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p63基因研究进展
p63是近年发现的p53家族成员之一,由于启动子的不同和3'端剪切方式的不同,p63基因可编码多种具有不同活性的异构体,可分成两大类:具有反式激活区的TA异构体和N末端截短的△N异构体.TA异构体具有p53样活性诱导细胞周期停滞和凋亡,△N异构体则抑制p53的功能促进转化细胞的生长.p63主要在各种上皮组织的发育、分化和形态发生上起重要作用,对于胚胎形成过程中外胚层的发育具有重要的意义,在肿瘤发生中更多的是致癌作用而不是抑癌作用.
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过氧化物酶增殖物活化受体γ活化在诱导胰腺癌细胞凋亡和细胞周期停滞中的可能作用
目的探讨过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPARγ)在诱导胰腺癌细胞凋亡及细胞周期停滞中的调节作用.
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长期使用LVAD诱导成人心肌细胞增殖
心力衰竭（心衰）患者延长左室辅助装置（LVAD）使用，可能有助于成人心肌再生。德克萨斯大学西南医学中心Hesham A. Sadek博士，“新数据表明，去负荷后的逆重构可能代表了心肌从肥厚到增生的转换”。该结果发表在2015年的JACC杂志上。
成人心肌细胞不能分裂，因此成人心脏在大量心肌细胞损失后不能再生。既往研究证实，线粒体介导的氧化DNA损伤在出生后心肌细胞周期停滞中发挥重要作用。Sadek和同事开展的这项研究旨在观察机械负荷是否在其中也起作用，并假设机械负荷的生理性增加导致了线粒体含量增多，使DNA损伤应答激活，带来永久性心肌细胞周期停滞。 -
组蛋白去乙酰化酶抑制剂抗炎机制的研究进展
组蛋白乙酰转移酶(HATs )和组蛋白去乙酰化酶(HDACs)通过对组蛋白氮端氨基酸残基进行乙酰化或去乙酰化，调节组蛋白的乙酰化水平，进而调控基因表达，对维持细胞正常功能有重要作用。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)是一类在转录水平调控基因表达的化合物，通过诱导组蛋白过乙酰化，引起染色体重建、细胞周期停滞、诱导细胞分化和凋亡以及调节转录因子活化和抑制等一系列生物学效应，具有神经保护、抗氧化、脏器保护、抗炎等作用[1-2]。炎症是具有血管系统的活体组织对损伤因子所发生的防御反应，炎症因子能引起白细胞和血小板聚集致感染部位，造成内皮细胞损伤，血管通透性增加，炎症反应失控可引起组织损伤、多器官功能损害，甚至发展到多器官功能衰竭[3]。现就 HDACIs在炎症发生发展过程中的几条主要信号通路的调控机制作一综述。
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过氧化物酶增殖物活化受体γ活化对胰腺癌细胞周期停滞的诱导作用
目的探讨过氧化酶增殖物活化受体γ(PPARγ)在诱导胰腺癌细胞周期停滞中的调节作用.方法胰腺癌细胞系SW1990经10 μmol/L PPARγ配体15-脱氧-前列腺素J2(15 d-PGJ2)、20 μmol/L维甲酸受体α(RXRα)配体9-顺式-维甲酸(9-cis-RA)及其联合培养48 h后,应用流式细胞仪研究细胞周期的改变;通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞周期G1期调节因子p27Kip1、p21Waf1的表达.30只雌性裸鼠皮下接种1×107 SW1990细胞.2周后待肿瘤可触及时,将其随机分为对照组和干预组,后者予以PPARγ激动剂罗格列酮处理.11周后处死裸鼠并取下移植瘤,应用RT-PCR检测罗格列酮对p27Kip1、p21Waf1 mRNA表达的影响.应用免疫组化观察移植瘤组织中p27Kip1、p21Waf1及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果流式细胞术检测提示15d-PGJ2、9-cis-RA及其联合应用可引起细胞周期G1期停滞,S期比例下降.RT-PCR结果显示,同对照组相比,15d-PGJ2组、9-cis-RA组、联合应用组中p27Kip1表达明显增强,p21Waf1表达无明显改变.体内实验也证实罗格列酮仅上调移植瘤组织中p27Kip1 mRNA的表达,而对p21Waf1mRNA表达水平无影响.免疫组化显示p27Kip1、p21Waf1蛋白仅表达于治疗组裸鼠移植瘤组织中,在对照组无表达.治疗组和对照组移植瘤组织中均表达PCNA,但治疗组的阳性表达强度和表达区域均呈下降趋势.结论 PPARγ的活化可诱导胰腺癌细胞周期G1期停滞及抑制S期发展,其机制可能是通过上调p27Kip1和p21Waf1表达、下调PCNA表达而实现的.提示PPARγ可能是胰腺癌治疗的一个新分子靶点.
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电离辐射对细胞端粒酶活性影响的研究进展与展望
染色体是细胞遗传信息的中心，也是放射损伤的主要靶点。端粒是染色体的重要结构，端粒酶是合成端粒所必需的酶，鉴于端粒酶对射线的敏感性成为目前放射损伤研究领域中一个新的研究热点，相关的文献报道已达数百篇，笔者就近年来国内外有关实验研究的进展综述如下。 一、端粒及端粒酶 端粒是位于染色体末端的一小段富含G的(AATGGG)n重复序列，还有多种端粒结合蛋白与其相结合。端粒的基本功能是维持染色体的稳定性和完整性。端粒的功能依赖于其适当的长度和正常的结构。当去掉染色体端粒的一条单链序列，RAD9被激活，介导细胞周期停滞于G1期；当从细胞周期停滞中恢复后，染色体DNA序列的丢失量显著增加［1］。端粒缩短或结构异常会导致染色体异常交联［2］。
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CKD4/6抑制剂临床研究进展
2015年2月 Palbociclib 在美国由FDA批准成功上市，其联合来曲唑被批准用于HER2阴性、ER阳性的绝经后晚期乳腺癌的治疗，由此重新掀起了一波对CKD4/6抑制剂的关注和研发热潮。在Ⅱ期临床研究中，其联用方案较标准疗法来曲唑单用，可显著延长患者无进展生存期（PFS）10个月，疾病进展风险降低51%，且有80%患者从中获益。Palbociclib上市仅一年销售额就超过7亿美元，被评为2015年有影响力的药物之一。研究证实 CDK4/6是理想的抗癌靶标。CDK4/6可与细胞周期蛋白D结合，调节细胞周期的时相转变。抑制CDK4/6能通过CDK4/6-抑癌基因蛋白 Rb（retinoblastoma）通路诱导细胞周期停滞于G1/S期，抑制细胞增殖。CDK4/6在肿瘤细胞中过表达，ER是反映CDK4/6抑制剂应答较好的生物标记物。
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DNA损伤后细胞凋亡与周期停滞中△40P53的作用
目的 探讨HCT116 p53-/-细胞△40P53在脱氧核糖核酸(DNA)损伤时细胞凋亡和细胞周期停滞中的作用,明确△40P53与野生型P53的不同作用.方法 荧光素酶报告基因和免疫印迹法检测△40P53在DNA损伤后转录活性和表达情况,流式细胞技术检测DNA损伤后细胞周期停滞情况,乳酸脱氢酶(LDH)检测分析DNA损伤后细胞凋亡情况,分析△40P53的生物学功能.结果HCT116 p53+/+细胞中bax和p21基因的启动子活性在甲烷磺酸甲酯(MMS)刺激时比无MMS刺激时高3～5倍,HCT116 p53-/-细胞中bax和p21基因的启动子活性在有无MMS刺激时无显著不同；免疫印迹表明有和无MMS刺激的细胞△40P53保持在较高水平,野生型P53经MMS刺激过度表达；LDH法检测50 μg/ml的MMS刺激后52.2％的HCT116 p53+/+细胞凋亡,而只有32.5％的HCT116 p53-/-细胞凋亡,差异有统计学意义(t=84.2,P＜0.05)；流式细胞仪检测MMS处理后88％的HCT116 p53-/-细胞进入G2/S期细胞,66％的HCT116 p53+/+细胞进入G2/S期细胞.结论 经MMS刺激的HCT116 p53-/-细胞的△40P53不能诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞.
关键词： P53蛋白异构体(△40P53) DNA损伤 细胞凋亡 细胞周期停滞 -
小剂量电离辐射与生殖损伤
能够直接引起介质电离或通过次级过程引起电离的辐射统称为电离辐射,电离辐射主要包括天然电离辐射和人工电离辐射.随着现代医学的发展,电离辐射已广泛应用于医疗行业.电离辐射可引起放射病,它是机体的伞身性反应,几乎所有器官、系统均发生病理改变,但人体中的眼晶体、性腺、乳腺和甲状腺对射线尤其敏感.电离辐射诱导生殖细胞凋亡、细胞周期停滞和DNA破坏,并产生三种自由基导致衰老的发生[1].现实生活中,人们受到大剂量辐射损伤的几率很小,而随着环境中产生低剂量的电离辐射源越来越多,其对人类健康,尤其是对生殖系统的影响不容忽视.
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重组腺病毒突变型人低氧诱导因子1α调节细胞周期的分子机制
背景:目前研究显示低氧诱导因子1α可诱导细胞周期停滞,但其机制尚不清楚.目的:研究重组腺病毒突变型人低氧诱导因子1α (Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803)调节细胞周期的分子机制.设计、时间及地点:对照实验,于2007-03/12在南方医科大学中医实验中心完成.材料:人结肠腺癌细胞株LoVo细胞由南方医院消化内科实验室提供;重组腺病毒Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803和对照病毒Ad-lacZ载体为自行构建.方法:将重组腺病毒Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803和对照病毒Ad-lacZ在HEK293A细胞中扩增,测定病毒滴度,然后在常氧下以感染复数10,20,30,40,50,60,70,80,90,100感染LoVo细胞.主要观察指标:X-gal染色检测重组腺病毒对LoVo细胞的感染效率;荧光定量PCR检测不同时间点低氧诱导因子1α与p21WAF1/CIP1的mRNA表达水平;MTT检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果:①重组腺病毒扩增后能获得较高的滴度,在LoVo细胞中具有很高的感染效率,感染效率与感染复数成量效关系,当感染复数为60时,感染效率为90%以上.②随低氧诱导因子1α表达的增高,p21WAF1/CIP1的表达也相应增高,两者存在正相关(r=0.945, P＜0.05).③与对照病毒相比,重组腺病毒感染后LoVo细胞增殖轻度受抑;细胞周期示G1期细胞明显增加,S期的细胞显著减少(P＜0.05).结论:①重组腺病毒载体介导的人HIF-1α-Ala564-Ala803基因可有效地转染LoVo细胞并成一定的量效关系.②低氧诱导因子1α在细胞周期的调节中发挥重要的作用,可能通过上调p21WAF1/CIP1的表达,诱导细胞周期停滞于G1期.
关键词： 腺病毒 HIF-1α p21WAF1/CIP1 细胞周期停滞 -
鸦胆子苦醇阻滞小鼠早期胚胎发育的作用机制
目的 截止目前,鸦胆子苦醇在小鼠早期胚胎发育中的作用及其作用机制仍不清楚.文中旨在探究鸦胆子苦醇对小鼠早期胚胎发育的影响及其可能的作用通路. 方法 取100只健康清洁级昆明小鼠(雌鼠80只,雄鼠20只)分为6组:阴性对照组(不添加DMSO)、空白对照组(新鲜CM中培养添加等量DMSO)以及20nmol/L鸦胆子苦醇组、50nmol/L鸦胆子苦醇组、100nmol/L鸦胆子苦醇组、200nmol/L鸦胆子苦醇组(用CM分别稀释鸦胆子苦醇浓度为20、50、100、200nmol/L).每组每次平均使用20枚胚胎,重复4次.受精卵培养24、48、72、96h分别为2-细胞期、4-细胞期、桑葚胚期和囊胚期.观察各组各期发育率并筛选出适浓度,并通过免疫荧光染色检测核因子E2相关因子2 (Nrf2)的定位,实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹分别比较G2/M期Cyclin B,CDK1 mRNA水平以及Nrf2蛋白表达的变化. 结果 在4-细胞期,20、50、100nmol/L鸦胆子苦醇组胚胎发育率[(75.0±2.8)%、(30.4±7.5)%、(4.2±5.9)%]较阴性对照组[(93.0±2.8)%]、空白对照组[(90.9±1.2)%]显著降低(P<0.05).在桑葚胚期,与阴性对照组、空白对照组桑葚胚形成率[(83.5±2.1)%、(84.2±1.2)%]比较,50nmol/L鸦胆子苦醇组[(19.3±13.1)%]显著降低[(79.00±0.06)% vs 100%,P<0.05].50nmol/L鸦胆子苦醇组Nrf2蛋白的表达较空白对照组显著降低(P<0.05).50nmol/L鸦胆子苦醇组G2/M期Cyclin B[(59.5±9.2)%]、CDK1 mRNA[(56.0±1.4)%]的表达较空白对照组(100%)显著降低(P<0.05). 结论 鸦胆子苦醇可能通过下调Nrf2,调节Cyclin B-CDK1复合物的表达影响细胞周期由G2向M期转变,进而抑制胚胎发育.
关键词： 鸦胆子苦醇 核因子E2相关因子2 早期胚胎 细胞周期停滞 -
黄芪抑制血管平滑肌细胞增殖及其作用机制
目的观察黄芪(AS)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用,了解黄芪是否通过刺激VSMC产生一氧化氮(nitric oxide,NO),使细胞周期停滞于G0/G1期,从而抑制平滑肌细胞增殖.方法 [3H]-胸腺嘧啶核苷酸([3H]-TdR)掺入测定VSMC DNA合成,流式细胞仪检测细胞周期情况,硝酸还原酶法测定细胞培养上清中NO水平.结果黄芪以剂量依赖关系抑制血清诱导的VSMC[3H]-胸腺嘧啶核苷酸掺入,使G0/G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例显著减少,黄芪刺激VSMC后,细胞培养上清中NO水平呈剂量依赖上升.结论黄芪能抑制VSMC增殖,使细胞周期停滞于G0/G1期,这一过程可能与黄芪刺激VSMC产生NO有关.
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肺癌侵袭与转移相关信号传导通路的研究进展
细胞外各种刺激通过生长因子、细胞因子等介质与相应受体结合后诱发细胞内一系列级联反应,包括受体活化、蛋白激酶和磷酸酶活化、蛋白分子间特异性结合及转录因子活化等, 使细胞发生凋亡、分裂或细胞周期停滞等反应,由此构成细胞信号传导系统.肿瘤细胞的恶性转化、增殖与凋亡调控失衡、细胞基质及黏附分子结构表达异常、血管及淋巴管转移等均涉及多条细胞信号传导通路的异常.
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P21WAF1/CIP1和PCNA在合并血吸虫病大肠癌中的表达及其意义
P21WAF1/CIP1是p53基因蛋白的下游调控因子,其表达有p53依赖性和p53非依赖性两种途径.P21WAF1/CIP1是通过抑制细胞周期的G1→S期转换过程中所需的周期素依赖性激酶(cdks)而使细胞周期停滞在G1期.研究表明,P21WAF1/CIP1表达与细胞增殖和分化有关[1].本文应用免疫组织化学方法对合并血吸虫病大肠癌(CCS组)和不合并血吸虫病大肠癌(CC组)中P21WAF1/CIP1和PCNA表达情况进行研究,探讨肠血吸虫病与大肠癌发生之间的关系.
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ABC转运蛋白超家族与肺癌多药耐药
肺癌是常见的恶性肿瘤之一,75%的患者就诊时已是晚期,失去了手术机会,因此化疗成为肺癌重要的治疗手段,它能明显延长肺癌患者总的生存率,减轻症状,提高生活质量.然而肿瘤细胞对药物的耐受性却导致了肺癌化疗的失败.多药耐药(multidrug resistance,MDR)是指由一种药物诱发,同时对其他多种结构和作用机制完全不同的抗癌药物产生交叉耐药的一种现象.药物耐受性作为一种临床表现,其机制在体外模型中已经得到了广泛研究.可能的机制包括:①药物转运蛋白的活化,将细胞内药物排出胞外;②降低药物活化或是增强细胞内药物解毒作用;③药物靶点的改变和损伤靶点的修复增强;④细胞凋亡抑制和细胞周期停滞[1].其中ABC转运蛋白超家族(ATP-binding cassette transporter superfamily)成员介导的药物外排在MDR中起了重要作用,也是目前国内外研究的热点之一.
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干扰素-α增强足叶乙甙介导的凋亡和细胞周期停滞
目的 探讨干扰素(IFN)-α对足叶乙甙介导骨肉瘤细胞周期停滞和凋亡的影响及其分子机制.方法 采用IFN-α和足叶乙甙单独或联合处理骨肉瘤U2OS细胞72 h,通过锥虫蓝法测定细胞生长抑制率,应用流式细胞术检测细胞周期停滞,通过Hochest 33258荧光染色检测凋亡,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测p53在mRNA水平的表达,通过小干扰RNA(siRNA)干扰沉默p53的表达,采用Western blot法检测p53和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的表达.结果 药物处理72 h,IFN-α、足叶乙甙和联合用药组细胞生长抑制率为:(2.29±1.03)％、(23.85±3.09)％和(50.51±3.77)％,IFN-α增强足叶乙甙的生长抑制,差异有统计学意义(P=0.008).在足叶乙甙和联合用药组均出现凋亡形态学改变.足叶乙甙组和联合用药组S期细胞为(19.68±3.62)％和(11.33±2.94)％,G2/M期细胞为(65.02±2.55)％和(76.09±2.87)％,两者组间差异有统计学意义(P=0.037).IFN-α没有增加足叶乙甙引起的p53在mRNA水平的表达,但沉默p53表达后空白组、对照siRNA组、p53-siRNA组的生长抑制率分别为:(55.72±3.88)％、(51.63±4.36)％和(36.40±3.95)％,p53沉默减弱了联合用药引起的生长抑制,差异有统计学意义(P=0.023),同时联合用药组的PARP裂解明显减弱.泛半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)抑制剂Z-VAD-FMK预处理后Z-VAD-FMK、足叶乙甙组、IFN-α+足叶乙甙组、足叶乙甙+Z-VAD-FMK组和IFN-α+足叶乙甙+ Z-VAD-FMK组的生长抑制率为(3.52±1.98)％、(27.11±4.06)％、(56.44±4.78)％、(21.37±3.55)％、(23.81±4.22)％.Z-VAD-FMK减弱联合用药引起的生长抑制,差异有统计学意义(P =0.015),并且联合用药引起的PARP裂解也被减弱.结论 IFN-α在人骨肉瘤U20S细胞中增强足叶乙甙介导的生长抑制、细胞周期停滞和凋亡,该作用依赖p53和Caspase.
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三氧化二砷抑制cdc2基因表达诱导K562白血病细胞G2/M周期停滞
目的 检测三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导慢性髓系白血病急变细胞K562周期停滞中细胞周期相关调节基因的转录、蛋白表达及其磷酸化改变,以期阐明As2O3诱导其周期停滞的分子生物学机制,为克服K562细胞的As2O3抵抗性提供实验基础.方法 体外培养K562细胞,采用PI染色、流式细胞仪检测As2O3作用后细胞周期分布的改变;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞周期相关调节基因mRNA表达变化;Western blot检测相关蛋白及磷酸化改变.结果 As2O3作用K562细胞24 h后,G2/M期细胞比例明显增加,浓度为0、2、5、10 μmol/L时G2/M期细胞比例分别为(22.6±3.4)%、(27.2±2.3)%、(43.8±4.5)%、(36.7±4.1)%;K562细胞在As2O3处理前有Survivin、cdc2、chkl基因表达,As2O3处理后Survivin、chkl的表达无明显变化,但cdc2表达呈浓度依赖性下调;As2O3作用前可见Survivin、cdc2、cdc2-P、chkl等4种蛋白的表达,作用24 h后,Survivin的表达条带增强,cdc2蛋白表达水平呈浓度依赖性下调,cdc2-p水平在2～5μmol/L时无明显变化,在10 μmol/L时受抑明显,chkl蛋白表达水平在As2O3作用前后无明显改变.结论 As2O3显著诱导K562白血病细胞G2/M周期停滞,其机制与抑制cdc2转录水平,下调活性化cdc2蛋白表达有关.不能有效抑制抗凋亡蛋白Survivin的表达可能是K562白血病细胞对As2O3诱导凋亡抵抗的一个重要机制.
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PTEN核转位的研究进展
PTEN是1997年发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,其缺失、突变和表达减少广泛存在于多种进展期肿瘤中,核内外的PTEN通过细胞凋亡和诱导细胞周期停滞抑制肿瘤的发生发展.近研究发现,PTEN可以通过泛素化进入细胞核内,并通过诱导细胞周期停滞和维持染色体完整性在核内起到肿瘤抑制作用.本文就PTEN的核转位及其在核内的多种功能作一综述.
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普罗布考对结缔组织生长因子在系膜细胞中表达的调节
结缔组织生长因子(CTGF)是一种相对分子质量为36 000～38 000的分泌多肽,在包括肾脏在内的多种不同器官中可致纤维化病变[1].CTGF可诱导人肾小球系膜细胞产生与糖尿病.肾病相关的病理变化,如增加细胞外基质积聚及诱导细胞周期停滞在G1晚期[1].CTGF在糖尿病肾病中的作用及如何调控CTGF表达为当前研究热点.普罗布考是一种降脂药物,并具有抗增殖活性,已初步应用于糖尿病的治疗[2].本研究旨在明确CTGF在高糖状态下系膜细胞中的表达变化以及普罗布考对CTGF表达的调控,并进一步探讨其分子机制.
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转录因子FoxO1在神经元凋亡中的作用
Firkhead转录因子(Fox蛋自家族)是2000年才正式统一命名的一个新的转录因子家族,自20世纪90年代首次在果蝇中发现该基因以来,其家族已先后发现100多个Fox基因,该家族的共同特征是具有一个长110个氨基酸的保守的DNA结合结构域,称为Fox(Forkhead box)结构域,含有一个螺旋-转角-螺旋基序,有3个α螺旋和2个大环形成的翼状(winged)结构[1].Fox家族又分为17个亚家族,即FoxA～Q,其中FoxO亚家族主要通过调控转录和信号转导途径在动物细胞凋亡、细胞周期停滞、DNA损伤修复及糖代谢等方面发挥重要作用[2].
