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阴道宫颈乳头状瘤的分子生物学与超微结构的研究
以往的研究工作证明人乳头状病毒(HPV)与中国妇女宫颈乳头状瘤的生长有密切关系.为深入研究其发病机制,我们对外阴痒、白带多就诊体检发现阴道下1/3及宫颈有异常突起者病理及核酸分子杂交技术证实为HPV感染的16例标本进行了PCR检测及超微结构的观察,结果如下:1 材料与方法16例来自门诊新鲜标本,以2.5%戊二醛和1%锇酸双固定,Epon-812包埋,超薄切片,铀-铅双重染色,PHILPS-CM10透射电镜观察.2 结果与讨论2.1 PCR检测用PCA技术检测标本16例,14例标本HPV阳性,占87.5%.2.2 超微结构观察在14例HPV阳性标本中发现了基底细胞核分裂相、基底细胞内存在成对中心粒,基底细胞和棘细胞层增厚,伴核增大,核仁增多,可见凹空细胞,核有明显改变,早期核增大,核仁增多.此后72.3%的核仁消失,常染色质丰富.82.18%染色质疏松,72.3%的阴道尖锐湿疣病例中发现了染色质之间颗粒及染色质周围颗粒、染色质之间颗粒呈棱角状,直径约15~35nm.PCA检测阳性者还可见核小体,阴性者未发现.随着核染色质的浓集并周边化,核固缩,在此类细胞中可见大量密集的染色质之间颗粒和染色质周围颗粒,胞质空化明显,形成典型的凹突细胞,凹突细胞中可见线粒体及内质网肿胀,脊消失,后融合成一些外围有包膜的大泡,充斥于胞质内,使胞质明显空化,成为典型的凹突细胞,典型的胞质空化在中表层细胞中常见.14例阴道尖锐湿疣标本中46%可见棘细胞质空化,另外在5例宫颈尖锐湿疣基底细胞和1例阴道尖锐湿疣副基底细胞中发现了大量直径在45~55nm边缘锐利但大小不规则的病毒样颗粒.
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X射线对同步化的HeLaS3细胞Cyclin B1蛋白表达和转录水平的影响
中、高剂量电离辐射对生长的真核细胞的一个普遍效应是导致分裂延迟,这早已被放射生物学界所公认.但有关低剂量电离辐射对细胞周期及其分子调控的影响报道甚少,我室以往实验资料已揭示低剂量辐射可促进细胞的DNA合成与增殖,加速细胞周期的进程[1,2].为了进一步探讨低剂量电离辐射促进细胞周期进程的分子机理以及低、高剂量辐射作用机理的差异,我们运用TdR双阻断法、RNA分子杂交技术和免疫组织化学法观察并探讨X射线作用于同步化的HeLaS3细胞后,其细胞周期相关基因Cyclin B1蛋白表达和转录水平的变化.
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急性淋巴细胞白血病患者糖皮质激素受体及其mRNA水平与预后的关系
急性淋巴细胞白血病(ALL)患者白细胞糖皮质激素受体(GR)及其mRNA水平与近期疗效的关系已有较多的临床报道,一般认为GR水平与近期疗效呈正相关.但GR水平与长期存活的关系一直未见明确的临床报道.我们采用放射配体结合分析法和以人GR cDNA为探针的分子杂交技术,对29例ALL患者白细胞GR及其mRNA含量与近期疗效以及长期存活的关系进行了对比观察,并对这29例患者的预后进行了跟踪随访,现将观察及随访结果报告如下.
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试论艾滋病的治疗方向
自从艾滋病问世之后,其治愈方法便一直不为人知.由于艾滋病本身属于RNA病毒,其遗传物质并不稳定,时常发生突变,因此没有任何一种抗体能够长期与之特异性结合,作为药用.但是基因突变的低频性,造成了HIV病毒种类虽多但仍有部分基因不发生改变,至少HIV将T淋巴细胞作为主要攻击对象的自其问世以来从未改变,这也是艾滋病难以治疗的重要原因.
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霍乱弧菌2种核糖体分型方法比较
目前分子杂交技术已广泛用于霍乱弧菌检测中,是霍乱疫情中追踪传染源的主要检测方法之一[1].本文以16S-23S-5S rRNA为探针,对霍乱疫情中分离的霍乱弧菌进行Southern杂交后,使用2种限制性内切酶普通变形杆菌Ⅱ型酶(PVUⅡ)和大肠埃希菌R Ⅰ型酶(ECORⅠ),对2种核糖体分型(RT)方法的图谱进行分析比较.现将结果报告如下.
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邻氨基酚与脱氧核糖核酸的相互作用
邻氨基酚是一种重要的化工中间体,广泛用于染料印刷医药生物等领域,由于其对人体有毒副作用并污染环境,研究其毒性具有重要意义.近年来利用光谱学与电化学方法研究DNA与有害物资的相互作用是分析化学研究领域的一个热点[1~4],可以从分子水平了解毒物对DNA的损伤机制.本文利用分子杂交技术、电化学分析枝术以及荧光、紫外光谱、量子化学方法探讨了邻氨基酚与DNA的相互的作用.
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补阳还五汤对AD大鼠海马区β-APPmRNA、IL-1βmRNA、IL-6mRNA、TNF-αmRNA表达影响的研究
目的:采用分子杂交技术观察补阳还五汤对Aβ1-40所致老年痴呆(AD)大鼠海马区β-APPmRNA、IL-1β mRNA、IL-6 mRNA及TNF-αmRNA表达的影响,进一步探讨该组方治疗AD的机制,为其临床应用提供实验依据.方法:70只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、补阳还五汤组、补气组、活血组和脑复康组,每10只.采用注射Aβ1-40的方法制备AD模型,分子杂交技术检测大鼠海马区β-APP mRNA、IL-1β mRNA、IL-6 mRNA、TNF-αmRNA的表达.结果与结论:补阳还五汤能够明显降低AD大鼠海马区β-APP mRNA、IL-1β mRNA、IL-6mRNA和TNF-αmRNA的表达,从而改善大脑记忆障碍,达到防治AD的作用.
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核酸分子生物学技术在隐孢子虫研究中的应用
核酸分子技术是建立在任何一种生物均具有独特的核苷酸系列的基础上对核酸分子进行研究的方法,随着现代分子生物学技术的迅速发展,对某一生物(包括寄生虫)的核酸有了深入的研究,并已经用于寄生虫的研究[1],所涉及的研究方法有分子杂交技术、DNA探针〔2〕、PCR(多聚酶链反应)〔3〕、随机扩增多态性DNA分析(RAPD)〔4〕和核酸序列分析〔5〕等。人体隐孢子虫病ryptosporidiosis)1976年在美国首次报道,国内于1987年由韩范在南京第一次报道〔6〕,以后在世界各地包括中国各地陆续有隐孢子虫病病例报道,甚至在特定人群中有暴发流行〔7,8〕。在隐孢子虫研究中核酸分子技术上主要应用于样本中隐孢子虫卵囊检测、隐孢子虫病的诊断、流行病学调查及虫种鉴定和虫株分型。核酸技术用于隐孢子虫病诊断,可以用于鉴别隐孢子虫的近源种或不同株型,在流行病学调查中确定传播途径或考核治疗效果。目前这些方法大多处于研究阶段,在临床或大面积应用时还受到一定限制。
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原位杂交的技术关键及其应用
原位核酸分子杂交技术简称原位杂交(in situ hybridization,ISH),其原理是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待检测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合而形成杂交体,然后再应用与标记物相应的检测系统,通过组织化学或免疫组织化学方法在被检测的核酸原位形成带颜色的杂交信号,并在显微镜或电子显微镜下进行细胞内定位.
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16株霍乱弧菌23srRNA基因的多态性分析
核糖体RNA的编码基因检测及多态性分析已广泛应用于分子流行病学的研究中[1,2].分子杂交技术是现代流行病学的主要研究手段,它在追踪菌株的来源以及探讨造成不同地区流行的菌株之间的关系上有重要意义.为了探讨不同来源、不同地区分离到的埃尔托霍乱弧菌在染色体分型上有无差异,我们采用了23srRNA基因的Southern杂交技术进行了初步研究,现报告如下:
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临床检验中PCR技术的应用
医学检验大致可分为形态学、生物化学、血清免疫学和分子生物学几大类,其分别代表几代实验诊断技术.60年代DNA双螺旋结构及半保留复制模式的出现,70年代基因重组及体外基因克隆技术、分子杂交技术的应用使分子生物学在疾病诊断中得到了长足的发展.特别是1985年Mullis发明了聚合酶链式反应(PCR)技术,使医学界真正兴起了基因诊断技术热,成为现代医学发展的又一里程碑.用于临床检验的PCR技术与经典的PCR反应在操作上稍有区别,有其自己的特色.一般在样品处理上,多采用非离子去污剂一次加热处理,这种方法对DNA纯化有限,但适应临床微量、快速的特点.另外PCR反应体系中各组成成份往往都预分装到反应管中,既减少操作者的工作强度而且也减少了污染的机会,具有极高的使用价值.
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麝香保心丸对家兔血管球囊损伤后胶原增生的影响
目的探讨血管球囊损伤后血清I型前胶原羧基端肽浓度和Ⅰ型胶原基因表达的变化及麝香保心丸对其影响.方法将45只实验兔随机分为3组,每组15只:血管成形术组、血管成形术+麝香保心丸组及对照组.应用球囊拉伤动脉内膜加高脂饲养的方法建立兔髂动脉硬化模型并行球囊扩张血管成形术,采用放射免疫法和核酸分子杂交技术对血清I型前胶原羧基端肽和髂动脉壁平滑肌细胞的Ⅰ型胶原基因的表达情况进行观察.结果术后1周时血管成形术组血清I型前胶原羧基端肽较对照组水平增加(I型前胶原羧基端肽为9.54±1.49,P<0.05),Ⅰ型胶原基因表达增加,经计算机图像辉度扫描定量分析结果为(160±12,P<0.05),2、4周时显著增加(P<0.01),( 血清I型前胶原羧基端肽为14.21±2.67和15.63±6.87,Ⅰ型胶原基因表达为416±16和438±17),血管成形术+麝香保心丸组血清I型前胶原羧基端肽无显著增加、Ⅰ型胶原基因未表达.结论血管内皮损伤可致Ⅰ型胶原合成增加,麝香保心丸对其有抑制作用.
关键词: 中药学 麝香保心丸对胶原增生的影响 球囊损伤 分子杂交技术 放射免疫法 胶原 麝香保心丸/药理作用 -
脂多糖注射大鼠肺组织TNF-α、IL-10和c-Jun mRNA的表达及地塞米松的影响
目的:观察大鼠急性肺损伤(ALI)时血浆TNF-α含量和肺组织中TNF-α、IL-10、 c-Jun mR NA的表达变化及地塞米松的影响,从mRNA水平探讨这些炎症介质在SIRS中的变化和糖皮质激素的抗炎作用机制.方法:采用颈静脉插管注入内毒素(1 mg/kg)法制备大鼠急性肺损伤( ALI)脓毒症模型.干预组同时注射地塞米松(5 mg/kg).又各分为1 h组和12 h组,到时相点后颈动脉插管放血活杀,立即分离血浆待测TNF-α水平.肺用4%多聚甲醛(PFA)逆行灌注,PFA固定12 h,20%蔗糖/PBS脱水12-24 h,冰冻切片.酶联免疫法检测血浆中TNF -α水平,原位杂交方法照蔡文琴主编的<实用免疫细胞化学与核酸分子杂交技术>的方法 ,略有变动.杂交结果采用Tigar图象分析软件处理.结果:内毒素干预后 TNF-α水平在LPS 注射后1 h即显著增高,注射后12 h明显回落;地塞米松干预组TNF-α的水平显著降低 .LPS刺激1 h后,TNF-α、c-Jun表达显著增强,而此时IL-10只有微弱表达.LPS刺激12 h后,TNF-α、c-Jun表达有所减弱,此时IL-10表达显著增强.地塞米松治疗1 h组,T NF-α、c-Jun表达被显著抑制.地塞米松对IL-10表达没有显著影响.讨论:本研究结果发现,LPS刺激使大鼠肺组织中前炎症细胞因子TNF-α很早就开始表达,但随着病程发展TNF- α的表达反而减弱,与所观察到的血浆TNF-α含量的变化有相似的规律.而IL-10的表达与T NF-α的表达呈相反的改变,提示TNF-α表达的这种变化可能与IL-10等抗炎介质的表达增加有关.c-Jun与TNF-α在肺组织中的表达时相有相似之处.作为参与许多炎症介质表达的转录因子AP-1的主要成分,我们认为c-Jun的表达增加可能与前炎症介质TNF-α等的转录调控有关.糖皮质激素是重要的调节炎症反应的内源性介质.本实验结果表明,糖皮质激素能抑制TNF-α和c-Jun的表达,但对IL-10的表达基本没有影响,提示糖皮质激素的作用机制之一是在mRNA水平调控促炎和抗炎介质的表达,从而起到调节全身炎症反应的作用.这为我们揭示了糖皮质激素抗炎作用新的可能机制.
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地高辛素标记DNA探针原位杂交的简便方法
原位杂交是将重组核酸分子杂交技术与组织细胞化学及免疫组织化学技术结合起来,在组织细胞原位显示某种特定基因、mRNA及其产物(特异蛋白质)的表达进行定位和定量检测的一项新技术。该方法用于组织和细胞学研究27年来[1],不论是对细胞内的DNA,还是mRNA已有大量成功的报告[2,3]。其中,DNA探针一般比RNA探针敏感,使用较方便,能选用各种标记方法,且杂交适宜温度的范围较宽。但操作程序较复杂,不易驾驭。