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白细胞介素-17和转化生长因子-β2在哮喘中的表达及意义
目的 探讨哮喘患者外周静脉血白细胞介素-17(IL-17)和转化生长因子-β2(TGF-β2)的表达及其意义.方法 收集2014年2月至2016年5月中国人民解放军第一一七医院呼吸内科72例哮喘急性发作患者为哮喘组,18例健康者为对照组.采用ELISA法分别进行IL-17、TGF-β32检测,哮喘患者进行规范化梯度治疗3个月后复测IL-17、TGF-β2、肺功能.结果 随着哮喘严重程度的增加,患者IL-17、TGF-β2浓度逐渐增加,第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1％ pred)逐渐下降,差异有统计学意义(F=37.794、27.557、44.993,P＜0.01).各组间IL-17、TGF-β2差异有统计学意义(P＜0.01).IL-17、TGF-β2水平与患者年龄、体质量指数(BMI)无相关性(P＞0.05),与FEV1％ pred呈负相关(r=-0.794、-0.468,P＜0.01).IL-17与TGF-β2水平呈正相关(r=0.527,P＜0.01).治疗3个月后,72例哮喘患者IL-17、TGF-β2较治疗前降低,FEV1％ pred升高,差异有统计学意义(t=11.619、9.371、12.948,P＜0.01);IL-17、TGF-β2水平仍高于对照组,FEV1％pred低于对照组,差异有统计学意义(t=11.007、14.501、8.396,P＜0.01).结论 哮喘患者TGF-β2、IL-17表达水平与哮喘发病呈正相关.TGF-β2、IL-17的测定对哮喘严重程度、炎症水平及气道重建程度的评估有参考价值.
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姜黄素对TGF-β2刺激下小鼠肺成纤维细胞PPAR-γ/PDGF-β信号通路的影响
目的 探讨姜黄素对转化生长因子(TGF-β2)刺激下小鼠肺成纤维细胞过氧化物酶体增殖物活化受体-γ(PPAR-γ)/血小板衍生生长因子β(PDGF-β)信号通路的影响.方法 体外培养小鼠肺成纤维细胞(C57B L/6),采用细胞生长计数板检测空白组、姜黄素组(姜黄素5、25、50μmol/L)、TGF-β2组(10 ng/mL)及TGF-β2加姜黄素组(TGF-β2 10 ng/mL及姜黄素5、25、50 μmol/L)细胞数;逆转录PCR检测空白组、TGF-β2组(10 ng/mL)及TGF-β2加姜黄素组(TGF-β2 10 ng/mL及姜黄素5、25、50 μmol/L)PPAR-γ、PDGFR-β及FGFR1 mRNA转录水平;Western blot法及ELISA法检测空白组、TGF-12组(10 ng/mL)及TGF-β2加姜黄素50 μmol/L组(TGF-β2 10 ng/mL及姜黄素50 μmol/L)PPAR-γ蛋白表达及胶原蛋白-1水平.结果 与空白组比较,姜黄素组50 μmol/L时在48、72 h时对细胞增殖抑制明显;与TGF-β2组比较,TGF-β2加姜黄素组50 μ山mol/L时同样在48 h、72 h时对细胞增殖抑制明显.与空白组比较,TGF-β2组PPAR-γ、PDGF-β mRNA表达及PPAR-γ蛋白表达升高,胶原蛋白-1表达增加(P＜0.05).与TGF-β2组比较,TGF-β2加姜黄素组25、50 μmol/L时PPAR-γm RNA表达水平明显升高,且高于TGF-β2加姜黄素组5 μmol/L时(P＜0.05),而TGF-β2加姜黄素组50 μmol/L时PPAR-γ mRNA表达水平高于TGF-β2加姜黄素组25 μm ol/L时(P＜0.05).TGF-β2加姜黄素组各浓度PDGF-β mRNA表达低于TGF-β2组(P＜0.05),且TGF-β2加姜黄素组50 μmol/L时PDGF-β mRNA表达低于TGF-β2加姜黄素组5、25 μmol/L时(P＜0.05).TGF-β2组及TGF-β2加姜黄素组各浓度FGFR1 mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与TGF-β2组比较,TGF-β2加姜黄素50 μmol/L组PPAR-γ蛋白表达升高,胶原蛋白-1表达降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 姜黄素不仅抑制TGF-β2诱导的小鼠肺成纤维细胞增殖,而且还抑制胶原合成,其可能与使PPAR-γ表达上调及PDGF-β表达下调相关.因此,姜黄素可能是通过PPAR-γ/PDGF-β信号通路阻止肺纤维化的发生发展.
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转化生长因子-β2体外诱导骨髓间充质干细胞表达软骨细胞表型的观察
目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)在转化生长因子(TGF-β2)诱导下向软骨细胞表型转化的能力,探讨其作为软骨组织工程种子细胞的可能性.方法 抽取兔髂骨骨髓液3～4 ml,进行原代和传代培养,传代后实验组以高糖DMEM无血清特定培养液诱导,培养液含TGF-β210 ng/ml、地塞米松10-7mol/L、维生素C 50 μmol/L;对照组以高糖DMEM无血清培养液培养,相差显微镜下观察细胞形态变化,免疫组织化学染色检测软骨特异性Ⅱ型胶原表达.结果 诱导后细胞体外扩增能力显著降低,细胞形态由成纤维样梭形向多角形、多边形或类圆形转变,诱导21 d后细胞形态变化为显著,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色深而均匀.结论 TGF-β2可有效诱导MSCs向软骨细胞表型转化,分泌软骨细胞特异性基质,有可能成为软骨组织工程较理想的种子细胞来源.
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CD68和转化生长因子-β2在良性前列腺增生组织中的表达及临床意义
目的 探讨CD68和转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)在良性前列腺增生(BPH)组织中的表达及临床意义.方法 2016年4—9月应用免疫组化染色检查PV二步法,分别检测90例BPH患者前列腺组织中CD68和TGF-β2的表达情况,并分析CD68和TGF-β2的表达程度与患者临床资料的关系.结果 BPH组织中CD68的阳性表达率为86%(77/90),表达于上皮细胞;TGF-β2阳性表达率为79%(71/90),表达于上皮细胞与间质细胞.根据细胞着色程度将患者分组,随着细胞着色程度的加深,相应患者的前列腺体积更大、IPSS评分更高、大尿流率更低,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 CD68和TGF-β2在BPH组织中均阳性表达,且其表达程度与患者的症状、体征成正相关.巨噬细胞介导的炎症免疫反应可能在BPH的发生、发展中起到了重要的作用.
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高原环境下兔眼球钝挫伤后NGB及TGF-β2的表达
目的 观察高原环境下,兔眼球钝挫伤后视网膜中脑红蛋白(NGB)及角膜中转化生长因子β2(TGF-β2)的表达.方法 将38只兔(76眼)随机分为对照组2只、亚高原组18只(海拔1510m)及高原组18只(海拔3840m).后两组造成兔双眼钝挫伤模型,伤后2 h、6 h、1 d、3 d、7 d、14 d取材切片,行HE及免疫组织染色,病理学彩色图像分析仪测定灰度值,观察视网膜NGB及角膜TGF-β2含量变化.结果 视网膜中NGB在两模型组中的表达均呈现时相性,伤后7 d灰度值小,高原组与亚高原组比较2 h、6 h、1 d及14 d差异有统计学意义(均P＜0.05);伤后角膜中TGF-β2在两模型组中的表达也均呈现时相性,2 h到3 d灰度值逐渐减小,14 d时恢复正常水平,两模型组比较各时间点灰度值差异均有统计学意义(P＜0.05);用Pearson相关性分析显示,视网膜NGB与角膜TGF-β2无相关性(r=-0.57,P＞0.05).结论 高原环境下,眼球钝挫伤后视网膜NGB及角膜中TGF-β2早期表达增加,并分别呈现时相性,提示NGB和TGF-β2参与缺氧环境下视觉系统组织的损伤与修复,在高原环境眼外伤综合治疗方面有一定的应用前景.
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葛根素对极低频电磁辐射下RPE细胞增殖活性及转化生长因子β2的影响
目的 研究葛根素对极低频电磁场(ELF-EMF)作用下人视网膜色素上皮(RPE)细胞病理改变的影响,探讨其在近视防治中的可能作用.方法 实验细胞分为对照组、辐射组、葛根素组(终浓度100μmol/L).CCK8检测RPE细胞的增殖活性,Real-time PCR法检测RPE细胞中转化生长因子-β2 (TGF-β2)mRNA的表达情况.ELISA检测RPE细胞培养上清中TGF-β2的蛋白含量.结果 与对照组相比,辐射组RPE细胞增殖活性降低;TGF-β2 mRNA表达增高,RPE细胞上清中TGF-β2含量上调.与辐射组相比,葛根素组RPE细胞增殖活性增高,TGF-β2 mRNA表达降低,RPE细胞上清中TGF-β2含量下调,差异有统计学意义.结论 ELF-EMF在一定范围内影响体外培养的RPE细胞的增殖活性及TGF-β2的表达与分泌,葛根素在一定程度上逆转了这一作用.
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氰基丙烯酸烷氧基酯新纳米基因载体的制备及评价
目的 制备新化学结构的氰基丙烯酸烷氧基酯脑靶向纳米微球,研究负载和递送转化生长因子-β2(TGF-β2)反义寡核苷酸(ASON)的能力,评价体外抗肿瘤活性.方法 氰基丙烯酸(甲氧基二乙二醇)酯单体,以二乙氨乙基-葡聚糖(DE?AE-Dextran)为阳离子稳定剂,采用乳化聚合法制备空白纳米微球(NS),负载ASON后以聚山梨醇-80进行脑靶向修饰.透射电镜观察形态;动态光散射粒度仪(DLS)测定粒径、Zeta电位;紫外分光光度法测定包封率及载药量;琼脂糖凝胶电泳分析其佳负载比例以及在DNA酶Ⅰ(DNaseⅠ)及血清环境下对ASON的保护能力;透析法测定ASON的释放速率;激光共聚焦考察细胞摄取情况;MTS法评价对肿瘤细胞A172的体外抑制活性.结果 微球外形圆整且无粘连,平均粒径为(79.04±4.33)nm, Zeta电位为(33.60±0.60)mV,负载ASON的包封率为(83.14±1.90)%,载药量为(11.59±0.56)%.可有效延缓ASON在DNaseⅠ及血清环境下的降解.能有效递送ASON进入A172肿瘤细胞并产生抑制活性.结论 成功制备出新氰基丙烯酸烷氧基酯脑靶向纳米微球,具有良好的ASON负载及递送能力,为核酸药物提供了新的载体.
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TGF-β2、TGFβRⅡ、载脂蛋白CⅢ、脂联素及瘦素在妊娠糖尿病患者中的表达水平
目的探讨转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β2及TGF-βⅡ型受体(transforming growth factor receptor-βtypeⅡ,TGFβRⅡ)、载脂蛋白(apolipoprotein,Apo)CⅢ、脂联素(adiponectin,APN)及瘦素在妊娠糖尿病患者中的表达及对预后的影响.方法选择2014年4月至2016年4月本院产检的50例妊娠糖尿病患者纳入妊娠糖尿病组,另选取同期本院接诊的50例正常孕妇纳入对照组.比较两组研究对象TGF-β2、TGFβRⅡ、ApoCⅢ、APN、瘦素表达水平及母婴结局.妊娠糖尿病组患者于确诊后进行常规治疗,1个月后记录血糖控制情况,并比较不同血糖控制效果的患者TGF-β2、TGFβRⅡ、ApoCⅢ、APN、瘦素表达水平.结果妊娠糖尿病组患者TGF-β2、TGFβRⅡ、ApoCⅢ、瘦素表达水平均显著高于对照组(P<0.05),APN表达水平显著低于对照组(P<0.05).血糖控制良好患者的TGF-β2、TGFβRⅡ、ApoCⅢ、瘦素表达水平显著低于血糖控制欠佳患者(P<0.05),APN表达水平显著高于血糖控制欠佳患者(P<0.05).妊娠糖尿病组患者妊娠期高血压疾病、胎膜早破、羊水过多、产后出血的发生率均显著高于对照组(P<0.05),两组研究对象终止妊娠率无显著差异(P>0.05).妊娠糖尿病组早产儿和新生儿窒息发生率均显著高于对照组(P<0.05),Apgar评分显著低于对照组(P<0.05),两组巨大儿、新生儿肺炎发生率均无显著差异(P>0.05).结论妊娠糖尿病患者TGF-β2、TGFβRⅡ、ApoCⅢ、瘦素表达水平显著升高,APN表达水平显著降低,且与疾病的发生、发展密切相关,可作为预测妊娠糖尿病病的重要指标.
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LE540对视网膜色素上皮 bFGF及TGF-β2的影响
目的:观察全反式视黄酸β受体阻断剂LE540对培养的豚鼠视网膜色素上皮细胞(RPE)分泌碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及转化生长因子-β2(TGF-β2)的影响.方法:胰蛋白酶消化法培养原代豚鼠RPE细胞,角蛋白免疫组织化学染色鉴定为阳性后,传2代细胞后用于实验.不同实验组分别加入10×10-6mol/L的全反式视黄酸ATRA和5×10-6mol/L的LE540,设试剂对照.ELISA检测ATRA及LE540作用2h、4h、6h、8h、16h后TGF-β2和bFGF的分泌量.结果:ELISA结果显示:(1)加入ATRA后,实验组TGF-β2的分泌量与对照组比较明显增加,而bFGF的分泌量明显减少(P＜0.05).(2)加入LE540后,实验组较对照组RPE分泌TGF-β2均明显减少(P＜0.05),差别有统计学意义.同时bFGF的分泌量没有明显变化(P=0.178).结论:全反式视黄酸能通过视黄酸β受体途径促进视网膜色素上皮细胞分泌TGF-β2,同时通过其他途径能抑制bFGF的分泌.提示有可能通过阻断视黄酸β受体来控制近视的进展.
关键词： 视网膜色素上皮细胞 转化生长因子-β2 碱性成纤维细胞生长因子 近视 LE540 -
TGF-β2及Myocilin蛋白在原发性开角型青光眼的研究进展
转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)是参与原发性开角型青光眼(primary open-angle glaucoma,POAG)发病机制的一个重要细胞因子,TGF-β2对小梁网的作用机制成为近年来研究的一个热点.Myocilin是第一个被证明与POAG相关的基因,在许多眼内、眼外组织中均有表达,特别是小梁网.在过去的十几年里,学者们对Myocilin蛋白在正常眼或青光眼的功能方面做了很多的研究.此文将以TGF-β2对小梁网作用机制以及Myocilin蛋自在POAG发病机制中的研究为综述.
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抑肽酶对跟腱断裂白兔模型跟腱修复中转化生长因子-β2表达的影响
目的：观察抑肽酶对白兔跟腱断裂修复的影响。方法选用60只新西兰白兔，随机分为三组（正常对照组、模型损伤组、抑肽酶治疗组），于造模后第3天及第1、2、3、4周采集标本，RT-PCR方法检测转化生长因子-β2（TGF-β2） mRNA 表达，免疫组化染色观察 TGF-β2蛋白表达。结果抑肽酶组在3 d TGF-β2 mRNA表达明显高于模型组（P＜0.05），在1 w后，抑肽酶组TGF-β2 mRNA表达低于模型组，但无统计学意义。在第2～3周时，抑肽酶组中表达量明显低于模型组（ P＜0.05）。 TGF-β2蛋白在正常白兔跟腱有少量表达，术后第3天时抑肽酶治疗组表达量高于模型组，第1周抑肽酶组中表达量明接近模型。2～4w时抑肽酶组中表达量明显减少且低于模型组。结论抑肽酶可减轻炎症反应，早期可通过调控TGF-β2的表达量，促进跟腱断裂的修复。
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子宫肌瘤及子宫肌层中TGF-β3与FN表达的变化及意义
目的 探讨子宫肌瘤及子宫肌层中转化生长因子(TGF)-β3与纤维连接蛋白(FN)表达的变化及意义.方法 子宫肌瘤患者196例,其中绝经者96例,未绝经者100例,将绝经者根据肌瘤是否萎缩分成萎缩组40例及未萎缩组56例,采用免疫组化法检测并对比患者肌瘤组织和肌壁组织TGF-β3和FN的表达,应用放射免疫法检测并比较不同萎缩情况绝经患者的雌激素(E2)、孕激素(P)水平,分析绝经患者TGF-β3和FN与E2、P水平的相关性.结果 绝经组肌瘤组织和肌壁组织TGF-β3评分均明显低于未绝经组肌瘤组织均明显高于同组肌壁组织(P<0.05).绝经组和未绝经组肌瘤组织及肌壁组织FN评分相比差异无统计学意义(P>0.05).萎缩组和未萎缩组肌瘤组织及肌壁组织TGF-β3、FN评分差异无统计学意义(P>0.05),但两组肌瘤组织均明显高于同组肌壁组织(P<0.05).未萎缩组E2、P水平均明显高于萎缩组(P<0.05).依据Spearman法分析可知,绝经患者TGF-β3与E2、P水平均呈正相关(r=0.769,0.688;P=0.042,0.033),而绝经患者的FN与E2、P水平无关(r=0.106,0.211;P=0.228,0.159).结论 子宫肌瘤绝经患者TGF-β3表达较子宫肌层更高,且与E2、P水平密切相关,而FN无明显变化,临床可尝试通过监测TGF-β3水平以评估患者的疾病情况.
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不同程度哮喘急性发作患者外周血白介素-17及转化生长因子-β2的检测及其意义
目的:探讨不同程度哮喘急性发作患者外周血白介素-17(IL-17)及转化生长因子-β2(TGF-β2)的检测及其意义.方法:选取2014年3月至2016年3月在我院就诊的哮喘急性发作患者81例,根据病情严重程度,分为轻度组、中度组、重度组.同时选取20例健康志愿者作为对照组,比较分析四组的一般资料差异、肺功能、外周血IL-17、TGF-β2水平及相关性分析.结果:四组患者一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05).四组FEV1％pred、IL-17、TGF-β2水平组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).与对照组比较,哮喘轻度、中度、重度组FEV1％pred水平显著降低,IL-17、TGF-β2水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05).且随着哮喘病情加重,FEV1％pred水平越低,IL-17、TGF-β2水平越高,差异有统计学意义(P<0.05).患者IL-17、TGF-β2水平与哮喘患者FEV1％pred均呈负相关(r=-0.687、-0.471,P<0.01);与患者年龄、BMI无相关性(P>0.05);外周血IL-17与TGF-β2水平呈正相关(r=0.434,P<0.01).结论:外周血TGF-β2、IL-17水平与哮喘患者肺功能呈负相关,且病情越重,TGF-β2、IL-17水平越高.
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转化生长因子-β2在促进胚胎干细胞分化成心肌 细胞过程中对GATA6表达的影响
目的:研究转化生长因子-β2(TGF-β2)在促进胚胎干细胞(ESCs)分化成心肌细胞中对GATA6表达的影响.方法:用"悬滴"法研究ESCs分化成心肌细胞.将ESCs(CGR8)分为对照组、TGF-β2(2 ng/ml)处理组和TGF-β2(10 ng/ml)处理组.第7天测量拟胚体(EBs)的直径,第14天统计贴壁拟胚体自发节律性跳动的百分数,免疫组织化学和免疫印迹检测GATA6的表达变化.结果:TGF-β2(10 ng/ml)可显著促进拟胚体生长,提高贴壁拟胚体跳动的百分数和促进高贴壁拟胚体中GATA6的表达.结论:TGF-β2促进ESCs分化成心肌细胞,可能与其上调GATA6表达相关.
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miR-141-3p靶向TGF-β2对人前列腺癌C4-2B细胞恶性生物学行为的影响
目的:探讨miR-141-3p与转化生长因子-β2(transforming growth factor β2,TGF-β2)基因的靶向关系及其对人前列腺癌细胞株C4-2B恶性生物学行为的影响.方法:转染miR-141-3pmimic后,qRT-PCR检测C4-2B细胞miR-141-3p和TGF-β2mRNA的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p与TGF-β2的靶向关系.miR-141-3p mimic与TGF-β2过表达载体单独或共转染C4-2B细胞后,Western blotting检测转染C4-2B细胞中TGF-β2蛋白的表达水平,Hoechst33258染色检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力.结果:miR-141-3p mimic转染后,C4-2B细胞miR-141-3p的相对表达水平明显提高、TGF-β rnRNA的相对表达水平明显降低(均P＜0.01).miR-141-3p mimic与野生型报告载体共转后,荧光素酶的活性显著降低(P＜0.01);miR-141-3p mimic与突变型报告载体共转后,荧光素酶的活性没有明显变化(P＞0.05);miR-141-3p mimic添加到pc-TGF-β2转染的C4-2B细胞后,细胞增殖倍数明显降低、凋亡细胞数目显著增加、细胞侵袭能力显著降低(均P＜0.01).结论:miR-141-3p与TGF-β2存在靶向关系,且两者协同影响人前列腺癌C4-2B细胞增殖、侵袭能力并诱导其凋亡.
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TGF-β2通过基质金属蛋白酶通路影响胶质瘤干细胞的侵袭能力
目的:研究TGF-β2对胶质瘤干细胞侵袭能力的影响及其可能机制.方法:收集2016年4月至2017年4月中国医科大学附属第一医院神经外科手术切除的8例人多形性成胶质细胞瘤组织标本,通过胰蛋白酶消化法进行胶质瘤细胞原代培养,部分胶质瘤细胞加入含有EGF、bFGF、B27的DEME/F 12培养基中进行无血清培养获得悬浮生长的肿瘤细胞球,免疫荧光染色及分化实验验证肿瘤球是否为胶质瘤干细胞.ELISA方法检测胶质瘤干细胞分泌TGF-β2的水平,转染TGF-β2 siRNA后应用Transwell方法检测TGF-β2对胶质瘤侵袭能力影响,Western blotting检测TGF-β2对胶质瘤干细胞中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)表达影响.结果:通过免疫荧光染色及分化实验证明原代培养的悬浮生长肿瘤细胞球为胶质瘤干细胞,肿瘤细胞球表达CD133,在含血清培养基中可以分化为神经元和胶质细胞.胶质瘤干细胞比原代培养的胶质瘤TGF-β2分泌水平明显升高[(74.13±3.63) vs (46.13±2.61) pg/ml,P＜0.05].沉默TGF-β2可以降低胶质瘤干细胞侵袭细胞数[(105.71±8.69) vs(63.67±5.93)个,P＜0.05],并抑制MMP-2和MMP-9表达(均P＜0.05).结论:TGF-β2通过MMP-2和MMP-9通路增强胶质瘤干细胞的侵袭能力.
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转化生长因子-β2诱导的上皮间质转分化对人晶状体上皮细胞基因表型的影响
目的 观察转化生长因子-β2(TGF-β2)诱导人晶状体上皮细胞(LECs)发生上皮间质转分化(EMT)时,其形态和基因表型所发生的变化.方法 在体外培养的人LECs中,加入100 pg/mL浓度的TGF-β2,诱导其发生EMT,处理0、6、24、48 h后,观察其在形态上的变化,利用实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)于各时间点检测其标志性基因E-钙粘蛋白(CDH1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(VIM)等在表达水平上所发生的变化,并与未处理的空白对照组进行比较.结果 加入TGF-β2后,随着时间的推移,人LECs在形态上拉长,呈梭形;上皮细胞标志性基因如CDH1的表达水平逐渐下调,48 h时相对表达量为1.10E-06,和对照组2.68E-06相比差异有统计学意义(P=0.002);间质细胞标志性基因如VIM的表达水平逐渐上调,48 h时相对表达量为1.64E-02,和对照组1.37E-02相比差异有统计学意义(P=0.006);而α-SMA的表达水平也逐渐上升,48 h时相对表达量为9.21E-03,虽和对照组8.67E-03相比差异无统计学意义(P=0.551),但仍呈上升趋势.结论 在TGF-β2诱导下,人LECs发生EMT,其形态和基因表型均发生与间质细胞相符的变化.
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雷帕霉素靶蛋白信号通路介导转化生长因子-β2诱导的后发性白内障的分子机制研究
目的：探讨雷帕霉素靶蛋白（ mammalian target of rapamycin ， mTOR）信号通路与转化生长因子（ transforming growth factor ，TGF）-β2诱导的晶状体上皮细胞间质化的相关机制。方法显微镜观察TGF-β2诱导的晶状体上皮细胞的表型变化，Western blot进一步验证TGF-β2诱导的HLEB-3上皮间质转化模型。 MTT检测TGF-β2诱导上皮间质化后以及雷帕霉素对细胞增殖的影响。 Western blot在分子水平检测上皮间质化和mTOR信号通路之间的机制关联。结果加入TGF-β2诱导处理24 h后，用显微镜观察HLEB-3的细胞形态由椭圆形变为星形或纺锤形，细胞连接减少。 Western blot检测发现TGF-β2诱导后的HLEB-3中上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达水平明显降低，而间质细胞标记蛋白α-SMA的表达水平显著降低，差异有统计学意义（P＜0．05）。 MTT检测发现雷帕霉素预处理可以抑制TGF-β2对上皮细胞增殖的促进作用。 Western blot显示当用雷帕霉素抑制mTOR信号通路的激活后，可以逆转TGF-β2对α-SMA的表达的上调作用，促进上皮细胞标志蛋白E-cadherin的表达。结论 mTOR信号通路介导TGF-β2诱导的上皮细胞间质化作用，促进后发性白内障的发生。
关键词： 转化生长因子-β2 雷帕霉素靶蛋白信号通路 后发性白内障 -
MicroRNA-1在小鼠动脉粥样硬化斑块中的表达及通过TGF-β2调控巨噬细胞凋亡功能的研究
目的 探讨微小核糖核酸(microRNA)-1在动脉粥样硬化斑块中的表达及通过转化生长因子(TGF)-β2调控巨噬细胞凋亡功能的分子机制.方法 实验选用5周龄的雄性ApoE-/-小鼠50只,按实验要求分为对照组(25只)与动脉粥样硬化组(实验组,25只).实验组小鼠采用高脂喂食以建立动脉粥样硬化模型,对照组小鼠采用正常饲料喂养.造模成功后,实验组及对照组分别取动脉粥样硬化斑块组织及正常动脉组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测microRNA-1的表达.培养小鼠内皮细胞、平滑肌细胞及巨噬细胞,并用50 ng/ml氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激24 h,应用qRT-PCR技术比较miRNA-1在不同细胞中的表达变化.通过数据库及生物信息学软件预测microRNA-1的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因系统进行验证.实验组与对照组分别通过转染microRNA-1 mimics和microRNA-1 mimics的阴性对照至巨噬细胞株后观察其对细胞凋亡功能的影响.结果 MicroRNA-1在实验组动脉粥样硬化斑块中的表达比在对照组正常动脉组织中的表达明显增加(P＜0.05).MicroRNA-1高表达于小鼠血管巨噬细胞,而低表达于血管平滑肌细胞及内皮细胞(P＜0.05),经ox-LDL刺激后,其在巨噬细胞中的表达量较刺激前明显增加(P＜0.05),内皮细胞及平滑肌细胞的表达量无明显差异(P均＞0.05).生物信息学分析发现microRNA-1的靶基因为TGF-β2,并经体外双荧光素酶报告基因系统检测证实.体外细胞功能实验发现microRNA-1能增加巨噬细胞的凋亡,TGF-β2具有抑制其凋亡的功能.结论 MicroRNA-1在动脉粥样硬化斑块中表达上调,其可能通过介导靶基因TGF-β2调控巨噬细胞的凋亡进而参与动脉粥样硬化的发生过程.
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糖尿病大鼠视网膜内转化生长因子-β2及其受体的表达
目的探讨糖尿病视网膜损伤和转化生长因子-β2(TGF-β2)产生的关系以及TGF-β2的作用机制.方法链脲佐菌素制备大鼠糖尿病模型,用Western blot方法检测不同病程糖尿病动物模型(2周及20周)视网膜中TGF-β2的表达,RT-PCR测定其受体TGF-βRⅠ及TGF-βRⅡ的表达.结果糖尿病大鼠视网膜内TGF-β2随糖尿病进展表达增加,其受体TGF-βRⅠ的表达和对照组相比无显著差异,而TGF-βRⅡ的表达显著增加.结论 TGF-β2在糖尿病视网膜病变(DR)形成过程中有重要作用,并有可能通过TGF-βRⅡ型受体起作用.
