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  • 别轻易说“我老了”

    作者:刘颂

    老是年龄标记,更是文化符号,不是一个简单的字,在它的背后,隐藏着一整套有关老年人的社会文化观念.毋庸讳言,相当一部分老年人会给人暮气沉沉的印象.不少年轻人认为,老年人是保守的、沉闷的、传统的、古板的、多疑的、唠叨的、烦人的、固执的、丢三落四的、多管闲事的、斤斤计较的、缺少情趣的、难以相处的、小气抠门的……这些评价就是非老年人心目中老年人的形象,也是“老”的社会标签.所以,如果对自己说“我老了”,等于在消极定位自己的言行举止、穿着打扮、思想观念、情感表达模式.

  • 一种适用于短肽制备抗体的亲和纯化方法

    作者:杨洁;黄迎春;刘军锋;庞星火;张铁钢

    在免疫组织化学检测过程中,抗体的纯度对于减少检测背景和假阳性起着关键作用.为了获得高纯度的抗体,亲和纯化的方法被广泛应用[1-3].为了研究某种特定基因编码产物的时空表达模式,可将基因的序列克隆到原核表达载体上,获得目的基因的原核表达蛋白,用于制备抗体进行免疫组化研究.

  • 慢性乙型肝炎患者肝组织HBcAg表达模式与中医证型的关系

    作者:梁惠卿;许诗霖;毛乾国;张嘉挺;杨嘉恩;吴春城;钟群燕;连开伟;蔡洋;罗晨;庄鸿莉;陈少东

    目的:观察慢性乙型肝炎(CHB)患者肝组织乙型肝炎核心抗原(HBcAg)表达模式与中医证型及肝组织炎症、纤维化等指标的关系并进一步探讨相应的机制.方法:选择CHB患者556例,均进行中医辨证分型及肝组织活检,测定肝组织HBcAg表达模式、炎症、纤维化程度及ALT、AST、HBV DNA水平.结果:①556例患者按中医辨证标准分为6组:瘀血阻络证44例、肝肾阴虚证42例、肝郁气滞证48例、肝郁脾虚证282例、湿热蕴结证140例、脾肾阳虚证0例;按HBcAg表达模式分HBcAg阴性组42例、胞浆型HBcAg组186例、胞浆优势型HBcAg组290例、浆核各半型HBcAg组38例.②经Spearman秩相关分析,肝组织HBcAg表达模式与肝组织炎症活动度、纤维化程度均呈负相关;经Fisher确切概率检验,肝组织HBcAg表达模式与中医证型分布具有相关性.结论:肝组织HBcAg表达模式与中医证型、肝组织炎症、纤维化程度均有相关性;HBcAg阴性组、胞浆型HBcAg组及肝郁脾虚证、湿热蕴结证多处于慢性乙型肝炎活动期,正气未伤,免疫功能较强,为抗病毒治疗的较佳时机.

  • 穿心莲转录因子ApNAC1的克隆、亚细胞定位及原核表达

    作者:王健;齐梦蝶;郭娟;申业;林慧馨;黄璐琦

    从穿心莲叶片中克隆了1个NAC家族的转录因子,命名为ApNAC1,GenBank注册号为KY196416.生物信息学分析表明该基因的完整编码区包含972bp,编码1个323个氨基酸的多肽,预测蛋白相对分子质量为35.9kDa,等电点为6.14.原生质体瞬时表达研究证实了ApNAC1-GFP融合蛋白特异定位在穿心莲叶肉细胞的细胞核中,是一个核定位蛋白.实时定量PCR结果表明ApNAC1基因表达与穿心莲内酯的积累模式一致:主要在穿心莲的叶片里表达,而且茉莉酸甲酯处理能急剧上调其表达水平.ApNAC1基因在大肠杆菌中进行异源表达,并且被成功纯化.该研究为进一步探索ApNAC1蛋白参与穿心莲内酯生物合成的研究奠定了基础.

  • 猪生殖与呼吸综合征病毒的基因组及致病的分子基础

    作者:刘光清;云涛;王根荣;倪征

    猪生殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)以引起母猪的生殖障碍及仔猪的呼吸道症状为特征.PRRSV 属于尼多病毒目、动脉炎病毒属.PRRSV的基因组为一单股正链RNA分子,由大约15 000个核苷酸组成,含有8个开放性阅读框架(ORFs),其线性排列顺序为5′-NCR-ORF1a/1b-ORF2-GP3-GP4-GP5-M-N-NCR-3′.大量研究表明PRRSV基因组的结构特征、表达模式及与宿主的相互作用构成了PRRSV致病的分子基础,系统了解该方面的研究进展对开展PRRSV致病机理和新型疫苗等方面的研究将有所帮助.

  • 埃及伊蚊表皮结构基因AaCPR100 A序列特征和表达特性分析

    作者:陈静;张磊;卢浩然;从军灏;商子昂;廖承红;韩谦

    AaCPR100A是本实验室从埃及伊蚊RNAseq数据库中获得的预测与表皮结构相关的基因.本文拟通过生物信息学和分子生物学技术,探究埃及伊蚊表皮AaCPR100A基因的序列特点,并分析其在埃及伊蚊的时空表达特征.埃及伊蚊表皮AaCPR100A蛋白序列AaCPR100A ORF长度为765 bp,编码254个氨基酸,蛋白分子量约为28.6 kDa,1~16位氨基酸残基为信号肽,其氨基酸序列中含有表皮蛋白CPR家族中的RR-1基序.埃及伊蚊与白纹伊蚊、 致倦库蚊、 冈比亚按蚊和黑腹果蝇的氨基酸同源性分别为95%、72%、61%、54%.qRT-PCR结果显示AaCPR00A基因在表皮和卵期表达量高,并随发育阶段呈现显著递减变化.结果表明,埃及伊蚊AaCPR100A表达具有时空和组织特异性特征.

  • 广州管圆线虫幼虫cDNA文库的构建及其表达模式与成虫表达模式的EST分析

    作者:赵醒村;彭鸿娟;陈晓光;李华;沈浩贤

    从感染广州管圆线虫3周的大鼠脑部挑取幼虫,提取其总RNA,运用"SMART cDNA文库构建试剂盒"构建其cDNA文库.分别将成虫和幼虫cDNA文库中的噬菌体克隆转化成噬菌粒,用5'端测序引物进行测序.利用BLAST程序对获取的EST从核苷酸和氨基酸水平进行同源性搜索.结果显示:所建文库的初始滴度为2.19 × 106pfu/mL,经1次扩增后的滴度为1.0×1010pfu/mL,插入子的平均长度为1.2kb,重组率为97.3%.从成虫的cDNA文库中得到64个EST,其中有意义的EST有54个,占82.8%;无意义的EST有10个,占17.2%.64个成虫EST序列中,rRNA基因49个,占总EST数的76.6%.从幼虫的cDNA文库中共得到106个EST,其中有意义的EST有91个,占85.8%;无意义的EST有15个,占14.2%.106个幼虫EST序列中rRNA基因78个,占总EST数的73.6%.本研究首次成功构建了广州管圆线虫幼虫的cDNA文库,EST分析显示广州管圆线虫幼虫和成虫基因表达谱中rRNA基因均占大多数.

  • 基因间长非编码RNA在T细胞发育分化过程中的表达和调控

    作者:王楠

    虽然基因间长非编码RNA(intergenic long noncoding RNA,lincRNA)在不同组织中都与基因调节有关,但是我们对T细胞系中的lincRNA所知尚少。作者用高通量测序手段在从早期T细胞到辅助体细胞的42种T细胞中发现了1524个lincRNA基因簇,其中某些基因簇甚至能够表达至少两个lincRNA。文中研究发现lincRNA在T细胞分化过程中呈现高动态和高细胞特异性的表达模式。其中,LincR-Ccr2-5'AS不仅可以调控CCR1、CCR2、CCR3、CCR5等多种共表达基因,还可以在小鼠体内调控Th2向肺部的迁移。该研究对T细胞lincRNA进行了高通量测序,丰富了免疫学非编码RNA数据库,并进一步研究了lin-c RN A对免疫功能的调控,为免疫学领域的非编码RN A相关研究做出了贡献。

  • 家蝇AMP17基因的克隆及其分子特性和表达模式研究

    作者:陶如玉;李妍;马慧玲;付萍;吴建伟;国果

    目的 克隆家蝇AMP17基因并进行、序列分析,对其时空表达模式进行初步探索. 方法 从微生物诱导的家蝇转录组数据库中筛选差异高表达唾液腺蛋白AMP17基因.以该基因的cDNA文库质粒为模板进行PCR扩增,运用生物信息学方法对其编码蛋白进行结构与功能分析.取家蝇不同生活史时期标本(卵,各龄幼虫,蛹,雄雌成虫)及3龄幼虫不同组织部位(体壁、气管、唾液腺、脂肪体、马氏管及中肠)标本,采用实时荧光定量PCR检测AMP17基因表达情况. 结果 PCR扩增得到约495 bp的特异性AMP17基因片段.AMP17基因ORF全长495 bp,编码164个氨基酸,理论分子质量单位17.4×103,等电点为6.09,整个多肽链表现为亲水性.该蛋白属于分泌蛋白,主要分布在细胞外(包括细胞壁).磷酸化位点分析该蛋白,有5个丝氨酸、3个苏氨酸、1个色氨酸可能成为蛋白激酶磷酸化位点.其二级结构中主要以α-螺旋,不规则卷曲和延伸链为蛋白大量的结构元件.时空表达谱显示,家蝇不同发育时期中,以卵期作为参照,AMP17基因在3龄及雄成虫时期表达量高,表达水平排列顺序为3龄幼虫>雄成虫>1龄幼虫>雌成虫>蛹期>2龄幼虫>卵,3龄幼虫时期表达量比卵期上调了20 320.98倍(P<0.01);雄成虫上调了10 936.37倍(P<0.01).以体壁作为参照,AMP17基因在家蝇3龄幼虫不同组织的表达以马氏管表达高,比体壁上调了2.40倍(P<0.05);其次为唾液腺,比体壁上调了1.31倍(P<0.01). 结论 成功克隆了家蝇AMP17基因并初步探索了其时空表达模式,为进一步研究其功能奠定了基础.

  • 钙视网膜蛋白在先天性巨结肠不同肠段的表达差异及其临床意义

    作者:张文;范丽;黄敏捷;冯亭;夏嘉辉;滕利;刘黎黎

    先天性巨结肠是以远端肠道神经节细胞完全缺如为特征的先天性畸形,结肠黏膜病理活检是术前确诊先天性巨结肠的重要的手段。钙视网膜蛋白( calretinin,CR)是一种重要的钙结合蛋白, CR参与神经细胞胞内的调节。国外文献报道[1-2],CR在先天性巨结肠不同肠段的表达模式存在差异,提示CR免疫组织化学染色可能作为临床诊断先天性巨结肠的一种新的手段。国内马能强[3]及张艳[4]等使用数字分析软件发现先天性巨结肠肠管痉挛段和扩张段黏膜下层及肌间区CR存在差异。我们拟使用免疫组织化学技术对含节细胞及无节细胞的肠管进行CR染色,并分析其染色模式,了解CR在先天性巨结肠患儿切除肠段中的表达,为临床使用CR免疫组织化学染色诊断先天性巨结肠打下基础。

  • 人胰腺癌组织中Th2类细胞因子的优势表达及其临床意义

    作者:张圣林;邱法波;吴力群;卢云

    目的:观察Th1/Th2类细胞因子在胰腺癌组织中的表达模式及临床意义.方法:以IFN-γ和IL-2代表Th1类细胞因子,IL-4和IL-10代表Th2类细胞因子.收集45例胰腺癌患者的手术切除组织蜡块,以免疫组织化学PV-9000通用型二步法染色,DAB显色试剂盒显色,检测胰腺癌组织中Th1/Th2类细胞因子的表达.结果:IFN-γ和IL-2在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达无明显差异(P>0.05),说明Th1类细胞因子在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达无明显差异;IL-4和IL-10在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织(P=0.022<0.05;P=0.023<0.05),说明Th2类细胞因子在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织.结论:胰腺癌组织中Th2类细胞因子呈优势表达状态,这可能是肿瘤免疫逃逸的机制.

  • MUC1,MUC2和MUC3在胃增生性息肉中的表达模式

    作者:李娟;吴丽华;石岩;焦宇飞

    目的:研究MUC1,MUC2和MUC3在胃增生性息肉(gastric hyperplastic polyp,GHP)中的表达模式,旨在发现可以提示GHP发生癌变的有价值的标志物.方法:选用明确诊断的经手术切除或胃镜活检的GHP标本238例,其中包括GHP未伴有不典型增生188例,GHP伴低级别不典型增生(low grade dysplasia,LGD)35例,GHP伴高级别不典型增生(high grade dysplasia,HGD)8例及GHP伴局灶癌变(carcinoma,Ca)7例.同时选取30例正常胃黏膜标本为正常对照.采用免疫组织化学方法评价MUC1,MUC2及MUC3的阳性表达百分率及其表达模式.结果:MUC1呈现2种表达模式.模式1:细胞质和细胞膜弥漫阳性;模式2:腔缘侧细胞膜阳性.所有正常的胃黏膜和85.6%的未伴有不典型增生的GHP,MUC1表达呈模式1.80%的GHP伴LGD和100%的GHP伴高级别不典型增生或癌变(HGD/Ca)其MUC1的表达呈模式2(P<0.001).MUC2在GHP中表达阳性率为8.11%,GHP伴LGD为21.93%,GHP伴HGD/Ca为31.42%(P<0.001).MUC3仅在l例GHP伴LGD和3例GHP伴HGD/Ca中表达阳性.结论:MUC1和MUC2可能是提示GHP具有恶变潜能的有价值的标志物.

  • 膀胱移行细胞癌与细胞角蛋白20/19

    作者:金百冶;赵鲁杭;许先国;李恭会;姜海

    为了探寻膀胱移行细胞癌(TCC)患者和正常人群CK20的真实表达模式,我们采用RT-PCR和DNA序列分析方法对2002年3月至9月收治的43例初诊TCC患者尿脱落细胞进行检测分析.现报告如下.

  • B和C基因型乙型肝炎病毒对Huh7细胞全基因组表达模式的影响

    作者:李晓光;洪源;王琦;张锦前;成军

    目的 探讨B和C基因型乙型肝炎病毒对Huh7细胞基因组表达模式的影响.方法 重组B或C基因型乙型肝炎病毒(pHY106-BHBV和pHY106-CHBV)转染Huh7细胞,以pHY106空载体为对照,48 h后进行芯片杂交,筛选出表达差异值Gy5/Cy3> 2或< 0.5的基因.pHY106-BHBV、pHY106-CHBV分别转染Huh7细胞48 h,以pHY106空载体为对照,应用real-time PCR对基因芯片差异表达的部分基因进行验证.结果 pHY106-BHBV转染Huh7细胞48 h后,从4097个基因中筛选出差异表达基因共60个;pHY106-CHBV转染Huh7细胞48 h后,筛选出差异表达基因共120个;real-time PCR证实pHY106-BHBV转染Huh7细胞48 h后,IFNGR2、GPR125、DDEF2和PI3K mRNA表达水平均出现不同程度下调,pHY106-CHBV转染Huh7细胞48 h后,EEF2和INF592表达下调,与基因芯片结果一致.结论 B和C基因型乙型肝炎病毒对Huh7细胞表达谱改变的影响明显不同,表明其对机体的影响可能存在不同的方式.

  • 蛋白质组与蛋白质组学及其在运动医学领域中的应用

    作者:史绍蓉;王步标;余玲;上官戎

    随着人类基因组框架图与序列图在2000年2月、6月的先后公布,人类基因组与基因组学大量研究成果的获得,使人们在揭示基因组精细结构的同时,也深刻地了解到基因数量的有限性和基因结构的相对稳定性,这与生命现象的复杂性和多变性之间存在着巨大反差.这种反差促使人们认识到基因只是遗传信息的载体,要研究生命现象,阐释生命活动的规律,只了解基因组的结构是远远不够的.如今,生命科学领域的研究重点已开始从揭示生命的所有遗传信息,转移到对基因的表达产物(生命活动的直接执行者)--蛋白质进行定量的、动态的、整体水平的研究[1].人类正开始探索一个以研究蛋白质为核心,揭示生命规律的新的重大的热点领域.一门以研究生物体全部蛋白质的表达模式与功能模式的新兴学科--"蛋白质组学(proteomics)"的建立,标志着以"蛋白质组(proteome)"为研究重点的生命科学新时代已悄然到来[1].

  • 铁皮石斛S-腺苷酸脱羧酶基因DoSAMDC1的克隆及特征分析

    作者:赵明明;张岗;张大为;郭顺星

    S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosyl-L-methionine decarboxylase,SAMDC)是多胺合成的关键酶,通过调节多胺的代谢途径参与植物的多项生理生化过程.本文利用cDNA末端快速克隆技术(RACE),首次从铁皮石斛共生萌发种子中分离得到一个新的SAMDC基因,命名为DoSAMDC1 (GenBank注册号JX966243),并对其编码蛋白的理化性质、保守结构域等特征进行分析.生物信息学分析表明,DoSAMDC1基因的全长为1 979 bp,涵盖tiny-uORF、small-uORF和mainORF 3个植物SAMDC基因特征ORF.mORF编码一条368个氨基酸的肽链,预测分子质量为40.7 kD,等电点为5.2,编码蛋白不含信号肽,具有22个氨基酸的跨膜域(89~110位),具有植物SAMDC的典型结构特点,包括酶原剪切位点、PEST结构域及催化功能必须的氨基酸.序列比对及系统发育树分析结果表明DoSAMDC1与单子叶植物SAMDC具有很高的同源性,与双子叶植物的亲缘关系较远.应用实时荧光定量PCR对DoSAMDC1基因在石斛不同组织中的表达模式分析发现,该基因在未接菌的植物组织中表达变化差异不大,在接菌共生萌发的植物种子中显著上调表达,为未萌发种子的2.74倍,具有受真菌侵染诱导表达的特性,揭示其可能通过参与多胺调控途径在植物-真菌共生方面发挥作用.

  • 三七病程相关蛋白PR10-1基因克隆及功能初步分析

    作者:唐美琼;闵丹丹;李刚;蒋妮;叶云峰

    采用同源克隆法和RACE技术相结合,对三七根部蛋白质组差异进行研究,鉴定PR10-1蛋白相应的基因全长cDNA,初步分析该基因在三七中的功能.测序结果显示该基因序列全长863 bp,包含1个序列长465bp编码155个氨基酸的开放阅读框,命名为PnPR10-1,GenBank登录号KJ741402.氨基酸序列同源性及系统发育树分析发现,PnPR10-1与人参的PR10-1蛋白同源性高,含有Bet-v-Ⅰ家族等多个保守结构域.实时荧光定量PCR分析显示,PnPR10-1在1~3年生三七各组织中均有本底表达,暗示其参与生长发育、代谢调控等生物学过程;PnPR10-1生根部受根腐病原菌(Fusarium oxysporum)胁迫上调表达,推测PnPR10-1基因可能参与抗三七根腐病等广谱抗病防御反应.

  • 铁皮石斛钙依赖蛋白激酶基因的分子克隆及特征分析

    作者:张岗;赵明明;张大为;宋超;李标;郭顺星

    目的 克隆铁皮石斛(Dendrobium officinale)钙依赖蛋白激酶(calcium-dependent protein kinases,CDPKs)基因并进行分子特征分析.方法 利用反转录PCRC(RT-PCR)和CDNA末端快速扩增(RACE)技术,从铁皮石斛叶cDNA中分离CDPKs基因,并进行编码蛋白等电点、分子量、保守结构域、信号肽以及跨膜域等生物信息学分析;采用DNASTAR和MEGA4软件进行氨基酸多序列比对和进化树构建分析;借助实时荧光定量PCR技术检测基因组织表达模式.结果 分离到两个铁皮石斛钙依赖蛋白激酶基因DoCPK2和DoCPK3(GenBank注册号JX219469和JX219470),全长为2 119和2 418 bp,各编码一条由541和536个氨基酸组成的肽链,相对分子质量分别为60.46×103和60.30×103,等电点6.14和6.32;两个基因编码的蛋白不合信号肽,均具有19个氨基酸的跨膜域(分别为248~ 266和243 ~ 261位)和CDPKs蛋白家族保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的结构域及Ca2结合EF-hand基元.两个基因与植物CDPKs基因同源性很高(67% ~81%),与小麦和水稻等单子叶植物CDPKs基因亲缘关系较近;DoCPK2和DoCPK3基因在组织中为组成型表达,前者在根和原球茎中表达量较高,后者在茎和种子中的表达量较低.结论 分离到两个铁皮石斛钙依赖蛋白激酶基因DoCPK2和DoCPK3,为进一步揭示其在植物生长发育和逆境胁迫等过程中的生物学功能奠定基础.

  • 不同舌苔胃癌患者血清炎症因子表达模式研究

    作者:张军峰;张李唯;吴娟;辛欠欠;董伟;王瑞平;詹瑧

    目的 探索不同舌苔胃癌患者的血清炎症因子的表达模式.方法 临床收集134例不同舌苔的胃癌患者和93例不同舌苔的非胃癌人群,电化学发光免疫检测血清炎症因子水平,多因素关联分析舌苔类型和血清炎症因子的相关性.结果 不同舌苔胃癌患者血清白细胞介素-17α(IL-17α)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平差异有统计学意义(P<0.05).苔色分析发现,黄苔和白苔胃癌患者血清IL-17α水平中值分别为3.062和3.982 ng/L,差异有统计学意义(P<0.05),受试者工作特征曲线(ROC)分析显示血清IL-17α区分白苔与黄苔的灵敏度、特异性和计算线下区域面积(AUC)(95%CI)分别为72.7%、91.3%和0.639(0.539-0.739),截断值为6.033 ng/L,而且,类似的趋势在非胃癌人群中得到了验证.相关性分析显示,在同种舌苔胃癌患者内部,20种血清炎症因子显著正相关占主导地位,然而,在不同舌苔胃癌患者之间显著负相关占主导地位.结论 血清IL-17α水平能够显著区分白苔和黄苔、白苔-黄苔、薄苔-厚苔可能反映了胃癌患者体内相反的炎症状态.

  • 转录因子SOX7调控血管发育的研究进展

    作者:李宝雷;洪楠超;孙锟;于昱;陈笋

    血管形成是胚胎发育期间的早进程之一,其对胚胎的正常生长发育非常重要.血管形成和发育进程受一系列基因、转录因子、信号通路等调控.转录因子SOX7(SRY related high mobility group box 7)在调控心血管系统的发育、内皮细胞向造血细胞转化、动静脉分化等进程中发挥重要作用.其特异性高水平地表达于胚胎的心血管组织,提示其参与调控心血管的形成与发育.SOX7与众多参与调控血管内皮细胞的转录因子存在调节关系,其可通过抑制RUNX1的转录活性,抑制内皮细胞向造血细胞转化.Notch信号通路是调控血管发育和动静脉血管分化的关键通路,SOX7很可能作用于Notch信号通路上游,参与调控动脉和静脉血管的分化.但其调控血管发育的确切分子机制未来需进一步研究.

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