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EB病毒转化人外周血B淋巴细胞的影响因素研究
目的 探讨人类疱疹病毒(EBV)转化外周血B淋巴细胞试验的影响因素.方法 用B95-8细胞制备EBV,实时荧光定量-PCR(real time-PCR)法测定EBV滴度以确保病毒有效性,Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,研究环孢霉素A(CSA)的浓度、CSA加入时间、淋巴细胞浓度3个因素对EBV转化外周血B淋巴细胞试验的影响,选择优化条件对三氯乙烯接触工人的B淋巴细胞进行转化.结果 制备的病毒滴度分别为5.45×10~6/ml和1.06×10~6/ml.不同浓度CSA(0.2、1和2μg/ml)作用以及不同加入时间(同时加入或2h后)B淋巴细胞均成功永生化;正常人B淋巴细胞转化时淋巴细胞浓度不低于2×10~6/ml时方能成功水生化,而接触三氯乙烯工人的淋巴细胞在1×10~6/ml浓度下亦转化成功.不同条件下转化成功的B淋巴细胞永生化细胞系在形态上无明显差别,显微镜下可见B淋巴细胞体积增大并聚集成团.结论 在建立B淋巴细胞永生化细胞系的过程中,CSA浓度和加入时间对转化结果未见影响,而淋巴细胞与EBV接触时的细胞浓度是影响实验成败的关键因素,接触三氯乙烯工人的B淋巴细胞在1×10~6/ml浓度下亦转化成功,推测与淋巴细胞致敏状态有关.
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三氧化二砷联合环孢霉素A治疗再生障碍性贫血的效果观察
目的 :探讨再生障碍性贫血采用三氧化二砷联合环孢霉素A治疗的效果.方法 :将我院2017年6月至2018年6月期间的再生障碍性贫血患者60例进行分组研究,对照组30例行环孢霉素A治疗,观察组30例行三氧化二砷联合环孢霉素A治疗,对血液指标以及不良反应发生率进行分析.结果 :观察组血液指标明显优于对照组,不良反应发生率则低于对照组,P<0.05.结论 :三氧化二砷联合环孢霉素A治疗再生障碍性贫血效果显著,可有效改善患者临床症状以及造血功能,降低不良反应发生率.
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0.5%环孢霉素A滴眼液联合雷公藤多甙治疗干眼症的临床观察
目的:探讨局部免疫抑制剂0.5%环孢霉素A(cyclosporin A,CSA)联合雷公藤多甙对干眼症进行治疗的效果.方法:方法:58例干眼症患者应用0.5% CSA、雷公藤联合用药3个月, 治疗前后进行视力、眼表裂隙灯检查、荧光素染色检查、Schirmer-testⅠ(S-Ⅰ-T)试验、泪膜破裂时间(BUT)检测、印迹细胞学(CIC)检查.结果:治疗后,眼表不适症状减轻,各项检查均有所改善,统计学检验具有显著性差异.结论:0.5%CSA滴眼剂联合雷公藤对干眼症有明显的治疗作用.
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升血灵联合环孢霉素A治疗重型再生障碍性贫血临床观察
目的 观察升血灵胶囊联合环孢霉素A(CSA)治疗重型再生障碍性贫血(SAA)的临床疗效.方法 收集我院收治的重型再生障碍性贫血62例,其中以升血灵胶囊联合CSA治疗34例为观察组,以单用CSA治疗28例为对照组.通过治疗后患者临床表现、血常规、造血干/祖细胞生长、部分细胞因子水平等指标观察升血灵胶囊的疗效.结果 治疗组治疗后有效率为58.8%,对照组治疗后有效率为53.6%,两组疗效无统计学意义(P＞0.05).但治疗组在减轻临床症状,缩短CSA治疗重型再生障碍性贫血的反应时间等方面优于对照组.结论 升血灵可以成为SAA治疗中免疫抑制剂的有益补充,体现了中西医结合治疗的优势.
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线粒体细胞外裂解规律及环孢霉素A对其抑制作用的实验研究
目的:观察线粒体细胞外裂解规律及环孢霉素A (cyclosporineA,CsA)对其抑制作用,探讨创伤后SIRS的发病机制与缓解策略.方法:选取10只60～70日龄,体重240～280 g的雄性SD大鼠,用于细胞线粒体的分离.新鲜分离大鼠线粒体随机分为2组,分别在添加或不添加CsA的血浆环境下培养8h,每30 min通过ELISA方法检测培养液中线粒体特征性蛋白COX、MDH浓度.大鼠NR8383巨噬细胞系随机分为6组,对照组(A组):常规培养液培养;NR8383+CsA共培养组(B组):培养液中含10 mmol/L CsA;NR8383+完整线粒体共培养组(C组):培养液中添加完整线粒体(mtDNA=5 μg/ml);NR8383+完整线粒体+CsA共培养组(D组):培养液中添加完整线粒体(mtDNA=5 μg/ml)与10 mmol/L CsA;NR8383+裂解线粒体共培养组(E组):培养液中添加裂解的线粒体(mtDNA=5 μg/ml);NR8383+裂解线粒体+CsA共培养组(F组):培养液中添加裂解线粒体(mtDNA=5 μg/ml)与10mmol/L CsA.在培养1、3和5h时,通过ELISA方法检测上清中TNF-α及IL-6的浓度.结果:在线粒体血浆培养中,MDH与COX水平随时间延长而升高,并在3h与3.5 h时达到峰值,而CsA使其峰值均延迟到4.5 h;在巨噬细胞不同培养条件下,A组与B组的TNF-α与IL-6在不同时间点基本稳定,其他组间TNF-α与IL-6存在差异.培养1h时,与C组比较,D组的TNF-α与IL-6无显著差异,E组TNF-α与IL-6显著增高;培养3h时,与C组相比,D组的TNF-α及IL-6水平均显著降低,E组TNF-α与IL-6水平显著增高;培养5h时,与C组相比,D组TNF-α及IL-6水平仍显著降低,E组TNF-α与IL-6无显著变化.F组与E组的TNF-α与IL-6水平无显著差异.结论:线粒体在血浆中随时间而逐渐裂解,进一步激活巨噬细胞,CsA对线粒体的裂解具有抑制作用,从而抑制其对巨噬细胞的激活效应.
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论"毒损肾络"学说对治疗环孢霉素A引起肾毒性的意义
自20世纪80年代环孢霉素A(cyclosporine A,CsA)临床应用以来,器官移植的效果大大得到改观,移植物的存活率显著提高,移植的质量和数量都比CsA应用以前大为改善,故人们将近二十年移植界的历史称为"CsA时代".自1978年用于肾移植以来,世界上有数十万器官移植患者依靠CsA维持生命.但其毒副作用也很明显,如导致肾毒性、高血压病、高脂血症、糖耐量异常等,在长期用药的患者中这些副作用尤为突出,其中肾毒性作用已经成为CsA治疗中重要的并发症[1].
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复方灵尼胶囊对免疫抑制小鼠免疫功能影响的实验研究
目的:通过观察复方灵尼胶囊对免疫抑制小鼠淋巴细胞亚群的影响,研究其对免疫抑制小鼠免疫功能的影响.方法:小鼠腹腔注射环孢霉素A(CsA)诱导小鼠造成免疫抑制模型,采集淋巴细胞样品,用流式细胞仪进行检测,观察受试药物对模型动物CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞及CD4 +/CD8+比值的影响.结果:复方灵尼胶囊能够提高免疫抑制小鼠CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞(P＜0.01)及CD4 +/CD8+比值,表明可对抗环孢霉素A起的免疫抑制,促进免疫功能恢复.结论:复方灵尼胶囊具有提高机体免疫功能的作用.
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罗氏e601环孢霉素试剂的性能验证与方法学比较
目的 评价罗氏公司Cobas e601型全自动电化学发光免疫分析仪(e601)环孢霉素试剂的分析性能.探讨化学发光微粒子免疫分析(chemiluminescencemicroparticle immune assay,CMIA)、酶放大免疫分析(enzyme multiplied immunoassaytechnique,EMIT)与电化学发光免疫分析(electrochemoluminescence immunoassay,ECLIA)三种免疫分析系统环孢霉素血药物浓度检测结果的相关性和一致性.方法 依照美国临床和实验室标准化协会(Clinical and Laboratory StandardsInstitute,CLSI)文件对e601环孢霉素试剂盒进行精密度、正确度、批号间稳定性、方法学比较的性能验证.结果 e601环孢霉素分析系统检测全血样本的批内精密度和实验室内精密度与厂家说明书声明的精密度一致;偏倚小于RCPA对于CsA评价标准;不同批号试剂间的Pearson相关系数r=0.988,回归方程y=1.0619X+6.7916.三种检测方法的相关性好,ECLIA与EMIT、CMIA方法的相关系数分别为0.974,0.930.ECLIA的检测结果稍高于CMIA、EMIT(差值均数分别为5.0ng/mL,5.1 ng/mL).结论 e601环孢霉素试剂盒符合厂家声明的性能参数,三种方法检测环孢霉素血药浓度相关性良好.
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三种免疫抑制药对分化的巨噬细胞表型和功能的影响
目的 探讨3种免疫抑制药(雷帕霉素、环孢霉素A和紫杉醇)在骨髓前体细胞分化过程中对分化的巨噬细胞表型和功能的影响.方法 取60只C57BL/6小鼠颈椎脱臼致死,无菌操作制备骨髓前体细胞,在细胞培养体系中分别加入雷帕霉素(100μmol/L)、环孢霉素A(1mg/L)和紫杉醇(20μg/L)和巨噬细胞集落刺激因子,通过混合淋巴细胞反应和流式细胞仪分析分化的巨噬细胞表型和功能.结果 雷帕霉素处理组分化的巨噬细胞表面分子CD80和CD54表达明显降低;环孢霉素A处理组巨噬细胞表面分子CD80、CD40和I-Ad表达显著降低,而CD86表达明显增加;紫杉醇处理组巨噬细胞表面分子CD80、CD86和CD14表达显著增加,而I-Ad表达明显降低.雷帕霉素、环孢霉素A处理组分化的巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力和抗原递呈能力明显降低,而紫杉醇处理组的巨噬细胞吞噬功能和分泌IL-12能力明显强于对照组,但免疫原性降低.结论 3种免疫抑制药可能影响体外分化的巨噬细胞表型和功能.
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中药复方君子汤联合环孢霉素A逆转白血病细胞諯562/VCR耐药性的实验研究
本研究观察中药复方君子汤(FFJZ)联合环孢霉素A(cyclosporine A,CsA)逆转白血病耐药细胞系K562/VCR细胞耐药性的效果,以便寻找有效的联合逆转剂.采用MTT法、流式细胞术研究FFJZ联合CsA逆转白血病耐药细胞系K562/VCR耐药性的作用.结果表明:FFJZ联合CsA在体外对K562/VCR细胞的耐药性有明显的逆转作用(p＜0.01),能提高K562/VCR细胞对阿霉素(ADM)的敏感性,且在药物有效浓度范围内对细胞本身无毒性作用.FFJZ联合CsA对K562/VCR细胞的P-gp表达的阳性率无明显影响.结论:复方君子汤联合环孢霉素A可能成为治疗白血病多药耐药的安全有效的耐药逆转药物.
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环孢霉素A逆转人白血病耐药细胞系HL-60/ADM后氧自由基水平的变化
本研究旨在探讨将抗阿霉素的人急性早幼粒细胞白血病细胞系HL-60/ADM的耐药性逆转后细胞内氧自由基水平的变化特点.选择环孢霉素A(CsA)作为耐药逆转剂,分别采用MTT法、流式细胞术和免疫组织化学法分析CsA对人白血病耐药细胞系的毒性及逆转效果;用化学比色法检测逆转前后细胞内丙二醛(MDA)、超氧化岐化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的含量.结果表明:当CsA在4 μg/ml以下时对HL-60/ADM无明显毒性作用,超过此浓度,其毒性呈剂量效应(p＜0.001).当CsA浓度为0.5 μg/ml时就有明显逆转作用,随着CsA剂量增加,逆转作用逐渐增强(p＜0.001),当CsA剂量达8 μg/ml以上时对细胞存活产生明显的影响.流式细胞仪检测细胞内药物浓度发现,逆转耐药细胞系HL-60/ADM+CsA细胞内阿霉素的浓度明显高于耐药细胞系HL-60/ADM.免疫组织化学检测结果显示,HL-60/ADM细胞膜上P-gp高表达,经CsA作用后P-gp表达下降.氧自由基测定结果显示:HL-60/ADM细胞经4 μg/ml CsA作用72小时后细胞内SOD的活性与对照组相比显著降低(p＜0.001),细胞内的脂质过氧化产物MDA的含量与对照组相比有所升高(p＜0.05),抗氧化剂GSH的含量较对照组明显降低(p＜0.001).结论:CsA能有效逆转HL-60/ADM的耐药性;逆转后细胞内氧自由基的含量升高,抗氧化剂的活性明显减低,过多的氧自由基可影响细胞的功能状态,导致细胞死亡.
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四嗪二甲酰胺抑制T淋巴细胞活化的实验研究
目的 研究四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)对植物血凝素(PHA)刺激的T淋巴细胞体外活化的影响,初步探讨其免疫抑制作用.方法 从健康人外周血分离淋巴细胞,经PHA刺激诱导淋巴细胞活化,ZGDHu-1单独或联合环孢霉素A(CSA)作用24 h、48 h,检测各组T淋巴细胞的增殖、凋亡情况.采用流式细胞仪检测CD3~+ CD69~+、CD3~+ CD25~+、CD4~+ CD25~+、CD8~+ CD25~+和CD3~+ Fas~+、CD4~+ Fas~+、CD8~+ Fas~+.用Annexin V/PI染色结合流式细胞术,分析淋巴细胞早期凋亡.酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清IL-2和转化生长因子-β1(TGF-β1).结果 ZGDHu-1能明显降低PHA活化的CD3~+ CD69~+、CD3~+ CD25~+、CD4~+ CD25~+和CD3~+ Fas~+、CD4~+ Fas~+、Annexin V~+/PI~-,并降低活化T淋巴细胞的IL-2分泌及促进TGF-β1的分泌,联合CSA应用效果更明显.结论 ZGDHu-1能抑制T淋巴细胞活化,降低T淋巴细胞凋亡,和CSA联合具有一定的协同效应.
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环孢素A联合SAL治疗再生障碍性贫血的疗效观察
目的 探索环孢霉素A(CsA)联合雄性激素、山莨菪碱、左旋咪唑(SAL)方案治疗成人再生障碍性贫血的疗效.方法 采用环孢素A口服5～6 mg/(kg·d),疗程3个月,SAL方案6个月,并设SAL治疗对照组.结果 联合治疗组20例,治愈4例,缓解6例,明显进步7例,无效3例,总有效率76.2%;对照组18例,缓解2例,明显进步5例,无效11例,总有效率31.6%,联合治疗组的治疗效果与对照组比较有显著差异(P＜0.05).结论 成人再生障碍性贫血用环孢霉素A联合SAL方案治疗具有安全,简便,有效.
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大剂量人血丙种球蛋白与环孢霉素A联合治疗再生障碍性贫血的护理
大剂量人血丙种球蛋白与环孢霉素A联合治疗再生障碍性贫血有显著疗效,但副作用较多,本文通过对10例再生障碍性贫血患儿治疗的护理及观察,强调病人的心理护理、副反应的观察、皮肤粘膜护理在治疗中的重要性,这不仅能减少副作用的产生,防止感染,有利于治疗顺利进行,而且有利于医生及时调节剂量,使药物更快、更好地发挥疗效.
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环孢霉素A应用于青光眼滤过术的护理
目的观察环孢霉素A(cyclosporinA,CsA)在青光眼滤过术后疗效和并发症,并加强术前、术后的护理,评价其临床应用价值.方法采用随机对照临床试验方法,将52例(64眼)原发开角型青光眼患者随机分为2组,一组患者术中一次性应用2%CsA溶液浸润巩膜瓣下及结膜瓣内表面;另一组行单纯小梁切除术,术后随访6～15个月.结果CsA组术后视力下降与对照组差异有显著性;CsA对眼部毒性作用小.结论通过对实验组、对照组术前、术后护理观察及随访资料得出:CsA应用于青光眼滤过手术有助于促进滤泡形成,提高手术成功率,并发症少,使用更为安全、有效.
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小剂量环孢霉素A抑制大鼠缺血性急性肾衰竭中肾小管上皮细胞线粒体通透性转运
目的研究小剂量环孢霉素A(CsA)对大鼠缺血性急性肾衰竭诱导的肾小管上皮细胞线粒体通透性转运的影响,探讨其抑制肾小管上皮细胞凋亡的作用机制.方法Wistar大鼠双侧肾动脉夹闭30min诱导缺血性急性肾衰竭.再灌注18 h后留取肾组织及血液标本.比色法测定血清肌酐(SCr)浓度,原位末端标记(TUNEL)法检测肾小管上皮细胞凋亡情况,Western blot测定肾组织中胞浆细胞色素C、caspase-3、9蛋白质表达.结果肾脏缺血30min/再灌注18h后大鼠SCr明显升高[(106.9±19.4)μmol/L vs(56.5±7.1)μ mol/L,P＜0.05],肾小管上皮细胞凋亡数目显著增加[(20.14±3.70)%vs(0.99±0.17)%,P＜0.05],肾组织胞浆细胞色素c、caspase 3、9表达增加(P＜0.05);CsA能显著降低SCr[(87.5±18.5)μ m0l/L],减轻肾小管上皮细胞凋亡[(14.61±3.39)%],下调胞浆细胞色素C、caspase-3、9表达(P＜0.05).结论小剂量CsA能抑制大鼠缺血性急性肾衰竭引起的线粒体通透性转运,从而减轻肾小管上皮细胞凋亡,保护肾功能.
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康力龙和环孢霉素A治疗重型再生障碍性贫血的临床疗效观察
目的 比较康力龙和环孢霉素A治疗重型再生障碍性贫血的临床疗效,为临床选择有效的治疗方法提供依据.方法 采用临床疗效观察的方法,对6例重型再生障碍性贫血进行康力龙治疗,4例采用环孢霉素A治疗,观察其疗效状况.结果 采用环孢霉素A治疗的有效率为75%,采用康力龙的治疗有效率为33.33%,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 对于重型再生障碍性贫血的治疗,环孢霉素A治疗的有效率明显优于康力龙,值得推广.
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醛固酮上调大鼠组织钙调神经磷酸酶活性及抑制血浆一氧化氮水平
目的研究醛固酮对大鼠重要脏器心、脑、肾、脾、肺和肝脏中钙调神经磷酸酶(CaN)活性及血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮素(ET-1)和一氧化氮(NO)水平的影响,探讨醛固酮在CaN依赖的信号传导通路中的作用.方法取21只雄性Wistar大鼠随机分为3组:醛固酮(Ald)组(腹腔内注射Ald 18μg/d 4周)、环孢霉素A(CsA)干预组(以Ald处理同时腹腔内给予CsA 5 mg/kg·d注射共4周)及正常对照组.采用放免法测定血浆AngⅡ、Ald和ET-1浓度,采用比色测定NO浓度及大鼠各组织器官CaN活性.结果Ald组大鼠血浆NO-3浓度较对照组明显下降(P＜0.05),CsA干预后血NO-3浓度明显回升(P＜0.05).各组AngⅡ、ET-1浓度无明显变化.Ald组大鼠心、脾、肾、肺、脑和肝脏中CaN活性较正常对照组分别上升147%、65%、38%、100%、43%和50%(均P＜0.05),CsA干预显著缓解上述组织器官CaN活性的上升(P＜0.05).结论醛固酮能上调大鼠重要组织脏器CaN活性并抑制血浆NO水平,可能在激活CaN依赖的信号传导通路中具有重要作用.
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环孢霉素A抑制肾性高血压大鼠心肌肥大的作用机制
目的观察环孢霉素A对肾性高血压大鼠心肌肥大的抑制作用,并探讨其作用机制.方法 20只Wistar大鼠随机分为3组:两组采用一肾一夹模型制造肾性高血压,其中高血压组(n=7)予生理盐水腹腔注射;CsA组(n=7)给予环孢霉素A(CsA)5 mg·kg-1·d-1腹腔注射;假手术组(n=6)只给予生理盐水腹腔注射.称重法测定心重比,发色底物法测CaN活性;半定量PCR测定各组心肌组织中心房利钠因子(ANF)及CaNmRNA的水平,同时用免疫组织化学染色方法,观察心肌中CaN及活化T细胞核因子(nuclearfactor of activated T cell,NFAT)的表达.结果肾性高血压大鼠经CsA干预4周,其心重比较未干预组明显降低(P＜0.05),ANF mRNA水平较手术组明显降低(P＜0.05),与假手术组水平接近,心肌肥大受到抑制,同时发现心肌中CaN活性较未干预组显著下降,CaN mRNA水平较手术组明显降低(P＜0.05),免疫组化显示CsA干预组心肌中CaN及NFAT表达降低.结论 CsA抑制肾性高血压心肌肥大的机制与其下调心肌胞浆中CaN表达及其活性有关.
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重症溃疡性结肠炎的规范化治疗
溃疡性结肠炎（ UC）是发生在结肠，原因不明的慢性非特异性炎症性疾病。 UC的病因和发病机制尚不清楚，可能与肠黏膜免疫应答异常有密切关系。重症UC是一种致命性的疾病，内科疗效差，死亡率高，预后差。临床上除了一般常规处理外，应积极给予内科治疗，包括糖皮质激素、环孢霉素A或生物制剂（抗肿瘤坏死因子单抗）治疗；若仍然无效，则需外科手术治疗。在临床上应及时正确预测病情发展，积极给予合理治疗，提高临床疗效，预防并发症，降低死亡率。
