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基因释放剂对痰中耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变检出率的影响
结核分支杆菌DNA依赖性RNA聚合酶β亚单位编码基因(rpoB)是单拷贝基因,提高其检测灵敏度对直接检出痰中耐利福平结核分支杆菌具有重要意义.我们在聚合酶链反应-单链构象多态性分析中(PCR-SSCP)采用基因释放剂和套式PCR,提高痰标本中结核杆菌rpoB基因突变检出率,以快速确定是否为耐药菌感染.
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不同基因型丙型肝炎病毒混合感染者体内丙型肝炎病毒基因型和序列的分布
应用套式PCR从一例维吾尔族丙型肝炎病毒(HCV)感染者血清[职业献血员,有多次献血史,无自觉肝炎症状,抗-HCV(+),PCR基因分型为Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ混合型]中,扩增出C区部分基因片段(357bp),将其克隆于T载体中进行基因型分析,并对不同基因型的C区片段进行序列测定.
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聚合酶链反应检测SEN病毒D和H亚型方法的建立及比较
SEN病毒(SENV)是新近发现怀疑与输血相关的non-A-E型肝炎有关的一种病毒.我们实验室首次证实在我国也存在SENV感染[1],为进一步了解其致病性,我们在前期工作的基础上,参考已发表的文献[2]及基因序列,建立了两种特异性检测SENV-D和SENV-H的套式PCR方法.
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万法归宗明辨阴阳--阴阳功法
阴阳功法是通过患者自我锻练,使其意念、呼吸及形体动作的某种阴阳属性加强,以阳功治疗阴病,以阴功治疗阳病,调节机体疾病矛盾中相互对立的两方面间的动态平衡.本疗法具有适寒温、调虚实、通经络、和气血、调节气机升降出入及因势导邪外出等功效.本法常与五行功法组合而演变出众多的套式,以辨证组合论治的方式,广泛应用于各科临床.其操作方法如下:
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套式皮瓣治疗手指离断伤120例
手指离断伤后因游离残部毁损严重,丢失或限条件因素无法再植时,采用从伤指残端软组织内自远端行环状分离呈套式游离皮瓣,前移覆盖伤指残端,称之为套式皮瓣[1].我们自1994年10月以来采用该方法修复手指离断伤残端创面120例(142指),取得良好疗效.现总结如下.1临床资料本组共120例(142指),男92例(106指),女28例(36指);年龄5~71岁,平均28.5岁.伤因:切割伤30例(42指),绞轧伤58例(62指),挤压伤32例(38指).受伤手指及损伤部位见表1.
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一株HIV1变异株的发现
我们在进行序列分析过程中发现一株不同于以往国内外报道的新型HIV1的变异毒株。现报道如下:1 材料和方法1.1 前病毒DNA的提取某HIV1感染者300μLEDTA抗凝血,使用Promega公司的DNA提取试剂盒(Wizard GenomicDNA Purification Kit)提取HIV1前病毒DNA。1.2 HIV env基因c2-v3区的套式PCR扩增 以所提的HW1前病毒DNA为模板,利用一对外侧引物EP1,EP2(序列为,EP1:5'-GGCAGTCTAGCA-GAAGAAGAGG-3':EP2:5'-CCTACTTC-C TGCCACATG-3')和一对内侧引物EP3,EP4(序列为,EP3:5'-GATCTGA-CAATTTCACGAACAAT TGC-3';EP4:5'-C TGGGTCCCCTCCTGAAGGATG-3')进行nested-PCR反应。反应条件为94qC30s,55℃30s,72℃30s,35个循环;72℃C5min结束扩增。1.3 PCR扩增片段的克隆P CR扩增的特异性片段经Promega公司的PCR产物纯化试剂盒(WizardPCRprepsDNA pu-rification system)纯化后,与PGEM-T载体连接克隆于JM109宿主菌中
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深圳地区小儿肠道病毒感染的核酸检测分析
为了解深圳地区肠道病毒(EV)的感染流行情况和病毒分型特征,我们采用检测EV的套式逆转录聚合酶链反应(RT-nPCR)方法进行EV感染检测,并对临床分离株5′端非编码区(5′UTR)基因序列进行分子进化树分析.
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陕西株GBV-C/HGV RNA NS3区cDNA的序列分析
应用反转录及套式PCR 技术, 从陕西省西安市两位非甲~戊型急性肝炎患者的血清中提取RNA,经特异性的反转录引物P4反转录成cDNA ,以此为模板分别用P3,P4及P1,P2两对引物进行PCR扩增,扩增到218bp(4248nt~4465nt )的HGV RNA NS3区部分基因,将其克隆人PinPointTMXal-T载体,挑选阳性克隆并进行了序列分析,结果表明SG2与HGV的核苷酸同源性分别为85.64%与84.48%;与GBV-C 的核苷酸同源性为86.21%与84.48%,其二者之间的核苷酸同源性为97.13%,二者与HGV的氨基酸的同源性分别为98.28%和93.10%,与GBV-C的氨基酸同源性为98.28%,93.10%,二者之间的氨基酸同源性则达到了94.83%.
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套式RT-PCR方法检测SARS冠状病毒
采用世界卫生组织推荐的套式RT-PCR引物,建立了较稳定、重复性好的实验室检测方法.病理检测的肺组织3份,取自广州非典死亡病例;咽拭子和漱口水20份,取自广州非典临床确诊病例;SARS冠状病毒,本室保存.Vero-F6、大肠杆菌DH5α为本实验室保存.
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新型男性小便套式引流带的设计与应用
通过观察和临床实践,笔者根据男性的生理解剖特点,设计了一种实用新型的男性小便套式引流带,经我院累计5 000例使用,反映颇佳,现报道如下.1 材料
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自制袜套式防垂鞋
骨折患者需要长时间卧床治疗和患肢制动,因此会出现足下垂、肌肉萎缩等并发症。传统的防旋鞋存在舒适度差、足踝活动不便、穿着时间长引起皮肤破溃、保暖度差等,为解决以上问题,笔者制作了一种简易袜套式防垂鞋,现介绍如下。
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手套式弹力绷带在手背静脉留置针护理中的应用效果
随着留置针在临床输液中的广泛应用,其避免了反复穿刺给患者造成身体上的痛苦,为所有的患者接受.留置针传统的固定方式除优韧宁粘贴外,外加胶布反复缠绕,患者手背部位常常会出现胶布痕迹,难以清除并影响美观,也常常出现夜间置管针脱落.我科采用网状弹力绷带固定手背静脉留置针,但这样不利于拇指的活动.自2010年8月至今我科采用在固定拇指处剪一个小孔,这样既有利于拇指的自由活动,又不会影响置管针的牢固固定,临床应用取得了良好效果,现介绍如下.
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静脉输液防护卡的设计与使用
在医疗护理操作中,静脉输液是防治疾病及抢救危重病人的一种迅速而有效的临床治疗手段.但因针尖锐角产生的切力切割血管而造成的机械性损伤,容易导致静脉渗出、药物外渗等,不但给病人增加不必要的痛苦,严重者甚至危及病人生命[1].因此,在临床护理工作中,预防和处理静脉输液液体外渗具有重要的意义.我们借鉴美国输液护理协会制定的<输液护理实践标准>等规定[2],在美国手套式静脉输液屋的基础上,设计与研制了较为完善的静脉输液防护卡.
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套式逆转录聚合酶链反应在检测糖尿病患者人巨细胞病毒感染中的应用
人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV) 是一种可导致多种疾病的DNA病毒.自Lohr等[1]发现HCMV与2型糖尿病有关以来,HCMV与糖尿病的关系已被重视.为此,我们自行设计并合成对HCMV基因组特异和保守的寡核苷酸引物对,建立了套式逆转录聚合酶链反应(套式RT-PCR)方法,检测糖尿病患者外周血单个核细胞(PBMC)中HCMV-mRNA的表达,探讨糖尿病患者HCMV活动性感染状况及临床意义.
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套式聚合酶链式反应诊断三日疟原虫感染的临床应用
目的:应用套式聚合酶链式反应(PCR)扩增小亚单位核糖体核糖核酸(SSUrRNA)基因诊断三日疟原虫感染,以减少三日疟的漏诊和误诊。方法分别提取可疑三日疟患者抗凝血 DNA和对照间日疟、恶性疟患者抗凝血 DNA,以此为模板,用疟原虫属特异性引物进行第一轮扩增;然后以第一轮扩增产物为模板,用4种疟疾的种特异性引物进行第二轮扩增,比较扩增出的18 SSU rRNA基因片段的大小,并对目的片段进行测序鉴定。结果经属特异性引物 PCR 扩增后,3个样本均出现大小约为1200bp 的条带。经种特异性引物 PCR 扩增后,间日疟及恶性疟确诊样本均扩增出相应的120bp 和205bp 特异性条带;可疑患者样本仅在用三日疟原虫种特异性作引物时扩增出144bp 特异条带,与理论值相符,与 Genbank 标准序列对比显示,扩增片段大小及测序结果均完全正确。证实患者感染三日疟原虫。结论利用小亚单位核糖体核糖核酸基因片段三日疟种特异引物进行扩增可以用于诊断三日疟原虫感染。
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套式聚合酶链式反应在疟原虫检测和分型中的应用研究
目的 比较疟疾病例样本套式PCR检测和传统镜检结果,探讨套式PCR在疟疾诊断中的应用价值.方法 采集疟疾患者血样,分别涂制厚、薄血膜用于常规镜检;抗凝血或滤纸血用于提取疟原虫DNA等.按要求设计属种等多套引物,应用套式PCR扩增感染人的4种疟原虫目的基因片段,将检测结果与镜检结果进行比较分析,并对目的片段进行测序鉴定等.结果 259份血样,套式PCR共检测出恶性疟187例、间日疟45例、卵形疟8例和三日疟1例,阴性10例.其中恶性疟阳性检出率高(75.10%),间日疟阳性检出率次之(18.07%),还检测到混合感染血样8份(3.21%).与GenBank标准序列对比显示,扩增片段大小及测序结果均完全正确,显示套式PCR在分型上比传统镜检更客观.套式PCR检测与传统镜检结果比较显示,前者阳性率(96.14%)明显高于后者(90.73%),并且差异具有统计学意义(x2=12.07,P<0.05).结论 套式PCR法检测疟原虫具有较高敏感性和特异性,且适用于疟原虫混合感染,在疟疾病例诊断和分型方面均具有良好的应用前景.
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原代猪肝细胞PERV检测及其意义
目的:探讨猪肝细胞内源性逆转录病毒(PERV)检测方法及意义.方法:采用体外二步灌流法获取猪肝细胞,使用特异性引物对其前病毒序列进行观察;以未逆转录PCR为对照,采用RT-PCR方法检测原代猪肝细胞PERV携带及释放情况,并用套式RT-PCR对扩增产物进行鉴定.结果:原代猪肝细胞基因组中可检测到PERV前病毒序列,肝细胞中亦可检测到特异性的PERV RNA序列.在缺乏有丝分裂原刺激的情况下,猪肝细胞普通培养的不同时段均可检测到病毒释放,并可持续至细胞死亡.结论:中国实验小型猪肝细胞携带PERV病毒序列,猪肝细胞普通培养时可释放该病毒,其感染性及生物安全性尚需进一步研究.
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西安地区急性GBVmC/HGV感染者的分子流行病学及临床特征
目的:为了了解西安地区急性GBV-C/HGV感染者的分子流行病学及临床特征.方法:连续收集急性病毒性肝炎病例458例,诊断符合上海会议标准.经ELISA检测的67例非甲-戊型肝炎患者经套式PCR方法检测HGVRNA,采用统一<急性病毒性肝炎调查表>,由专人负责进行l临床和流行病学调查.所有数据用EPI软件处理.结果:经ELISA检测的67例非甲-戊型肝炎患者经套式PCR方法检测有17例呈HGVRNA阳性,50为诊断不明患者.通过对17例HGVRNA阳性患者的流行病学分布所进行的分析表明HGV极易感染抵抗力较弱的儿童和老年人,26岁以下占88.23%,与同一人群同年龄乙肝、丙肝和丁肝患者相比,明显增多,经x2检验有统计学意义(P<0.05).而当HGV与HCV或HBV同时感染时,致病力增强,可以使各年龄段人群感染.同时我们可以看到HGVRNA阳性患者于冬春季有一明显的发病高峰,尤以冬季为明显.结论:GBV-C/HGV并不是临床急性肝炎的主要致病因子.HGVRNA阳性患者在暴露因素、流行病学及临床特征等方面具有与其他各型肝炎相同或相似的特点.
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分时段人性化保护性约束对CCU预防留置胃管患者非计划性拔管的效果观察
目的:CCU是一个对危重心脏病患者集中实施救治和护理的地方,对于一些病情危重不能自己经口进食的患者需要插入胃管才能保证营养的供给和口服药的按时服用;然而留置胃管患者非计划性拔管却时有发生。重新置管不仅给护理人员增加了临床工作量,更重要的是给患者带来了躯体、精神上的不适和经济上的负担。虽然对患者置管期间采取持续保护性约束可以防止患者坠床、撞伤、抓伤及意外拔管等不良事件,还可提高病人的治疗与护理的依从性;但持续约束也给患者带来了心理及肢体上的不舒适,还可能对躁动患者造成约束部位的皮肤损伤。因此,我区对留置胃管患者改变以往持续性约束的方式,而实施分时段人性化保护性约束措施,并探讨此方法对于预防留置胃管患者非计划性拔管的效果。
方法:回顾性分析我院CCU于2012年3月到2013年3月期间,留置胃管患者80例,随机分成两组(观察组与对照组),两组患者采用相同的胃管固定方法,在年龄及胃管留置时间方面均无统计学差异。对照组在留置胃管期间采用持续性腕带式或者手套式约束方式;观察组则采用分时段腕带式或者手套式保护性约束,观察两组留置胃管患者非计划性拔管的发生率。观察组采用分时段保护性约束措施的具体方法是:在交接班护理人力较空缺时给予约束1小时、患者午休时约束2小时(中午1点至2点)、夜间约束8小时(夜间11点至凌晨7点)。 -
新型可调套式栓钉在胫骨平台骨折手术中的应用
自2001年1月~2002年12月,我们应用自行研制的新型可调套式栓钉[该栓钉获得2002年度国家专利(专利号:ZL 01 2 66557.6 )].在已经治疗了踝关节骨折下胫腓联合韧带损伤和股骨髁骨折的基础上对49例胫骨平台骨折进行复位和内固定,取得了满意的效果,现报告如下.