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免疫细胞功能试验中细胞样品保存期的探讨
在应用免疫学试验中,由于在完成对药品、化学品及保健食品等体内免疫功能研究中,免疫检测样品数量大,且多涉及细胞功能测定.在一般情况下,均需在当日内完成测定任务,为此,试验人员在精力及体力上均有较大压力,尤其是在实验人员不足的情况下,当日工作时间内完成测定任务则不大可能,所以,我们初步尝试了免疫细胞检测样品在20～24 h间完成的可能性,并获得满意的检测结果.
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LDH酶释放测定NK细胞活性的几点建议
天然杀伤(NK)细胞的活性与机体抗肿瘤能力关系密切,是机体非特异性防御机能的重要组成部分之一.NK细胞活性的测定方法,多年来一直采用同位素释放法,因此应用上受到限制.近年来乳酸脱氢酶(LDH)释放测定法,以其测定方法的简便性、灵敏性、可靠性,尤其是无同位素污染,使此项检测指标得到广泛应用.目前已确定LDH酶释放法为检测免疫功能性保健品的标准方法之一.我们用LDH酶释放法对化学性毒物、药品以及保健品等进行了免疫功能测.
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硒诱导HepG2细胞凋亡与活性氧的关系
目的 探讨亚硒酸钠(Na2SeO3)诱导细胞凋亡的可能作用机制.方法 用0、2.5、5、10和20μmol/L的Na2SeO3以及加有N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)的Na2SeO3(10μmol/L)处理HepG2.用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞活性;流式细胞仪测细胞内活性氧(ROS)的水平以及细胞凋亡情况.结果 5、10和20μmol/L Na2SeO3作用于HepG2 1h即引起ROS增加,12h后HepG2细胞活性降低,24h后细胞早期凋亡以及晚期凋亡/坏死率均增加,与对照组相比差异有显著性(P＜0.05);抗氧化剂NAC有效抑制了ROS的增加,并增加了细胞活性,降低了细胞凋亡率,与未加NAC的Na2SeO3组(10μmol/L)相比差异有显著性(P＜0.05).结论 一定浓度的亚硒酸钠使HepG2细胞活性下降,促进了细胞凋亡,ROS的增加在其中发挥了作用.
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细胞活性MTT法定量分析中的异速生长代谢动力学
目的:分析细胞活性噻唑蓝比色法(MTT法)定量分析中细胞代谢MTT的特殊动力学特点,建立适于临床应用的分析方法.方法:以传统的MTT法为基础,以MTT浓度、反应时间(t)及细胞数(X)为主要研究参数,观察4种肿瘤细胞系(Hep-G2等)在体外对MTT的代谢特点.采用一级代谢动力学方程[P1=Q0[1-exp(-kt)]]为分析MTT总量(Q0)与其代谢产物甲臜(P1)关系的基本模型,采用逻辑斯谛方程[Pi=ea+βxi/(1+ea+βxi)]分析呈S-型曲线的细胞死亡率(Pi),采用异速生长方程[Y=KXb]表达细胞代谢活性(Y)与每孔细胞数(X)间的关系,以逐步分析MTT代谢中各项因素之间的相互作用和内在联系.结果:根据光学原理,在MTT法中吸光度(At)与甲臜的量(Pt)成正比,MTT初始总量(Q0)全部代谢成甲臜相当的吸光度为极限吸光度(Amax),按本试验条件MTT50μ g/孔约相当于4.0.At对反应时间(t)和Amax呈有限依赖性,提示MTT的代谢不遵从典型的一级代谢动力学规律.MTT的细胞毒性所致细胞渐进性死亡呈S-型曲线,遵从logistic模型的规律.细胞代谢MTT的能力与细胞密度成负相关,遵从异速生长规律,4种细胞系代谢MTT能力的异速生长指数b均介于0.5-0.75之间.以上3种现象各项参数之间存在内在的联系,可用平衡细胞方程(BCEq)[At.=Amax{1-exp[-KXbf(t)]}]表示,式中K为一常数,f(t)为时间函数.结论:体外细胞MTT的代谢遵从特殊的异速生长动力学规律,BCEq是对细胞代谢MTT规律的三维解析,可用三维三步MTT法进行比较准确的细胞定量分析.
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酵素治癌言过其实
近来"酵素"火热,网络中多篇报道强调其作用强大,甚至可以治疗癌症,真相确实如此吗?酵素就是酶什么是酵素?酵素一词源于日语,其实就是我们常说的酶,酵素是"酶"的旧称.酶在希腊语里,就是存在于酵母中的意思,酶是人体大多数生命活动中不可缺少的催化剂,是维持生命与细胞活性的物质.人体就像一家化工厂,时刻都在进行着复杂的化学反应,这需要各种酶的配合,从而帮助消化食物、增强新陈代谢,修复组织等.
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抗氧化性丝素蛋白水解产物的生产工艺及其改善过氧化氢所致HepG2细胞损伤机制
目的:抗氧化性丝素蛋白(SF)胰酶水解工艺的优化.研究水解物对过氧化氢(H2O2)造成人肝癌HepG2细胞损伤的改善作用,对其机制进行初步探讨.方法:以超氧自由基清除率为指标,设计正交试验考察丝素蛋白胰酶水解过程中反应时间、pH、温度、底物浓度、酶浓度对水解工艺的影响.测定水解产物的分子量分布及其对羟基自由基清除率和H2O2诱导的红细胞氧化溶血抑制率.用不同浓度H2O2处理细胞24 h,测定细胞活性,选择合适浓度的H2O2损伤细胞.然后再将细胞分为空白组(不加药物处理),H2O2损伤组,H2O2损伤+5 mmol·L-1N-乙酰半胱胺酸(NAC)治疗组,H2O2损伤+10,20,30,50 g·L-1 SF治疗组.观察细胞活性,丙二醛(MDA)含量,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,过氧化氢酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)的变化.结果:佳水解工艺是酶浓度6％,反应时间160 min,底物质量浓度20 g·L-1,pH 8,温度38℃,此水解条件下所得水解液对超氧自由基清除率为72.73％,水解物分子量在10 kDa以下,对羟基自由基清除率和红细胞氧化溶血抑制率均提高.H2O2损伤细胞后细胞活性降低并且细胞中MDA含量增加(P＜0.05).与H2O2损伤组比较SF治疗组中细胞活性升高,MDA的含量也降低(P＜0.05).H2O2损伤细胞后,TNF-α含量上升,SOD,CAT的活性和T-AOC能力均下降(P＜0.05),SF治疗能降低TNF-α含量,提高SOD,CAT分泌量和增强T-AOC能力(P＜0.05).结论:抗氧化性丝素蛋白永解物对过氧化氢致HepG2细胞损伤有改善作用,机制是通过降低TNF-α含量,提高细胞活力和增加细胞中抗氧化酶活性.
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艾叶提取物的化学成分及抗HBV活性分析
目的:研究菊科艾Artemisia argyi干燥叶的化学成分及抗乙型肝炎病毒(HBV)活性.方法:采用硅胶柱色谱分离其化学成分,并根据理化性质、核磁共振波谱法、质谱法以及参考相关文献鉴定化合物结构,采用噻唑蓝(MTT)法测定化合物对HepG 2.2.15细胞的毒性以及酶联免疫(ELISA)法检测各组分对HepG 2.2.15细胞上清液中HBeAg和HBsAg分泌的影响.结果:从艾叶乙酸乙酯部位分离鉴定了5个化合物,分别为豆甾醇(1),5,4'-二羟基-6,7,3'-三甲氧基黄酮(3'-甲氧基蓟黄素)(2),达玛二烯醇乙酸酯(3),5,7,4'-三羟基-3',8-二甲氧基黄酮(4),十六烷酸丙酯(5).结论:化合物2～4为首次从艾叶中分离得到,其中3'-甲氧基蓟黄素对HBsAg和HBeAg有抑制作用,其对HBsAg的半数抑制浓度(IC50)为8.09 mg·L-1,对HBeAg的IC50小于2.5 mg·L-1.
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苦参素对人食管癌Eca-109细胞增殖作用及机制研究
目的 探讨苦参素对人食管癌Eca-109细胞增殖抑制作用及机制研究.方法运用MTT和流式细胞术分别检测细胞增殖率和细胞周期变化.结果 苦参素对Eca-109细胞持续作用48h后,细胞增殖率由100%降为9.64%(P＜0.001);细胞周期结果显示,G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,与阴性对照组和阳性时照组比较,差异具有显著性(p＜0.05).结论苦参素对人食管癌Eca-109细胞的增殖具有抑制作用,其作用机制与细胞周期阻滞于G0/G1期有关.
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中药注射剂临床应用概况(Ⅱ)
4 肿瘤治疗冯氏[34]用参麦注射液治疗60例晚期癌症患者,结果治疗后胃、肠、肺癌患者的SIL-2R均有显著下降,LAK及NK细胞活性均有显著增强,而SIL-2R与LKA及NK细胞活性之间无相关性.提示晚期癌症患者免疫功能低下,参麦注射液对癌症患者的免疫功能有广泛调节作用.
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卫气虚弱与机体免疫机制相关性研究
为探讨大气污染、卫气虚损及免疫功能三者之间的关系,以及中医病因病机理论对于疾病易感性和大气污染对机体的影响,本课题对广州市污染区和清洁区等地的常住居民2034人进行流行病学调查,并对其中136人进行NK细胞活性和免疫球蛋白功能的检测,现报道如下.
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营心宁对实验性Coxsackie B-3病毒性心肌炎NK细胞活性和干扰素效价的影响
病毒性心肌炎(VMC)自70年代以来国内外发病均呈增多的趋势.已是青壮年较常见的心肌疾病,为儿童和健康青年猝死的重要原因.但目前在临床方面仍缺乏行之有效的治疗手段和药物[1].中医学在防治病毒性心肌炎上具有明显的优势[2],我院研制的自制药营心宁具有补虚化痰通络之功效,在临床上对病毒性心肌炎患者的主观症状和客观指标改善较明显.本课题利用动物实验的方法,采用黄芪注射液为对照,研究营心宁对实验性Coxsackic B-3病毒性心肌炎NK细胞活性和IFN效价的影响.
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柴胡疏肝散对大鼠胃Cajal间质细胞活性及细胞内钙离子浓度的影响
目的 观察柴胡疏肝散含药血清对大鼠胃Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)活性及细胞内钙离子(Ca2+)浓度的影响.方法 按照血清药理学通法制备大鼠含药血清,将血清分为柴胡疏肝散组(浓度为5％、10％、20％)、多潘立酮组(10％)、空白组,急性分离并采用酶解法提取胃窦ICCs进行常规培养,免疫荧光染色法鉴定ICCs,MTT法测定ICCs对数生长曲线,以含药血清继续培养对数生长期的ICCs 3天后,通过CCK-8法检测ICCs活性,激光共聚焦显微镜进行Fluo-3荧光检测ICCs细胞内Ca2+变化,比较各组含药血清对大鼠胃窦ICCs生长的影响.结果 成功分离、培养和鉴定ICCs后,通过各组含药血清作用,与空白组同期比较,多潘立酮组、柴胡疏肝散组ICCs活性与细胞内Ca2+荧光强度均显著增强(P＜0.05);与多潘立酮组同期比较,10％、20％柴胡疏肝散组ICCs活性与细胞内Ca2+荧光强度均显著增强(P＜0.05);与5％柴胡疏肝散组同期比较,10％、20％柴胡疏肝散组ICCs活性(48、72 h)与细胞内Ca2+荧光强度均显著增强(P＜0.05).结论 柴胡疏肝散可以通过增强细胞内Ca2浓度促进ICCs活性,促进其分化生长.
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扶正抗癌益寿延年
癌症的发病率、病死率高,而肿瘤的病因与发病机理,迄今尚未完全阐明,中医学从整体观出发,认为恶性肿瘤的发生、发展,主要是由于正气虚损、阴阳失衡、脏腑功能失调,留滞客邪(致病因子),致使气滞血瘀、痰凝毒聚、相互胶结、蕴郁成肿瘤.癌瘤的生长又会进一步耗损正气,正不遏邪则又助长了癌瘤的发展.现代医学亦认为,恶性肿瘤的发生、发展与整体防御功能衰退,尤其是细胞免疫功能水平低下有关;而生长着的肿瘤又会加深机体免疫机能的抑制,从而助长了肿瘤的发展.近年来,西医运用生物反应调节剂(BRM)用于癌症的治疗,以提高机体的免疫功能,加强和保存机体的有效抗病能力,达到提高疗效的目的.而中医学向来崇尚"治病必求其本",认为肿瘤乃因虚而得病,因虚而致实;整体为虚,局部癌肿属实的疾病.因此,对于癌肿的治疗,应根据<内经>"虚则补之""损者益之""坚者消之""结者散之"的原则,临证时分清标本虚实、轻重缓急,以肺癌为例,我们曾选择304例在各种肺癌中治疗为困难的晚期原发性肺腺癌作为研究对象,其中Ⅲ期82例,Ⅳ期222例,随机分为中药组和化疗组,中药组根据肺癌患者的不同临床表现,中医辨证为阴虚、气虚、气阴两虚、阴阳两虚4种类型,分别给予滋阴(北沙参、南沙参、天门冬、麦门冬等)、益气(黄芪、党参、白术等)、温阳(仙灵脾、肉苁蓉、菟丝子等)扶正中药,与软坚解毒(夏枯草、海藻、石见穿、石上柏等)中药酌情同用;化疗组用MOF方案(MTX+VCR+5FU).结果中药组(171例)治疗后1、3、5年生存率分别为60.94%、31.86%及24.22%,生存期中位数为417天;化疗组(133例)化疗后1、3年生存率分别为36.67%、24.56%,无5年生存率,生存期中位数为265天,两组比较,差异有显著性(P＜0.05),中药组优于化疗组.治疗后肿瘤缩小稳定率中药组为67.83%,化疗组为48.12%,两组比较,差异亦有显著性(P＜0.01),治疗后临床症状改善,体重增加,生存质量提高(卡氏评分标准),经统计学分析,中药组均优于化疗组.中药组治疗后免疫功能的改善(LAK细胞活性,NK细胞活性,IL-2水平,CD3、CD4、CD4/CD8比值,CAMP水平),较治疗前均有显著提高(P＜0.05).
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试论化浊解毒中药血清及补骨脂素对肝星状细胞生物活性的影响
肝病纤维化的主要特征为肝脏收缩及形成结节，是肝脏末期并发症的发病基础。肝纤维化是慢性肝损伤患者的多发现象，终会形成肝硬化，严重的会患有肝癌。有研究显示，肝星状细胞是形成肝纤维化为重要的细胞。肝纤维化的主要治疗方法是抑制形状细胞的活性，包括抑制肝星状细胞的增殖以及凋亡等。目前，临床上治疗肝纤维化的主要方法是化浊解毒方，但是医学上又缺乏对化浊解毒方作用机制的深入研究，因此，探究化浊解毒中药血清以及补骨脂素对肝星状细胞生物活性的影响具有重要的医学意义。
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养血安胎冲剂对反复早期自然流产患者NK及Ts细胞活性的影响
反复早期自然流产(RSA)中医称之为"滑胎"、"数堕胎",是常见的妊娠并发症之一.其发病率占育龄夫妻总数的1%～2%.已知病因与遗传、内分泌、感染、解剖、自身抗体有关,但仍有40%的患者病因不明.
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巨细胞病毒编码的趋化因子及其受体同源物
巨细胞病毒(CMV)属β疱疹病毒亚科,普遍存在于自然界.人巨细胞病毒(HCMV)是对人类具有致病性的CMV,在人群中的感染非常普遍,但大多数呈临床不显性感染或潜伏感染.CMV感染机体后,可调动多种机制逃逸正常机体的免疫监视,建立潜伏感染[1,2],这些机制包括下调MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ类基因的表达,编码MHC-Ⅰ同源物抑制NK细胞活性,以及编码趋化因子(chemokines,CKs)及其受体(chemokine receptors,CKPs)同源物干扰机体正常的免疫应答等.
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人眼球后和其它部位成纤维细胞的差异
研究表明，眼球后成纤维细胞活性增强在Graves眼病（Graves ophthalmopathy，GO）的发生中起重要作用。但是成纤维细胞具有多相性，不同部位成纤维细胞在相应部位疾病的发病中所起的作用不同。本文选用人眼球后和腹部皮肤成纤维细胞进行这方面的研究，初步探讨两种成纤维细胞在结构和功能方面的某些差异。 1 材料与方法 眼外肌（部分）及周围结缔组织取自一位22岁因眼外斜视手术的男性病人；腹部皮肤组织块取自一位9岁因脂肪瘤手术的男性儿童，患者均无自身免疫性疾病史。按照Bahn方法，进行原代和传代细胞培养。实验中为防止传代细胞某些功能发生较大变化，仅选用3～10代的细胞。在培养的两种成纤维细胞内（球后和皮肤成纤维细胞浓度各为6×104和4×104个cell/mL），分别加入不同药物，同时设不加药物的阴性对照，每个浓度设3或4个复孔。适时加入3H-TdR，后测定每分钟计数值。
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2.147内脏高敏感模型中肥大细胞活性的改变及5-羟色胺的作用
目的证实内脏高敏感模型中肥大细胞活性增加.探讨5-羟色胺(5-HT)影响肥大细胞脱颗粒的依据.方法用腹腔注射鸡卵清白蛋白制备内脏高敏感大鼠随机分为A组和B组,空白对照组随机分为C组和D组.
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激光对细胞内反应氧、钙离子浓度及细胞膜完整性的影响
目的 探讨在激光扫描共焦显微镜(LSCM)观测活细胞的过程中,激光对细胞内反应氧(ROS)、细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)和细胞膜完整性的影响.方法 用H2DCFDA、Fluo-4AM和Calcein-AM/PI分别检测488nm激光对脐静脉内皮细胞株(ECV-304)细胞内ROS、[ca2+]i和细胞膜完整性的影响,Ultra view LCI(live cell image)共聚焦成像系统采集并分析结果.结果 激光照射后细胞内 DCF 的荧光强度迅速上升,约80s达到峰值,随后下降并逐渐回到基础水平;Fluo-4的荧光强度在70min内持续平缓地上升;Calcein 的荧光强度明显下降,少量细胞PI阳性染色.结论 488nm激光照射可引起细胞内ROS和[Ca2+],的增加,但对细胞膜的完整性没有显著影响.
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细胞活性的电磁遥感控制技术
电磁场调控细胞活性（electromagnetic control of cell activity）的新技术，于2016年3月发表在《自然》杂志；这一里程碑式的新方法，以其“非植入”、“非化学诱导”等特点，展示了其可观的应用前景。该技术由美国洛克菲勒大学 Jeffrey M．Friedman教授的团队研发，并首次通过电磁方法成功控制神经元，实现了对糖代谢的调控。
