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miRNA-34a和miRNA-29b在非小细胞肺癌中的表达及意义
目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌组织标本中miRNA-34a和miRNA-29b基因的表达与临床特征及化疗疗效的相关性.方法 将已确诊的80例NSCLC患者肿瘤肺组织作为试验组(并按病理类型及TNM分期分组),同期随机选择肺部为良性疾病肺组织100例作为对照组,通过实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)法检测 miRNA-34a和miRNA-29b基因表达水平,并回顾性分析miRNA-34a和miRNA-29b基因表达与化疗疗效情况.结果 miRNA-34a在试验组的组织表达水平高于对照组(P<0.05);miRNA-29b在试验组的组织表达水平低于对照组(P<0.05);miRNA-34a在腺癌组与鳞癌组均明显高于其他型肺癌组(P<0.05),在腺癌组组中的表达高于鳞癌组(P<0.05),miRNA-29b在腺癌组与鳞癌组均明显低于其他型肺癌组,在腺癌组中的表达低于鳞癌组(P<0.05),miRNA-34a和miRNA-29b在肺癌组织分级、TNM分期及淋巴结转移呈密切相关性(P<0.05).miRNA-34a高表达组患者化疗有效率显著低于低表达组患者(P<0.05);miRNA-29b低表达组患者化疗有效率显著低于高表达组患者(P<0.05).NSCLC组织中miRNA-34a的表达和 miRNA-29b的表达之间呈负相关(r=-0.79,P<0.01).结论 miRNA-34a的基因表达在NSCLC中高表达,miRNA-29b的基因表达在NSCLC中低表达,它们表达水平有助于临床分期组、织学分级和淋巴结转移的判断,并且miRNA-34a低表达或者miRNA-29b高表达的患者化疗有效率高,是化疗受益的指标之一.
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肺鳞癌组织miRNA-29b表达及预后相关性研究
目的 探讨miRNA-29b在可手术的肺鳞癌组织中的表达及其与转移及预后的关系.方法 回顾性分析2006年6月至2013年12月间武警总医院与中国医科大学附属第一医院62例肺鳞癌手术患者的临床资料,采用RT-PCR方法检测上述病例肺鳞癌组织标本中miRNA-29b的表达水平,根据miRNA-29b相对表达量进行实验分组.应用x 2检验分析miRNA-29b表达与肺鳞癌患者转移的关系,应用Kaplan-Meier方法分析miRNA-29b表达与生存的关系,应用Cox风险比例模型分析miRNA-29b表达与预后的关系,应用Western blot分析肺鳞癌组织标本中胰岛素样生长因子-1(IGF1),分析miRNA-29b与IGF1表达的相关性.结果 肺鳞癌组织中miRNA-29b的表达量显著低于正常肺组织,与转移相关(P＜ 0.05),低表达组生存期较高表达组明显缩短(P＜0.01),miRNA-29b表达可作为肺鳞癌患者预后的独立影响因素.IGF1在肺鳞癌组织标本中的表达显著高于正常肺组织(P＜001).结论 miRNA-29b低表达与非小细胞肺癌转移及生存期相关,miRNA-29b表达与IGF1的表达呈显著负相关.
关键词： miRNA-29b 胰岛素样生长因子-1 肺鳞癌 转移 预后 -
MicroRNA-29b表达改变对卵巢癌细胞增殖及侵袭的影响
目的:探讨microRNA-29b (miRNA-29b)在卵巢癌细胞中的表达差异及其对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:采用real-time PCR技术检测人卵巢癌上皮细胞系SKOV-3及正常人卵巢上皮细胞系IOSE80中miRNA-29b的表达水平;采用转染技术上调SKOV-3细胞中miRNA-29b的表达水平;采用CCK-8法检测SKOV-3细胞增殖能力;采用Transwell法检测SKOV-3细胞的侵袭能力;采用Western印迹法检测SKOV-3细胞中蛋白表达水平.结果:与IOSE80细胞相比,人卵巢癌上皮细胞系SKOV-3细胞miRNA-29b的表达下降(P＜0.05).转染miRNA-29b mimic后SKOV-3细胞中miRNA-29b的表达水平增加;从第4天开始,转染miRNA-29b的SKOV3细胞增殖能力下降(P＜0.05).转染miRNA-29b减少了通过聚碳酸酯膜的SKOV3细胞数量,抑制了SKOV3细胞的侵袭能力(P＜0.05);转染miRNA-29b mimic后,卵巢癌细胞SKOV3中抑制凋亡蛋白Bcl-2和侵袭相关蛋白MMP-9的表达均降低,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:miRNA-29b可通过抑制凋亡相关蛋白Bcl-2和侵袭相关蛋白MMP-9的表达来抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭.
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miRNA-29b 在肺腺癌的表达及临床意义
目的：研究微小RNA‐29b（miRNA‐29b）在肺腺癌中的表达及其临床意义。方法采用荧光定量RT‐PCR法检测82例肺腺癌组织及其癌旁正常肺组织中miRNA‐29b的表达，分析其与临床病理学特征的关系。结果肺腺癌组织中miRNA‐29b表达高于癌旁正常肺组织（P＜0．01）。肺腺癌组织中miRNA‐29b表达与患者肿瘤组织分化程度、临床分期、淋巴结转移状态以及总生存期密切相关（P＜0．01），而与性别、年龄和吸烟史无明显相关（P＞0．05）。肿瘤的临床分期、淋巴结转移状态以及miRNA‐29b表达水平均为判断肺腺癌患者预后的独立因素（P＜0．01）。结论 miRNA‐29b表达下调参与肺腺癌的发生、发展过程，有望成为临床肺腺癌患者早期诊断和预后评估的分子学标志物。
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转化生长因子-β2(TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达及意义
目的 探究转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达变化及意义.方法 使用不同浓度TGF-β2刺激RPE细胞上皮-间质转分化后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Western blot、RT-PCR检测成纤维化相关分子纤维连接蛋白(fibronection,FN)、神经钙粘连蛋白(nerve calcium adhesion protein,N-Cadherin)的表达.采用RT-PCR检测不同浓度TGF-β2及不同时间TGF-β2(5μg·L-1)刺激RPE细胞后miRNA-29b的表达.结果 TGF-β2刺激后的RPE细胞形态呈纤维化改变.在一定浓度范围内(1μg·L-1、5μg·L-1、10 μg· L-1),随着TGF-β2浓度的增加FN、N-Cadherin及相应mRNA随之增加,1μg·L-1、5μg·L-1、10μg · L-1组与对照组(0 μg· L-1)相比,差异均有统计学意义(均为P＜0.01).TGF-β2在一定浓度范围内(0μg· L-1、1μg·L-1、5 μg· L-1)以剂量依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,1μg·L-1、5μg·L-1、10μg·L-1组与对照组(0μg·L-1)相比,差异均有统计学意义(均为P＜0.01),在TGF-β2浓度为5μg·L-1时miRNA-29b表达量低.TGF-β2在一定时间范围内(0h、3h、6h、12 h)以时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,3h、6h、12 h、24 h、48 h组与0h相比差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 一定范围内TGF-β2以剂量和时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b的表达,为进一步研究miRNA-29b与TGF-β2在RPE细胞上皮-间质转分化过程中的相互作用提供理论基础.
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miRNA-29 b在特发性肺间质纤维化中的抗纤维化作用
目的：探讨miRNA-29b（简称miR-29b）在特发性肺间质纤维化（IPF）上皮间充质转分化（EMT）过程中的抗纤维化作用。方法：将体外培养的IMR-90细胞随机分为空白对照组、TGF-β1诱导组（诱导48 h）、miR-29b转染组（TGF-β1＋miR-29b）和miR-29b阴性对照组（TGF-β1＋无意义序列）；应用倒置相差显微镜观察细胞形态改变；运用实时荧光定量PCR技术和Western bolt技术分别检测TGF-β／Smad信号通路Smad3和p-Smad3、上皮标志物E-钙黏蛋白（E-cad）、间质标志物平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和下游靶基因Ⅰ型胶原蛋白（COL1A1）的表达。结果：与空白对照组比较，TGF-β1诱导组IMR-90细胞中E-cad表达显著下降，p-Smad3、α-SMA和COL1A1的表达显著升高（P均＜0．05）；与TGF-β1诱导组比较，miR-29b转染组E-cad表达升高，p-Smad3、α-SMA和COL1A1的表达降低（P均＜0．01）。结论：上调miR-29b表达可抑制TGF-β／Smad信号通路介导的肺泡上皮细胞EMT。
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肺痨康对耐异烟肼肺结核小鼠miRNA-29b和caspase-3的影响
目的:观察肺痨康对耐异烟肼肺结核小鼠肺组织中miRNA-29b和caspase-3表达的影响,揭示肺痨康治疗耐异烟肼肺结核的作用机制.方法:将小鼠随机分为空白对照组、模型组、肺痨康组、异烟肼组,小鼠尾静脉注射耐异烟肼肺结核分枝杆菌菌悬液造模,空白对照组小鼠、模型组小鼠每天灌胃生理盐水;肺痨康组小鼠每天灌胃6g(生药)/kg;异烟肼组小鼠每天灌胃异烟肼液6 g/kg,连续灌胃56 d.采用免疫组化方法检测小鼠肺组织中caspase-3的表达水平,采用RT-qPCR(实时荧光定量聚合酶链反应)技术检测各组小鼠肺组织中miRNA-29b的表达水平.结果:与空白组比较,模型组肺组织caspase-3和miRNA-29b明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01),肺痨康干预后,肺痨康组肺组织caspase-3和miRNA-29b明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:肺痨康治疗耐异烟肼肺结核,可能与caspase-3引起的细胞凋亡有关,可能通过miRNA-29b的降低而发挥作用.
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MicroRNA-29b对肝纤维化及肝星状细胞增殖、凋亡的影响
目的 探究microRNA-29b(miR-29b)在肝纤维化过程中的作用,以及对肝星状细胞增殖和凋亡的影响.方法 将大鼠随机分为对照组和模型组,每组10只.模型组大鼠经腹部注射60％3 ml/kg CCl4复制肝纤维化模型;对照组注射等量生理盐水.分别观察两组大鼠肝纤维化情况,检测肝组织中miR-29b、TGF-β1、SAMD3基因及TGF-β1、SAMD3蛋白的表达.体外培养肝星状细胞HSC-T6、LX-2,转染miR-29b siRNA,检测miR-29b对HSC-T6、LX-2细胞增殖、凋亡的影响,以及对TGF-β1、SAMD3表达的影响.结果 与对照组相比,模型组心肌纤维比例增加,随着时间延长,第6和12周心肌纤维比例逐渐升高(P<0.05).与对照组相比,模型组miR-29b基因相对表达量降低,随着时间延长,模型组miR-29b基因相对表达量逐渐降低(P<0.05).与对照组相比,模型组TGF-β1、SAMD3基因和蛋白相对表达量升高;随着时间延长,TGF-β1、SAMD3基因和蛋白相对表达量逐渐升高(P<0.05).在HSC-T6、LX-2细胞中,miR-29b转染组G1期细胞比例高于空白对照组、阴性转染组,S期细胞比例低于空白对照组、阴性转染组(P<0.05).miR-29b转染组HSC-T6、LX-2细胞凋亡率高于空白对照组、阴性转染组(P<0.05).与空白对照组、阴性转染组相比,HSC-T6、LX-2细胞中TGF-β1、SAMD3基因和蛋白相对表达量升高,miR-29b基因相对表达量降低(P<0.05).结论 miR-29b在肝纤维化过程中表达降低,miR-29b可抑制肝星状细胞增殖,诱导其凋亡.
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miRNA-29b、MMP-2在大鼠颅内动脉瘤中的相关性及药物干预
目的 观察miRNA-29b与MMP-2在颅内动脉瘤壁组织中的变化,探讨其在动脉瘤中的相关性及不同药物干预的影响.方法 将40只雄性SD大鼠(6周龄)采用随机数字表法分为模型组、多西环素组、丙戊酸钠组和对照组,每组各10只.模型组、多西环素组、丙戊酸钠组大鼠均采用颈外动脉结扎制造颅内动脉瘤模型,对照组大鼠不做造模处理.前三组于造模成功后分别注射生理盐水0.1 mL/(kg·d)、多西环素15 mg/(kg·d)、丙戊酸钠15 mg/(kg·d),对照组大鼠注射生理盐水0.1 mL/(kg·d).2个月后取各组动脉组织,采用实时荧光定量PCR检测miRNA-29b的表达,采用免疫组化检测MMP-2的表达.结果 模型组、多西环素组、丙戊酸钠组和对照组中miRNA-29b的相对表达量分别为(0.27±0.04),(0.68±0.03),(0.47±0.15),(0.95±0.12),差异均有显著统计学意义(F=10.235,P<0.01);miRNA-29b表达量经两两比较,模型组明显低于对照组,丙戊酸钠组明显高于模型组,而多西环素组明显高于丙戊酸钠组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组、多西环素组、丙戊酸钠组和对照组中MMP-2阳性细胞数分别为(21.10±3.36),(10.27±1.20),(15.24±2.13),(4.50±0.44),差异均有显著统计学意义(F=6.013,P<0.01);MMP-2阳性细胞数经两两比较,模型组明显高于对照组,丙戊酸钠组明显低于模型组,而多西环素组则明显低于丙戊酸钠组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miRNA-29b、MMP-2的表达水平与颅内动脉瘤的发生相关,多西环素对MMP-2的抑制作用明显强于丙戊酸钠.
