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纳米微球在核酸检测中的应用研究进展
核酸分析在遗传病诊断、病原微生物检测、法医鉴定、亲子鉴定以及环境监测等方面有广泛的应用.1986年Mullis等[1]发明了PCR后,经过不断完善,现已成为核酸分析的一种常规技术.
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肠球菌API、VITEK 2、23SrRNA鉴定结果的比较与分析
随着分子生物学技术的发展,核酸分析在细菌鉴定中已得到广泛应用.我们于2004年4月至2005年1月采用API、VITEK 2、23SrRNA PCR方法对临床分离的11株肠球菌的鉴定结果进行比较,旨在探讨不同的细菌鉴定方法在细菌分类学上的价值和应用,报告如下.
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人源化抗CD3单链抗体的构建、序列分析和表达研究
目的构建和表达抗CD3单链抗体,并对其构象进行模拟分析.方法应用重叠延伸拼接法连接抗CD3抗体的轻链可变区基因和重链可变区基因,构建抗CD3单链抗体基因(ScFv),并将其克隆于原核表达载体中表达.结果拼接后的抗CD3ScFv基因全长732bp,构象模拟分析表明其三维结构稳定,兼容性分数S>0,表达的目的蛋白约26.5kD.结论抗CD3ScFv基因的成功构建,为进一步研究抗CD3/抗乙肝病毒的双特异性抗体奠定了基础.
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临床分子遗传学诊断简述
本世纪初人类基因组计划完成及现代分子生物学的革命性进展,极大促进了人类对疾病发病机制新的认识,推动了临床遗传学的快速发展.临床分子遗传学(clinical molecular genetics)作为医学遗传学的重要组成之一,已经成为临床医学知识更新快的学科,为临床遗传学提供了越来越多的快捷、准确的分子诊断方法,不断丰富着遗传性疾病的预防措施和治疗手段.
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微生物基因分类鉴定的方法学进展
分子生物学理论与技术的迅速发展给传统微生物分类鉴定带来了巨大的革新.当代微生物分类学利用遗传学原理和方法分析微生物种、属间的亲缘关系.遗传分类法是根据核酸分析得到的遗传相关性(genectic relatedness)所做的分类.因为这种分类方法是以决定生物表型特征的遗传物质-核酸作为比较的准绳,所以它是一种客观和可信度较高的分类方法[1].
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PCR技术应用中的注意事项
PCR(聚合酶链反应)是美国petus公司的karymullis等人在1985年创建的核酸分析技术,近年来得到了飞速地发展.这一技术建立在DNA复制理论的基础上,用于扩增位于两段已知序列之间的DNA区段,其优点是无需进行克隆化即可有目的地扩增基因内某一特异的DNA片段.PCR反应包括3个过程:①变形,②退火,③延伸.PCR是模拟DNA体内复制过程,在DNA聚合酶的作用下,进行特定DNA的体外复制.PCR能将极微量DNA在体外扩增几百万倍,实际操作中稍有不慎就有可能出现假阴性或假阳性.因此在实际工作中一定要严格按照操作说明,尽量避免假阴性及假阳性和污染的存在.
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一种新轮状病毒所致腹泻1500例临床分析
1982年12月~1983年1月20日,锦州市南票矿区发生一次急性腹泻流行.发病时间集中,蔓延迅速,共发生7369例,发病率14.3%,有三个住宅区发病率高达32.6%,其余五个住宅区发病率5.4%,男性高于女性,以青壮年发病高.其流行原因是:先在三个住宅区水型爆发,继之在其它住宅区经生活接触扩大传播.研究证明本次腹泻流行的病原是一种与目前已知轮状病毒完全不同的新轮状病毒,并经世界卫生组织轮状病毒英国合作中心Flewett主任重复了病毒的核酸分析,验证了我国的发现.
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基因芯片技术在肿瘤研究中的应用
基因芯片技术是20世纪90年代发明的高效率核酸分析技术之一,可以将生命科学研究中许多不连续的分析过程连续化和微型化,同时检测比较生物样品中多个已知或未知序列的表达状况.近来研究证实,肿瘤的发生、发展是一个复杂的多阶段过程,是多种肿瘤相关基因表达失常或许多肿瘤抑制基因失活所致.基因芯片为研究肿瘤发生发展中的基因开关及表达程度提供了强有力的工具,被越来越多的肿瘤生物学家用来比较肿瘤组织与相应正常组织间的基因表达差异,分析肿瘤生长的各期相关基因的表达模式.基因芯片技术在肿瘤研究领域中具有重要应用价值.
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胎盘生殖支原体感染对妊娠的影响研究
1981年Tully等首次从人体泌尿生殖道分离到生殖支原体(Mycoplasma genitalium,Mg)并加以命名〔1,2〕。近十年来中外学者证实,男性非淋菌性尿道炎(NGU)和女性宫颈炎与Mg感染相关联〔3,4〕。1998年,我们通过对正常和异常孕妇宫颈脱落细胞中的Mg核酸分析研究发现:早产、胎膜早破等不良妊娠结局可能与其宫颈部存在Mg相关〔5〕。为了进一步确认不良妊娠与Mg的关系,我们收集了100例正常妊娠和129例早产、胎膜早破等异常妊娠者的胎盘组织进行了Mg套式PCR(nPCR)检测,并对阳性病例进行了DNA序列测定。现将结果和分析报告如下。
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聚合酶链反应中假阴性的探讨
聚合酶链反应,英文缩写PCR,是体外酶促反应合成特异性DNA的一种方法.它利用人工合成引物介导的DNA聚合酶促反应,扩增位于两端已知序列之间的DNA区段,它以快速、特异、敏感的核酸分析技术而著称,是分子生物学技术的一项新突破.因其高度的灵敏性,污染问题已广泛受到人们的观注与重视.但又因本实验的特殊性,假阴性同样是一个不可忽视的问题,如果对于假阴性不能很好地控制和解决,同样不能保证其特异、准确、敏感的特性,对于如何预防和解除假阴性分述如下:
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抗CD3单链抗体的构建及核酸序列分析
目的探讨用抗CD3抗体重链可变区与轻链可变区基因,经重叠延伸拼接连接形成单链抗体.方法用DNA序列分析及动态模拟构象分析,并与相关软件分析,推导Scfv基因编码的氨基酸序列.结果该基因全长732bp,三维构象稳定,兼容性分数S>0.将单链抗体基因克隆于载体中,在强启动子作用下,目的蛋白的表达量约占菌体蛋白总量的20%.结论重链可变区与轻链可变区经短肽连接而成的单链抗体,具有分子量小,免疫原性低的特性,具有较广的应用前景.