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添加剂对喷雾干燥干扰素α-2b稳定机制的研究
目的 研究添加荆对蛋白质在喷雾干燥过程中的稳定机制.方法 以乳糖或甘露醇作为赋形剂,并以聚山梨酯20、十二烷基硫酸钠、L-赖氨酸、羟丙基甲基纤维素或羟丙基-β-环糊精为添加剂将干扰素α-2b制成喷雾干燥粉末.用X光电子能谱分析研究干扰素α-2b的表面吸附现象,用圆二色谱测定该蛋白的二级结构结果上述几种添加剂均能降低干扰素的表面吸附量;当以乳糖(而非甘露醇)为赋形剂时,添加剂的加入提高了该蛋白α螺旋结构的含量. 结论蛋白质在喷雾干燥过程中的稳定性受载体结晶、表面富集和构象变化等多种机制影响.
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硫氧还蛋白及其L79Y变体酶切后片段自身重新结合为同源二聚体的稳定性和动力学研究
目的:进一步研究蛋白质酶切后重新结合成同源二聚体时功能区域中残基的影响.方法:在研究了野生硫氧还蛋白、硫氧还蛋白L79F变体、硫氧还蛋白L79K变体的基础上,本文选用野生硫氧还蛋白(TRX)和硫氧还蛋白L79Y变体分别做为研究对象,使硫氧还蛋白和硫氧还蛋白L79Y变体分别进行酶切.结果:酶切后得到的两组片段.以N片段(1-73)和C片段(74-108)再重新进行结合形成同源二聚体.比较排79位的残基的改变对N片段(1-73)和C片段(74-108)重新结合成同源二聚体的影响.结论:1.TRX中处于β折叠状态的β4区域(P76,T77,L78,L79,L80,F81和K82)中79位的残基由非极性改变为带有羟基的极性残基使N片段和C片段重新聚合成非共价同源二聚体的速率常数有所增大,说明聚合较易进行.2.这一变化使酶切后的N片段和C片段重新形成的同源二聚体的稳定性大大降低.
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IL-2受体信号转导及其功能研究进展
IL-2是早发现的细胞因子之一,又称T细胞生长因子(T cell growth factor,TCGF),对T细胞的增殖、发育和分化具有重要作用.有研究报道IL-2不仅可以促进T细胞的生长发育,还可促进其凋亡[1,2].IL-2还是细胞毒性T淋巴细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞(NK)和B淋巴细胞重要的生长和激活因子.对于该分子的研究可以追溯到1976年,当时人们发现淋巴细胞培养上清中有一种可以支持T淋巴细胞长期生长的物质,直到1981年才证明这是一个糖基化的大小为15.5 kD的蛋白质,并于1981年成功克隆其cDNA,即IL-2[3].目前发现IL-2的空间结构由4个反向平行的α螺旋核心和小β片段组成,其与细胞膜上的IL-2R特异性结合后发挥多种生物学功能[4].
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经内镜逆行胰胆管造影术中导丝在主胰管断裂一例
患者女,53岁.以间断上腹疼痛半年门诊入院.腹部超声提示:胆囊切除术后;胆总管结石并增宽.MRCP提示:胆总管下端结石,1.0 cm×0.9 cm.入院后行ERCP及EST,使用Olympus TJF-260V十二指肠镜,进入十二指肠降段后,应用导丝引导法插管,所用导丝为Boston的一次性封塑绝缘导丝、导丝长度为450 cm,直径为0.91 mm,此时透视下见导丝进入主胰管,并且前端形成小的α螺旋.
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BRD-7基因溴区结构域的真核表达及其特征研究
背景与目的:BRD-7基因是我室自己克隆的一个新基因,它包含一个溴区结构域.研究表明BRD-7基因能明显抑制鼻咽癌细胞的生长,是一个良好的鼻咽癌候选抑瘤基因.为了阐明BRD-7基因的作用机制,我们首先对其溴区结构域进行了初步的研究.方法:通过定向克隆,我们构建了BRD-7基因溴区结构域的真核表达载体,并进行了诱导表达,Western-EP迹检验结果的真实性.另外,我们运用生物信息学对BRD-7溴区结构域进行了分析.结果:我们构建重组表达质粒PGEX-4T-2/bromodomain,经酶切鉴定和测序验证表达载体构建正确.经IPTG诱导,SDS-PAGE分析在大肠杆菌中成功诱导表达了分子量为38.8KD的融合蛋白,用Western-EP迹证实了融合蛋白的表达.通过氨基酸序列的一级结构,二级结构的分析及其同源匹配,我们发现BRD-7溴区蛋白与三个结构已知的溴区蛋白具有高度相似性:可能含有四个α螺旋(Z,A,B,C),螺旋与螺旋之间通过环伴连接(ZAloop,BCloop),并且含有一个由疏水氨基酸形成的"口袋",通过这个结构,能特异性识别乙酰化的组蛋白.结论:通过同源比较,BRD-7溴区蛋白应属与溴区蛋白家族联合作用因子亚群,并且可能具有特异性识别乙酰化组蛋白的功能.
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转录因子FoxO1在神经元凋亡中的作用
Firkhead转录因子(Fox蛋自家族)是2000年才正式统一命名的一个新的转录因子家族,自20世纪90年代首次在果蝇中发现该基因以来,其家族已先后发现100多个Fox基因,该家族的共同特征是具有一个长110个氨基酸的保守的DNA结合结构域,称为Fox(Forkhead box)结构域,含有一个螺旋-转角-螺旋基序,有3个α螺旋和2个大环形成的翼状(winged)结构[1].Fox家族又分为17个亚家族,即FoxA～Q,其中FoxO亚家族主要通过调控转录和信号转导途径在动物细胞凋亡、细胞周期停滞、DNA损伤修复及糖代谢等方面发挥重要作用[2].
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蛋白质α螺旋检测的四元数方法
本文提出一种基于四元数表示的蛋白质α螺旋检测方法.本方法将蛋白质Cα坐标系螺旋轴映射到单位球面上,在此基础上定义了四元数螺旋轴球面距离(Quaternion Helix Axis Spherical Distance,QHASD)并用该指标对二级结构中的α螺旋进行检测.基于PDBselect数据库应用本文方法进行验证,对α螺旋检测精度达到91.7％.本文方法具有检测精度高、计算复杂度低和几何意义明确的显著优点.
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疏水性肺表面活性蛋白SP-B结构类似物的研究进展
肺表面活性蛋白B(SP-B)类似物α作为肺表面活性物质治疗剂,基于天然SP-B蛋白N-端、C-端、连接区域序列为模板的类似物在体外、体内试验中都表现出了良好的活性,其中类似物SP-B1-25与KL4表现为突出,KL4已成功上市.同时基于SP-B蛋白N-端与C-端连结序列的Mini-B结构和根据其特殊的α螺旋结构设计的合成肽也显示出了很好的生物活性,显示出了成为SP-B替代物的巨大潜力.这些研究成果为人工合成表面活性物质替代天然表面活性物质治疗剂的应用作出了重要贡献.文中综述了SP-B结构类似物的研究进展.
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含有P spA家族1和2的双价结合疫苗具抗广谱肺炎链球菌菌株和伤寒沙门菌的潜力
先前作者发现,无需添加佐剂,肺炎球菌表面蛋白A( PspA)与伤寒沙门菌Vi荚膜多糖结合可增强抗P spA的免疫应答。目前研究由P spA家族1或2的α螺旋区结合到Vi多糖组成结合物用于免疫小鼠,以检测它抗静脉注射的能致死的肺炎链球菌各种菌株的能力。包含P spA家族1成分的结合疫苗对P spA 家族1菌株的攻击提供了良好的保护作用,但对P spA 家族2菌株的攻击没有保护作用。同样,PspA家族2结合物对PspA家族2菌株的攻击有良好的保护作用,对P spA家族1菌株的攻击几乎没有保护作用。这个结果得到在包被有异源PspA的ELISA 板上观察到的PspA 抗体交叉反应水平低的现象的支持。细胞因子模式显示了对Vi和Vi-P spA结合物的混合性Th1/Th2免疫应答。结果表明,PspA α螺旋区与Vi多糖的结合物增强了其诱导保护性免疫应答的能力,并且基于P spAα螺旋区的疫苗应同时含有P spA家族1和2以实现广泛的交叉保护。
