧化氮合酶(iNOS)表达明显增加(P ＜0.001),内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)表达降低(P＜0.001),NO释放减少(P＜0.05),P53、caspase-3和细胞色素C(cytochrome C)表达升高(P ＜0.05);CGRP预处理后,心肌细胞存活率升高(P ＜0.001),iNOS表达减少(P＜0.05),eNOS和p-eNOS表达增加(P＜0.05),NO的释放进一步降低(P＜0.05),凋亡相关蛋白活性下降(P＜0.001);L-NAME处理后,iNOS (P ＜0.05)和P53 (P ＜0.001)表达降低;L-NAME与CGRP共处理,与CGRP单处理比较,细胞存活率下降(P＜0.05),NOS表达降低(P＜0.05),P53、caspase-3和cyto C表达升高(P＜0.05).结论 NOS/NO可能介导CGRP对低氧心肌细胞抗凋亡的调控作用.
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芹菜素改善棕榈酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡与氧化应激
目的 探讨芹菜素对棕榈酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡的作用及其作用机制.方法体外培养大鼠H9c2心肌细胞,分为对照组、棕榈酸组、芹菜素组、棕榈酸+芹菜素组、c-Jun氨基末端激酶(JNK)激动剂组、JNK激动剂组+棕榈酸组,JNK激动剂+棕榈酸+芹菜素组.对照组加入0.5％二甲基亚砜(DMSO);棕榈酸组加入500μmol/L棕榈酸;芹菜素组加入20μmol/L芹菜素;棕榈酸+芹菜素组先加入20μmol/L芹菜素处理H9c2细胞2 h,之后再加入500μmol/L棕榈酸;JNK激动剂+棕榈酸+芹菜素组是在棕榈酸+芹菜素组的基础之上加用20 mg/kg JNK激动剂处理;JNK激动剂组只用20 mg/kg JNK激动剂处理;JNK激动剂+棕榈酸组用20 mg/kg JNK激动剂和500μmol/L棕榈酸共同刺激.经上述处理24 h后,光学显微镜下观察细胞形态;原位末端标记法(TUNEL)染色和分裂化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶(C-caspase3)免疫荧光观察细胞凋亡;免疫印记检测凋亡相关蛋白和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路;RT-PCR检测超氧化物歧化酶(SOD1、2、3)的表达;DCFH-DA荧光探针检测活性氧簇(ROS)水平;氧化应激相关试剂盒检测丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的活性.结果光学显微镜下观察和TUNEL染色显示,相比对照组,棕榈酸显著诱导H9c2细胞凋亡,而芹菜素预处理可以显著降低棕榈酸诱导的细胞凋亡.免疫荧光染色显示,相比对照组,棕榈酸组C-caspase3聚积增加,而芹菜素可以抑制棕榈酸诱导的C-caspase3的聚积.免疫印记结果表明,和对照组相比,棕榈酸促进Bax和C-caspase3的表达(均P<0.05),而相对棕榈酸组,芹菜素提前干预2 h能抑制棕榈酸促进的Bax和C-caspase3的表达(均P<0.05).细胞内活性氧检测及实时定量PCR显示,和对照组相比,棕榈酸显著诱导细胞内ROS增加,转录水平SOD1、SOD2及SOD3减少,GPX产生减少,MDA产生增加(均P<0.05),和棕榈酸组相比,芹菜素+棕榈酸组,芹菜素预处理抑制了棕榈酸诱导的细胞内ROS的增加,抑制MDA的产生及恢复SOD和GPX的活性(均P<0.05).后借助JNK激动剂证实了相比对照组,棕榈酸增加JNK的磷酸化水平(P<0.05),而相比棕榈酸组,棕榈酸+芹菜素组,芹菜素预处理抑制了棕榈酸诱导的JNK的磷酸化(P<0.05).结论芹菜素可通过抑制JNK通路改善棕榈酸诱导的H9c2凋亡与氧化应激.
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卡维地洛通过PI3K/AKT/GSK3β信号通路对H9c2缺氧/复氧损伤的保护
目的:研究卡维地洛预处理对缺氧/复氧诱导的大鼠心肌细胞保护作用及其机制.方法:对大鼠心肌细胞株(H9c2)进行缺氧/复氧(6h/2h),模拟大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,将H9c2细胞随机分成四组:正常对照组(control组)、缺氧/复氧组(H/R组)、缺氧/复氧+卡维地洛预处理组(H/R+CAR组)、缺氧/复氧+卡维地洛+PI3K/AKT阻滞剂LY294002组(H/R+ CAR+ LY294002组);分别采用MTT法检测心肌细胞活力,流式细胞仪法检测心肌细胞活性氧(ROS)水平,Western免疫印迹法检测心肌细胞Caspase-3、p-AKT、p-GSK3β蛋白表达情况.结果:与正常组相比,H/R组细胞活力下降,ROS水平升高,Caspase-3表达明显增多;经卡维地洛预处理后,细胞活力明显提高、p-AKT、p-GSK3β磷酸化水平较H/R组显著增加,ROS水平明显降低,而加入PI3K/AKT阻滞剂LY294002后卡维地洛的上述作用显著减弱.结论:卡维地洛预处理能显著减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤,对心肌细胞具有明显的保护作用,其可能的作用机制是通过激活PI3K/AKT/GSK3β通路而提高AKT、GSK3β磷酸化水平,减少ROS产生,增加细胞的活性而实现的.
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自噬下降对β1受体自身抗体诱导的H9c2心肌细胞凋亡的作用
目的 探讨自噬下降对β1肾上腺素受体自身抗体(β1-AA)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的作用.方法 使用1μM的β1-AA对H9c2心肌细胞进行处理,Real time-PCR检测自噬相关基因LC3 mRNA表达的改变,Western blot检测LC3、Beclin 1以及P62蛋白表达水平的变化;使用流式细胞术、Caspase-3活性检测及Hoechst 33258染色反映细胞凋亡情况;使用经典的自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)预处理30 min,以及mTOR通路抑制剂雷帕霉素(RAPA)预处理1 h后,再给予细胞β1-AA处理,检测此时细胞凋亡的变化情况.结果 与对照组相比,1μM的β1-AA干预H9c2心肌细胞6 h可以明显降低细胞存活率[(83.46±12.87)%比(96.45±6.99)%].与对照组(1.01±0.14)相比,β1-AA干预细胞6 h、12 h、24 h,LC3 mRNA水平依次降低[6 h(0.85±0.11),12 h(0.71±0.10),24 h(0.62±0.07)],LC3Ⅱ和Beclin 1蛋白水平依次降低,P62蛋白水平逐渐增加,表明β1-AA可以引起心肌细胞自噬水平逐渐下降.同时发现,与对照组(1.13±0.24)相比,β1-AA干预细胞6 h、12 h,细胞凋亡水平明显升高,分别达到3.21±0.89和2.14±0.24.使用经典自噬抑制剂3-MA预处理心肌细胞30 min抑制自噬后,H9c2心肌细胞凋亡水平较β1-AA单独处理组显著增加[(41.45±6.37)%比(29.55±4.32)%];而使用经典mTOR通路抑制剂RAPA预处理心肌细胞1 h上调自噬后,心肌细胞凋亡水平较β1-AA单独处理组明显下降[(17.36±2.98)%比(29.55±4.32)%],说明自噬水平改变可以影响心肌细胞凋亡水平.结论 自噬下调能够增加β1-AA诱导的H9c2心肌细胞凋亡.
关键词： 自噬 β1肾上腺素受体自身抗体 H9c2 凋亡 -
橙皮素对H2O2诱导H9c2心肌细胞凋亡的抑制效应研究
目的 探讨橙皮素(HES)对H2O2诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响.方法 采用H2O2建立H9c2心肌细胞氧化应激损伤模型.实验分为4组:正常对照组(Control组)、H2O2损伤组(H2O2组)、单纯橙皮素处理组(HES组)、橙皮素预处理+H2O2组(HES+H2O2组).H2O2(400μM)处理2 h建立心肌细胞氧化应激损伤模型,HES+H2O2组于建模前1 h加入40μM橙皮素.采用CCK-8法确定H9c2细胞活性,DCFH-DA探针检测细胞活性氧簇(ROS)水平,流式细胞术检测心肌细胞凋亡,分光光度计检测Caspase-3活性.结果橙皮素预处理可明显改善H2O2诱导的H9c2心肌细胞活性降低,且浓度为40μM时保护作用明显;给予40μM橙皮素预处理后ROS的产生明显减少,Caspase-3活性显著下降,心肌细胞凋亡率为(28.32±2.12)%,明显低于H2O2组(50.33±2.56)%(P<0.05).结论 橙皮素对氧化应激诱导的心肌细胞凋亡具有抑制效应.
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MAPK信号通路在高糖高脂诱导的心肌细胞肥大中的差异调节作用
目的:探讨丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路在高糖高脂诱导的H9c2细胞肥大中的作用.方法:高糖(33 mmol/L)及不同浓度脂(250、500、1000μmol/L)不同时间(12、24、36、48 h)干预H9c2细胞,应用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞培养液中LDH的活性,采用RT-PCR技术分别检测肥厚指标心房钠尿肽(ANP)、α-心肌肌动蛋白(α-SKA)的mRNA表达,利用蛋白免疫印迹(Western blot)技术检测p-ERK/T-ERK、p-JNK/T-JNK、p-p38/T-p38的活化程度.结果:结果显示上清 LDH的活性与高糖高脂处理间具有浓度及时间依赖性,高糖高脂显著增加ANP和α-SKA的mRNA表达(P＜0.05),在高糖高脂(33 mmol/L+500μmol/L)36 h时ANP、α-SKA的mRNA表达高(P＜0.01).与对照组相比,高糖高脂显著促进MAPK信号活化,其中p-ERK和p-JNK的活化分别增加了1.39倍和1.47倍(P＜0.05),而p-p38活化增加了3.34倍(P＜0.01).结论:高糖高脂可导致H9c2细胞损伤并显著促进细胞肥大,在此过程中MAPK信号通路差异调控作用扮演重要角色.
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黄芪苷Ⅳ通过P13K/Akt信号通路抗H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤
目的 研究黄芪苷Ⅳ对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制.方法 建立H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤模型,MTT法检测细胞存活率,DNA抽提及琼脂糖凝胶电泳、Hoechst 33258染色、caspase-3活性检测细胞凋亡,Western blotting检测t-Akt和p-Akt蛋白的表达.结果 与H2O2组比较,10、20mg/L的黄芪苷Ⅳ均显著提高细胞存活率,降低caspase-3活性,减轻细胞凋亡;且均显著卜调p-Akt蛋白的表达;P13K/Akt抑制剂LY294002部分阻断10、20 mg/L黄芪苷Ⅳ的保护作用.结论 黄芪苷Ⅳ部分通过P13K/Akt通路发挥对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用.
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ERK1/2信号通路对黄芪苷Ⅳ抗H2O2诱导H9c2细胞氧化损伤的作用
目的:研究黄芪苷Ⅳ(ASP)是否通过细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路发挥对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用.方法:用200 μmol/L的H2O2处理细胞6h,采用MTT,法检测细胞存活率,建立H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤模型;比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、总超氧化物歧化酶(T - SOD)和锰超氧化物歧化酶(Mn - SOD)活力以及丙二醛(MDA)含量;Western blot检测H9c2细胞ERK1/2蛋白的磷酸化水平.结果:在H2O2浓度为200 μmol/L作用6h条件下,细胞存活率降低程度适中,实验结果重复性好,确定后续实验采用200 μmol/LH2O2作用6h建立模型.与H2O2组比较,10 mg/L及20 mg/L ASP均显著提高细胞存活率(P<0.01),使细胞培养液中LDH活性显著降低(P<0.01),T-SOD及Mn - SOD活力显著提高(P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.01).10 mg/L及20 mg/L ASP均显著增加H2O2损伤的H9c2细胞p - ERK1/2蛋白的表达(P<0.01),当用PD98059(ERK1/2的抑制别剂)预处理后,AST的作用则被取消.结论:黄芪苷Ⅳ可以通过ERK1/2通路发挥对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用.
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甘草对H2O2诱导大鼠H9c2心肌细胞损伤保护作用的研究
[目的]探讨甘草对双氧水(H2O2)诱导大鼠H9c2心肌细胞损伤的保护作用.[方法]建立H2O2诱导心肌细胞损伤模型(100μmol/L,4 h),甘草(800、400μg/mL)作用4 h,检测心肌细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)释放量、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量、细胞内氧自由基(ROS)含量、钙离子含量、线粒体膜通透性转换孔(mPTP)的开放及心肌细胞凋亡率.[结果]甘草能够不同程度提高心肌细胞活力和SOD活力,减少LDH、MDA、细胞内ROS和钙离子含量,抑制mPTP开放、降低细胞凋亡率(P<0.05或P<0.01).[结论]甘草对H2O2诱导的大鼠H9c2心肌细胞损伤具有保护作用.
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丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用
目的 在大鼠心肌细胞系H9c2中,观察丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡和内质网应激及其特异的凋亡分子表达的影响,探讨丹参酮ⅡA抑制血管紧张素Ⅱ(AgⅡ)诱导的心肌细胞凋亡的内质网应激机制.方法 H9c2在CO2孵箱37 ℃常规培养,同步化后进行实验.细胞分为4组.正常对照组.AgⅡ组:10-6 mol/L的AgⅡ孵育48 h.AgⅡ+0.5 μg/mL TSA组同时加入10-6 mol/L的AgⅡ和0.5 μg/mL TSA培养48 h.AgⅡ+1 μg/mL TSA组同时加入10-6 mol/L的AgⅡ和1 μg/mL TSA培养48 h.培养结束,收集细胞进行Hoechst染色检测细胞凋亡的发生,实时荧光定量PCR测定GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA的表达.结果浓度为1 μg/mL TSA可以显著抑制AgⅡ诱导的细胞凋亡(P<0.01).内质网应激通路分子GRP78、CHOP mRNA在给以AgⅡ培养48 h表达较正常培养细胞显著增加,而同时给以0.5 μg/mL TSA可以抑制表达增加(P<0.05),当TSA为1 μg/mL时,抑制作用更明显(P<0.01).结论 TSA可以抑制AgⅡ诱导的心肌细胞系H9c2的凋亡,以及AgⅡ诱导的GRP78,CHOP mRNA表达的增加.
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高糖诱导H9C2大鼠心肌细胞线粒体功能障碍及其机制
目的 观察高糖对H9C2大鼠心肌细胞线粒体功能的影响,以探讨高糖所致心肌病发生发展的分子机制. 方法 将H9C2大鼠心肌细胞分为低浓度组(含5 mmol/L葡萄糖),中浓度组(含15 mmol/L葡萄糖)和高浓度组(含30 mmol/L葡萄糖),实验干预12 h.CCK-8检测心肌细胞活力.JC-1检测心肌细胞线粒体膜电位.线粒体ROS荧光探针检测线粒体ROS水平.Western blot检测心肌细胞Bcl-2、Bax、胞质内细胞色素C(Cyt C)及cleaved caspase-3表达水平. 结果 与低浓度组相比,中浓度组心肌细胞活力降低14.5％ (P＜0.05),高浓度组心肌细胞活力降低26.3％ (P＜0.01).低浓度组心肌细胞维持较高线粒体膜电位水平,中浓度组及高浓度组心肌细胞线粒体膜电位明显降低.与低浓度组相比,中浓度组心肌细胞线粒体内ROS水平明显降低(P＜0.05),高浓度组心肌细胞线粒体内ROS水平显著降低(P＜0.01).与低浓度组相比,中浓度组心肌细胞Bax/Bcl-2、胞质内Cyt C及cleaved caspase-3表达明显升高(P＜0.05),高浓度组心肌细胞Bax/Bel-2、胞质内细胞色素C及cleaved caspase-3表达显著升高(P＜0.01). 结论 高糖导致心肌细胞线粒体功能障碍,促进了心肌细胞活力降低,可能是高糖所致心肌病分子机制之一.
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镉致大鼠心肌细胞H9c2凋亡作用
目的 研究不同浓度氯化镉(CdCl2)引起大鼠心肌细胞H9c2凋亡作用.方法 采用姬姆萨染色法观察氯化镉对细胞毒作用的形态学改变;采用Annexin V-FITC/propidium iodide(PI)流式细胞技术(flowcytometric,FCM)检测氯化镉对H9c2细胞凋亡的影响;采用流式细胞术法检测线粒体膜电位(MMP)的变化;采用免疫细胞化学法检测细胞色素C表达.结果 5,10,30,50,80 lamol/L的氯化镉分别作用H9c2细胞6,12,24 h可以诱导细胞凋亡;随着镉剂量的加大及作用时间的延长,线粒体膜电位明显下降,与阴性对照比较,差异有统计学意义(P<0.05);随着镉剂量增加,CytC表达增强.结论 镉可以通过线粒体途径诱导H9c2细胞凋亡.
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环孢霉素A诱导H9c2类心肌细胞损伤与钙敏感受体的关系
目的 观察钙敏感受体(CaSR)是否在环孢霉素A (CsA)诱导心肌损伤过程中发挥重要作用.方法 10 μg/mL CsA作用于H9c2类心肌细胞不同时间(0.25、0.5、1、4、8、12、24 h),应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测H9c2类心肌细胞CaSR mRNA表达,Western blot方法检测H9c2类心肌细胞CaSR蛋白表达,免疫荧光观察蛋白定位情况.结果 ①CsA作用于H9c2类心肌细胞4h后,与对照组相比CaSR mRNA表达量明显增高(P＜0.01);②CsA作用于H9c2类心肌细胞4h后,与对照组相比CaSR蛋白表达量明显增高(P＜0.01),与RT-PCR结果一致;③免疫荧光观察显示,CaSR蛋白表达分布,CsA作用于H9c2类心肌细胞4h后,与对照组相比,CaSR表达量明显增加,且CaSR表达主要分布在H9c2类心肌细胞的细胞膜和胞浆中.结论 CsA能通过引起CaSR mRNA和蛋白表达增加,导致H9c2类心肌细胞损伤.
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山核桃叶总黄酮对H9c2细胞氧化损伤的保护作用
目的 研究山核桃叶(Carya cathayensis)总黄酮对H2O2诱导的H9c2大鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用及其与PI3 K/Akt(磷脂酰肌醇3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶B)信号通路的关系.方法 使用MTS(溴化噻唑蓝四氮唑)检测H2O2诱导氧化应激损伤的H9c2细胞存活率,Hoechst 33342染色观察其凋亡,Western blot技术检测p-AKT和AKT表达量,并用PI3 K/Akt通路抑制剂LY294002进行验证.结果 山核桃叶总黄酮可显著的提高氧化应激损伤细胞的存活率,减少细胞凋亡,增加细胞中p-AKT的表达,但其作用可被PI3Ks抑制剂LY294002抵消肖.结论 山核桃叶总黄酮激活PI3 K/Akt信号通路来有效抑制H9c2细胞的氧化损伤.
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MicroRNA-34a在大鼠心肌梗死后的细胞凋亡中的作用
目的 探讨microRNA-34a(miR-34a)在大鼠心肌梗死后的心肌细胞凋亡过程中的作用.方法 建立大鼠心肌梗死模型,检测缺血区心肌组织miR-34a、bcI-2、bax和cIeaved-caspase-3的表达.在体外培养大鼠心肌细胞株H9C2,构建低氧无血清损伤模型(1%O2,94%N2,5%CO2),并将H9C2细胞转染miR-34a inhibitor下调miR-34a水平,观察细胞凋亡情况.同时H9C2细胞转染miR-34a mimics,观察miR-34a对细胞凋亡的影响.荧光实时定量PCR检测miR-34a的表达,Western BIot检测bcI-2、bax和cIeaved-caspase-3的表达.结果 心肌梗死组大鼠和低氧无血清培养饥饿诱导的H9C2细胞中miR-34a表达均增多,bcI-2/bax比值下降,心肌梗死模型组大鼠cIeaved-caspase-3表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05);转染miR-34a mimics的H9C2细胞bcI-2/bax比值下降(P<0.05);转染miR-34a inhibitor能抑制低氧无血清损伤所致的心肌细胞bcI-2/bax下降(P<0.05).结论 miR-34a在大鼠心肌梗死后的心肌细胞中表达增加,可能具有促进心肌细胞凋亡的作用.
关键词： 心肌梗死 H9c2 microRNA-34a 凋亡 -
miRNA-34a对无血清培养诱导心肌细胞凋亡的影响及机制研究
目的：探讨miRNA-34a（miR-34a）对无血清培养诱导的大鼠心肌细胞凋亡及B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）表达水平的影响。方法体外培养大鼠心肌细胞H9C2，实验分实验组（转染miR-34a inhibitor）、空白对照组（无转染miR inhibitor）和阴性对照组（转染随机合成NC microRNA片段）。转染24h后无血清培养饥饿诱导细胞凋亡，Western bolt法检测Caspase-3及Bcl-2的表达。结果实验组细胞Caspase-3表达低于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。Bcl-2表达明显高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。结论转染miR-34a inhibitor可以下调miR-34a的表达，减少无血清培养诱导H9C2细胞的凋亡，Bcl-2的表达增加可能参与了其保护机制。
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姜黄素纳米粒对高脂诱导的心肌细胞损伤的作用
目的 探讨姜黄素纳米粒( curcumin nanoparticles,Cur-NPs)对高脂诱导的心肌细胞损伤的保护作用.方法 采用棕榈酸(palmitic acid,PA)刺激H9c2心肌细胞,建立心肌细胞脂毒性损伤模型,Cur-NPs预处理,MTT法检测细胞增殖情况;活性氧( reactive oxygen species,ROS)试剂盒检测细胞内ROS水平;TUNEL试剂盒检测细胞凋亡情况;免疫印迹法检测细胞内质网应激和凋亡信号通路相关蛋白的表达水平.结果 高脂可引起细胞增殖率的降低,ROS水平明显升高,细胞形态出现明显的病理性损伤改变,凋亡细胞明显增多;GRP78、CHOP和caspase-3表达水平明显增加,Bax/Bcl-2的比值升高.姜黄素纳米粒可以逆转上述变化.结论 姜黄素纳米粒能够明显降低高脂诱发的心肌细胞ROS的产生,降低心肌细胞内质网应激和凋亡相关蛋白的表达,从而抑制高脂所致的H9c2心肌细胞损伤.
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白藜芦醇通过上调SIRT1抑制阿霉素诱导的H9c2细胞损伤
目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,RSV)对阿霉素(doxorubicine,DOX)引起的心肌细胞损伤的保护作用及相应机制.方法 应用DOX,RSV,SIRT1 siRNA处理H9c2细胞,对照组(CON)不做任何处理.MTT比色法检测H9c2细胞活力,流式细胞术检测凋亡率,Western免疫印迹检测SIRT1蛋白表达,荧光显微镜下观察转染GFP的细胞,并随机选取视野计算转染率.结果 DOX降低细胞活力,诱导细胞凋亡,呈现时间、剂量依赖性.RSV时间、剂量依赖性上调SIRT1蛋白表达.RSV预处理能明显降低DOX对H9c2细胞的损伤.然而,SIRT1 siRNA预处理则加重DOX引起的H9c2细胞损伤.这种细胞损伤未能被RSV预处理所改善.结论 RSV可减轻DOX引起的H9c2细胞损伤,这种保护作用可能是通过上调SIRT1来实现的.
