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02 用多重聚合酶链反应检测眼部标本中的单纯疱疹病毒,水痘-带状疱疹病毒和巨细胞病毒
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北京郊区161例急性散发性病毒性肝炎患者病原学和流行病学调查
为探讨北京郊区急性散发性病毒性肝炎的分型构成及危险因素,2000年选择房山区第一、二人民医院和大兴县人民医院诊断为急性病毒性肝炎的161例患者进行血清流行病学调查.于诊断后2日内取血,常规分离血清,-20℃封存,同时进行流行病学调查.ELISA法检测抗-HAV IgM、HBsAg、抗-HBc IgM、抗-HCV及抗-HEV IgG.ELISA法未能分型者用巢式聚合酶链反应检测HBV DNA和HCVRNA [1,2].
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聚合酶链反应检测SEN病毒D和H亚型方法的建立及比较
SEN病毒(SENV)是新近发现怀疑与输血相关的non-A-E型肝炎有关的一种病毒.我们实验室首次证实在我国也存在SENV感染[1],为进一步了解其致病性,我们在前期工作的基础上,参考已发表的文献[2]及基因序列,建立了两种特异性检测SENV-D和SENV-H的套式PCR方法.
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非淋菌性尿道炎患者聚合酶链反应检测单纯疱疹病毒
近年来,非淋菌性尿道炎(NGU)的发病率不断上升,在欧美国家居性传播疾病之首,2001年我国NGU的报告病例数已超过淋病,居8种报告性病的首位.NGU的病原体复杂多样[1],包括沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)、单纯疱疹病毒(HSV)等,为明确HSV感染与NGU发病的关系,我们进行了NGU患者中HSV感染情况的调查,现报告如下.
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荧光探针定量聚合酶链反应检测结核分支杆菌比较研究
关于结核病的实验室诊断,近年来报道了一些新的快速诊断方法:如荧光探针定量聚合酶链反应,连接酶链反应,基因探针扩增检测结核分支杆菌复合物等新技术方法,提高了结核分支杆菌(MTB)的检出率.
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应用聚合酶链反应检测食品中单核细胞增多性李斯特菌
单核细胞增多性李斯特菌(Listeriamonocytogenes,简称Lm)在自然界广泛存在,可从土壤、污水、饲料、食物以及鸟类和哺乳动物(包括人)中均能分离到.
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聚合酶链反应检测结核杆菌DNA对关节结核的诊断价值
聚合酶链反应(以下简称PCR)是近几年发展起来的基因诊断技术.我们自1994年开始对26例结核性关节液进行涂片染色分析,结核杆菌培养以及PCR检测,并与35例非结核性关节液的PCR检测相对照,就其结果分析如下.
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黑龙江省逊克县火山熔岩地区啮齿动物携带病原体调查
目的 调查黑龙江省逊克县火山熔岩地区啮齿动物携带病原体状况.方法 2014年4-9月,采集啮齿动物样本107只,解剖取脏器肺、肾、肝、肾和膀胱样本,采用PCR方法分别扩增10种鼠传病原体的特异性核酸片段,通过基因测序进一步鉴定.结果 在107份鼠肺中共检出汉城型汉坦病毒RNA核酸阳性样本5份,感染率为4.67%;107份鼠肾中共检出钩端螺旋体DNA核酸阳性样本6份,感染率为5.61%;107份鼠脾中共检出巴尔通体DNA核酸阳性样本7份,感染率为6.54%,嗜吞噬细胞无形体4份,感染率为3.74%;107份鼠肝、鼠脾中鼠疫菌、巴贝西原虫、斑点热群立克次体、恙虫病立克次体、莫氏立克次体的DNA核酸检测结果均为阴性;107份鼠膀胱中伯氏疏螺旋体的DNA核酸检测结果为阴性;在鼠体内还存在复合感染情况,感染率为2.80%.结论 黑龙江省逊克县火山熔岩地区啮齿动物中存在汉坦病毒、钩端螺旋体、巴尔通体和嗜吞噬细胞无形体的感染.
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荧光定量聚合酶链反应检测石蜡包埋组织结核杆菌的应用价值
在病理学形态上有多种疾病在光镜下都表现为上皮样肉芽肿性病变,如结核病、结节病、麻风病等慢性感染性疾病,在不同部位、不同患者及不同病变时期,其上皮样肉芽肿病理表现的典型性也不同,在病理诊断中常难以鉴别这类疾病,容易引起误诊.在病理形态上主要表现为上皮样肉芽肿性病变的疾病在临床上常见的是结核病,故在病理诊断中应特别注意结核病的诊断与排除诊断.目前结核病病理诊断的主要辅助检测是抗酸染色,但其灵敏度较低[1];文献报道针对结核分枝杆菌特定DNA序列进行荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测痰液、胸腹水标本中结核分枝杆菌的敏感性高、特异性强,且省时、易操作,用于诊断肺结核病取得较好效果[2].
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DNA硫化修饰聚合酶链反应检测石蜡包埋的结直肠癌p15基因甲基化改变
DNA甲基化与肿瘤发生的关系是近年来肿瘤分子病理学研究的热点之一.研究发现,肿瘤抑制基因的CpG序列易发生甲基化,后者与基因的失活有关,从而丧失对细胞增殖的调控,导致细胞转化和肿瘤发生.
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套式聚合酶链反应检测豚鼠巨细胞病毒宫内感染
人巨细胞病毒(HCMV)宫内感染是导致出生缺陷的重要因素之一,其致病机制迄今尚未阐明.本研究建立豚鼠巨细胞病毒(GPCMV)宫内感染模型,将灵敏性和特异性均较高的套式聚合酶链反应(N-PCR)用于研究检测,报道如下.
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逆转录-聚合酶链反应检测蚊标本乙型脑炎病毒核酸片段
蚊子是乙脑病毒的传播媒介,蚊子带毒率的调查是监测自然界乙脑流行的主要手段之一.一般用常规的生物学方法分离病毒了解蚊带毒率情况,该方法工作量大,出结果慢,费时费力.本研究试图用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测蚊标本乙脑病毒核酸片段,并与常规分离病毒方法进行比较.1997年夏季从辽宁、沈阳、长春等地采集蚊标本约1 100余只,液氮保存.将蚊标本20~30只混合为一组,常规消毒、研磨、离心后,将上清分为两份,一份接种C6/36和BHK-21,连传3代,观察细胞病变,另一份作RT-PCR检测.
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应用双重聚合酶链反应检测乙型、丙型肝炎病毒
常规聚合酶链反应(PCR)方法对患者HBV和HCV需要分别检测,因而操作繁琐,费时费力,且增加了污染的机会,为此,我们建立了双重PCR技术,实现一步法同时进行HBV和HCV的检测。 选取肝病患者血清标本115例,20例正常对照标本采自HBsAg阴性、肝功能正常的献血员。核酸提取采用蛋白酶K消化,酚/氯仿抽提,乙醇沉淀,将提取的DNA和RNA复悬于焦碳二乙酯处理过的蒸馏水中,并加入2U RNA酶抑制剂Rnasin。PCR反应在核酸提取管中进行,总体积50μl,反应条件为10 mmol/L Tris·Cl(pH8.3),50mmol/LKCl,2mmol/LMgCl2,0.5μmol/L HBV和HCV引物,0.2 mmol/LdNITP,AMVRT逆转录酶2U,Tag DNA聚合酶2U,RNA酶抑制剂Rnasin 10 U,混匀。
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荧光定量聚合酶链反应检测人类疱疹病毒7型方法的建立及应用
1990年,首次从健康人外周血单个核细胞中分离到人类疱疹病毒7型(human herpes rirus type 7,7).HHV-7为双链DNA病毒(145kb),主要感染CD4+淋巴细胞、唾液腺.
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多重半套式聚合酶链反应检测脑脊液中细菌16S rRNA基因
根据细菌16S核糖体RNA(ribosomal RNA ,rRNA)基因兼有保守性和变异性,以及对于本应无菌的体液标本(如血液、脑脊液),只要确定有细菌存在即可断定为感染之特点,建立了多重半套式聚合酶链扩增(multiplex semi-nested PCR)的方法,对脑脊液标本中细菌的感染进行检测。
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聚合酶链反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA和femB基因
近年来耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的感染率逐年上升,已成为全世界医源性感染的重要病原菌之一.目前国内多采用PCR方法检测编码耐药菌特异的青霉素结合蛋白(PBP2a)的mecA基因来鉴定MRSA,但近缘的细菌难以区分.如凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)中也发现具有修饰PBP2a的mecA基因.该基因具有属内种间的一致性, 耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)与MRSA mecA基因之间的DNA序列有99%以上是一致的.
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实时荧光定量聚合酶链反应检测脑脊液中结核杆菌DNA的临床应用
结核病是严重危机全球公共卫生的问题之一.结核病的病原学检测是发现传染源的主要手段,是确定结核病的依据,在结核病的预防和治疗工作中起着不可或缺的重要作用[1].近年来随着结核分子生物学诊断技术的快速发展,其快速、敏感、特异性高等的优点使其在临床逐渐得到应用.其中实时荧光定量聚合酶链反应(FQ PCR)阳性结果可作为结核病诊断的重要临床依据.本文应用Real time-FQ PCR技术与传统抗酸染色方法对比分析56例脑脊液标本,结果报告如下.
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聚合酶链反应检测重组腺病毒方法的建立及评价
病毒载体的应用越来越广泛,而我国病毒载体药物也正处于临床试验阶段[1-2],还需对人体和环境安全性密切观察.为研究这类药物在体内扩散和对环境的安全性,需要建立一种灵敏、可靠的检测方法.聚合酶链反应(PCR)技术已应用于临床病原微生物的检测,具有高敏感性、特异性等特点.本研究采用PCR建立了一种快速、简便的重组腺病毒的检测方法,并参考美国FDA检验标准[3],对该方法进行评价.
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反转录聚合酶链反应检测前列腺癌病人外周血中前列腺特异膜抗原
前列腺特异膜抗原(PSM)存在前列腺细胞上,患前列腺癌时,有很少量PSM进入血清,检测病人血清中PSM的水平,对前列腺癌的诊断有一定的临床意义,但该方法的敏感性和特异性均不理想.我们运用敏感的反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测了33例前列腺癌病人外周血中PSM mRNA的表达,结合临床有关资料,探讨其临床意义.
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荧光定量聚合酶链反应检测肺癌患者血清循环DNA的临床应用
循环DNA是指存在于血液、滑膜液等体液中的细胞外DNA,主要以DNA蛋白质复合物的形式存在,部分为游离DNA.其在体液中处于一种动态平衡过程,由细胞受外源刺激后主动分泌或者细胞损伤或死亡后释放产生[1].其变化与临床多种疾病,尤其是肿瘤有关.本研究用建立的循环DNA提取和定量检测方法,对临床不同疾病的血清中循环DNA水平进行研究.