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用原位杂交证实检测非甲~非戊型肝炎患者肝组织中存在HGV RNA
应用原位杂交技术以地高辛素标记的HGV cDNA探针,对36例血清非甲~非戊型肝炎(HNA-E)患者肝组织中HGV RNA进行了检测,HGV RNA总检出率为30.6%(11/36),其中急性重型肝炎1例,亚急性重型肝炎3例,急性轻型肝炎3例,慢性肝炎4例.原位杂交阳性信号为兰紫色,细颗粒状,定位于肝细胞浆或/和核内.在急性和亚急性病毒性肝炎肝组织,阳性肝细胞多弥散分布,而于慢性肝炎多近汇管区呈片灶状.急性重型肝炎肝组织于残存的肝细胞中可见部分有阳性表达.肝组织免疫组化检出HGV NS5Ag阳性13例(36.1%),其中5例为HGAg单项阳性(急性重型肝炎1例,急性轻型肝炎3例及慢性肝炎1例).另8例同时呈HBsAg或/和HCV NS3Ag阳性.经统计,本组病例中原位杂交及免疫组化均阳性8例,两者均阴性16例,原位杂交阳性、免疫组化阴性3例,原位杂交阴性、免疫组化阳性5例,经配对计数资料的卡方检验,两种检出率差异无显著性(χ2=0.125,P>0.50).此外,病毒基因与抗原阳性表达的肝细胞其分布也较为一致,HGV RNA阳性信号不仅见于肝细胞胞浆内,也于肝细胞核和核周表达.
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地高辛素标记DNA探针原位杂交的简便方法
原位杂交是将重组核酸分子杂交技术与组织细胞化学及免疫组织化学技术结合起来,在组织细胞原位显示某种特定基因、mRNA及其产物(特异蛋白质)的表达进行定位和定量检测的一项新技术。该方法用于组织和细胞学研究27年来[1],不论是对细胞内的DNA,还是mRNA已有大量成功的报告[2,3]。其中,DNA探针一般比RNA探针敏感,使用较方便,能选用各种标记方法,且杂交适宜温度的范围较宽。但操作程序较复杂,不易驾驭。
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地高辛素标记探针原位杂交技术检测肝硬变组织中TIMPs mRNA
[谢玉梅,聂青和,周永兴,程勇前,康文臻.世界华人消化杂志,2001;9(3):251-254]目的金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)具有抑制金属蛋白酶(MMPs)的作用,为了阐明T1MP-1和TIMP-2在肝硬变患者肝组织中的表达水平及分布状态,我们检测了肝硬变患者肝组织中的TIMP-1和TIMP-2,探讨TIMP-1和TIMP-2在肝硬变发病机制中的作用.方法以TIMP-1和TIMP-2 cDNA探针为试剂,采用原位杂交技术检测40例经肝组织病理学检查证实为结节性肝硬变患者肝组织中(其中男32例,女8例,平均年龄为50岁)TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达.结果 40例肝硬变患者肝组织中TIMP-1和TIMP-2 mRNA表达的阳性率为100%,TIMP-1 mRNA的表达强阳性40例中有32例,占80%,中等阳性6例,占15%,弱阳性2例,占5%;TIMP-2 mRNA的表达强阳性40例中有22例,占55%,中等阳性16例,占40%,弱阳性2例,占5%;TIMP-1 mRNA阳性的肝组织中TIMP-2 mRNA亦为阳性,且TIMP-1 mRNA表达强度略高于TIMP-2 mRNA,而正常肝组织中未见阳性表达.TIMP-1和TIMP-2 mRNA表达的阳性信号主要位于肝细胞胞质中,未见细胞核表达.结论肝硬变患者肝组织中的肝细胞中存在TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达,TIMP-1和TIMP-2可能与肝病的进展相关,它通过抑制MMPs的活性,使得ECM降解减少而导致肝纤维化,以至肝硬变. (潘伯荣)