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橙皮素的大鼠血浆蛋白结合率研究
目的：研究橙皮素的大鼠血浆蛋白结合率。方法使用平衡透析法模拟橙皮素在体内与血浆蛋白结合的过程，采用高效液相色谱法（HPLC）测定低、中、高3个浓度（0.5，2.5和10μg/ml）的橙皮素在透析袋内血浆中和透析袋外缓冲液中的浓度，计算血浆蛋白结合率。结果低、中、高3个浓度的橙皮素在体外与大鼠血浆蛋白的平均结合率分别为83.5%，84.3%和83.9%，3个浓度之间的血浆蛋白结合率比较，差异无统计学意义（ P ﹥0.05）。结论橙皮素具有较高的血浆蛋白结合率，为含橙皮苷药物的临床合理应用提供理论指导。
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口服枳术丸后人体内橙皮苷、柚皮苷的药代动力学研究
目的:阐明枳术丸的的人体药动学特性.方法:利用葡萄糖醛酸酶使血浆中的苷元与葡萄糖醛酸游离,用HPLC方法,测定血浆中柚皮素(naringenin)及橙皮素(hesperetin)的含量,并用3p97软件进行数据分析.结果:柚皮素及橙皮素的T1/2(ka)/T1/2(ke)(h)分别是2.142±0.999/5.491±3.926和2.106±0.728/5.824±3.067,AUC(mg/L·h)分别是34.886±22.199和39.407±19.535,两种化合物的行为基本一致,生物利用度均较高.结论:建立了口服枳术丸后血浆中柚皮素及橙皮素的含量测定方法,并阐明了药动学特性,可用于指导该药的临床应用.
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橙皮素干预改善小鼠心肌梗死后心室重构及心功能
目的 观察橙皮素对小鼠心肌梗死后心室重构及心功能的影响.方法 采用左前降支结扎术制备心肌梗死模型,42只C57BL/6小鼠随机(随机数字法)分为假手术组和心肌梗死组,术后24 h存活小鼠随机(随机数字法)分为心肌梗死对照组和橙皮素治疗组.术后8周,血流动力学测定及超声心动图评估心功能及心脏结构改变;苏木精-伊红染色观察心肌细胞横截面积(CSA)、天狼星红染色观察胶原蛋白沉积并计算胶原容积分数(CVF)、RT-PCR检测心肌肥厚标志物心房钠尿肽(ANP)、脑钠尿肽(BNP)及β-肌球蛋白重链(β-MHC)、心肌纤维化标志物胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ及结缔组织生长因子(CTGF)的表达.比色法测定心肌组织中超氧阴离子及羟自由基的含量.多组间差异比较采用单因素方差分析.结果 与假手术组比较,心肌梗死对照组小鼠的左室后壁厚度(LVPWT)和室间隔厚度(IVST)增厚、左室短轴缩短率(LVFS)及左室射血分数(LVEF)显著降低、左室压力上升下降大速率(±dp/dtmax)显著降低(P＜0.05).与心肌梗死对照组比较,橙皮素干预后LVPWT[(2.29±0.05) mm和(2.85 ±0.10) mm]和IVST[(1.44±0.09) mm和(1.89 ±0.06) mm]变薄;LVFS[(29.48±3.87)％和(20.69±3.99)％]、LVEF[(46.40±1.68)％和(30.51±1.17)％]及±dp/dtmax[(3 344.33±269.57)mmHg/S和(2 205.19±224.17) mmHg/S、(-2 250.40±218.35)mmHg/S和(-1 566.91±217.37) mmHg/S]升高(P＜0.05).与假手术组比较,心肌梗死对照组小鼠的CSA及CVF显著升高;而与心肌梗死对照组比较,橙皮素治疗后可显著降低CSA和CVF (P ＜0.05).与假手术组比较,心肌梗死对照组小鼠的心肌肥厚、心肌纤维化标志物的mRNA表达水平显著升高;而与心肌梗死对照组比较,橙皮素干预后可显著降低心肌肥厚和心肌纤维化标志物的表达(P＜0.05).此外,与心肌梗死对照组比较,橙皮素干预后可显著降低心肌组织中超氧阴离子及羟自由基的含量(P＜0.05).结论 橙皮素可能通过抑制活性氧物质(ROS)的产生,从而抑制心肌梗死后心室重构并改善血流动力学和心脏功能.
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橙皮素通过减轻氧化应激和线粒体损伤抑制细颗粒物诱导的大鼠H9c2细胞凋亡
目的 探讨橙皮素对细颗粒物PM2.5诱导的心肌样细胞损伤是否具有保护作用及其机制.方法 将培养的大鼠心肌样细胞H9c2分为4组,即对照组、PM2.5组、橙皮素组和橙皮素+PM2.5组.对照组细胞在普通培养基中正常培养.PM2.5组,以含PM2.5800μg/ml的培养基进行培养.橙皮素组,先用含橙皮素40 μμmol/L的培养基预处理1h(37℃)后换用普通培养基正常培养.橙皮素+PM2.5组,先用含橙皮素40 μmol/L的培养基预处理1 h(37℃)后再以含PM2.5800 μg/ml的培养基进行培养.处理相应的时间后,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞技术和Hoechst 33258染色检测H9c2细胞凋亡情况,采用DCFH-DA法检测H9c2细胞活性氧(ROS)的生成量,采用JC-1染色法检测H9c2细胞线粒体膜电位(MMP),采用Western blot法检测H9c2细胞凋亡相关蛋白及MAPK信号通路蛋白的表达水平.结果 (1)各组H9c2细胞的凋亡情况:流式细胞术检测结果显示,PM2.5组H9c2细胞凋亡率明显高于对照组[(48.94±3.20)％比(8.13±1.40)％,P＜0.01],橙皮素+PM2.5组H9c2细胞凋亡率[(34.80±2.21)％]虽亦明显高于对照组(P＜0.01),却明显低于PM25组(P=0.003 2).Hoechst 33258染色结果显示,橙皮素+PM2.5组H9c2细胞凋亡数目明显少于PM2.5组.(2)各组H9c2细胞内ROS生成量:PM2.5组H9c2细胞内ROS荧光强度明显高于对照组[(49.69±5.05)％比(10.57±1.33)％,P＜0.01],橙皮素+PM2.5组[(35.08±3.90)％]虽亦高于对照组(P＜0.01),却明显低于PM25组(P=0.0002).(3)各组H9c2细胞MMP:PM2.5组H9c2细胞绿色荧光强度明显高于对照组[(20.28±4.69)％比(10.50±2.72)％,P＜0.01],橙皮素+PM2.5组[(13.41±2.89)％]虽亦高于对照组(P=0.029 4),却明显低于PM25组(P＜0.01).(4)各组H9c2细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达水平:PM2.5组H9c2细胞Bcl-2蛋白表达水平明显低于对照组[(76.94±4.52)％比100％,P=0.000 9],橙皮素+PM2.5组[(92.95±6.82)％]虽亦低于对照组(P=0.15),却明显高于PM25组(P=0.027 5).PM2.5损伤组活化的caspase-3蛋白表达水平明显高于对照组[(243.98± 17.94)％比100％,P=0.000 2],橙皮素+PM25组[(200.45±4.31)％]虽亦高于对照组(P＜0.01),却明显低于PM2.5组(P=0.015).(5)各组H9c2细胞磷酸化(p)-p38 MAPK和磷酸化(p)-ERK蛋白的表达水平:PM2.5组p-p38 MAPK蛋白表达水平明显高于对照组[(118.90±4.78)％比100％,P=0.002 7],橙皮素+PM2.5组[(103.30±1.27)％]虽略高于对照组(P=0.05),却明显低于PM25组(P=0.01).PM2.5组p-ERK蛋白表达水平明显高于对照组[(163.50±4.98)％比100％,P＜0.01],橙皮素+PM2.5组[(139.10±2.72)％]虽亦高于对照组(P＜0.01),却明显低于PM2.5组(P=0.001 6).结论 橙皮素对PM2.5诱导的心肌样细胞损伤具有保护作用,而其机制可能与减轻氧化应激损伤、保护线粒体功能、调节凋亡相关蛋白表达以及调控MAPK信号通路从而抑制细胞凋亡有关.
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超高效液相串联质谱法同时测定乳块消颗粒中6种成分的含量
目的 建立超高效液相串联质谱法测定乳块消颗粒中橘红素、橙皮素、5-去甲基川陈皮素、川陈皮素、牡荆素、芸香柚皮苷的含量测定方法.方法 采用Waters ACQUITY UPLC@BEH C18柱(2.1 mm×50mm,1.7 μm),柱温50℃;以乙腈(含体积分数0.1％甲酸)-体积分数0.1％甲酸溶液为流动相,流速0.6 mL· min-1梯度洗脱;质谱以电喷雾离子源多反应监测模式(MRM)对待测物质进行测定.结果 6个成分色谱峰面积与对照品浓度之间在线性范围内呈现良好的线性关系,r ＞0.995 8;定量限分别为0.80、1.10、1.30、0.66、2.00、7.10、0.70 ng·mL-1;样品加样回收率在95.78％～101.35％之间,RSD均小于2.1％.结论 该方法简便,快速、灵敏、专属性强,可为乳块消颗粒质量控制提供依据.
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橙皮素对脂多糖诱导H9C2心肌细胞活性氧水平的影响
目的 探讨橙皮素对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导H9C2心肌细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响.方 法 使用不同浓度橙皮素(0.0625、0.125、0.25 μmol/L)和LPS(1 μg/ml)共同孵育H9C2心肌细胞120min,DCFH-DA探针检测H9C2细胞ROS水平,荧光显微镜定性观察以及流式细胞仪定量检测各组细胞荧光强度,以观察不同浓度橙皮素对LPS诱导H9C2心肌细胞产生ROS的影响.选择0.25 μmol/L橙皮素和LPS(1 μg/ml)共同孵育H9C2心肌细胞30、60、120min,观察橙皮素对LPS诱导H9C2心肌细胞产生ROS的时间相关性.结果 橙皮素干预可以浓度依赖性的缓解LPS诱导H9C2心肌细胞ROS产生;在60、120min,橙皮素能够抑制LPS诱导H9C2心肌细胞ROS产生.结论 橙皮素能够抑制LPS诱导的H9C2心肌细胞ROS产生,从而降低心肌细胞氧化应激水平,其有可能成为心肌保护新的潜在药物.
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橙皮素对血管紧张素Ⅱ诱导H9C2心肌细胞肥大的影响
目的 探讨橙皮素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导H9C2心肌细胞肥大的影响.方法 使用不同浓度橙皮素(0.125、0.25、0.5、1μmol/L)和AngⅡ(1μmol/L)共同孵育H9C2心肌细胞12h,心肌细胞骨架骨骼α肌动蛋白(α-actinin)荧光染色评估H9C2细胞面积改变以及real-time PCR方法检测心肌肥厚标志物BNP、β-MHC的mRNA表达变化,以观察不同浓度橙皮素对AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大的影响,选择0.25 μmol/L橙皮素和AngⅡ(1μmol/L)共同孵育H9C2心肌细胞6、12、24h,观察橙皮素对AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大抑制作用的时间相关性.结果 橙皮素干预可以缓解AngⅡ诱导H9C2心肌细胞的细胞面积增大;橙皮素抑制了AngⅡ诱导的H9C2心肌细胞BNP、β-MHC的mRNA表达水平升高.结论 橙皮素能够抑制AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大,其有可能成为治疗心肌重构新的潜在药物.
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橙皮素对H2O2诱导H9c2心肌细胞凋亡的抑制效应研究
目的 探讨橙皮素(HES)对H2O2诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响.方法 采用H2O2建立H9c2心肌细胞氧化应激损伤模型.实验分为4组:正常对照组(Control组)、H2O2损伤组(H2O2组)、单纯橙皮素处理组(HES组)、橙皮素预处理+H2O2组(HES+H2O2组).H2O2(400μM)处理2 h建立心肌细胞氧化应激损伤模型,HES+H2O2组于建模前1 h加入40μM橙皮素.采用CCK-8法确定H9c2细胞活性,DCFH-DA探针检测细胞活性氧簇(ROS)水平,流式细胞术检测心肌细胞凋亡,分光光度计检测Caspase-3活性.结果橙皮素预处理可明显改善H2O2诱导的H9c2心肌细胞活性降低,且浓度为40μM时保护作用明显;给予40μM橙皮素预处理后ROS的产生明显减少,Caspase-3活性显著下降,心肌细胞凋亡率为(28.32±2.12)%,明显低于H2O2组(50.33±2.56)%(P<0.05).结论 橙皮素对氧化应激诱导的心肌细胞凋亡具有抑制效应.
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橙皮素对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原蛋白合成的抑制作用
目的：探讨橙皮素对血管紧张素Ⅱ（ AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原蛋白沉积的影响。方法实验分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ＋橙皮素组、AngⅡ＋N-乙酰半胱氨酸（ NAC）组，不同因素干预成纤维细胞24 h后，采用锥虫蓝染色法检测各组成纤维细胞生存活性的影响；酶标仪检测法检测各组成纤维细胞产生的活性氧（ ROS）；实时（ Real-Time） PCR检测各组成纤维细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及基质金属蛋白酶-1（MMP-1）基因的表达；活细胞计数试剂盒（CCK-8）检测各组成纤维细胞增殖情况。结果橙皮素（25、50、100μmol/L）及AngⅡ（1μmol/L）＋橙皮素对成纤维细胞生存活性均无影响（均P＞0.05）；与空白对照组比，AngⅡ可显著提高成纤维细胞中ROS的表达（1.70±0.12比1，P＜0.01），Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白基因的表达均上调（1.31±0.08、1.40±0.09比1，均P＜0.01），MMP-1基因表达下调（0.68±0.03比1，P＜0.01），AngⅡ也可诱导成纤维细胞增殖（1.91±0.18比1，P＜0.01）。橙皮素或NAC与AngⅡ同时作用则可逆转这种现象，与AngⅡ组相比，橙皮素（25、50、100μmol/L）及NAC（1 mmol/L）均可抑制 ROS 的表达（1.37±0.05、1.16±0.08、1.07±0.07及1.12±0.07比1.70±0.12，均P＜0.01），Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白基因的表达均下调（1.22±0.08、1.14±0.07、1.02±0.06及1.08±0.07比1.31±0.08；1.27±0.07、1.00±0.06、0.99±0.05及1.09±0.06比1.40±0.09，均P＜0.01），MMP-1基因的表达均上调（0.76±0.05、0.88±0.07、1.01±0.08及0.96±0.07比0.68±0.03，均P＜0.01），细胞的增殖能力也有下降（1.42±0.07、1.38±0.03、1.07±0.15及1.16±0.11比1.91±0.18，均P＜0.01）。结论橙皮素可抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞中ROS的产生，从而抑制胶原蛋白的合成，橙皮素也可通过抑制ROS抑制Ang Ⅱ诱导的成纤维细胞增殖。
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橙皮素对百草枯致大鼠肺氧化损伤的拮抗作用
目的 探讨橙皮素干预对百草枯(PQ)致大鼠肺损伤的拮抗作用及其对氧化指标的影响.方法 140只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、橙皮素对照组、PQ模型组、吡非尼酮对照组及橙皮素低、中、高剂量治疗组,每组20只.正常对照组和橙皮素对照组不染毒,其他各组均以50 mg/kg PQ一次性灌胃染毒,24 h后对各组进行药物干预,每天灌胃给药1次.分别于染毒后第7、28天每组随机处死10只大鼠,观察并比较各组大鼠肺组织病理学改变,检测每组肺组织中丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和总抗氧化能力(T-AOC)活力.结果 组织病理学检查发现,吡非尼酮对照组及橙皮素各治疗组大鼠肺损伤情况减轻.正常对照组与橙皮素对照组大鼠肺组织中各氧化指标水平无明显差异(P＞0.05);与正常对照组比较,PQ染毒后肺组织中MDA水平升高,SOD、CAT和GSH-Px活力降低;橙皮素干预后MDA水平降低,SOD、CAT和GSH-Px活力出现不同程度升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 橙皮素可能通过抑制氧化损伤拮抗PQ中毒大鼠肺损伤.
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橙皮素对百草枯致大鼠肺损伤的抗炎作用研究
目的 测定百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织中炎性指标水平变化,探讨橙皮素(HSP)对PQ所致肺损伤的抗炎作用 方法 将140只Wistar雄性大鼠随机分为阴性对照组、HSP对照组、PQ模型组、吡非尼酮(PDF)阳性对照组及100、200、400 mg/kg HSP 3个剂量治疗组,每组20只.阴性对照组和HSP对照组大鼠不染毒,其他各组大鼠均以50 mg/kg PQ一次性灌胃染毒,染毒24 h后各组分别给予相应药物处理,每天灌胃给药1次.大鼠染毒后第7、28天每组随机选3只大鼠行HE及Masson染色观察各组大鼠肺组织病理学改变,于两个时间点每组另取6只大鼠检测其肺内转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、IL-10、IL-1β、干扰素-γ(IFN-γ)的水平.结果组织病理学检查发现PDF阳性对照组及HSP各治疗组大鼠肺组织损伤情况均有不同程度减轻.与阴性对照组比较,两个时间点PQ模型组大鼠肺组织中TGF-β1、IL-1β、TNF-α、IL-4和IL-10水平均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),肺组织中IFN-γ水平与阴性对照组的差异无统计学意义(P>0.05).HSP各剂量治疗组第7天大鼠肺组织中TGF-β1、IL-1β、IL-4、IL-10和TNF-α水平较PQ模型组有不同程度降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),而大鼠肺组织中IFN-γ水平与模型组的差异无统计学意义(P>0.05).PDF阳性对照组及HSP各剂量治疗组第28天大鼠肺组织中TGF-β1和TNF-α水平较PQ模型组有不同程度降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),大鼠肺组织中IFN-γ水平较PQ模型组有所升高,差异有统计学意义(P<0.05),而肺组织中IL-1β、IL-4和IL-10水平较PQ模型组差异无统计学意义(P>0.05).结论 HSP可能通过抑制炎性因子的释放、促进分泌抗炎因子从而减轻PQ对肺组织的损伤作用.
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虎杖花的化学成分研究
目的 研究虎杖Polygonum cuspidatum花的化学成分.方法 利用溶剂提取、硅胶柱色谱和Sephadex LH-20反复进行分离纯化,根据波谱数据和理化性质鉴定化合物结构.结果 从虎杖花甲醇提取物的乙醚、甲醇萃取部分分离得到16个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇(1)、芦荟大黄素(2)、大黄素甲醚(3)、大黄素(4)、胡萝卜苷(5)、大黄酚(6)、槲皮素(7)、山柰酚(8)、蒽醌苷B(9)、大黄酸(10)、芹菜素(11)、橙皮素(12)、4-羟基苯乙酮(13)、芦丁(14)、蔗糖(15)、染料木素(16).结论 化合物2、8、12、13、15、16为首次从虎杖花中分离得到.
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橙皮素抑制P-选择素诱导的乳腺癌转移作用机制研究
目的 探究橙皮素对P-选择素介导的MDA-MB-231乳腺癌细胞转移的影响及其作用机制.方法 运用计算机虚拟对接技术体外评价橙皮素与P-选择素的结合能力;采用MDA-MB-231乳腺癌细胞为模型,MTS法观察不同浓度的橙皮素/P-选择素对MDA-MB-231生长能力的影响;ELISA法检测橙皮素对活化的血小板表面P-选择素分泌的影响;黏附实验考察橙皮素对P-选择素介导的MDA-MB-231与内皮细胞黏附的影响;Transwell实验分析橙皮素对P-选择素促进MDA-MB-231乳腺癌细胞迁移的影响;采用Western blotting法考察橙皮素对MDA-MB-231细胞表面糖蛋白(Mucin-1)、整合素(Integrin β33、β1)及基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)蛋白表达的影响;进一步分析橙皮素对MDA-MB-231细胞Integrin-MMP信号通路的影响,阐明橙皮素抗肿瘤转移的作用机制.结果 计算机虚拟对接技术证实橙皮素与P-选择素有较好的结合能力;在体外橙皮素能剂量依赖性抑制MDA-MB-231增殖及其与内皮细胞的黏附;橙皮素能降低活化的血小板表面P-选择素的分泌;迁移实验中橙皮素能显著抑制P-选择素介导的MDA-MB-231乳腺癌细胞迁移;降低P-选择素诱导的细胞表面糖蛋白Mucin-1、Integrin β3、Integrinβ1及MMP-2、MMP-9蛋白的表达.结论 橙皮素具有抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞生长能力,阻断P-选择素诱导的乳腺癌MDA-MB-231肿瘤细胞迁移以及其与内皮细胞的黏附,其机制为橙皮素通过竞争性结合P-选择素,阻断其与Mucin-1的结合,抑制PI3 K-AKT-Paxillin-FAK-Src信号通路,下调P-选择素调控的Integrins及MMP-2、MMP-9表达.
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枳术丸与枳术颗粒多成分对比分析研究
目的 建立液质分析方法,对比收载于《中国药典》2015年版的同方不同剂型的枳术丸和枳术颗粒中20个活性成分的含量.方法 按《中国药典》2015年版制备工艺,采用3批原料制备枳术丸和枳术颗粒.建立高效液相色谱-三重四级杆-质谱(HPLC-QqQ-MS)分析2种剂型中20个活性成分含量的方法.色谱条件为Poroshell 120 SB-C18色谱柱(100mm×4.6 mm,2.7 μm);流动相为0.1％甲酸水溶液(A)-0.1％甲酸乙腈溶液(B),梯度洗脱条件:0～7 min,23％ B;7～17 min,23％～80％ B;17～20 min,80％～100％B,20～30min,100％ B;体积流量0.5 mL/min;柱温30℃.结果 3批原料制备的枳术丸和枳术颗粒成品,20个活性成分的日服用量,丸剂是颗粒剂的1.48～13.37倍,总量相差493.01～615.07mg.其中热不稳定性成分白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ相差的倍数大,其次为水溶性较差的川陈皮素.结论 枳术丸和枳术颗粒成品中活性成分含量有明显差异,尤其是处方中水溶性差、热不稳定的成分.
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橙皮素及其衍生物的药理作用研究进展
橙皮素是一种从芸香科柑橘属植物果实中提取的二氢黄酮类化合物,其具有多种药理活性,包括抗菌、抗炎、抗氧化、抗病毒、抗变态反应、调节血脂及增强免疫等.近年来,有研究报道橙皮素及其衍生物还具有抗阿尔茨海默病、抗帕金森病、降血糖、抗蛇毒血凝酶、抗纤维化等作用.对近5年来有关橙皮素及其衍生物一些新的药理作用研究进行综述,以期为橙皮素的进一步开发利用提供参考,使其在其他疾病领域发挥更好的疗效.
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橙皮素抗apoE-/-小鼠动脉粥样硬化作用及其机制
目的：探讨橙皮素抗apoE-/-小鼠动脉粥样硬化作用及其机制。方法40只8周龄apoE-/-小鼠随机分为4组,即普通饮食组(NC)、动脉粥样硬化高脂饮食组(WD)、橙皮素高剂量(100 mg/kg)组(H-HES)、橙皮素低剂量(50 mg/kg)组(L-HES),各10只。采用灌胃方式给予橙皮素,根据每只小鼠体质量给予不同的剂量,12周后处死小鼠前眶静脉采血,全自动生化分析仪检测血清三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇浓度,并采用ELISA 试剂盒检测apoE-/-小鼠血清中肿瘤坏死因子( TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1)的浓度,麻醉小鼠后左心室灌注多聚甲醛固定,主动脉树油红O染色观察斑块百分比,同时取材主动脉窦采用免疫荧光技术观察斑块巨噬细胞的浸润情况。结果与NC组比较,WD组、H-HES组及L-HES组apoE-/-小鼠血清TC、TG、LDL-C浓度显著升高,HDL-C显著降低( P <0.05),且 H-HES 及 L-HES 组 TC、TG、LDL-C 的水平显著低于 WD 组( P <0.05)。高脂高胆固醇饲料喂养12周后,WD组的主动脉树动脉粥样硬化病变非常显著,其主动脉树的AS斑块面积百分比为(0.1430±0.0604),而H-HES组、L-HES组的主动脉树AS的面积百分比分别为(0.0404±0.0175)、(0.0252±0.0195),与WD组相比,H-HES组、L-HES组主动脉树AS 病变显著减轻,差异有统计学意义( P <0.05)。 WD组的主动脉窦动脉粥样硬化斑块部位巨噬细胞浸润增加,经过橙皮素12周治疗后,H-HES和L-HES 组主动脉窦斑块部位CD68巨噬细胞浸润减少( P <0.05)。 WD组apoE-/-小鼠血清MCP-1和TNF-α的浓度分别为(807.33±122.46)、(9.87±1.75)μg /L 高于H-HES及L-HES组的(365.83±66.31)、(6.34±0.65)μg/L及(405.74±46.21)、(9.48±0.82)μg /L,差异有统计学意义( P <0.05)。结论橙皮素有明显的调脂降血脂作用,同时具有抗动脉粥样硬化效果,其主要通过抗炎发挥药理作用。
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橙皮素对转化生长因子-β1诱导心肌成纤维细胞增殖的影响
目的：探讨橙皮素（HES）对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导心肌成纤维细胞增殖的影响，并探讨其可能的机制。方法取SD大鼠30只，取其心肌组织进行成纤维细胞的培养。而后采用TGF-β1（10 ng／ml）刺激成纤维细胞，采用4种不同浓度梯度的HES（25μmol／L、50μmol／L、75μmol／L、100μmol／L）干预成纤维细胞24 h，以台盼蓝染色检测其对细胞活性的影响；荧光酶标仪检测法用于检测细胞内活性氧（ ROS）的水平；活细胞计数试剂盒（ CCK-8）用以检测成纤维细胞的增殖情况。结果台盼蓝染色结果提示，HES对成纤维细胞的细胞活性无显著影响，各组活性值分别为空白对照组：100％， HES 25μmol／L组：95％， HES 50μmol／L组：94％， HES 75μmol／L组：93％， HES 100μmol／L组：93％。酶标仪检测结果表明，与空白对照组相比， TGF-β1可增加成纤维细胞内ROS的水平（ P ＜0构．01），当HES与TGF-β1同时作用时，ROS水平随着HES浓度的增加逐渐降低，均存在统计学意义（ P ＜0．05）；TGF-β1可刺激成纤维细胞增殖（ P ＜0．01），当HES （100μmol／L）或N-乙酰半胱氨酸（NAC）（1 mmol／L）与TGF-β1同时作用时，可明显抑制成纤维细胞增殖（ P ＜0．01）。结论 HES可通过抑制TGF-β1诱导的氧化应激进而抑制心肌成纤维细胞增殖，提示其对于预防心肌纤维化可能具有潜在效果。
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橙皮素对大鼠肾动脉血管环的舒张作用机制探讨
目的：研究橙皮素对大鼠肾动脉血管平滑肌细胞的舒张作用,并探讨其机制。方法大鼠处死后,在解剖显微镜下分离其肾动脉血管三级分支,剪成2 mm长的血管环,通过微血管张力记录仪记录其张力,利用全细胞膜片钳技术记录其电压依赖性钾电流。首先观察橙皮素对静息状态下肾动脉张力的影响。然后将肾动脉血管环用60 mMKCl或10-5 mol/L PE预收缩达坪台,加入橙皮素(10-6~10-4 mol/L)对肾动脉进行浓度依赖性舒张,以预收缩的大张力为100%,测定橙皮素对预收缩肾动脉血管环的舒张百分比。用60 mMKCl或10-5 mol/L PE预收缩肾动脉达坪台后,预孵Kv通道抑制剂4 AP或KCa通道抑制剂TEA10 min,然后加入不同浓度梯度的橙皮素(10-6~10-4 mol/L)舒张肾动脉,观察4 AP或 TEA对橙皮素舒张肾动脉的影响。采用两步酶解法分离得到大鼠肾动脉血管平滑肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,观察并记录橙皮素对大鼠肾动脉血管平滑肌细胞电压依赖性钾电流的影响。结果橙皮素对大鼠肾动脉血管平滑肌细胞的静息张力没有产生显著影响。橙皮素(10-6~10-4 mol/L)可使预收缩的肾动脉血管环发生浓度依赖性的舒张,大舒张幅度分别为(53.39±5.27)%(KCl预收缩)和(60.13±4.17)%(PE预收缩)。预孵 TEA没有对橙皮素的舒张作用产生显著影响,预孵4 AP使橙皮素的舒张幅度减小了14.26%(KCl预收缩)和18.31%(PE预收缩)。橙皮素(浓度选用舒张实验计算所得 RC50)可使大鼠肾动脉血管平滑肌细胞的电压依赖性钾电流 I V曲线发生非平行上移,大电流密度增加了45.24%。结论橙皮素对 KCl或10-5 mol/L PE预收缩的大鼠肾动脉血管环有浓度依赖性的舒张作用；橙皮素对大鼠肾动脉的舒张作用与激活电压依赖性钾通道有关,与钙激活钾通道无关。
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橙皮素对异丙基肾上腺素诱导大鼠心衰的保护作用
目的 观察橙皮素对大剂量异丙基肾上腺素(ISO)诱导大鼠心衰的保护作用,并探讨其机制.方法 将SD大鼠随机分为正常(C)组、橙皮素对照(H)组、异丙基肾上腺素(Ⅰ)组和橙皮素治疗+Ⅰ(T)组,l组和T组接受皮下注射大剂量ISO(150 mg/kg),2周后行超声心动图检测.确定造模成功后,H组及T组给予橙皮素(100 mg/kg)灌胃,Ⅰ组给予等量的溶剂乙醇,连续给药10d后测定各组大鼠心脏功能包括左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室射血分数(EF)、左室缩短分数(FS)变化及血清丙二醛(M DA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(TAOC)的变化,观察各组大鼠心肌的病理变化.结果 与C组比较,I组LVEDD变化不大,LVESD值增大、EF、FS降低,氧化应激指标中MDA值升高,SOD、TAOC降低,备指标差异有统计学意义(P＜0.05);与I组比较,T组大鼠LVEDD无明显变化,LVESD降低,EF、FS升高,血清MDA值降低,SOD、TAOC升高,各指标差异有统计学意义(P＜0.05).H组各指标较C组无明显变化.结论 橙皮素可能通过减轻氧化应激,降低MDA,升高SOD、TAOC,从而改善心衰大鼠的心脏功能.
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橙皮素对离体大鼠胸主动脉环舒张作用和机制研究1）
目的：观察橙皮素(HSP)对大鼠离体胸主动脉血管反应性的影响及其可能的机制。方法采用离体血管平滑肌张力实验方法,观察 HSP对 Sprague Dawley(SD)大鼠离体胸主动脉环的作用,并探讨其作用机制。结果 HSP 对氯化钾(KCl)和去氧肾上腺素(PE)预收缩的血管环具有浓度依赖性的舒张作用。去内皮后,HSP 不同浓度梯度(10-5 mol/L,3×10-5 mol/L,6×10-5 mol/L,10-4 mol/L)的舒张血管作用减弱。结论 HSP对KCl和PE预收缩大鼠离体胸主动脉环具有浓度依赖性舒张作用。
