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miRNA-34a及XIAP在不同基因分型乳腺癌中的表达及意义
目的 探讨miRNA-34a和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在不同基因分型乳腺癌中的表达及意义.方法 分别采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分析管腔A型(Luminal A,18例)、管腔B型(Luminal B,19例)、人表皮生长因子受体2(HER2)过表达型(HER2+,19例)和三阴性(21例)乳腺癌组织和癌旁组织中miRNA-34a和XIAP的相对表达情况,并分析二者与乳腺癌患者临床特征的关系.结果 乳腺癌组织中miRNA-34a相对表达水平低于癌旁组织,XIAP蛋白相对表达水平高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05).不同基因分型乳腺癌组织中miRNA-34a、XIAP蛋白相对表达水平比较,差异均有统计学意义(F=7.128,P=0.000;F=3.824,P=0.013).与Luminal A、Luminal B和三阴性乳腺癌组织相比,HER2+乳腺癌组织中miRNA-34a相对表达水平降低,而XIAP相对表达水平升高(P﹤0.05).有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、HER2阳性表达的乳腺癌组织中miRNA-34a相对表达水平均低于无淋巴结转移、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、HER2阴性表达的乳腺癌组织(P﹤0.05).TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、HER2阳性表达的乳腺癌组织中XIAP蛋白相对表达水平均高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、HER2阴性表达的乳腺癌组织(P﹤0.05).Pearson相关性分析显示,乳腺癌组织中随着miRNA-34a相对表达水平的降低,XIAP蛋白相对表达水平逐渐提高,二者呈负相关(r=-0.404,P﹤0.05).结论 miRNA-34a在乳腺癌中的表达水平下调,与XIAP表达呈负相关,且二者在生物学行为更为恶性的HER2过表达型乳腺癌中的表达差异更显著,提示miRNA-34a和XIAP对乳腺癌恶性进展具有调控作用.
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miRNA-34a过表达对4种人宫颈癌细胞放射敏感性研究
目的 研究miRNA-34a过表达对4种人宫颈癌细胞放射敏感性的影响.方法 运用脂质体2000转染试剂盒将pGenesil-1-miRNA-34a表达质粒转染宫颈癌细胞系C33A、HeLa、SiHa和CaSki,通过G418筛选构建过表达miRNA-34a宫颈癌细胞系(miRNA-34a/C33A、miRNA-34a/HeLa、miRNA-34a/SiHa和miRNA-34a/CaSki).细胞经不同剂量60 Coγ射线照射;运用TaqManRT-PCR和蛋白印迹法测定细胞中miRNA-34a表达;运用MTT法和克隆形成实验分别测定细胞增殖抑制率和克隆形成能力,流式细胞仪测定细胞凋亡率和蛋白印迹法测定细胞凋亡相关蛋白表达变化.结果 宫颈癌细胞系中miRNA-34a表达量显著高于阴性对照组(P<0.05),过表达miRNA-34a宫颈癌细胞增殖抑制率显著高于阴性对照组(P<0.05),细胞克隆形成率显著低于阴性对照组(P<0.05).流式细胞仪结果显示过表达miRNA-34a宫颈癌细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05).蛋白印迹法结果显示4 Gy+过表达miRNA-34a细胞中cleaved caspase 9和cleaved PARP蛋白表达量高于过表达miRNA-34a细胞.结论 本研究成功构建miRNA-34a过表达宫颈癌细胞系,miRNA-34a过表达增强宫颈癌细胞放射敏感性,其机制与激活细胞凋亡通路有关.
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microRNA-34a与非小细胞肺癌的关系及其可能调节机制
目的 探讨miRNA-34a在非小细胞肺癌发生中的作用及其可能机制.方法 选取56例经病理诊断确诊为非小细胞肺癌患者的癌组织及癌旁组织,RT-PCR法测定miRNA-34a及c-myc mRNA的表达水平,免疫组织化学法检测癌组织及癌旁组织的P53蛋白及c-myc蛋白的表达水平.结果 癌组织的miRNA-34a的表达水平低于癌旁组织,c-myc mRNA表达及c-myc、P53蛋白表达阳性率高于癌旁组织(P < 0.05).miRNA-34a与c-myc mRNA表达水平呈负相关关系(P < 0.05).结论 miRNA-34a对非小细胞肺癌的发生具有一定的调节作用,可能是非小细胞肺癌发生的重要环节,miRNA-34a主要是通过与c-myc的结合而发挥其调节作用.
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miRNA-34a和miRNA-29b在非小细胞肺癌中的表达及意义
目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌组织标本中miRNA-34a和miRNA-29b基因的表达与临床特征及化疗疗效的相关性.方法 将已确诊的80例NSCLC患者肿瘤肺组织作为试验组(并按病理类型及TNM分期分组),同期随机选择肺部为良性疾病肺组织100例作为对照组,通过实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)法检测 miRNA-34a和miRNA-29b基因表达水平,并回顾性分析miRNA-34a和miRNA-29b基因表达与化疗疗效情况.结果 miRNA-34a在试验组的组织表达水平高于对照组(P<0.05);miRNA-29b在试验组的组织表达水平低于对照组(P<0.05);miRNA-34a在腺癌组与鳞癌组均明显高于其他型肺癌组(P<0.05),在腺癌组组中的表达高于鳞癌组(P<0.05),miRNA-29b在腺癌组与鳞癌组均明显低于其他型肺癌组,在腺癌组中的表达低于鳞癌组(P<0.05),miRNA-34a和miRNA-29b在肺癌组织分级、TNM分期及淋巴结转移呈密切相关性(P<0.05).miRNA-34a高表达组患者化疗有效率显著低于低表达组患者(P<0.05);miRNA-29b低表达组患者化疗有效率显著低于高表达组患者(P<0.05).NSCLC组织中miRNA-34a的表达和 miRNA-29b的表达之间呈负相关(r=-0.79,P<0.01).结论 miRNA-34a的基因表达在NSCLC中高表达,miRNA-29b的基因表达在NSCLC中低表达,它们表达水平有助于临床分期组、织学分级和淋巴结转移的判断,并且miRNA-34a低表达或者miRNA-29b高表达的患者化疗有效率高,是化疗受益的指标之一.
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miRNA-34a对无血清培养诱导心肌细胞凋亡的影响及机制研究
目的：探讨miRNA-34a（miR-34a）对无血清培养诱导的大鼠心肌细胞凋亡及B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）表达水平的影响。方法体外培养大鼠心肌细胞H9C2，实验分实验组（转染miR-34a inhibitor）、空白对照组（无转染miR inhibitor）和阴性对照组（转染随机合成NC microRNA片段）。转染24h后无血清培养饥饿诱导细胞凋亡，Western bolt法检测Caspase-3及Bcl-2的表达。结果实验组细胞Caspase-3表达低于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。Bcl-2表达明显高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。结论转染miR-34a inhibitor可以下调miR-34a的表达，减少无血清培养诱导H9C2细胞的凋亡，Bcl-2的表达增加可能参与了其保护机制。
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miRNA-34a、Notch1与乳腺癌发生、发展的研究进展
miRNA-34a在众多肿瘤中发挥作用,通过作用靶基因Notch1调控Notch信号通路,广泛参与肿瘤细胞增殖、侵袭、转移等恶性生物学行为.探讨miRNA-34a-Notch1信号通路在乳腺癌发生、发展中的作用机制,对乳腺癌的防治可能具有重要意义.
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miRNA-34 a对人结肠癌细胞 HCT116增殖及侵袭转移的影响
目的：研究微小RNA-34a（microRNA-34a，miR-34a）在人结肠癌细胞株HCT116中的过表达对细胞增殖和侵袭的影响及其机制。方法设计合成并构建携带绿色荧光蛋白（ GFP）的miR-34a真核表达载体，脂质体法稳定转染HCT116细胞。通过Realtime PCR验证转染后miR-34a的表达变化。 MTT法检测转染前后HCT116细胞增殖能力变化， Transwell法检测转染前后HCT116细胞侵袭能力改变，western blot检测目的蛋白的表达。结果 miR-34a转染HCT116细胞后其表达量增加到（7．32±1．34）倍，而HCT116细胞增殖能力也受到显著抑制，下降到（0．49±0．10）；Bcl-2蛋白受到miR-34a表达的抑制，而BAX的表达则受到miR-34a表达的增强；HCT116细胞侵袭能力在miR-34a过表达后显著增强，相应的MMP-2和MMP-9表达也出现显著增强。阴性对照组与空白对照组比较无显著性差异。结论 miR-34a的过表达能够抑制人结肠癌细胞HCT116的增殖及侵袭转移，与调控Bcl-2／BAX和MMP-2和-9蛋白的表达密切相关。
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宫颈癌及CINⅢ组织miRNA-34a表达及意义
目的 探讨miRNA-34a(miR-34a)在宫颈上皮内瘤变(CINⅢ)及宫颈鳞癌组织和血清表达及其意义.方法 选择41例宫颈鳞癌病人(宫颈癌组)、27例CINⅢ病人(CINⅢ组)和20例正常宫颈者(对照组),提取其血清及组织中的小分子RNA,采用实时荧光定量PCR方法检测miR-34a的表达.结果 宫颈癌及CINⅢ组织中miR-34a相对表达水平明显低于对照组,差异有显著性(F=70.26,q=8.36、16.58,P＜0.01).宫颈癌组血清中miR-34a相对表达量较CINⅢ组明显下降,差异有显著性(F=39.96,q=5.54,P＜0.01).CINⅢ组血清中miR-34a相对表达量较对照组也明显下降,差异有显著性(q=7.08,P＜0.01).宫颈癌组病人血清及组织中miR-34a的表达呈正相关(r=0.886,P＜0.01).结论 miR-34a在CINⅢ及宫颈鳞癌病人组织及血清中异常表达,可能在宫颈癌的发生和发展过程中发挥重要作用,对宫颈癌的诊断具有一定临床价值.
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MiRNA-24、 miRNA-34 a和miRNA-375抑制小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞中Neurod1／BETA2的蛋白表达
目的：在小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞中分析miRNA?24、 miRNA?34a和miRNA?375对Neurod1／BETA2的表达调控以及作用方式。方法设计并合成针对小鼠Neurod1基因3′非翻译区（3′untranslated re?gion，3′UTR）序列的引物，克隆于pMIR?REPORTTM荧光素酶报告基因载体中；用miRanda软件预测可能调控Neurod1表达的miRNAs，挑选在β细胞中有相关功能研究的miRNAs并委托公司合成pre?miRNAs；脂质体法转染至MIN6细胞中，荧光素酶报告基因技术分析这些miRNA对Neurod1的作用；定量RT?PCR分析Neurod1的mRNA水平； Western 印迹检测Neurod1的蛋白表达水平； GSIS检测干扰Neurod1后MIN6细胞的功能。结果成功制备小鼠Neurod1基因的3′UTR荧光素酶报告基因载体；选取了预测在Neurod1的3′UTR有互补结合位点的3个miRNAs （miRNA?24、 miR?34a和miR?375），并挑选一个没有互补结合位点的miRNA （miR?29a）作为阴性对照；在MIN6细胞中过表达pre?miRNA?24、 pre?miR?34a和pre?miR?375能够抑制Neurod1基因3′UTR荧光素酶报告基因的活性，而过表达阴性对照 miRNA?29a则不能抑制其活性；pre?miRNA?24、 pre?miR?34a和pre?miR?375还可以不同程度抑制Neurod1的蛋白表达；在MIN6细胞中干扰Neurod1蛋白表达能够降低细胞的GSIS功能。结论 miRNA?24、 miR?34a和miR?375能够抑制小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞中Neurod1的蛋白表达。
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miR-34a表达水平与结直肠癌根治术后复发转移的关系
目的 研究miR-34a在Ⅱ～Ⅲ期结直肠癌组织中的表达及其与结直肠癌根治术后复发转移的关系.方法 收集根治术后3年内复发转移与未复发的Ⅱ～Ⅲ期结直肠癌新鲜手术标本各40例,采用反转录实时定量PCR方法检测miR-34a的表达水平,并分析其与结直肠癌根治术后复发转移的关系.结果 肿瘤组织中miR-34a的表达水平与患者性别、年龄、肿瘤部位、浸润深度、有无淋巴结转移、脉管癌栓和病理分化程度无关(P＞0.05).有复发转移患者miR-34a的表达水平低于无复发者(P=0.039).单因素生存分析显示,miR-34a低表达与患者根治术后无病生存时间缩短有关(P=0.010),且在Ⅲ期患者中这种趋势更加明显(P=0.003).40例复发患者中,miR-34a低表达者(14例)中位无病生存时间为13.4个月,低于高表达者(26例)的18.4个月(P=0.037).Cox模型多因素分析miR-34a低表达是影响结直肠癌根治术后无病生存时间的独立因素(RR=0.397,95％CI=0.205～0.768,P=0.006).结论 miR-34a表达水平下降与结直肠癌患者术后无病生存时间缩短有关,miR-34a可作为预测结直肠癌根治术后复发转移的一个分子指标.
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寻常型银屑病患者皮损中miRNA-34a及其靶基因Notch1的表达及意义
目的:探讨miRNA-34a及其靶基因Notch1在寻常型银屑病患者皮损中的表达水平及意义.方法:实时荧光定量PCR法检测22例寻常型银屑病患者皮损组织及10例正常人皮肤组织中miRNA-34a的表达水平.采用免疫组化EnVision法检测51例寻常型银屑病患者(包括上述22例患者)和29例正常人(包括上述10例正常人)皮损组织中miRNA-34a可能的靶基因Notch1的表达情况.结果:miRNA-34a在寻常型银屑病患者皮损组织中的表达水平为0.162±0.186,高于正常皮肤组织中的表达水平(0.028±0.029),银屑病组为正常对照组的5.786倍,两组比较,差异有统计学意义(=2.22,P＜0.05);Notch1在寻常型银屑病组织中主要为表皮全层细胞质表达,阳性表达率为76.47％ (39/51),而在正常皮肤组织中阳性表达率为13.79％(4/29),两者差异有统计学意义(x2=29.22,P＜0.05).结论:miRNA-34a在寻常型银屑病皮损组织中的表达高于正常人皮肤组织,其可能通过调控靶基因Notch1参与寻常型银屑病的发病机制.
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血清miRNA-15b和miRNA-34a的检测对ⅢB、Ⅳ期非小细胞肺癌患者化疗疗效的评估
目的 探讨血清miRNA-15b和miRNA-34a的检测对ⅢB、Ⅳ期非小细胞肺癌患者化疗疗效的评估价值.方法 收集2010年1月1日至2016年1月1日于本院化疗的201例ⅢB、Ⅳ期非小细胞肺癌患者化疗前和化疗后血清,另收集20例健康人血清做对照.设计miRNA-15b和miRNA-34a上下游引物,提取血清中总RNA,采用RT-PCR方法检测血清中miRNA-15b和miRNA34a含量水平,记录每份样品检测CT值,分析其与每例患者的治疗疗效相关性.结果 ①经过2个疗程的化疗后,201例非小细胞癌患者中69例为PR,94例为SD,38例为PD.②健康对照组的血清中miRNA-15b和miRNA-34a的CT值分别为(35.50±2.51)、(36.00±2.00)观察组化疗前、后血清中miRNA-15b CT值分别为(28.43±4.81)、(31.85±7.00);观察组化疗前、后血清中miRNA-34a的CT值分别为(30.43±5.12)、(32.00±6.28);与健康对照组相比,观察组化疗前、后血清中miRNA-15b和miRNA-34a含量均处于高水平;差异均具有统计学意义(均P＜ 0.05).③与化疗前相比,PR组和PD组两组患者血清中miRNA-15b和miRNA-34a CT值有显著变化,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).结论 血清中miRNA-15b和miRNA-34a的检测对ⅢB、Ⅳ期非小细胞肺癌患者的化疗疗效及病情评估具有重要的临床参考价值.
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miRNA-21、miRNA-34a在宫颈癌、CIN、正常组织中的差异性表达及对宫颈癌早期诊断价值
目的 探讨miRNA-21、miRNA-34a在宫颈癌、CIN、正常组织中的表达差异及对宫颈癌早期诊断的价值.方法 选取子宫肌瘤患者、CIN患者、宫颈癌患者为研究对象,检测病理组织、正常组织及血清中miRNA-21、miRNA-34a的表达水平.统计分析二者表达的临床意义.结果 (1)与其他患者相比,宫颈癌患者组织及血清中miRNA-21表达水平显著较高,miRNA-34a水平显著较低(P<0.01);(2)临床分期、是否存在淋巴结转移是影响miRNA-21表达水平的独立性危险因素.但miRNA-34a表达水平对宫颈癌患者临床病理参数无明显影响;(3)ROC曲线显示,miRNA-21、miRNA-34a对宫颈癌诊断的敏感性为87.9％、92.8％,特异性为78.8％、64.8％.结论 miRNA-21、miRNA-34a参与了宫颈癌的发生发展过程,且二者对宫颈癌的诊断有一定的预测效能.
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MicroRNA-34a调控细胞衰老的研究
目的 探讨微RNA-34a(miRNA-34a)对细胞通过调控沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)的表达,从而引起细胞衰老的作用.方法 构建pre-miRNA-34a表达载体,并将其和一个不针对任何基因的微小RNA-1792(miRNA-1792)表达载体(其他实验室赠送)分别转染至HEK293和HUVEC细胞内,用RT-PCR、Western blot检测各细胞组SIRT1 mRNA与蛋白表达水平,以未转染的细胞为对照；将HUVEC细胞分为转染不同质粒、未转染质粒和用SIRT1激活剂白藜芦醇(终浓度1μmol/L,作用2h)处理HUVEC细胞(HUVEC-Res)组,中性彗星电泳分析H2O2作用2h后4组HUVEC细胞的双链损伤情况；用阿霉素处理上述4组HUVEC细胞2h,β-半乳糖甘酶(SA-β-gal)染色检测各细胞不同时间点的衰老情况.结果 测序结果表明pre-miRNA-34a表达载体构建成功；RT-PCR、Western blot显示HEK293-pre-miRNA-34a和HUVEC-pre-miRNA-34a中SIRT1mRNA和蛋白质表达的水平明显下降(P＜0.001);中性彗星电泳检测发现经H2O2处理后,HUVEC-Res组DNA损伤轻,而HUVEC-miRNA-34a组DNA损伤程度为严重；SA-β-gal染色显示DNA损伤后HUVEC-miRNA34a衰老程度较其它3组严重,而HUVEC-Res组的衰老程度为轻微.结论 miRNA-34a通过抑制SIRT1表达调控细胞衰老.
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miRNA-34a在宫颈HPV持续感染患者脱落细胞中的表达及意义
目的:研究miRNA-34a在宫颈高危型人乳头瘤病毒(human paplilloma virus,HPV)持续感染患者脱落细胞中的表达及临床意义.方法:收集2012年3月-2014年3月妇科门诊60例HPV感染患者的宫颈脱落细胞学组织标本,运用Poly (A)加尾法的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测miRNA-34a在宫颈脱落细胞中的表达,分析其与HPV持续感染的关系.结果:miRNA-34a在HPV持续感染标本中表达较转归组降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:miRNA-34a与HPV持续感染密切相关,可能成为HPV持续感染在宫颈癌早期筛查、诊断及临床诊治中的新指标.
