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抗纤复方药物血清对HSC-LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶及其组织抑制因子-1基因表达的影响
目的:探讨抗纤复方药物血清对肝星形细胞(HSC)LI90细胞(HSC-LI90)Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制因子(TIMP-1)基因表达的影响.方法:以0.5、2.0、4.0g/kg等不同剂量抗纤复方灌胃大鼠,制备药物血清,作用于HSC-LI90细胞48h,应用Northern印迹杂交的方法,检测Ⅰ型、Ⅳ型前胶原、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及膜型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)及其组织抑制因子(TIMP-1)基因的表达,并用酶图法检测基质金属蛋白酶-2的活性.结果:(1)抗纤复方不同浓度药物血清能抑制HSC-LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原及其组织抑制因子TIMP-1的基因表达(P<0.05或P<0.01);(2)能增加膜型基质金属蛋白酶基因表达(P<0.01);(3)对基质金属蛋白酶-2基因表达及活性无影响(P>0.05).结论:(1)抗纤复方具有抗肝纤维化作用;(2)抗纤复方抑制HSC-LI90细胞TIMP-1基因表达水平,促进胶原降解,可能是抗肝纤维化的作用机制之一.
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基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制因子2在狼疮性肾炎肾活检组织中的表达及其意义
一、材料与方法1.材料:实验材料选自本教研室1998年至2000年肾穿活检标本,共60份,经常规HE、免疫荧光染色及透射电镜检查,确定其病理组织学类型.其中狼疮性肾炎(LN)50例(Ⅰ型5例、Ⅱ型9例、Ⅲ型9例、Ⅳ型18例、Ⅴ型9例),以及肾小球轻微病变(ML)10例作为对照组.
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正常及实验性肝纤维化大鼠肝脏中的金属蛋白酶组织抑制因子-1
目的:了解金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在正常及实验性肝纤维化大鼠肝组织中的定位及表达状态.方法:用人血白蛋白免疫攻击的方法制备实验性免疫性肝纤维化大鼠模型,以正常大鼠为对照.采用免疫组化法及原位杂交技术分别检测肝脏中TIMP-1 mRNA和相关抗原表达,同时用PCR技术检测肝脏中TIMP-1基因水平.结果:实验组肝脏中TIMP-1相关抗原表达在肌成纤维细胞、成纤维细胞,以汇管区及纤维间隔中明显,阳性信号位于细胞胞质中,未见细胞核表达.原位杂交检测结果也展示了上述相同的分布和定位.正常大鼠肝组织中可见TIMP-1基因表达,但表达水平极低.实验组肝组织中TIMP-1呈高水平表达.结论:在肝纤维化中,成纤维细胞及肌成纤维细胞是TIMP表达的主要细胞.随着病损肝脏中肝纤维化程度的加重,TIMP-1基因表达水平随之增高.
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中国人金属基质蛋白酶组织抑制因子-1基因的克隆与表达
目的:克隆和表达中国人金属基质蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinases-1;ⅡMP-1)基因,获得具有抗原性的人TIMP-1蛋白.方法:用RT-nest-PCR扩增TIMP-1编码区基因片段,用基因重组技术构建含该片段的重组质粒并进行序列分析.在大肠杆菌E.coli中表达融合蛋白MBP-TIMP-1,用SDS-PAGE和Western-blot对重组蛋白进行分析鉴定,并用亲和层析试剂盒纯化融合蛋白MBP-TIMP-1.结果:经核苷酸序列分析表明,本研究克隆的中国人TIMP-1为624bp,与报道的国外TIMP-1基因序列同源.经SDS-PAGE和Western blot表明,表达的融合蛋白MBP-TIMP-1分子质量为66Ku,具有TIMP-1的抗原性,并可进行亲和层析纯化.结论:克隆了中国人TIMP-1基因,表达和纯化了具有免疫原性的融合蛋白MBP-TIMP-1,他将对肝纤维化的诊断有一定作用.
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肝纤维化的无创性诊断
肝组织活检是目前肝纤维化疾病诊断的金指标.但具有创伤性,近年来,无创性诊断方法的确立成为国内外学者关注的热点问题.实验室及临床研究结果表明血清透明质酸、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、基质金属蛋白酶及其组织抑制因子以及转化生长因子-β1等细胞因子与该病密切相关.本文对目前国内外各项无创性诊断的研究进展进行综述.
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基质金属蛋白酶及其抑制物与实验性肝纤维化
肝纤维化的主要病理变化是细胞外基质(extracellular matrix,ECM)在肝脏中过多沉积.肝脏ECM的代谢主要由基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)及其抑制因子基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissueinhibitor of metalloproteinases,TIMPs)调节,MMPs促进ECM的降解,而TIMPs通过抑制MMPs阻止ECM的降解,从而形成和促进肝纤维化,MMPs与TIMPs不平衡被认为是ECM沉积的重要因素.近年来,其性质及其在肝纤维化发生、发展过程中的具体机制在体外肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)培养,肝纤维化动物模型研究中得到进一步阐明.
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基因表达谱芯片技术筛选肝再生增强因子反式调节基因
目的:为了阐明人肝再生增强因子(augmenter of liverregeneration,ALR)的表达对于肝细胞基因表达谱的影响,我们应用基因芯片技术,对于转染和未转染的HepG2细胞进行了分析.方法:从HepG2细胞RNA中用反转录聚合酶链反应法(RT-PCR)扩增出ALR编码区DNA,常规分子生物学技术构建ALR的真核表达载体pcDNA3.1(-)-ALR,利用脂质体转染技术转染HepG2细胞,ALR的表达以Western blot杂交技术证实.从转染和非转染细胞HepG2种提取总mRNA,逆转录为cDNA,并进行基因芯片技术分析.结果:经过限制性内切酶分析和序列测定,证实pcDNA3.1(-)-ALR构建正确.ALR在HepG2细胞中的表达以Westernblot杂交技术得到证实.对于ALR重组表达载体和空白载体转染的HepG2细胞的基因表达谱,利用基因芯片技术进行分析.结果表明,2种基因的表达水平上调,24种基因的表达水平下调.这些基因包括淀粉酶α、肿瘤坏死因子受体、金属蛋白酶1组织抑制因子、性激素相关蛋白等基因,相信这些类型的基因在ALR所发挥的生物学效应起到重要的作用.结论:ALLR于肝细胞基因表达谱存在一定影响;基因芯片技术是分析蛋白反式调节基因表达谱的重要技术途径,有助于了解ALR对肝细胞和其他生物学功能的调节作用.
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基质金属蛋白酶-9和金属蛋白酶组织抑制因子-1与急性心梗后左室重构关系的临床研究
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肿瘤坏死因子α和白细胞介素6对大鼠肺成纤维细胞基质金属蛋白酶及其抑制因子表达的影响
基质金属蛋白酶/组织抑制因子(MMPs/TIMPs)作为调节细胞外基质代谢的重要酶类系统,参与组织器官纤维化的发生,其基因表达与多种细胞因子及生长因子密切相关[1].由于体内细胞因子是作为一个极其复杂的网络系统在起作用,为了解单一及多个细胞因子对MMPs/TIMPs基因表达的影响,本实验选用肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)以及二者联合作用于大鼠肺成纤维细胞,观察其MMP-2、9及TIMP-1基因表达的变化情况,探讨TNF-α和IL-6在特发性肺纤维化(IPF)发病中的作用机制,从而为该病提供新的临床治疗策略.
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基质金属蛋白酶2、9及基质金属蛋白酶组织抑制因子1在肺间质纤维化实验中的表达
细胞外基质(ECM)合成和降解失衡是引起ECM积聚导致肺间质纤维化的重要病理生理因素。基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制物(TIMPs)是调节ECM降解的重要体系。我们以博莱霉素诱导的肺间质纤维化大鼠为模型,观察肺间质纤维化发生过程中基质金属蛋白酶2、9(MMP-2、 MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)基因表达的变化,探讨MMP-2、9和TIMP-1在肺间质纤维化发病中的作用。 材料与方法 (1) 动物模型制备:雌性Wistar大鼠60只(沈阳军区医学专科学校动物实验中心提供),体重(215±20)g,随机分为:模型组、对照组,每组各30只。模型组吸入乙醚麻醉后,颈前暴露气管,一次性气管内注入0.4%博莱霉素A5(天津华北制药厂)生理盐水注射液(5 mg/kg),制成动物模型。然后分别于第1、3、7、14、28天处死6只大鼠,心脏取血。对照组同样方法注入等量生理盐水,同样天数各处死6只。(2)酶谱分析:根据刘煜等[1]介绍的方法,对标本进行MMPs酶谱分析。(3) Northern Blot:取5 μg大鼠肺组织总RNA,行RT-PCR,引物序列为:MMP-2:5′-AGTGGGACA AGAATCAGATCACAT-3′(上游), 5′-TCGGTGGTACAGCTGT TGTAAGAG(下游);MMP-9:5′-AAGCAGACATTGTCAT CCAGTTTG-3(上游),5′-GACAGAAACCCCACTTCTTGTCAG-3′(下游);TIMP-1:5′-CTCATCGCGGGCCGTTTAAG-3(上游),5′-GAAGGCTTCGGGTCATCGAG-3′(下游),geneclean纯化回收PCR产物制备探针,随机引物法行α-32P-dCTP标记。20 μg RNA 样品经甲醛变性电泳、转入尼龙膜、65 ℃预杂交1~3 h、65 ℃杂交18 h,常规洗膜及放射自显影。
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基质金属蛋白酶组织抑制因子1对小鼠成纤维细胞增殖和细胞外基质的影响
肺纤维化的主要病理改变为肺成纤维细胞(LF)聚积和细胞外基质(ECM) 积聚.LF在肺纤维化过程中有着重要的作用.LF几乎能合成全部有ECM降解活性的基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制剂(TIMPs),特别是TIMP-1[1],当LF在静止状态下只能合成较低水平的TIMP-1,但其被激活后表达、合成并分泌大量的TIMP-1,阻止ECM的降解,特别是其中胶原的降解,从而促进肺纤维化的形成和发展.因此,我们将人的正义和反义TIMP-1(h TIMP-1)全长cDNA导入小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)中以期观察其对NIH3T3细胞增殖及细胞外基质成分表达的影响.
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基质金属蛋白酶及其抑制剂TIMPs在心肌间质重塑中的作用
心脏重塑是各种病因的进展性充血性心力衰竭的共同病理机制.心脏重塑不仅表现为心肌细胞的凋亡、坏死、肥大、延长和心肌肥厚,还表现为心肌间质纤维胶原合成和降解之间动态平衡的破坏.基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是降解细胞外基质(ECM)成分的主要酶系,金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)是基质金属蛋白酶的内源性特异性抑制剂.近年的研究发现,MMPs和TIMPs在调节心肌细胞外基质的更新中具有重要的作用,本文就MMPs、TIMPs及与心肌细胞外间质重塑的关系作一综述.
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外源性bFGF对深Ⅱ度烫伤大鼠创面MMP-2、MMP-7和TIMP-2的影响
目的:观察大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合过程中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-7与金属蛋白酶组织抑制因子-2(tissueinhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2)的变化以及创面外用bFGF对两者的影响,认识基质金属蛋白酶与抑制因子对创面愈合的作用.方法:78只Wistar大鼠随机分为正常对照、单纯烫伤和bFGF治疗三组.利用大鼠30%深Ⅱ度烫伤模型,于伤后3h、6h、1d、3d、7d和14d采取创面皮肤标本,用免疫组织化学染色检测创面组织真皮内成纤维细胞MMP-2、MMP-7和TIMP-2的表达变化情况.结果:烫伤大鼠创面中细胞外基质活动影响皮肤的胶原沉积.伤后1d MMP-2/MMP-7表达增多,随后略有下降,7d时再次达到高峰.伤后TIMP-2的表达与前者的表达一致.局部外用bFGF后,创伤初期(3h~6h)组织中MMP-2/MMP-7的表达无显著变化,1d~14d,MMP-2/MMP-7和TIMP-2阳性表达强于对照组.结论:MMPs和TIMPs的表达变化是组织修复的重要步骤,bFGF加速创面愈合的过程与MMP-2/MMP-7和TIMP2的表达密切相关.
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基质金属蛋白酶及其抑制因子与腰椎间盘退变关系的研究进展
腰椎间盘突出是临床上引起腰痛的主要原因之一.椎间盘突出的发生基础是椎间盘退变,而退变常伴随着椎间盘基质成分合成和降解的失衡,在影响基质降解的诸多因素中,基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)和金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPs)失衡是导致基质过度降解的根本原因[1].MMPs和TIMPs在椎间盘退变中的作用已成为近年来研究的重点之一,现就其近年研究进展作一综述.
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基质金属蛋白酶与下肢静脉曲张血管重塑
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是一类降解细胞外基质(extracellular matrixc,ECM)的蛋白水解酶家族,其表达受多种因素调控,且作用底物种类之繁多.MMPs及其基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)通过调节ECM合成与降解的动态平衡,以维持ECM的正常结构与功能[1].
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原发性胆囊癌中MMP-2/TIMP-2比值的临床价值研究
原发性胆囊癌临床过程隐匿,侵袭性强,转移早,预后不佳,如何准确判断其恶性程度和浸润转移倾向,以指导临床,备受人们关注.基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)及其组织抑制因子(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)是一对作用于细胞外基质(extracellularmetrix,ECM)的蛋白[1],与转移关系密切.本研究应用免疫组化方法结合图像分析技术,检测原发性胆囊癌及胆囊息肉样病变MMP-2、TIMP2相对表达量,计算MMP-2/TIMP-2比值,探讨此比值与胆囊癌及其各临床病理参数的关系.
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基质金属蛋白酶9及组织抑制因子1在妊娠高血压综合征胎盘滋养细胞中表达及作用
妊娠高血压综合征(简称妊高征)是导致孕产妇和围产儿死亡的主要原因之一.对妊高征的病因和发病机理的研究,一直是产科的重要课题.近年来研究发现基质金属蛋白酶9(Matrix Metalloproteinase-9,MMP-9)与滋养细胞的浸润行为关系十分密切,而组织抑制因子1(Tissue Inhibitor of Metalloproteinases-1,TIMP-1)可以通过与MMP-9的结合抑制其活性[1].本研究拟通过检测MMP-9及其TIMP-1在妊高征患者胎盘中的表达,探讨二者在妊高征发病机制中的作用.
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基质金属蛋白酶与卵巢肿瘤
基质金属蛋白酶(MMPs)是一类内源性的蛋白酶家族.它的降解受到金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)蛋白家族以及其他抑制剂的调控.正常情况下,MMPs的活性受TIMPs的严格控制,使得MMPs能适度降解细胞外基质,维持组织、细胞正常功能.一旦MMPs 和TIMPs 平衡失调,将可能导致许多与MMPs 功能紊乱有关的病理变化,如肿瘤细胞的增生、浸润和转移等.
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基质金属蛋白酶及其抑制剂与慢性肾脏病
肾小球硬化(glomerulosclerosis)及肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis)是所有肾脏疾病进展至终末期肾病的共同通路,其主要表现是细胞外基质(extracellular matrix,ECM)在肾小球及肾间质异常堆积,导致有效肾单位丧失和肾功能进行性下降[1].近年来,ECM降解机制日益受到重视,其中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)及金属蛋白酶组织抑制因子 (tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)功能紊乱与ECM过多堆积密切相关.现就MMPs及TIMPs与肾脏疾病的关系综述如下.
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心室重构相关生化标志物的研究进展
心室重构是导致冠心病、心肌病等进行性发展,引起恶性心律失常、心力衰竭甚至心源性猝死的重要因素.其进展过程中伴随的相关生化标志物改变可帮助临床医师及早识别无临床症状患者心室重构的发生,并为处于不同疾病阶段的患者提供积极的个体化治疗方案,对延缓心室重构的进展,改善患者的预后发挥着不可估量的作用.近年来,与心室重构相关的生化标志物的研究是心血管为活跃的研究领域之一,并取得了丰硕成果.现对近年来心室重构相关生化标志物的研究进展予以综述.