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我国肝干细胞研究取得重大进展
科技日报上海7月18日电通过4年攻关,第二军医大学基础部细胞生物学教研室主任胡以平教授课题组,实现了小鼠成纤维细胞向肝干细胞分化的重编程,并证明了这一方法所产生的肝干细胞,与活体内自然存在的肝干细胞具有相似的生物学特性。今天,国际权威学术刊物《细胞·干细胞》在线发表了相关研究成果。该课题组于兵博士和何志颖副教授为论文的共同第一作者。
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基质金属蛋白酶组织抑制因子1对小鼠成纤维细胞增殖和细胞外基质的影响
肺纤维化的主要病理改变为肺成纤维细胞(LF)聚积和细胞外基质(ECM) 积聚.LF在肺纤维化过程中有着重要的作用.LF几乎能合成全部有ECM降解活性的基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制剂(TIMPs),特别是TIMP-1[1],当LF在静止状态下只能合成较低水平的TIMP-1,但其被激活后表达、合成并分泌大量的TIMP-1,阻止ECM的降解,特别是其中胶原的降解,从而促进肺纤维化的形成和发展.因此,我们将人的正义和反义TIMP-1(h TIMP-1)全长cDNA导入小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)中以期观察其对NIH3T3细胞增殖及细胞外基质成分表达的影响.
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消疤胶囊对小鼠体外培养成纤维细胞生长的影响及其机理研究
增生性疤痕和疤痕疙瘩一直是整形外科的一大难题.人们曾应用手术切除、免疫疗法、类固醇激素、放射线等方法来治疗增生性疤痕和疤痕疙瘩,但效果并不十分理想.应用中药来防治增生性疤痕和疤痕疙瘩是一种新的尝试,并已有多种方剂应用于临床.其中浙江省消防总队医院研制的消疤胶囊经初步临床应用具有抑制疤痕增生的作用,但其作用机制尚需进一步的实验研究.本文应用体外培养的小鼠成纤维细胞来观察消疤胶囊对成纤维细胞增殖的影响,以期进一步阐述作用机理.
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促进诱导多能干细胞向神经系统细胞分化的研究现状
诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iiPSC)是一种应用相关转录因子将细胞重编程、逆转其发育潜能而得到的类似于胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESC)的一种多能性干细胞.2006年,Takahashi与Yamanaka[1]将Oct3/4、Sox2、Klf4和c-Myc 4种因子转移至小鼠成纤维细胞,首次获得iPSC.由于其来源于自身细胞,自体移植时不涉及伦理问题,无免疫原性,在替代治疗、药物筛选、疾病建模等方面均可以发挥潜在的巨大优势[2].iPSC作为一种多能干细胞,在适当条件下可实现神经分化,即定向分化为神经干细胞(neural stem cell,NSC)、神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞等组成神经系统的各种细胞[3,4],因而成为治疗神经系统疾病的理想选择.有学者总结了经典的胚胎干细胞神经分化的方法[5-7],这也成为确立iPSC神经分化方法的重要参考.
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电纺合成聚偏二氟乙烯补片体外细胞毒性及细胞相容性研究
目的 评价人工合成聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride,PVDF)盆底补片的细胞毒性及细胞相容性.方法 将小鼠成纤维细胞(L929细胞)与A组(空白对照组)、B组(乳胶手套组)、C组(聚丙烯组)和D组(PVDF组)浸提液共培养24、48、72 h.采用倒置显微镜观察细胞形态学变化,四唑盐MTS比色法检测细胞增殖率(FGR)并进行毒性分级,流式细胞仪检测72 h细胞凋亡情况.将L929细胞种植于PVDF材料上,扫描电镜观察第1、3、7、14天时细胞生长情况.结果 A组、C组和D组24、48、72 h细胞生长良好,B组见大量死细胞,细胞层几乎完全破坏;B组、C组和D组24、48、72 h细胞毒性分别为4级、1级和0~1级;A组、C组和D组72 h存活细胞比例分别为(92.43±1.24)%、(92.23±0.64)%和(92.80±0.89)%,三组比较,差异无统计学意义(P>0.05);扫描电镜提示,细胞在PVDF材料上可发生黏附增殖.结论 PVDF材料补片对L929细胞不具有细胞毒性,并具有良好的体外细胞相容性.
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关键词:
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艾拉莫德对小鼠成纤维细胞分泌胶原的影响
目的 观察艾拉莫德对小鼠成纤维细胞3T6细胞分泌胶原的影响.方法 利用MTT法得到艾拉莫德对3T6细胞的半数毒性浓度约为1142.6mg/L,终给药浓度选取334.38mg/L(二甲基亚砜浓度为1μl/256μl)、167.4mg/L、83.7mg/L、41.85mg/L,并以未加药组作为空白对照,分别在给药后12h、24h、36h、48h取细胞上清,采用氯胺T法检测其中细胞分泌的胶原.结果 药物浓度334.38mg/L组在给药后12h、24h、36h与空白对照组比较胶原浓度增大(P<0.05),167.4mg/L和83.7mg/L组在给药后24h、48h与空白对照组比较胶原浓度增大;41.85mg/L组在给药后12h、24h与空白对照组比较胶原浓度降低(P<0.05).结论 艾拉莫德对小鼠成纤维细胞3T6细胞分泌胶原的影响具有时间和药物浓度依赖性,高浓度可促进胶原的分泌,低浓度药物41.85 mg/L组可减少细胞胶原的分泌.
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医用创面胶和吻合胶对小鼠成纤维细胞L929毒性的研究
目的 探讨医用创面胶和吻合胶对小鼠成纤维细胞的间接毒性.方法 通过小鼠成纤维细胞L929检测两种胶的细胞毒性.采用CCK-8法检测两种医用胶对细胞活性的影响、细胞DAPI荧光染色检测对细胞分裂生长的影响、FITC/PI凋亡染色检测对细胞凋亡的影响.结果 创面胶组和吻合胶组小鼠成纤维细胞L929活性比较差异无统计学意义(P>0.05),但均低于对照组(P<0.05).3组荧光染色细胞计数、总面积占比和正常细胞存活率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 医用创面胶和吻合胶能够较明显降低周边毗邻细胞活性且降低程度相当,但不能阻止细胞正常生长,更不能诱发细胞凋亡.
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我国肝干细胞研究取得重大进展肝干细胞治疗肝脏疾病将成为可能
本刊讯(通讯员 肖鑫 王泽锋)7月18日,第二军医大学基础部细胞生物学教研室主任胡以平教授课题组,通过4年艰辛攻关,实现了小鼠成纤维细胞向肝干细胞分化的重编程,并证明了通过这种重编程方法所产生的肝干细胞,具有与活体内自然存在的肝干细胞相似的生物学特性.相关研究成果发表在今天网络在线出版的国际权威学术刊物《细胞·干细胞》上.
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三种贵金属烤瓷合金与高糖对小鼠成纤维细胞L-929增殖的影响
背景:糖尿病患者这一特殊群体口腔环境较为特殊,关于口腔修复材料在这类患者应用的安全性研究较少见报道.目的:检测3种贵金属烤瓷合金与高糖对体外培养的小鼠成纤维细胞L-929增殖的影响.方法:将89%金合金、74%金合金、银钯合金3种烤瓷材料浸泡在不同糖浓度(11.1,22.2,33.3 mmol/L)的培养液中浸提,将所得的浸提液与小鼠成纤维细胞L-929共培养.同期设立空白对照.结果与结论:L-929在不同贵金属烤瓷合金和不同糖浓度的细胞培养液中的增殖活性不同,24,72 h两因素交互作用的P值均小于0.05.与阴性对照组相比,22.2 mmol/L糖浓度下89%金合金促进细胞的增殖(P=0.004),银钯合金则抑制细胞的增殖(P < 0.001),74%金合金在不同糖浓度的培养液中与阴性对照组相比其细胞的增殖活性差异无显著性意义.结果表明,上述3种材料中74%金合金在不同糖浓度下对细胞增殖的影响小.
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新型鼻腔填塞材料聚乙二醇双丙烯酸酯复合物水凝胶的细胞相容性
背景:前期研究发现聚乙二醇双丙烯酸酯和壳聚糖形成的复合物可生物降解吸收,具有抗炎消肿能促进创面愈合作用,且生物相容性好,然而该复合物质地较脆,鉴于鼻腔解剖结构,需要一种具有力学支撑性能的材料来克服这种缺陷.目的:观察新型可降解吸收鼻腔填塞材料聚乙二醇双丙烯酸酯复合物水凝胶的细胞相容性.方法:通过光交联将聚乙二醇双丙烯酸酯、壳聚糖、聚乙烯醇材料复合,形成聚乙二醇双丙烯酸酯复合物水凝胶,根据国际通行医疗器械生物学评价标准采用直接解触法及间接浸提法评价其细胞相容性.①直接解触法:将聚乙二醇双丙烯酸酯复合物水凝胶与小鼠成纤维细胞L929共培养24 h,观察形态变化;②间接浸提法:分别以100,50μL聚乙二醇双丙烯酸酯复合物水凝胶浸提液及100μL RPMI1640培养液培养小鼠成纤维细胞L929,CCK-8法检测培养1-3 d的增殖及细胞毒性.结果与结论:①直接解触法:材料周围细胞形态呈伴突起的梭形或星形的扁平状结构,贴壁性生长,细胞饱满且折光性强,整体呈生长趋势,可见该材料生物相容性良好;②间接浸提法:随着时间的增加,含复合物水凝胶浸提液组细胞数量增加,细胞相对增殖率逐渐增加,细胞毒性为0至1级;③结果表明:聚乙二醇双丙烯酸酯复合物水凝胶材料具有良好的细胞相容性.
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贻贝粘蛋白创面修复敷料体外细胞毒性的检测方法
背景:在贻贝粘蛋白创面修复敷料的体外细胞毒性检测中,由于蛋白分子表面带正电荷,1∶9的浸提比会使细胞聚团而导致测定产生误差,影响测定结果。
目的:在已有标准的基础上,根据贻贝粘蛋白特殊的性质及使用状态,改进贻贝粘蛋白创面修复敷料的浸提比例或前处理方法。
方法:①浸提液法:将贻贝粘蛋白创面修复敷料与细胞培养液分别以1∶9、1∶131浸提比例制备浸提液,分别以贻贝粘蛋白创面修复敷料浸提液、天然乳胶浸提液、高密度聚乙烯浸提液及细胞培养液培养L929小鼠成纤维细胞。②直接接触法:分别以蒸馏水、贻贝粘蛋白创面修复敷料溶液、二甲基亚砜及细胞培养液培养L929小鼠成纤维细胞。
结果与结论:采用浸提比1∶9测定样品体外细胞毒性时,细胞产生聚团作用,不适用于样品毒性的检测;调整浸提比为1∶131后,絮凝作用和细胞聚团现象明显降低,提高了检测结果的可信度,显示样品无细胞毒性。直接接触法显示样品无细胞毒性。采用经调整过的浸提液法或直接接触法均可适用于贻贝粘蛋白创面修复敷料体外细胞毒性的检测。 -
EPS8与肿瘤关系的研究进展
1 EPS8的发现,结构特点及其作用表皮生长因子受体通路底物8(EPS8)是细胞内信号通路底物.1993年Fazioli[1]在过表达表皮生长因子受体(EGFR)的小鼠成纤维细胞(NIH-3T3)中,克隆出EGFR受体通路中受到酪氨酸磷酸化的底物,通过构建这些底物的cDNA文库,发现第8号克隆含有一段1.6 kb片段,用ORF(开放阅读框)确定其为一种新蛋白,并取EGFR-pathway-substrate no.8 的首字母命名为EPS8.该蛋白在进化上高度保守,在果蝇、线虫、非洲蟾蜍、人类中均有表达.编码人的EPS8基因定位于染色体的12q23.q24,大约含有821个氨基酸,相对分子量为97 kD.有研究发现[2],EPS8具有3个基因类似物成员分别为EPS8L1、EPS8L2、EPS8L3,三者的线性拓扑学结构一致.
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裸鼹鼠成纤维细胞原代培养方法的建立
目的 建立裸鼹鼠成纤维细胞的原代培养方法,研究裸鼹鼠成纤维细胞的生长特性.方法 结合传统的消化培养法和组织培养法进行裸鼹鼠和小鼠成纤维细胞原代培养,CCK-8(cell counting kit)细胞计数比较研究两种物种成纤维细胞的生长速率和细胞周期.以不同浓度接种裸鼹鼠肝脏成纤维细胞,CCK-8计数细胞24 h、72 h、96 h、144h细胞密度.结果 结合消化培养法和组织培养法两种细胞原代培养方法,裸鼹鼠及小鼠成纤维细胞的生长状态良好.裸鼹鼠成纤维细胞的增殖速率显著高于小鼠成纤维细胞,处于对数生长期的细胞比例与小鼠比较,显著较高.以1.5×104/ml以上的浓度接种裸鼹鼠成纤维细胞能使细胞在两天内进入细胞生长对数期.结论 结合消化培养法和组织培养法的原代培养方法能提高细胞原代培养的效率,裸鼹鼠成纤维细胞的增殖能力显著高于小鼠.
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中文文摘
1.牙科浸泡着色氧化锆陶瓷的细胞毒性研究/石连水…//实用口腔医学杂志.-2015,31(1).-20-22
采用浸泡着色的方法制备 NH4 VO3、FeCl3、Co (NO3)3、Ni(NO3)3、MoCl35种过渡金属着色的氧化锆3Y-TZP 瓷块,用瓷块浸提液体外培养小鼠成纤维细胞(L-929)3 d,观察细胞形态并用 MTT 法测试吸光度值评价各着色瓷块的细胞毒性。结果:各组细胞培养3 d 后生长良好,形态正常,各实验组的毒性评级为0~I 级。结论:5种染色液浸泡着色所得氧化锆陶瓷无细胞毒性。 -
新型碳纤维增强复合材料的细胞毒性评价
目的体外评价新型碳纤维增强复合材料的细胞毒性.方法选用建系的L929成纤维细胞进行体外细胞毒性实验,评价新型碳纤维增强复合材料对细胞增殖的影响.结果材料浸提液与L929成纤维细胞作用后的细胞增殖度为第2d 104%,第4d 104%,第7d 77%,毒性判定为1级,有良好的细胞相容性.结论新型碳纤维增强复合材料未见明显的细胞毒性作用.
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膜糖脂与恶性肿瘤
膜糖脂是存在于细胞质膜和内膜的糖脂,并以鞘糖脂类的神经节苷脂(Ganglioside,Gls)为主。近年来的研究表明,不论是化学致癌物诱导的、还是病毒癌基因转化的肿瘤细胞,其膜糖脂的组成、数量以及在膜上的分布均发生特异性的改变。现将膜糖脂与恶性肿瘤的关系作一简要综述。1 恶性肿瘤中膜糖脂的异常表达1.1 膜糖脂合成受阻 Gls合成受阻的原因是某一种糖基转移酶的活性由于致癌转化而降低或丧失。结果是正常细胞中应有的Gls减少或丧失,同时还有前体物质的堆积[1]。在早期的研究中,比较了培养的正常成纤维细胞与病毒转化的成纤维细胞的鞘糖脂组成,结果发现转化细胞的糖脂谱较为简单,这是由于一个或几个糖基转移酶受阻,不能(或不能完全)合成较高级糖脂的缘故。典型的例子包括仓鼠BHK-21细胞中GM3合成受阻(唾液酶转移酶I被阻断)。小鼠成纤维细胞中较高级Gls的合成受阻(GalNAc转移酶被阻断)。
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胚胎干细胞饲养层培养的改良法
1981年Martin[1]等首次分离培养了小鼠的胚胎干细胞(embyonic stem cell)后,胚胎干细胞已成为当今生物医学热门和为前沿的研究课题之一,而饲养层细胞对于胚胎干细胞的增殖和维持未分化状态具有重要的作用.目前,多熟研究采用小鼠成纤维细胞作为饲养层,也有用人胚胎成纤维细胞做饲养层[2].用传统的方法制备饲养层,耗时较长,成纤维维细胞的质与量不稳定,为此,对原方法进行了改良,力求在较短时间内,培养出优质高产的小鼠成纤维细胞.
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小鼠Omi/HtrA2基因启动子萤光素酶报告载体的构建及转录活性分析
目的:通过构建小鼠Omi/HtrA2基因启动子萤光素酶报告载体并进行转录活性分析,深入研究小鼠Omi/HtrA2转录调控发生的机制。方法:本实验构建覆盖小鼠Omi/HtrA2基因5’侧翼区(-1205 bp~+93 bp)区域的一系列启动子萤光素酶报告基因载体,将其转染至小鼠成纤维细胞NIH3T3、大鼠心肌细胞H9c2和人胚肾细胞HEK293,并进行萤光素酶活性检测。结果:小鼠Omi/HtrA2启动子在-1205 bp~-838 bp和-146 bp~+93 bp区域活性高,生物信息学分析这些启动子区域可能存在HSF1、SP1、AP、p53等转录因子结合位点。结论:初步证实-1205 bp~-838 bp和-146 bp~+93 bp区域为CFL2启动子的活性区域。
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纳米羟基磷灰石膜复合材料与小鼠成纤维细胞的相容性
目的 探讨纳米羟基磷灰石膜聚氨酯复合材料(nano-Hydroxyapatite/polyurethane,nHA/PU) 与小鼠成纤维细胞(L929)的生物相容性.方法 将小鼠成纤维细胞与纳米羟基磷灰石膜聚氨酯复合材料体外复合培养,并设单独细胞培养的阴性对照和细胞与传统材料复合培养的对照组,倒置相差显微镜、扫描电镜行形态学观察,计数接种后的黏附情况,流式细胞仪分析接种到材料上的细胞的生长周期,CCK-8法检测材料对细胞增殖影响.结果 小鼠成纤维细胞在纳米羟基磷灰石膜聚氨酯复合材料上良好的黏附、生长、增殖,流式细胞仪分析接种到材料上的细胞,其细胞周期与空白对照组和传统对照组对比差异均无统计学意义(P>0.05),CCK-8检测显示材料对细胞增殖的影响小于传统材料.结论 纳米羟基磷灰石膜聚氨酯复合材料具有良好的细胞相容性,可望作为组织工程人工肛门括约肌的外层套囊材料.