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以壳聚糖纳米微球为载体的Crisp1-DNA避孕疫苗的制备及体外表达
目的 构建以壳聚糖纳米微球为载体的Crisp1 DNA疫苗,对其物理学、生物学活性进行测定,并评估其在COS-7细胞中的表达情况及细胞毒性. 方法 采用本实验室前期构建的真核表达质粒pcDNA3.1-Crisp1,以复凝法制备载Crisp1 DNA疫苗的壳聚糖纳米粒(CS/DNA NPs),用透射电镜以及凝胶阻滞分析对其相关物理学、生物学活性进行测定,然后将载Crisp1 DNA疫苗的壳聚糖纳米粒转染至COS-7细胞,检测其细胞毒性,并用间接免疫荧光法鉴定其在细胞内的表达情况. 结果 透射电镜结果显示纳米粒形态较均一,平均粒径为189.3 nm,Zeta电位约为+0.2 mV.凝胶阻滞分析显示壳聚糖微粒可将DNA疫苗完全阻滞于加样孑孔中并保护DNA质粒不降解.MTT试验显示壳聚糖组细胞存活率显著高于脂质体组(P＜0.01).间接免疫荧光实验结果显示CS/DNA NPs能在COS-7细胞中有效表达Crisp 1抗原蛋白. 结论 由壳聚糖纳米微球介导的Crisp1 DNA疫苗,可在真核细胞中有效地表达,且具有较小的细胞毒性,为进一步发展安全有效的DNA避孕疫苗打下了基础.
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盐析法制备小檗碱壳聚糖纳米载药微球
目的:探索制备小檗碱壳聚糖载药纳米微球颗粒的新方法及关键技术.方法:采用盐析法,通过三聚磷酸钠交联制备小檗碱壳聚糖纳米载药微球,测定载药微球的包封率,观察其扫描电镜图及红外光谱.结果:小檗碱颗粒粒径分布于400～500 nm,经壳聚糖包裹的小檗碱纳米颗粒形状规则,具有核-壳结构,平均粒径约500 nm,包封率约70％.结论:壳聚糖包裹的小檗碱颗粒具有均一的纳米粒径和良好的包封率,为小檗碱缓释用药和靶向给药设计提供参考.
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一种新型纳米基因载体的制备及体外实验
本实验以聚乳酸和O-羧甲基壳聚糖为基质材料,采用超声波法制备了聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米微球,并用环境扫描电镜和XPS对其进行了表征.将聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米微球携带寡核苷酸转染TJ905人脑胶质瘤细胞,并通过RT-PCR方法对细胞的转染情况作了一系列的体外检测.结果表明,携带寡核苷酸的聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米微球能有效地转染TJ905人脑胶质瘤细胞,同时也能有效地抑制胶质瘤细胞中端粒酶RNA、端粒酶催化亚基RNA的表达和端粒酶的活性,从而抑制人脑胶质瘤细胞生长,达到基因治疗的目的.
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包裹液态氟碳的纳米微球对兔VX2肿瘤射频消融效果影响
目的 探讨包裹液态氟碳的纳米微球对兔VX2肿瘤射频消融(RFA)效果的影响.方法 36只荷瘤兔随机分为单纯RFA治疗组、纳米微球+RFA治疗组、空白对照组,分别于治疗前、后行常规超声、超声造影及病理学检查,治疗后常规超声观察肿瘤生长情况,比较各组差异.结果 病理证实单纯RFA治疗组、纳米微球+RFA治疗组均产生了明显坏死灶.超声造影显示消融面积分别为:单纯RFA治疗组(41.46±2.70) mm2、纳米微球+ RFA治疗组(62.33±1.59) mm2、空白对照组(5.22±1.61) mm2,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后常规超声观察,纳米微球+ RFA治疗组肿瘤生长率显著低于单纯RFA治疗组及空白对照组(P＜0.05).结论 RFA联合纳米微球明显扩大单针消融面积、增加治疗效果、减少术后复发.
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液态氟碳纳米脂质微球超声对比剂用于增强正常大鼠CT显像实验研究
目的 探讨液态氟碳(perfluorooctylbromide,PFOB)纳米脂质微球超声对比剂作为CT对比剂对正常大鼠各脏器的增强显像效果.方法 采用高压均质技术制备PFOB微球,用光镜观察微球形态、分布,用激光粒度和电位分析仪测定微球大小.分别于注入对比剂前后不同时间点对大鼠进行胸腹部CT扫描,同时监测大鼠生命体征变化.肝脾实质为感兴趣区,测量感兴趣区造影前后CT值,绘制时间-密度曲线(time-density curve,TDC).结果 PFOB微球粒径极小,分布均匀.体内造影表明,作为超声对比剂的PFOB微球也能有效增强大鼠肝、脾及脉管系统的影像密度,造影前后感兴趣区CT值差异有统计学意义(P＜0.05).脾实质较肝实质强化效果更显著,持续显影时间长达8 d.实验过程中大鼠生命体征未见明显变化.结论 PFOB微球超声对比剂可同时用于CT显像,这一多功能的对比剂将具备良好的应用前景.
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纳米微球在核酸检测中的应用研究进展
核酸分析在遗传病诊断、病原微生物检测、法医鉴定、亲子鉴定以及环境监测等方面有广泛的应用.1986年Mullis等[1]发明了PCR后,经过不断完善,现已成为核酸分析的一种常规技术.
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重组人骨形态发生蛋白-2壳聚糖纳米微球的制备及检测
目的 制备负载重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)壳聚糖纳米微球,并检测其粒径、形态、降解及药理特性,以评估壳聚糖纳米微球作为rhBMP-2缓释载体的可行性.方法 以壳聚糖为原料、三聚磷酸钠为交联剂,通过离子交联法制备负载rhBMP-2壳聚糖纳米微球,应用透视电镜观察微球的形态、激光粒径,分析其粒径分布、溶菌酶降解,了解降解特性.通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测rhBMP-2壳聚糖微球的载药率、包封率和释药规律.结果 离子交联法制备的壳聚糖纳米微球,平均粒径大小为230nm,成球性较好,包封率和载药率分别为(66.867±4.575)％、(33.437±2.290)μg/mg;体外释药试验rhBMP-2可以从壳聚糖纳米微球中缓慢释放,释放行为符合双向动力学规律,整个释放过程可达30 d.结论 离子交联法可成功制备壳聚糖纳米微球并具有缓释rhBMP-2的能力,为进一步应用于骨组织工程研究提供实验依据.
关键词： 重组人骨形态发生蛋-2 壳聚糖 纳米微球 制备 检测 -
新型多西紫杉醇载药纳米微球的制备及其评价
目的:采用自行合成的高分子载体,制备负载多西紫杉醇(DOC)的纳米微球,全面评价其性质.方法:通过开环聚合法,制备单甲氧基聚乙二醇-聚己内酯(mPEG-PCL)两嵌段聚合物载体,考察载体的结构、相对分子质量、纳米微球粒径、形貌、生物相容性等性质.以改良的丙酮-纳米沉淀法制备负载DOC的载药纳米微球,以CCK-8法,评价该载药微球在体外对于肝癌细胞株H22的抗肿瘤活性,并与泰素帝相比较.结果:通过开环聚合法合成mPEG-PCL两嵌段聚合物,测定相对分子质量和设计相对分子质量相近.DOC纳米微球为不规则的圆形,表面光滑,其粒径＜100 nm.载体在高浓度时对细胞生长无抑制作用,毒性低.DOC的载药效率为81.3％,载药量为18.7％.体外细胞毒性显示,DOC纳米载体组IC50略小于裸药泰素帝.结论:该实验制备并评估了DOC载药纳米微球,为进一步研究提供了实验依据.
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羟喜树碱纳米微球体内抗肿瘤作用的研究
我们研究羟喜树碱(10-hydroxycamptothecin,HCPT) 和聚乙二醇-聚谷氨酸苄酯(poly ethylene glycol)-poly (γ-benzyl-L-glutamate,PEG-PBLG)纳米微球的体内抗肿瘤作用.
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羟基喜树碱纳米微球抑制舌鳞癌Tca8113细胞的实验研究
目的 探讨改良闭环羟基喜树碱(HCPT)药用剂型体外抑制口腔鳞癌细胞株的疗效.方法 透析法制备载闭环羟基喜树碱/聚乙二醇-聚谷氨酸苄酯(HCPT/PEG-PBLG)纳米微球,与HCPT羧酸钠盐分别作用于Tca8113细胞,对比观察细胞形态学改变,MTT检测细胞毒作用,流式细胞仪、DNA凝胶电泳检测细胞周期变化及细胞凋亡.结果 成功制备HCPT/PEG-PBLG纳米微球,包封率56.8%;载药率7.5%.Tca8113细胞经HCPT和HCPT/PEG-PBLG分别作用后,显微镜形态学观察见细胞凋亡、生长抑制.MTT检测显示HCPT呈现明显细胞毒作用;HCPT纳米微球剂型组48 h时生长抑制率低于HCPT普通剂型组(P≤0.01),至96 h时则与HCPT普通剂型组差异已无统计学意义(P ＞ 0.05).流式细胞仪、DNA凝胶电泳检测细胞周期发生变化:HCPT阻抑细胞于S期,同时诱导细胞凋亡;HCPT/PEG-PBLG组细胞周期与HCPT组改变类似,但S期阻抑增加速度平缓,慢于后者.结论 HCPT对Tca8113细胞具有较强的抑瘤作用,阻抑细胞周期于S期并诱导细胞凋亡.HCPT纳米微球剂型具有药物缓释优点,体外实验作用平缓,终末抑瘤效果与HCPT羧酸钠盐剂型持平.
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羟基喜树碱纳米微球治疗金黄地鼠颊囊癌的实验研究
目的 探讨改良羟基喜树碱纳米微球剂型对口腔鳞癌疗效提升的作用.方法 制备闭环羟基喜树碱/聚乙二醇一聚谷氨酸苄酯(HCPT/PEG-PBLG)纳米微球,对金黄地鼠颊囊鳞癌动物模型进行干预实验:设生理氯化钠、PEG-PBLG对照组和HCFT、HCPT/PEG-PBLG治疗组,药物腹腔注射(3 mg/kg,qd)连续5 d.计算肿瘤体积变化、肿瘤倍增时间(DT)和抑瘤率并检测药代动力学各参数.结果 成功制备HCPT/PEG-PBLG纳米微球,包封率56.8%;载药率7.5%.金黄地鼠颊囊癌干预实验:HCPT治疗组肿瘤体积于化疗第4天缩小达到小值后复又开始增大,DT延长,抑瘤率:63.58%:HCPT/PEG-PBLG治疗组肿瘤体积于化疗第4天缩小.第8天达到小值,DT与HCPT组比较明显延长(P=0.01).抑瘤率(76.50%)提高.HCPT体内代谢呈二室模型;HCPT/PEG-PBLG呈缓释-突释模型,峰值浓度减少,达峰时间、消除半衰期延长;浓度-时间曲线下面积、表观分布容积增加.结论 HCPT对金黄地鼠颊囊癌具有较强的抑瘤作用,但开环HCPT羧酸钠盐助溶剂型降低了抑瘤活性,体内代谢快,组织亲和力差,限制其临床应用.HCPT/PEG-PBLG纳米微球剂型可保留抑瘤关键结构内酯环,增加难溶性闭环HCPT水溶性、提高内酯环稳定性,具有药物缓释、延长体内代谢时间、增加组织亲和力等优点.提高了抑癌疗效.
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氰基丙烯酸烷氧基酯新纳米基因载体的制备及评价
目的 制备新化学结构的氰基丙烯酸烷氧基酯脑靶向纳米微球,研究负载和递送转化生长因子-β2(TGF-β2)反义寡核苷酸(ASON)的能力,评价体外抗肿瘤活性.方法 氰基丙烯酸(甲氧基二乙二醇)酯单体,以二乙氨乙基-葡聚糖(DE?AE-Dextran)为阳离子稳定剂,采用乳化聚合法制备空白纳米微球(NS),负载ASON后以聚山梨醇-80进行脑靶向修饰.透射电镜观察形态;动态光散射粒度仪(DLS)测定粒径、Zeta电位;紫外分光光度法测定包封率及载药量;琼脂糖凝胶电泳分析其佳负载比例以及在DNA酶Ⅰ(DNaseⅠ)及血清环境下对ASON的保护能力;透析法测定ASON的释放速率;激光共聚焦考察细胞摄取情况;MTS法评价对肿瘤细胞A172的体外抑制活性.结果 微球外形圆整且无粘连,平均粒径为(79.04±4.33)nm, Zeta电位为(33.60±0.60)mV,负载ASON的包封率为(83.14±1.90)%,载药量为(11.59±0.56)%.可有效延缓ASON在DNaseⅠ及血清环境下的降解.能有效递送ASON进入A172肿瘤细胞并产生抑制活性.结论 成功制备出新氰基丙烯酸烷氧基酯脑靶向纳米微球,具有良好的ASON负载及递送能力,为核酸药物提供了新的载体.
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他克莫司纳米微球的制备及其体外释药性能
目的 采用甲氧基聚乙二醇-聚乳酸聚合物(PEG-PLA)制备他克莫司微球(PPT),研究其体外释药特性.方法 考察PPT的载药量、包封率、粒径大小、粒径分布和药物体外释放实验.结果 PPT的制备工艺稳定、重复性好,微球外形圆整,表面光滑,分布均匀,平均粒径为(545.1±0.9)nm,平均载药量为(18.90±3.22)%,平均包封率为(25.0±1.6)%,35 d的药物累积释放率为67.21%.结论 他克莫司微球缓释时间长达35 d,能够满足临床治疗的要求.
关键词： 他克莫司 纳米微球 甲氧基聚乙二醇-聚乳酸聚合物 制备 体外释药 -
卡铂碳包铁纳米笼壳聚糖微球在肝癌大鼠模型体内的分布和药动学研究
目的 观察卡铂碳包铁纳米笼壳聚糖微球(carboplatin-Fe@C-10aded chitosan nanopartieles,C-Fe@C-CN)结合磁场在移植性肝癌大鼠模型体内的靶向分布情况和药动学过程.方法 建立移植性肝癌大鼠模型40只为A组,正中开腹行肝动脉插管,按卡铂5 mg·kg~(-1)体重注入C-Fe@C-CN的生理盐水分散液,以肿瘤组织为靶区施加O.5 T磁场30 min.分别在给药后0.25,0.5,1,3,6,12,24和48 h各时间点,每组取5只大鼠处死,采集血浆、耙区肿瘤、非靶区肝、肾、脾和肺组织标本,石墨炉原子分光光度计测定血浆和组织中卡铂浓度,药物浓度数据用3P87药动学程序分析处理,并组织学观察C-Fo@C-CN的在各脏器分布情况.另40只健康大鼠为B组,以左肝叶为靶区,给予相同的处理作为对照.结果 A组靶区肿瘤组织c_(max)是65.21 μg·g~(-1),为B组靶区肝组织(38.47 μg·g~(-1))的1.7倍.48 h时A组靶区肿瘤组织药物浓度是7.27 μg·g~(-1),为B组靶区肝组织(3.11 μ·g~(-1))的2.3倍.A组靶区肿瘤组织AUC是906 mg·h·L~(-1),为B组靶区肝组织(421.34 mg·h·L~(-1))的2.2倍.2组药动学参数值相近.病理学观察显示,C-Fe@C-CN在磁场作用下聚集于肿瘤细胞间隙中,并可栓塞于部分细小动脉.非靶区肝组织内少见C-Fe@C-CN的聚集和栓塞的血管.结论 C-Fe@C-CN在体内具有长循环和缓释特性,在磁场的引导下对肿瘤组织具有更强的靶向性,成倍提高肿瘤组织中的药物浓度,延长维持时间.
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微球中替莫唑胺含量测定方法的研究
随着对纳米靶向载药微球的重视,目前对纳米载药微球的研究也越来越多,但由于在制备过程工艺、药物种类、性质等的不同,给微球中药物含量的测定带来一定的困难,也很难形成统一的方法对载药微球中的药物含量进行测定,本实验结合自身工艺和药物性质,介绍一种间接测定微球中替莫唑胺含量的方法,通过验证,说明本方法具有较好的可行性和便捷性.
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十六烷基壳聚糖纳米微球负载紫杉醇的研究
目的研究适用于水体系的紫杉醇的负载载体.方法壳聚糖经烷基改性制得烷基取代的壳聚糖衍生物,该衍生物在水中可自动形成粒径分布在100 nm左右的纳米微球,并在磷酸缓冲液(pH=7.4)中对负载紫杉醇的纳米微球进行了体外释放研究.结果随着烷基取代度的增加,紫杉醇的体外释放平衡浓度降低,体外释放的半释放时间延长.结论十六烷基壳聚糖纳米微球是一个优良的紫杉醇的水分散体系.
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rhBMP-2/无定形磷酸钙纳米缓释微粒成骨活性的实验研究
目的 探讨无定形磷酸钙(ACP)对rhBMP-2的缓释作用,检测rhBMP-2/ACP纳米缓释微粒的成骨活性.方法 用扫描电镜观察已制备rhBMP-2/ACP缓释微粒的大小、形态;测定rhBMP-2的体外释放情况并描绘曲线:用MTT法检测缓释微粒对兔骨髓间充质干细胞(MSC)增殖情况的影响:用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞ALP活性以反映缓释微粒对其分化的影响,并与ACP的作用进行比较:将缓释微粒植入大鼠股部肌袋,通过X线、组织形态学观察评价缓释微粒的异位成骨能力.结果 缓释微粒大小为100nm左右,具有典型的无定形球形面貌.开始时为快速释放期,随后呈缓慢持续释放.缓释微粒能显著促进MSC的增殖和分化,植入大鼠股部肌袋12周,材料大部分降解,有明显的骨形成.结论 ACP可作为rhBMP-2合适的缓释载体材料,生成的纳米缓释微粒具有良好的降解性能和成骨活性.
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rhBMP-2聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微球缓释系统对骨髓间充质干细胞影响的实验研究
目的探讨rhBMP-2聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微球缓释系统作用BMSCs后对成骨标志蛋白表达的影响.方法采用免疫细胞化学染色及图像分析方法,观察rhBMP-2纳米微球作用后对细胞中骨钙素、骨涎蛋白及Ⅰ型胶原表达的影响,并与单纯rhBMP-2作用细胞后的结果进行比较.结果rhBMP-2纳米微球作用后细胞中骨钙素、骨涎蛋白及Ⅰ型胶原的表达均明显强于单纯rhBMP-2作用后的效果.结论rhBMP-2纳米微球缓释系统促进BMSCs向成骨方向分化的作用强于单纯rhBMP-2的作用.
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正交试验优选羧甲基壳聚糖-醋甲唑胺纳米微球的制备方案
目的:制备羧甲基壳聚糖载药纳米微球,醋甲唑胺为模型药物,测量药物的包封率和纳米微球形态.方法:采用乳化交联法,在微乳液的基础上制备载药纳米微球,对可能影响药物包封率的处方因素进行优化设计,筛选出优配方.结果:羧甲基壳聚糖溶液的浓度对包封率有显著性影响,三聚磷酸钠溶液浓度和醋甲唑胺药量对包封率未见影响.优化方案的载药纳米微球包封率为49.36％,其电镜下为较规整的球型纳米微球,平均粒径386.0 nm.结论:采用乳化交联法,可形成较高包封率的羧甲基壳聚糖-醋甲唑胺纳米微球.
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正交法制备羧甲基壳聚糖-纳米银纳米微球
目的:制备以纳米银为模型药物的羧甲基壳聚糖载药纳米微球,探索载药纳米微球的制备条件对粒径、包封率的影响,确定佳制备工艺.方法:三聚磷酸钠为交联剂,采用离子交联法制备载药纳米微球,测量药物的包封率及粒径.紫外分光光度法测定该制剂中纳米银释放情况.结果:通过正交实验设计,优化了制备工艺条件,其佳条件是羧甲基壳聚糖浓度4.2 mg/mL,滴速为5 s/滴,纳米银投药量为20 mg(500 μL).在此条件下进行实验,制备出的载药纳米微球的平均粒径为514.1 nm,多分散系数0.204,包封率61.67％.8h内累计释放量达80％以上,方程拟合以一级动力学方程拟合效果好.结论:该制备工艺简单、稳定,可制备出包封率高、粒径适宜的羧甲基壳聚糖-纳米银纳米微球.
