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03 一种截短的丙型肝炎病毒E2糖蛋白胞内型及分泌型的功能定性
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以咽部症状为主的茎突综合征42例临床分析
1999年1月至2003年3月,我院收治以咽部症状为主的茎突综合征患者42例,经手术截短患侧茎突后,临床症状均消失或缓解.
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阿尔茨海默病(AD)早老蛋白-1(PSl)变异 有新发现
编码PSl的基因突变是导致家族性阿尔茨海默病(AD)的普遍的原因。这种突变常常使该型A D的病程不同于散发型和另一种由β-淀粉样前体蛋白引起的家族性AD。美、意、日等国的 研究者在《自然》杂志上联合报道,有一种特殊的缺少前10个氨基酸的淀粉样蛋白集聚于带 有PSl突变基因患者的脑组织内,该蛋白的积蓄量比在其他类型AD时显著增多。研究资料 表明,在PSl的基因突变中,至少有两种与过量的氨基末端截短的淀粉样和低浓度全长蛋 白有关。PSl基因突变可影响β和γ两种分泌酶的活性。免疫印迹法显示,无论散发性 AD,或者是家族性与PS1或β-淀粉样蛋白基因突变关联的AD, 都能从脑组织中检测到 在正常对照中没有的Bl(Aβ1~40/42)、B2(Aβpy3~42)、B3(Aβ py11~42)三条带。定量分析表明,B3带的量在PSl突变基因携带者中显著地多于散发 者和淀粉样前体蛋白有缺陷者。而B2和B3蛋白量在有H1391和H163A早老蛋白-1基因突变的 患者中高于散发的AD。产生过量的氨基末端截短Aβ的原因在于PSl基因突变影响了Aβ序列 氨基末端淀粉样前体蛋白的切割。比起淀粉样突变的基因携带者,PSl突变基因携带者的 发病较早而其痴呆出现的时间较晚。病人脑组织内的氨基末端截短Aβ肽积蓄的增多与PSl 的基因突变病人的临床症状有关。
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p63基因研究进展
p63是近年发现的p53家族成员之一,由于启动子的不同和3'端剪切方式的不同,p63基因可编码多种具有不同活性的异构体,可分成两大类:具有反式激活区的TA异构体和N末端截短的△N异构体.TA异构体具有p53样活性诱导细胞周期停滞和凋亡,△N异构体则抑制p53的功能促进转化细胞的生长.p63主要在各种上皮组织的发育、分化和形态发生上起重要作用,对于胚胎形成过程中外胚层的发育具有重要的意义,在肿瘤发生中更多的是致癌作用而不是抑癌作用.
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羧基末端截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白反式激活作用的研究
0引言乙型肝炎病毒(HBV)的感染,不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化、肝细胞癌的发生、发展过程密切相关[1-5].
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截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白上调c-myc基因表达的研究
目的:应用抑制性消减杂交方法构建截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBst)反式调节基因的消减文库,用免疫印迹方法验证截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白对c-myc基因的上调表达.方法:构建羧基末端截短的乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白的真核表达载体pcDNA3.1(-)-Mt,分别以重组表达质粒pcDNA3.1(-)-Mt和空载体pcDNA3.1(-)瞬时转染HepG2细胞,提取细胞mRNA并逆转录为cDNA,用抑制性消减杂交技术,将实验组与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性多聚酶链反应(PCR),构建eDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.生物信息学分析结果显示部分与肿瘤发生密切相关的基因,如癌基因c-myc.结果:显示截短型乙肝病毒表面抗原中蛋白可以反式激活c-myc基因,并上调其表达.结论:成功构建截短型乙肝病毒表面抗原中蛋白反式调节基因的消减文库,细胞原癌基因c-myc是MHBst反式激活作用的靶基因,为进一步阐明乙型肝炎病毒致癌的分子生物学机制提供理论基础.
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应用表达谱芯片技术对截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白反式调节基因的研究
目的:应用基因表达谱芯片研究乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原截短型中蛋白(MHBst)的反式调节基因.方法:构建MHBst基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-MHBst,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)-MHBst转染的HepG2(人肝母细胞瘤细胞系)细胞和转染空载体的相同细胞的差异表达mRNA进行检测和分析.结果:HepG2细胞经转染MHBst后,有37条差异基因表达,其中14条基因表达增强,23条基因表达降低.这些差异表达的基因与细胞的增生、分化及细胞的信号转导密切相关.结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了乙型肝炎病毒表面抗原截短型中蛋白的反式调节基因,为进一步阐明乙型肝炎病毒表面抗原截短型中蛋白的反式激活作用及免疫调节机制提供了新的依据.
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羧基末端截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白反式激活基因1的克隆化研究
目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)羧基末端截短型表面抗原中蛋白(MHBst)的反式激活作用,利用差异显示技术,筛选克隆MHBst蛋白的反式激活作用的靶基因,发现新型基因,为阐明MHBst对于肝细胞表达基因谱的影响,探索新的研究方向.方法:利用多聚酶链反应技术(PCR)扩增MHBst的编码基因片段,构建真核表达载体pcDNA3.1-MHBst,转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,与仅转染空白载体pcDNA3.1的HepG2细胞进行差异显示,利用抑制性消减杂交技术(SSH)克隆鉴定MHBst的反式激活作用的靶基因,通过生物信息学技术,确定新基因的序列,设计序列特异性引物,利用HepG2细胞来源的mRNA进行逆转录PCR(RT-PCR)扩增,克隆新基因,并对于新基因的序列以及编码基因产物序列进行分析.利用生物信息学技术确定TTP1基因是新基因.结果:构建表达载体pcDNA3.1-MHBst,经过序列分析和酶切鉴定正确.转染HepG2细胞系,利用SSH技术获得差异表达的基因片段.经对于美国生物工程信息学中心(NCBI)建立的核苷酸序列的数据库(GenBank)检索,证实这是一个新型基因片段.通过对于同源基因序列的比对,根据Kozak规则和终止密码子下游的多聚腺苷酸信号序列,确定新基因的序列,将这种MHBst反式激活的新基因命名为TTP1,并在GenBank中注册登录.结论:克隆并鉴定了乙型肝炎病毒羧基末端截短型表面抗原中蛋白反式激活作用的新型靶基因TTP1,为今后研究MHBst的反式激活作用,开辟了新的研究方向和可能.
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腔隙性和动脉粥样硬化性脑梗死急性期患者血浆组织因子的检测
腔隙性脑梗死(lacunar infarct, LI)和动脉粥样硬化性脑梗死(atherosclerotic infarct,AI)是临床上常见的两类脑血管疾病,有关LI和AI患者血浆组织因子(tissue factor,TF)和组织因子途径抑制物(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)抗原水平的研究尚少报道.我们采用ELISA法测定LI和AI患者急性期血浆TF、总TFPI(t-TFPI)、全长TFPI(f-TFPI)和截短形式TFPI(tr-TFPI)的水平,现报道如下.
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保留扁桃体治疗茎突过长症10例体会
茎突过长症以手术治疗为主,绝大多数采用口内径路切除扁桃体后将茎突截短[1],其缺点是要切除正常扁桃体,存在由此带来的一系列不良反应.我院采用保留扁桃体的方法治疗茎突过长症患者10例,取得满意疗效,现报告如下.
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HIV跨膜蛋白gp36和gp41的截短及融合表达
目的将HIV-1的跨膜蛋白gp41和HIV-2跨膜蛋白gp36进行截短,并在大肠杆菌中进行融合表达.方法用PCR将gp41和gp36的编码基因进行截短,回收的PCR产物纯化后克隆到连接载体pGEM-T上,然后用BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ和SalⅠ切下目的基因,并构建到表达载体pGEX-4T-3,导入宿主细胞BL21,用IPTG诱导表达.结果酶切鉴定显示,截短的HIV-1 gp41和HIV-2 gp36跨膜蛋白基因大小与预期的一致,表达产物经SDS-PAGE分析显示在相对分子质量66 000处出现融合表达条带,Western blot分析显示,与相应抗体出现特异性反应.结论已成功对gp41和gp36跨膜蛋白进行截短,并构建表达载体进行表达,为跨膜蛋白的进一步应用研究奠定基础.
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HIV-2跨膜蛋白gp36的截短及表达
目的将HIV-2跨膜蛋白gp36进行截短,并在大肠杆菌中表达.方法用PCR将gp36的编码基因进行截短,回收的PCR产物纯化后克隆到连接载体pGEM-T上,然后用BamHI和EcoRI切下目的基因,并构建到表达载体pGEX-4T3上,导入宿主细胞BL21(DE2),用IPTG诱导表达.结果成功地对gp36进行了截短,并且构建到表达载体上进行表达.结论截短的HIV-Ⅱ跨膜蛋白gp36能直接在大肠杆菌内进行表达,为跨膜蛋白的进一步应用打下基础.
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候选HCVE1蛋白疫苗在健康志愿者中的耐受性和免疫原性
比利时Ghent大学和医院的Leroux-Roels等在Vero细胞中表达了1b丙型肝炎病毒(HCV)的E1蛋白,即羧基端截短的重组E1蛋白(192~326位氨基酸).它装配形成20nm的病毒样颗粒后,在免疫小鼠中显示了良好的免疫原性.他们以之为候选疫苗,在20名男性志愿者中进行Ⅰ期临床试验.
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095 截短的HCV核心蛋白在小鼠中诱导强的细胞免疫应答
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099截短的HCV核心蛋白DNA疫苗在小鼠诱导迟缓但强烈的免疫应答
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176引起帕氏利什曼原虫半胱氨酸蛋白酶基因的一个拷贝被截短的新突变证据
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△Np73在结肠癌中的表达及临床意义
近年来发现,p73能同时编码缺失氨基末端和羧基末端共11种截短异构体,其中4种氨基末端的截短异构体分别为:△Np73、△N'p73、Ex2p73和Ex2/3p73(统称为△TAp73)[1].
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B33-17 用双歧杆菌来源的截短的β-半乳糖苷酶高效合成低聚糖
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经口内径路茎突截短术治疗茎突综合征
茎突综合征常引起一侧头面部耳部刺痛、牵拉痛及咽异物感等症状[1].1984年9月至2003年8月作者采用经口内径路茎突截短术治疗茎突综合征78例.现报告如下.1 资料与方法1.1 一般资料本组78例中,男32例(36侧),女46例(52侧);年龄18~72岁,平均34.3岁;病程3个月至11年.主诉咽痛42例,咽异物感23例,颈痛19例,耳痛11例,头痛17例,肩背痛22例,上胸部不适8例,吞咽梗阻感14例.78例中伴有慢性咽炎28例,扁桃体切除术后出现症状13例.检查:78例中,69例在有症状侧扁桃体窝偏后方的中下部可触及坚硬条索状物或茎突的尖锐末端.茎突X线摄片示长度3.5~7.1 cm,平均4.4 cm.
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弓形虫致密颗粒蛋白GRA8的原核表达分析
构建弓形虫GRA8的原核重组表达质粒,分析其表达状况.采用PCR技术扩增GRA8及其截短型片段的基因序列,经克隆后,亚克隆至原核表达载体中,构建GRA8及其截短型片段的重组表达质粒,分析GRA8的表达;将各重组菌进行诱导,从其裂解上清中纯化目的蛋白.GRA8基因被正确插入原核表达质粒中;原核重组表达质粒在大肠杆菌中表达GRA8的水平低,几乎无完整GRA8的表达;纯化的截短型GRA8能被弓形虫感染兔血清识别.GRA8的原核重组表达质粒表达GRA8的水平低,纯化的截短型GRA8具有良好的免疫活性.