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复方苦参注射液(岩舒注射液)对大肠癌细胞凋亡的实验研究
"岩舒"复方苦参注射液是纯中药抗肿瘤制剂.该药由苦参、白茯苓等中药精制而成.该药在用于临床治疗癌症的过程中被发现具有良好的抑制肿瘤的作用,可有效地缩小或稳定瘤体,并改善疼痛、发热、出血、乏力等临床不适.本研究主要观察该药在体外对大肠癌LoVo细胞生长的影响.
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调强适形放射联合得力生注射液对鼻咽未分化癌细胞凋亡及细胞周期的影响
调强适形放射(intensity modulated radiation,IMRT)在治疗肿瘤方面发展很快.2003年1月-2005年5月,我们观察了IMRT联合得力生注射液治疗鼻咽未分化癌患者50例,并观察其对患者细胞凋亡及细胞周期的影响,现将结果报告如下.
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中药诱导卵巢癌细胞凋亡机制及研究进展
卵巢癌是女性生殖器官常见的肿瘤之一,发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌而列居第三位.但卵巢癌病死率却占各类妇科肿瘤的首位,严重威胁着女性的健康和生命安全.研究表明,卵巢癌的发生与细胞凋亡障碍有关,诱导卵巢癌细胞凋亡可能成为肿瘤治疗中有前景的手段之一[1].大量实验研究发现,大多数中药抗肿瘤药物均可诱导敏感的卵巢癌细胞发生凋亡,从而发挥其抗肿瘤作用.为此本文简要综述中药诱导卵巢癌细胞凋亡机制及研究进展.
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中华眼镜蛇毒诱导人类小涎腺腺样囊性癌细胞凋亡报告
我们尝试应用近年发展起来的对恶性实体肿瘤有较高可评估率的新方法三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法(ATP-TCA法),测定眼镜蛇毒对人类小涎腺腺样囊性癌(NACC)细胞株的抑制作用,测定眼镜蛇毒与癌细胞存活的量效和时效关系,应用HE染色观察眼镜蛇毒作用NACC细胞后其细胞形态学的改变,以及流式细胞术检测眼镜蛇毒作用后的NACC细胞凋亡等方面的实验,为眼镜蛇毒的抗肿瘤临床应用提供实验依据.
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葡萄糖6磷酸脱氢酶表达下调对皮肤鳞癌细胞系A431细胞凋亡和侵袭能力的影响
皮肤鳞癌是世界范围内第二大常见的皮肤癌[1]。具有侵袭表型的皮肤鳞癌能增加转移的风险,导致患者的存活率显著下降,具有淋巴结转移的皮肤鳞癌患者的5年生存率仅为26%~34%[2]。因此寻找新的分子靶点治疗皮肤鳞癌显得极为重要。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶( G6PD)是磷酸戊糖途径的第一个和关键的限速酶,定位于人染色体Xq28,由13个外显子和12个内含子组成,编码515个氨基酸。研究表明,G6PD在调节细胞的生长、存活、转化、衰老及凋亡中发挥重要的作用。目前,研究表明,许多肿瘤中均发现G6 PD的高表达,包括宫颈癌、胃癌、白血病等。重要的是,G6PD可能成为肿瘤潜在的分子治疗靶点。我们采用G6PD siRNA转染皮肤鳞癌A431细胞,研究G6PD表达下调对皮肤鳞癌细胞凋亡和细胞侵袭的影响,并初步探讨其可能的分子机制。该研究有望为以G6PD为靶点的皮肤鳞癌的分子靶向治疗提供理论依据。
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氧化砷诱导食管癌细胞凋亡细胞骨架的改变
我们过去用氧化砷(As2O3)诱导食管癌细胞凋亡[1],发现在凋亡早期,细胞核未见明显改变之前有线粒体增生反应,并首先描述了As2O3诱导食管癌细胞的线粒体的形态改变[2].细胞凋亡的形态有细胞变小,皱缩,细胞核变圆,染色质凝集、靠边.我们发现在羊膜上皮细胞自发凋亡过程中张力微丝的消失[3],因此使我们考虑到细胞凋亡时,细胞形态的改变与细胞骨架的改变的关系.我们以As2O3诱导食管癌细胞凋亡,观察细胞形态和细胞张力微丝,肌动蛋白F(F-actin)的变化,以阐明细胞骨架的改变在细胞凋亡形态改变的意义.
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几种抗癌药物诱导胰腺癌细胞凋亡能力的比较
目的:比较抗癌药物诱导胰腺癌细胞凋亡的能力,以期找到一种疗效较好的化疗药物.方法:根据临床常用的高及低剂量,分别将羟基喜树碱、三氧化二砷、紫杉醇、全反式维甲酸、奥曲肽及5-Fu与胰腺腺泡癌细胞SW1990系共同培养6、12、24h,利用光镜及电镜下的形态学方法及脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)确定细胞凋亡,并利用AO-EB双重荧光染色法及PI和Annexin-V FITC双重标记下的流式细胞术定量测定细胞凋亡率.结果:上述药物均可诱导SW1990细胞凋亡,凋亡诱导能力由强到弱依次为紫杉醇、5-氟尿嘧啶、羟基喜树碱、三氧化二砷、全反式维甲酸和奥曲肽.各药物的凋亡诱导能力呈剂量和时间的依赖性,其中紫杉醇的作用强且快.结论:紫杉醇可能是一种疗效较好的胰腺癌化疗药物.
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Survivin mRNA反义寡核苷酸诱导胰腺癌细胞凋亡
目的:用反义寡核苷酸(ASODN)封闭胰腺癌细胞中Survivin基因的表达,研究其诱导细胞凋亡的作用及其机制.方法:用脂质体介导SurvivinASODN转染人胰腺癌细胞株SW1990细胞,用Annexin V-FITC/PI复染、流式细胞术检测及电镜术观察凋亡,激酶活性检测法测定细胞内caspase-3活性变化,免疫沉淀法测定细胞内丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)活性的变化早期细胞变化情况.结果:脂质体介导SurvivinASODN转染胰腺癌细胞后细胞内p38MAPK及caspase-3活性较对照组明显升高(55.3% vs2.9%,3.2%,4.5%,4.8%respectively,P<0.05).细胞出现典型的凋亡形态学特征,细胞凋亡率较对照组明显增加(8.81±1.33vs47.87±2.91,and 14.73±1.36 vs 23.47±3.61,P<0.05).结论:脂质体介导转染Survivin ASODN可以诱导细胞激活,诱导活化进而诱导细胞发生凋亡.
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Fas死亡受体及FLIP对大肠癌细胞凋亡的影响
目的:比较不同大肠癌细胞Fas受体及其下游通路抑制因子FLIP的表达差异,探讨Fas、FLIP对大肠癌细胞凋亡的影响.方法:体外培养大肠癌细胞,应用直接免疫荧光流式细胞术检测细胞表面Fas表达率,半定量RT-PCR法测定FLIPmRNA的水平,并采用Annexin V法评价细胞对Fas介导的凋亡的敏感性.结果:大肠癌细胞表面Fas表达率不同,其中HT-29细胞的表达率为42.46±4.32%,明显高于其他3株细胞.SW620和HT-29细胞FLIP mRNA含量较高,Colo205居中,Lovo则呈阴性;且相对于任何一株FLIP表达阳性的细胞,FLIPL的表达水平均高于FLIPs.给予凋亡诱导型抗Fas抗体(CH-11)刺激后,4株大肠癌细胞凋亡敏感性均较低.结论:不同的大肠癌细胞株可能通过不同途径逃避Fas介导的凋亡,其中包括下调Fas的表达和上调FLIP的含量.
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细胞黏附对结肠癌细胞凋亡及化疗敏感性的影响
目的:研究结肠癌细胞株与基质黏附对肿瘤细胞凋亡及药物敏感性的影响.方法:应用MTT法研究细胞与基质成分纤维粘连蛋白(FN)结合对药物敏感性的影响;采用TUNEL法检测细胞凋亡,采用流式细胞术观察Bcl-2和Bax基因表达.结果:HT29细胞与FN结合后,其耐药性明显增加(抑制率为12.2%,对照组为53.0%,P<0.01),用抗β-1整合素抗体阻断其与FN结合,其对药物的敏感性又恢复至对照水平(抑制率为50.6%,与对照组比P<0.05);HT29细胞与FN结合后,Bcl-2基因蛋白表达上升(62.1%),Bax表达降低(12.86%),凋亡率(8.75±1.08%)显著降低,对照组为(19.46±1.08%);阻断其与FN结合,Bcl-2表达明显下降(22.68%),而Bax表达上升(73.8%),凋亡率也升至(18.9±1.4%)(与对照组比P<0.05).结论:肿瘤细胞与基质成分结合可上调Bax和下调Bcl-2基因表达,增强肿瘤细胞的抗凋亡能力,从而增加肿瘤耐药性.
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食管鳞癌FLIP表达与细胞凋亡相关
目的:探讨凋亡抑制蛋白FLIP在食管鳞癌组织中的表达及其与细胞凋亡的关系.方法:应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(S-P法),检测FLIP在10例正常食管组织及96例食管鳞癌组织中的表达,并应用TUNEL技术检测96例食管鳞癌的凋亡情况.结果:FLIP在96例食管鳞癌组织中有72例表达阳性,占75%.高分化组(Ⅰ-Ⅱ级)及临床早期(Ⅰ-Ⅱ期)病例食管癌的FLIP表达阳性率为64%(32/50),低分化组(Ⅲ-Ⅳ级)及临床晚期(Ⅲ-Ⅳ期)病例食管癌的FLIP表达阳性率为82.6%(38/46),二者比较,差异有显著性(P<0.05);FLIP表达阳性率与食管鳞癌的病理分级和临床分期呈正相关.FLIP在食管鳞癌组织中的表达水平与癌细胞凋亡指数(AI)有明显相关性(P<0.05).结论:FLIP的异常表达在食管鳞癌的发生发展中起重要作用,其表达与食管鳞癌细胞凋亡密切相关.
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反义Survivin诱导食管鳞癌细胞凋亡
目的:研究Survivin ASODN联合三氧化二砷(As2O3)对食管鳞癌细胞系EC109凋亡的影响.方法:设计合成特异性Survivin反义寡核苷酸(ASODN).细胞分成6组:空白对照组、空脂质体转染对照组、正义链转染对照组、160、200、240 nmol/L反义链转染组.以阳离子脂质体为载体转染至EC109细胞内,用Western blot法检测各组细胞Survivin蛋白表达情况;TUNEL法检测细胞凋亡情况;MTT法检测As2O3和5-氟尿嘧啶(5-Fu)对转染前后细胞的生长抑制情况.结果:各浓度ASODN转染组癌细胞Survivin蛋白表达有不同程度减少,而各对照组细胞Survivin蛋白表达无明显变化.各ASODN转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组(5.48±1.56,6.04±1.95,11.92±1.76 vs 1.52±0.73,P<0.05),以240 nmol/L转染组明显高于160和200 nmol/L组(11.92±1.76%vs5.48±1.56%,6.04±1.95%,P<0.05).240 nmol/L转染组中As2O3对肿瘤细胞生长抑制率明显高于5-Fu组(56.40±1.27%vs 43.49±0.83%,P<0.05).结论:Survivin ASODN转染食管鳞癌细胞能下调Survivin蛋白的表达,诱导食管鳞癌细胞凋亡,抑制细胞增值,增加食管鳞癌细胞对化疗药物As2O3的敏感性.
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BAK基因过表达对胃癌细胞的诱导凋亡作用及其分子机制
目的:探讨转染外源性BAK基因及其过表达对胃癌细胞的诱导凋亡作用和分子机制.方法:构建携带有BAK基因的真核表达载体并转染胃癌MKN-45细胞1-5d后,RT-PCR和Western Blotting法检测BAK基因表达;细胞计数、MTT比色法检测癌细胞生长活性,流式细胞仪分析细胞周期时相改变,透射电镜、末端TdT酶标记技术检测癌细胞凋亡;比色法检测癌细胞内Caspase-3活性改变.结果:转染1-5 d后,癌细胞BAK mRNA和蛋白表达水平显著增强(P<0.01),癌细胞体外生长抑制11.6-35.3%(P<0.01),增生活性抑制10.2-32.4%(P<0.01),细胞周期出现G0/G1期阻滞,部分癌细胞出现胞体缩小、核固缩等凋亡形态学改变,凋亡率为21.4%(P<0.01);癌细胞Caspase-3活性增强4.45倍(P<0.01).结论:转染外源性BAK基因使其过表达能激活Caspase-3,显著诱导胃癌MKN-45细胞凋亡,有望成为胃癌治疗的新途径.
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三氧化二砷诱导人类大肠癌细胞凋亡的分子机制
目的:明确三氧化二砷(As2O3)注射液对人类大肠癌细胞株的诱导凋亡作用,并探讨其分子机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、AO/EB荧光染色法、透射电镜观察、DNA电泳、流式细胞术法及免疫组化等方法,系统地观察了As2O3注射液对体外培养的人类大肠癌细胞株LoVo和CoLo-320的生长活力、细胞凋亡、细胞周期及其相关基因表达的影响.结果:用不同浓度(0.5,1.0,2.0,4.0 mg/L)As2O3作用LoVo和CoLo-320细胞不同时间(24,48,72 h),均能显著抑制其生长(P<0.05),用药后诱导其出现了典型的细胞凋亡的形态学和生化学改变,癌细胞Bcl-2基因表达明显下降,Bax和Fas基因表达显著增强(P<0.01).结论:As2O3注射液对人类大肠癌细胞具有显著的诱导凋亡作用,这一作用受到多种基因的调控,即Bcl-2基因表达下调,Bax和Fas基因表达上调.
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重组腺病毒介导的野生型PUMA基因对胰腺癌细胞的放射增敏作用
文献报道[1,2],PUMA基因转染可促进体外肺癌和食管癌细胞凋亡,并能增强它们对放化疗的敏感性.我们曾将野生型PUMA转染胰腺癌Aspc-1细胞,发现Aspc-1细胞的生长明显被抑制[3].本实验旨在研究转染野生型PUMA基因的胰腺癌Aspc-1细胞是否增强其对放疗的敏感性.
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过氧化物酶增殖物活化受体γ活化在诱导胰腺癌细胞凋亡和细胞周期停滞中的可能作用
目的探讨过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPARγ)在诱导胰腺癌细胞凋亡及细胞周期停滞中的调节作用.
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体的表达及TRAIL的抗癌作用
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)可特异性杀伤肿瘤细胞同时赦免正常细胞.近有报道,化疗可加强TRAIL诱导肺癌细胞凋亡 [1].本研究意在观察TRAIL受体(TRAILR)的表达及TRAIL与顺铂、紫杉醇联合作用的抑癌性.
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改良型TAT-VP3基因表达对人膀胱癌细胞凋亡的诱导作用
VP3来源于鸡贫血病毒(CAV),又被称为凋亡素[1].TAT能够跨膜导入细胞内部.我们利用分子克隆方法构建了重组质粒PcDNA3-TAT-VP3,观察改良型TAT-VP3基因在人膀胱癌BIU-87细胞中的表达及诱导凋亡的效应.
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γ-亚麻酸膀胱灌注治疗大鼠膀胱癌的实验研究
为了探讨γ-亚麻酸诱导大鼠膀胱癌细胞凋亡的机制,我们采用γ-亚麻酸对膀胱癌荷瘤大鼠行膀胱灌注,观察灌注前后肿瘤细胞中丙二醛(MDA)浓度的变化,增殖细胞核抗原(PCNA)以及Fas和FasL的表达情况,现报告如下.材料与方法 8~10周龄SPF级雌性SD大鼠60只,体质量250~300 g,由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供.应用N-甲基亚硝基脲(MNU,美国Sigma公司)膀胱灌注,9周后诱导出大鼠膀胱癌动物模型[1].1%戊巴比妥钠腹腔内注射麻醉,手术切取部分膀胱癌组织,缝合膀胱.术后1周,60只大鼠随机分为2组,每组30只.实验组:膀胱灌注浓度为2.5 mg/ml的γ-亚麻酸(美国Sigma公司),每只每次用量0.4 ml(1mg/次),保留2h.隔日1次,共3次.
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化疗后大肠癌细胞凋亡、增殖和Fas/FasL表达的改变
本研究从分子生物学角度解释术前化疗的机理,为临床制定合理的化疗方案提供理论依据.