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抗结核药物致大鼠肝脏损害的电镜观察
抗结核药物损害肝脏已有共识,但国内尚未有抗结核药物致肝脏损害行透射电镜观察的文献报道.本实验从2003年始通过研究抗结核药物对SD大鼠肝细胞超微结构的影响,探索其对肝脏损害的形态学特征.
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发育早期铅暴露所致仔鼠海马中突触相关蛋白表达的改变
铅暴露可导致儿童的认知功能障碍,因此在中国乃至世界范围内仍是重要的公共健康问题。目前,对于铅损害学习记忆方面的研究虽然取得了一些进展,但其具体机制仍不清楚,有待进一步研究。突触后致密蛋白-95(postsynaptic density protein 95, PSD-95)是突触后致密区的主要组成部分,研究表明PSD-95先于其他突触后蛋白锚定于突触后膜上,在突触后致密区内发挥初始作用。研究发现PSD-95可以结合突触后膜上的N-甲基-D-天门冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor, NMDAR)和下游信号转导蛋白-神经元型一氧化氮合成酶(neuronal nitric oxide synthase, nNOS)组成三联体结构,在学习记忆等生理功能上发挥重要作用。研究人员自母鼠孕期开始,通过饮水铅暴露,给予0、0.5、1.0和2.0 g/L的醋酸铅染毒,分别于仔鼠出生后10、20和40 d,采用透射电镜观察仔鼠的突触超微结构,并在蛋白和基因水平检测位于突触后膜上的PSD-95和nNOS以及位于突触前膜上的突触素(Synaptophysin, SYP)的表达。研究结果显示,发育早期铅暴露可以引起海马组织内突触后致密区变薄,导致PSD-95,nNOS以及SYP蛋白水平的下调,另一方面,在仔鼠出生后40 d,PSD-95和SYP的mRNA表达也明显受到抑制。提示,发育早期铅暴露所致的突触相关蛋白表达的改变可能是铅所致学习记忆功能障碍中的重要原因。
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钩端螺旋体在豚鼠组织中的动态分布和钩体病的病理改变
我们应用问号钩端螺旋体(简称钩体)赖型赖株建立钩体豚鼠感染模型,观察病理改变,应用免疫组织化学法显示感染后不同时期钩体抗原在肝、肾和肺组织中的分布特点,并应用透射电镜观察钩体病超微结构病变,为研究其发病机制奠定基础[1].
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HpD光动力效应对裸鼠视网膜超微结构的影响
我们在注入血卟啉衍生物(hematoporphyrin derivative, HpD)后激光照射裸鼠眼球,用电镜观察其视网膜病理变化。现将结果报告如下。 材料与方法 进口倍频Nd∶YAG激光仪,波长532 nm。Balb/c裸鼠18只,体重20~25 g,雌雄各半,随机分成6组,每组3只鼠,均以右眼为实验眼。A、B和C组注入HpD(北京制药工业研究所制备)后,以激光照射右眼。照射时间均为15 min,功率密度分别是:A组50 mW/cm2、B组150 mW/cm2、C组300mW/cm2。D组仅注入HpD不经激光照射。E组不注入HpD,仅用激光照射、功率密度为300 mW/cm2,照射时间15 min。F组不作任何处理。实验过程:A、B、C和D组裸鼠尾静脉注射HpD 5 mg/kg,暗室环境72 h。A、B、C和E组裸鼠腹腔注射4.3%水合氯醛430 mg/kg麻醉后,用倍频Nd∶YAG激光照射裸鼠眼球,激光输出功率为50 mW,通过调整激光束在角膜水平光斑大小来改变功率密度。激光束在角膜水平光斑直径分别为1.13、0.65和0.46 cm,其相应的功率密度则分别为50(A组)、150(B组)和300 mW/cm2(C组及E组)。激光照射后24 h处死动物。立即摘下右眼球用2.5%戊二醛-多聚甲醛液固定,取后极部眼球壁切成1 mm×2 mm大小组织块,PBS磷酸缓冲液洗,1%锇酸后固定,经各级丙酮脱水,Epon-812渗透包埋,半薄切片,1%甲苯胺蓝染色进行视网膜定位后再行超薄切片,切片厚60 nm,醋酸铀及柠檬酸铅双重染色,H-600透射电镜观察。
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镁与能量制剂对危重病人的临床意义
目的观察镁与能量(ATP-MgCl2)制剂对危重病人的临床意义.方法通过对实验动物进行缺血损伤,应用MgCl2、ATP、ATP-MgCl2对肝、肾、心、肺等器官的作用,使用冷冻蚀刻、组织化学及原子吸收光谱等技术,并结合光镜、透射电镜观察损伤器官的超微结构与Mg2、ATP浓度变化的关系,探讨外源性镁及能量制剂对损伤修复的效果.结果MgCl2、ATP两组对损伤器官均有保护作用(P>0.01).而ATP-MgCl2组对损伤器官具有良好的保护作用(P<0.01).该组细胞膜完整,胞质内有丰富糖原颗粒;质膜P面蛋白颗粒分布均匀,细胞核膜的P面上核孔分布均匀;细胞膜上、线粒体膜上及肌质网膜上均存在致密阳性产物,与正常组相近;原子吸收光谱显示线粒体内Qa2+明显下降.结论将外源性ATP-MgCl2应用危重病人,取得良好疗效.
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外源性 Nkx2.5、GATA4促进大鼠骨髓间充质干细胞的心肌分化
目的::心脏早期转录因子Nkx2.5、GATA4转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),探讨Nkx2.5、GATA4对大鼠BMSCs向心肌细胞分化的作用和影响。方法:全骨髓法分离、纯化、扩增培养SD大鼠BM-SCs,流式细胞术联合检测第三代细胞表面分子,CD90+/CD29+/CD45-细胞达95%以上。采用阳离子转染试剂LipofectamineTM2000将pEGFP-N1-Nkx2.5、pVP22-GATA4/myc-His质粒转染BMSCs。结果:转染4周后,Western blotting、免疫细胞化学结果表明,与空质粒组、空白对照组相比,Nkx2.5、GATA4显著提高转染组大鼠心肌细胞肌钙蛋白T(cardiac troponin T, cTnT)、连接蛋白43(connexin43, Cx43)的表达。免疫细胞化学结果显示Nkx2.5转染组、GATA4转染组中部分细胞呈cTnT、Cx43阳性,cTnT阳性细胞的胞质中可见棕黄色丝网状及颗粒样结构,Cx43阳性细胞的细胞质中可见棕褐色颗粒。透射电镜观察各组细胞超微结构变化,转染组大鼠心肌细胞的细胞质内出现大量平行排列的肌丝样结构,细胞侧面或细胞末端可见较多缝隙连接。结论:外源性Nkx2.5、GATA4能够促进BMSCs向心肌细胞分化。
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BMP-2和 PFT-α对骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的影响
目的::探索骨形态发生蛋白2( BMP-2)、P53抑制剂( PFT-α)以及二者联合诱导对大鼠骨髓间充质干细胞( BMSCs)向心肌细胞分化的影响。方法:分离4周龄SD大鼠的骨髓间充质干细胞并进行体外培养,对第二代BMSCs定向诱导,依次为BMP-2组、PFT-α组、BMP-2+PFT-α组以及空白对照组,相差显微镜观察细胞的形态学变化。免疫细胞化学法检测诱导4周后心肌特异性标记物(α-actin、C-TnT、desmin、P38-Mark)的表达,并进行统计学分析;透射电镜观察细胞的内部结构。结果:诱导4周后,诱导组大鼠BM-SCs的细胞形态变长,呈杆状,紧密平行排列,方向一致;空白对照组大鼠BMSCs细胞呈星形或三角形。免疫细胞化学检测显示:各诱导组BMSCs均可见α-actin、C-TnT、desmin、P38-Mark阳性的细胞,其中联合诱导组的阳性表达率高于BMP-2或PFT-α单独诱导组,诱导各组与对照组的以上各标记物的阳性率具有统计学差异( P﹤0.05)。透射电镜结果显示:诱导组大鼠BMSCs细胞呈分支杆状,核卵圆形,且位于细胞中央,细胞质中有肌丝平行排列,可见线粒体、大量粗面内质网、核糖体等。结论:BMP-2、PFT-α均可诱导BMSCs向心肌样细胞分化,且两者联合应用效果强于单一应用的效果。
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颅内混合瘤的CT表现与病理、超微结构和免疫组化研究
胶质母细胞瘤和纤维肉瘤、血管内皮瘤的混合瘤少见。本文10例颅内混合瘤系经CT检查,并经手术、病理确诊,现在报告如下。1 资料与方法 10例中,男6例,女4例。年龄8~64岁,平均37.2岁。10例均经CT检查,先平扫,后行增强检查。增强剂使用60%泛影葡胺、优维显200-370型。扫描层厚10mm,间隔5~10mm。CT机为日立颅脑HF型、日立W-4型、岛津5000TX型。10例肿瘤均经手术病理证实。其中1例两次肿瘤手术。肿瘤切片用HE染色,光镜观察。取7例肿瘤组织按常规电镜制样,用JEM-100B透射电镜观察。10例肿瘤均作5组免疫组化:胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性乙酰化酶(NSE)、S-100蛋白、波形蛋白(vimentin)、FⅧ因子。5种抗体均为丹麦DAKOPAtts产品。ABC试剂为美国Vector实验室生产。
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阴道宫颈乳头状瘤的分子生物学与超微结构的研究
以往的研究工作证明人乳头状病毒(HPV)与中国妇女宫颈乳头状瘤的生长有密切关系.为深入研究其发病机制,我们对外阴痒、白带多就诊体检发现阴道下1/3及宫颈有异常突起者病理及核酸分子杂交技术证实为HPV感染的16例标本进行了PCR检测及超微结构的观察,结果如下:1 材料与方法16例来自门诊新鲜标本,以2.5%戊二醛和1%锇酸双固定,Epon-812包埋,超薄切片,铀-铅双重染色,PHILPS-CM10透射电镜观察.2 结果与讨论2.1 PCR检测用PCA技术检测标本16例,14例标本HPV阳性,占87.5%.2.2 超微结构观察在14例HPV阳性标本中发现了基底细胞核分裂相、基底细胞内存在成对中心粒,基底细胞和棘细胞层增厚,伴核增大,核仁增多,可见凹空细胞,核有明显改变,早期核增大,核仁增多.此后72.3%的核仁消失,常染色质丰富.82.18%染色质疏松,72.3%的阴道尖锐湿疣病例中发现了染色质之间颗粒及染色质周围颗粒、染色质之间颗粒呈棱角状,直径约15~35nm.PCA检测阳性者还可见核小体,阴性者未发现.随着核染色质的浓集并周边化,核固缩,在此类细胞中可见大量密集的染色质之间颗粒和染色质周围颗粒,胞质空化明显,形成典型的凹突细胞,凹突细胞中可见线粒体及内质网肿胀,脊消失,后融合成一些外围有包膜的大泡,充斥于胞质内,使胞质明显空化,成为典型的凹突细胞,典型的胞质空化在中表层细胞中常见.14例阴道尖锐湿疣标本中46%可见棘细胞质空化,另外在5例宫颈尖锐湿疣基底细胞和1例阴道尖锐湿疣副基底细胞中发现了大量直径在45~55nm边缘锐利但大小不规则的病毒样颗粒.
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胃溃疡大鼠胃泌素、生长抑素和GD细胞的变化
目的:研究胃溃疡对大鼠G细胞分泌胃泌素(D细胞分泌生长抑素)和对G(D)细胞变化的影响.方法:建立冰乙酸性大鼠胃溃疡模型,采用大体、光镜、透射电镜观察胃窦黏膜组织学表现和胃窦黏膜细胞超微结构表现,采用放射免疫法检测血清和胃窦组织中的胃泌素、生长抑素含量,采用免疫组化法及定量分析检测G(D)细胞形态、数目、面积、和G/D细胞数目、面积比值,采用免疫电镜及定量分析观察与检测G(D)细胞及G(D)细胞中的胃泌素(生长抑素)分泌颗粒.结果:免疫电镜观察到了G(D)细胞和G(D)细胞中的胃泌素(生长抑素)分泌颗粒.大鼠胃溃疡后,G细胞内胃泌素分泌量增加,D细胞内生长抑素分泌量减少,G细胞数目增加、面积减少,D细胞数目减少、面积减少,G/D细胞数目比值和G/D细胞面积比值增加,并且血清、胃窦组织中胃泌素含量增加,生长抑素含量减少.结论:大鼠胃溃疡可引起G、D细胞的变化,引起G、D细胞分泌胃泌素、生长抑素的变化,和引起胃泌素、生长抑素含量的变化.
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依那普利对大鼠肝纤维化的预防和治疗作用
目的:探讨血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)依那普利(Ena)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠实验性肝纤维化的预防和治疗作用.方法:以CCl4诱导形成大鼠肝实质损伤性肝纤维化模型.大鼠分为对照组、模型组、预防组及治疗组.除对照组外,其余各组大鼠均sc400mL/LCCl4橄榄油混合液,每3/d次,共10 wk.预防组同时给予Ena灌胃.治疗组则在造模第5 wk给予Ena灌胃.实验结束后称量肝脾并收取肝组织.通过HE及Masson三色染色对肝组织炎症及纤维化程度进行评价,通过透射电镜观察肝细胞超微结构.结果:用药后,与对照组相比,模型组、Ena预防及治疗组体质量均显著下降(P<0.01).与模型组相比,Ena预防及治疗组大鼠肝脾指数均显著降低(P<0.01),Ena高剂量预防及高剂量治疗组均显著改善肝组织炎症和纤维化程度(P<0.01).通过电镜观察肝细胞,Ena高剂量预防及高剂量治疗组肝细胞损害较模型组明显减轻.结论:依那普利对CCl4诱导的大鼠实验性肝纤维化有良好的预防和治疗作用.
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透射电镜及激光共聚焦技术观察体外丙型肝炎病毒感染的人胎盘滋养层细胞
目的:探讨体外分离培养的人体胎盘滋养层细胞感染丙型肝炎病毒(HCV)的可能性,以及滋养层细胞感染HCV后的超微结构改变.方法:采用胰蛋白酶消化法及Percoll密度梯度分离法分离培养人胎盘组织中滋养层细胞后,以HCV RNA阳性血清对滋养层细胞进行体外感染试验,应用RT-PCR法定性及定量检测感染后细胞培养上清中HCV RNA,透射电镜观察HCV感染后滋养层细胞的超微结构改变,并用激光共聚焦技术观察免疫荧光染色后HCV NS5在滋养层细胞中的定位.结果:HCV感染后的细胞培养上清中可间断检测到HCVRNA,而对照组始终未检出;激光共聚焦观察显示HCV NS5主要定位于细胞核周;HCV感染后滋养层细胞超微结构发生了明显改变,主要表现为溶酶体大量增生,粗面内质网增生,脂滴减少,出现空泡状结构,并可观察到病毒样颗粒.结论:HCV可以感染滋养层细胞,并导致滋养层细胞的超微结构发生类似黄病毒科病毒感染后的改变.
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GnRH类似物诱导肝癌细胞凋亡的体外研究
目的:研究GnRH类似物阿拉瑞林诱导体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721发生凋亡的作用,为GnRH类似物用于肝癌的内分泌治疗提供实验资料.方法:采用MTT法、形态学透射电镜观察和末端脱氧核苷酸标记法观察被阿拉瑞林处理后的SMMC-7721细胞的形态学和生化等指标的变化.结果:MTT法研究结果表明阿拉瑞林在10-9 mol/L浓度时即可诱导7721细胞凋亡,并呈量-效效应.透射电镜下可观察到早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞以及核染色质浓缩并见凋亡小体.末端脱氧核苷酸转移标记法进一步证实阿拉瑞林可以诱导肝癌细胞凋亡并可见凋亡小体;与对照组相比,阿拉瑞林处理后TUNEL凋亡指数显著增加(0.29±0.06vs0.11±0.03,P<0.05).结论:GnRH类似物可诱导体外培养的肝癌细胞株SMMC-7721发生凋亡,从而提示GnRH类似物对人肝细胞性肝癌具有潜在的治疗作用.
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参臼胶囊诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡
目的:研究"参臼胶囊"(SJ)诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用.方法:采用HE染色、透射电镜观察、原位末端标记技术(TUNEL)等方法,观察SJ作用于SMMC-7721细胞后细胞形态的改变.结果:HE染色及透射电镜分别从微观、超微观水平观测肿瘤细胞经SJ作用后的形态学变化:细胞变圆、缩小,折光性增强,细胞破碎,经HE染色后,细胞核呈兰黑色,胞质呈淡红色,细胞出现凋亡改变,单个散在分布,表现为核染色质致密浓缩,核碎裂或核染色质断裂,形成大小不等的凋亡小体,证实10 μg/mL SJ作用SMMC-7721 48 h后细胞出现典型的凋亡征象;TUNEL法检测到发生在各期的凋亡细胞.结论:SJ可诱导SMMC-7721细胞凋亡,可望作为一种新的细胞凋亡诱导剂用于肝癌的治疗.
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鸦胆子油乳诱导肝癌细胞凋亡及对相关基因表达的影响
目的:研究鸦胆子油乳体外诱导人肝癌细胞SMMC-772l凋亡的作用及对细胞周期和凋亡相关基因p53和Bcl-2表达的影响,探讨其抗肿瘤机制.方法:MTT法检测鸦胆子油乳不同浓度和作用时间对肝癌细胞的抑制增生作用;透射电镜观察细胞形态学改变;琼脂糖凝胶电泳分析DNA特征;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布;免疫细胞化学染色检测p53和Bcl-2的表达.结果:鸦胆子油乳对人肝癌细胞SMMC-772l具有显著的抑制增生作用,且有时间和浓度依赖性.透射电镜和凝胶电泳可观察到凋亡特征性的形态学和生化特征改变.0.10 g/L鸦胆子油乳作用12,24,48 h后,流式细胞仪分析可见典型的亚二倍体峰,细胞周期阻滞于G0/G1期,与对照组相比有显著性差异(P<0.05).p53和Bcl-2在经鸦胆子油乳作用后表达水平均下降,二者呈正相关(r=0.966,P<0.05),p53下降更为明显.结论:鸦胆子油乳体外对肝癌细胞SMMC-7721有显著的抑制增生作用,能诱导凋亡、阻滞细胞周期于G0/G1期,抑制p53和Bcl-2的表达是其重要机制,其中p53途径起主导作用.
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扶正抑瘤饮及其配伍不同化疗药物对人胃癌细胞增生的抑制作用
目的:研究扶正抑瘤饮及其配伍不同化疗药物后对体外人胃癌细胞的影响.并探讨中药抑制人胃癌细胞增生的可能的作用机制.方法:取两株人胃癌细胞株SGC-7901、MGC-803细胞,分别加入中药及其分别配伍不同的化疗药物及方案(包括化疗药物Vp-16,ADM,5-FU,DDP以及化疗方案EAP,EFP),分别采用MTT法观察各组药物作用胃癌细胞24h,48 h,72 h后对两种胃癌细胞增生的抑制作用.并通过流式细胞仪测定各组药物作用胃癌细胞72 h后的胃癌细胞凋亡率和坏死率.同时通过透射电镜观察中药作用72 h后的胃癌细胞的细胞超微结构的变化.结果:透射电镜下可以观察到中药引起胃癌细胞发生典型的凋亡细胞形态学的改变.经t检验,结果显示中药与4种化疗药物2种化疗方案联用24,48,72 h后,对两株胃癌细胞均有协同抑制作用,且随着药物作用时间的延长,其协同抑制作用也增强.中药与ADM联用对人胃癌细胞株SGC-7901,MGC-803的协同抑制作用均为弱,分别为(55.4±4.8 vs 20.1±5.5,t=2.41,P=0.02<0.05;50.7±6.4 vs 14.8±2.7 t=2.42,P=0.02<0.05).其中中药与EFP化疗方案联用对SGC-7901细胞株协同抑制作用较强,分别为(79.4±2.8,83.3±4.8,87.5±4.3,t=2.85,P=0.005<0.05).而中药与DDP(70.2±3.5,80.1±3.6,84.3±7.5,t=2.42,P=0.02<0.05)和与EFP(82.6±7.8,87.5±3.1,89.9±4.8,t=2.96,P=0.005<0.05)化疗方案联用对MGC-803细胞株的协同抑制作用较强.且中药与DDP和EFP化疗方案联用72 h对MGC-803细胞株的抑瘤率相近且高于其他治疗(P<0.05).中药与不同的化疗药物及方案联用,对不同分化程度的人胃癌细胞株所产生的协同增效作用不同.结论:扶正抑瘤饮通过诱导细胞凋亡抑制肿瘤细胞的增生,并与化疗药物有协同效果,但与不同药物联用的协同效率和产生协同效果的机制不同.且中药与单药联用的抑瘤率不一定低于与化疗方案联用的抑瘤率.中药与化疗或与化疗方案联用对不同分化程度的胃癌的抑制作用也存在敏感性差异.
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三氧化二砷诱导人类大肠癌细胞凋亡的分子机制
目的:明确三氧化二砷(As2O3)注射液对人类大肠癌细胞株的诱导凋亡作用,并探讨其分子机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、AO/EB荧光染色法、透射电镜观察、DNA电泳、流式细胞术法及免疫组化等方法,系统地观察了As2O3注射液对体外培养的人类大肠癌细胞株LoVo和CoLo-320的生长活力、细胞凋亡、细胞周期及其相关基因表达的影响.结果:用不同浓度(0.5,1.0,2.0,4.0 mg/L)As2O3作用LoVo和CoLo-320细胞不同时间(24,48,72 h),均能显著抑制其生长(P<0.05),用药后诱导其出现了典型的细胞凋亡的形态学和生化学改变,癌细胞Bcl-2基因表达明显下降,Bax和Fas基因表达显著增强(P<0.01).结论:As2O3注射液对人类大肠癌细胞具有显著的诱导凋亡作用,这一作用受到多种基因的调控,即Bcl-2基因表达下调,Bax和Fas基因表达上调.
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胃泌素拮抗剂增加CD自杀基因对结直肠癌细胞的杀伤作用
目的:研究联合应用胃泌素拮抗剂和胞嘧啶脱氨酶(CD)的基因治疗对结肠癌细胞的杀伤作用.方法:脂质体法转染G1CEACDNa至LoVo细胞.用含1mmol/L5-FC或/和1×10-8mmol/L CI-988的100ml/L胎牛血清的RPMI1640培养基培养细胞,测生长曲线;MTT法测细胞杀伤率;透射电镜观察细胞的超微结构;流式细胞仪annexin V和PI双重染色行凋亡相关检查;Balb/c裸鼠背部皮下接种CD+LoVo细胞,5-FC(500mg/kg)腹腔注射或/和CI-988(10mg/kg)灌胃处理20 d,处死裸鼠后肿瘤称重,病理切片HE染色,瘤组织透射电镜检查.结果:用5-FC或/和CI-988处理6 d后CD+LoVo细胞抑制率分别为90%和50%,二者合用于3 d和6 d抑制率分别为40%和97%;MTT法检测联合应用5-FC和CI-988较单用任何一种处理对CD+LoVo细胞杀伤作用更强,有统计学差异(0.53±0.05 vs 0.49±0.02,0.38±0.06,F=29.5536,n=5,P<0.01);电镜和流式细胞仪分别显示CD/5-FC和CI-988结合处理72 h后细胞有凋亡现象;用5-FC(500 mg/kg)腹腔注射和CI-988(10 mg/kg)灌胃处理荷瘤裸鼠均可出现明显的抑瘤作用,抑瘤率分别为69.4%和495%,二者合用抑瘤较单用任一种处理更明显,有统计学意义(0.42±0.12 vs0.69±0.11,1.22±0.22,F=33.1709,n=5,P<0.05),抑瘤率达81.5%,电镜下见瘤组织内有凋亡小体.结论:联合应用胃泌素拮抗剂CI-988可以提高CD/5-FC对结肠癌细胞的杀伤作用.凋亡相关过程可能是这种协同作用的原因.
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维甲酸Ro 40-8757对人大肠癌细胞系CCL-187增生和侵袭的抑制作用
目的:维甲酸类化合物对多种恶性肿瘤具有诱导分化、抑制增生、诱导凋亡等作用.本文旨在研究一种新合成的维甲酸Ro 40-8757对体外培养的人大肠癌细胞系CCL-187的生长增生、侵袭、形态结构及细胞周期的影响,并探讨其可能机制.方法:MTT法测定Ro 40-8757对人大肠癌细胞系CCL-187的增生抑制作用;用流式细胞术研究其对CCL-187细胞周期的影响;侵袭试验观察侵袭抑制作用;半定量RT-PCR测定MMP-2表达变化;电镜观察其对CCL-187细胞形态的影响.结果:Ro 40-8757作用后CCL-187出现显著的生长抑制作用,并具有时间、浓度依赖性;经1×10-6mol/L Ro 40-8757处理3,6,9,12 d后的CCL-187 G1期细胞数分数比例增加,S+G2/M期细胞数分数比例减少,出现G0/G1期细胞周期阻滞作用;Ro 40-8757能够抑制CCL-187细胞的侵袭,1×10-6 mol/L药物作用后穿过滤膜的细胞数随时间逐渐减少(处理0 d的CCL-187穿过滤膜的细胞数为24.2±3.0;女理3d为16.0±2.1;处理6d为15.1±1.2;处理9d为9.6±2.5;女理12d为5.4±1.2,P<0.05).侵袭能力下降的同时,MMP-2表达下降(0 d光密度值和β-actin的比值为1.19±0.26;3 d为0.94±0.79;6 d为0.71±0.06;9 d为0.37±0.80;12 d为0.32±0.90);扫描和透射电镜观察均未见细胞有明显的细胞毒性、凋亡和分化特征性改变.结论:Ro 40-8757对人结肠细胞系CCL-187有明显的增生抑制作用,并呈时间、剂量依赖性,这种抑制作用是通过细胞周期阻滞于G0/G1期发挥作用的;Ro 40-8757对CCL-187有侵袭抑制作用,MMP-2的表达下降在其中参与发挥作用.
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钙离子跨缝隙连接在内皮细胞与平滑肌细胞间传递的研究
目的:探讨钙离子能否跨缝隙连接在内皮细胞与平滑肌细胞间进行传递。
方法:本实验采用植块法分别培养大鼠主动脉内皮及平滑肌细胞,将内皮细胞与平滑肌细胞分别接种至transwell insert膜的两侧以建立内皮细胞与平滑肌细胞双层共培养模型,并用透射电镜观察两种细胞在transwell insert膜两侧生长情况,将细胞负载Fluo-3后,在用ETA (10-5M)和/或ETB(10-5M)受体阻断剂处理一种细胞后用ET-1(10-7M)刺激另一种细胞在激光共聚焦显微镜测定未刺激细胞内荧光强度变化,并观察18α-GA及肝素对上述变化的影响。