首页 > 文献资料
-
HIF-1α在博来霉素致大鼠肺纤维化中的作用
目的探讨博来霉素(bleomycin,BLM)致大鼠肺纤维化机制.方法Ⅰ体内试验:雄性SD大鼠,体重220～250 g,60只,随机分成对照组和BLM组(每组50只),用一次性气管内滴注BLM(5 mg/kg,2 mL/kg)的方法复制大鼠肺纤维化模型,对照组滴注生理盐水.
关键词： 肺纤维化 缺氧诱导因子(HIF)-1α 大鼠 肺成纤维细胞 -
温肺通痹颗粒对肺成纤维细胞增殖及细胞周期的影响
目的：通过离体细胞实验，以 MRC -5人胚肺成纤维细胞为研究对象，检测温肺通痹颗粒对 MRC -5细胞的增殖及细胞周期的影响。方法将温肺通痹颗粒配制成终浓度为0.031、0.125、0.5、2、8 mg/ ml 的溶液，用 MTT 法测定细胞存活率及细胞存活周期。结果温肺通痹颗粒与MRC -5人胚肺成纤维细胞共孵育对细胞的增殖具有抑制作用，且作用效果与药物浓度及共孵育时间具有显著相关性；温肺通痹颗粒与 MRC -5人胚肺成纤维细胞共同孵育，随着药物浓度的增大和作用时间的延长，G1期细胞的比例逐渐升高，G2期与 S 期相应降低，与对照组比较差异具有统计学意义，且呈现明显量效关系。结论温肺通痹颗粒对 MRC -5人胚肺成纤维细胞具有明显抑制增殖的活性；温肺通痹颗粒对细胞的毒性非常小；温肺通痹颗粒可能具有稳定肺成纤维细胞，并抑制其大量增殖的作用。
-
转化生长因子β1刺激大鼠肺成纤维细胞增殖的体外研究
目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠肺成纤维细胞体外增殖的影响.方法:体外原代及传代培养SD大鼠肺成纤维细胞,传至第4代,进行细胞增殖实验.细胞随机分为5组,即无血清细胞基础培养液(DMEM)组、分别含10.0,5.0,2.5,1.25 μg·L-1 TGF-β1 DMEM组.分别在24,48,72 h3个不同刺激时间点应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)观察SD大鼠肺成纤维细胞增殖情况.进行统计学方差分析及多重比较,探讨TGF-β1刺激大鼠肺成纤维细胞增殖的佳浓度和佳时间点.结果:24h时间点各组数据经方差分析,差异无统计学意义.48 h时间点各组数据结果进行非参数检验,P＜0.05,差异有统计学意义.72 h时间点各组数据结果进行方差分析,P＜0.05,差异有统计学意义；进一步进行多重比较:与空白组比较,TGF-β1 10.0,2.5 μg· L-1组(P＜0.05),TGF-β1 1.25,2.5 μg·L-1组(P＜0.01)；其余各组比较均无显著差异.结论:TGF-β1刺激质量浓度2.5μg·L-1,作用于大鼠肺成纤维细胞72 h,细胞增殖显著.
-
蛇床子素抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖和胶原合成的机制研究
目的:探讨蛇床子素对转化生长因子-β1 (TGF-β1)诱导的小鼠肺成纤维细胞(MLF)增殖、胶原合成和表型转化的影响并探讨机制.方法:使用乳酸脱氨酶(LDH)试剂盒、细胞增殖-毒性(CCK-8)试剂盒、细胞计数法、3H-脯氨酸掺入实验检测各组细胞的死亡、增殖、胶原合成能力;Western blot技术检测胶原Ⅰ、胶原Ⅲ、Rac-1蛋白表达水平.细胞免疫荧光检测波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在细胞内的定位及表达水平.DCFH-DA检测细胞内活性氧水平.结果:0.1-50μmol/L的蛇床子素对MLF没有毒性.10-50μmol/L的蛇床子素能够浓度依赖性地抑制TGFβ-1诱导的MLF增殖、胶原合成、α-SMA、Rac-1蛋白表达升高及ROS生成.结论:蛇床子素可以浓度依赖性地抑制TGF β-1诱导的肺成纤维细胞的增殖、胶原蛋白合成和表型分化,其可能机制与抑制Rac-1表达、活性氧(ROS)生成有关.
-
虎杖对肺纤维化大鼠肺成纤维细胞MMP-2,TIMP-1 mRNA表达的影响
目的:观察虎杖对大鼠肺纤维化形成的影响,并探讨其作用机制.方法:将雄性SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、阳性对照组、虎杖预防组、虎杖3 d治疗组、7 d治疗组和14 d治疗组.除正常对照组外其余各组均气管内注射博莱霉素诱导肺纤维化.阳性对照组造模当天予0.5%地塞米松4 mL·kg~(-1)·d~(-1)灌胃;正常对照组和模型组于造模后当天开始灌胃生理盐水4 mL·kg~(-1)·d~(-1);虎杖预防组、虎杖3,7,14 d治疗组分别在造模前2 d、造模后第3,7,14天开始胃饲受试药物4 mL·kg~(-1)·d~(-1)(含生药量1 g·mL~(-1)),进行动态观察.HE,Masson染色行肺组织病理学检查,胰酶消化法行肺成纤维细胞培养,并用RT-PCR法检测MMP-2,FIMP-lmRNA的表达.结果:与模型组比较,阳性对照组、虎杖预防组及各治疗组,肺泡炎、肺纤维化程度及胶原沉积均明显减轻.肺成纤维细胞MMP-2mRNA表达除第42天与模型组相似,无统计学意义,其余之前的时间点均较模型组减弱(P<0.05或P<0.01);TIMP-1mRNA表达也均较模型组减弱(P<0.05或P<0.01),其持续抑制时间更长,直至第42天.结论:虎杖通过抑制不同时期肺成纤维细胞MMP-2,TIMP-1mRNA的异常高表达以减轻肺泡炎及肺纤维化的程度,可能是其延缓肺纤维化的作用机制之一.
-
养阴清肺方含药血清对60Co照射后肺成纤维细胞转化生长因子β1及α-肌动蛋白表达的影响
目的 探讨养阴清肺方治疗放射性肺纤维化的可能作用机制. 方法 将20只大鼠随机分为养阴清肺组[予养阴清肺方浓缩液(浓度0.97 g/ml)1 ml/100 g]、激素组[予醋酸泼尼松龙片水溶液(浓度0.125g/ml)1 ml/100g]、养阴清肺加激素组(养阴清肺方浓缩液、醋酸泼尼松龙片水溶液各0.5ml/100g)、模型组和未照射对照组(均给予生理盐水1 ml/100 g),每天早晚各灌胃1次,连续3天,第4天早上给药1h后经腹主动脉取血制备含药血清.取人胚肺成纤维细胞接种于6孔板内,分为未照射对照组、模型组、养阴清肺组、激素组、养阴清肺加激素组,除未照射对照组外其余各组用钴60射线照射,剂量为8Gy.照射后将各组上清液吸弃,并分别换上相应的含药血清培养液,于24、48、72h检测转化生长因子β1(TGF-β1)含量.细胞培养同前,于照射后24h检测肺成纤维细胞α-肌动蛋白(α-SMA)的表达. 结果 模型组、养阴清肺组、激素组、养阴清肺加激素组在各个时间点比较TGF-β1表达水平均较未照射对照组显著升高(P＜0.05).在24h时激素组、养阴清肺加激素组TGF-β1表达水平较模型组降低,在48h时养阴清肺组、养阴清肺加激素组TGF-β1表达水平较模型组降低,72 h时养阴清肺组、激素组TGF-β1表达水平较模型组降低(P＜0.05).与模型组比较,激素组、养阴清肺组、养阴清肺加激素组α-SMA表达均明显降低(P＜0.05);并且养阴清肺加激素组α-SMA表达明显低于养阴清肺组和激素组(P＜0.05). 结论 养阴清肺方能抑制照射后肺成纤维细胞分泌TGF-β1和α-SMA表达,可能是其治疗放射性肺纤维化的作用机制之一.
-
成年小鼠肺成纤维细胞分离纯化及原代培养
成年小鼠肺成纤维细胞的原代培养是获得肺组织后在体外进行的培养,能反映体内的生长特性,对研究细胞的生长分化及其生理病理变化的机制具有极其重要的价值,具有细胞系所无法比拟的优点.本文主要探讨合理的成年小鼠肺成纤维细胞的分离纯化培养方法及其生长曲线特点.1材料与方法1.1试剂:高糖DMEM(Gibco公司),胎牛血清(杭州天杭公司),胰蛋白酶(Sigma公司),波形蛋白vimentin、α-平滑肌肌动蛋白α-SMA抗体和免疫组化SABC试剂盒(武汉博士德公司).1.2实验动物:清洁级雄性成年昆明小鼠(25±5)g[华中科技大学同济医学院实验动物中心提供,许可证号:SCXK(鄂)2008-0005].
-
ECM支架构建肺成纤维细胞三维培养模型研究
应用组织工程技术建立新型稳定、可靠的肺成纤维细胞(LF)三维培养模型的方法.应用细胞外基质(ECM)支架为成纤维细胞培养载体,建立成纤维细胞三维培养体系;并同时分别加入IL-13单克隆抗体、TGF-β及LPS.应用细胞荧光免疫、细胞计数及扫描电镜观察肺成纤维细胞三维培养的生长特性及相关物质对细胞生长状况的影响.在此三维培养模型中,细胞、细胞外基质以及IL-13单克隆抗体、TGF-β等调控因素共同构成一个有机整体,成纤维细胞所表达的生物学特性接近于它们在体内肺组织中的特点.本实验应用组织工程技术成功地建立了新型肺成纤维细胞三维培养体系,并研究成纤维细胞的生物学特性,是研究间质性肺病(ILD)领域里一个新的和更为科学的方法.
-
人巨细胞病毒感染对体外培养肺成纤维细胞中明胶酶的影响
目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染对体外培养肺成纤维细胞(HEL)中明胶酶活性的影响. 方法体外培养HEL细胞感染HCMV,分为低感染复数(MOI)组及高MOI组,每组重复6例.明胶酶谱法检测HEL细胞中MMP-2及MMP-9的明胶酶活性,用半定量RT-PCR检测各组HEL细胞中MMP-9及TIMP-1的转录水平.结果在低MOI组及高MOI组HEL细胞中MMP-9及MMP-2活性均增强(P＜0.05),高MOI组MMP-9及MMP-2活性较低MOI组显著增加(P＜0.05).进一步检查MMP-9及TIMP-1的mRNA水平发现,正常对照组HEL细胞中MMP-9及TIMP-1的mRNA处于一个较低的水平,HCMV感染使HEL细胞中MMP-9及TIMP-1的mRNA水平均明显升高(P＜0.05),低MOI组和高MOI组差异无统计学意义(P＞0.05).在低MOI组及高MOI组,HEL细胞MMP-9/TIMP-1的比值和正常对照组相比明显升高(P＜0.05),表明MMP-9升高更为显著.高MOI组和低MOI组中MMP-9/TIMP-1的比值差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 HCMV感染可以造成MMP-9和TIMP-1转录和MMP-9/TIMP-1的失衡,同时造成MMP-9及MMP-2明胶酶活性增强,导致肺泡结构的破坏和肺纤维化的发生,这在CMV肺炎的发病机制中起着重要的作用.
关键词： 巨细胞病毒 基质金属蛋白酶 肺成纤维细胞 组织基质金属蛋白酶抑制剂 -
过氯酸铵致肺纤维化作用的研究
目的研究过氯酸铵(AP)致肺纤维化作用.方法 AP染毒大鼠肺泡巨噬细胞(AM)24h,取AM上清液培养肺成纤维细胞(FB),检测AM转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达水平及FB增殖活性、细胞内羟脯氨酸(Hyp)含量.采用气管内注入方式对大鼠进行AP染毒,3 d后处死,测定肺组织中TGF-β1 mRNA的表达.结果 AP低、高剂量组TGF-β1细胞阳性率和AP高剂量组TGF-β1光密度值均显著高于对照组(P＜0.01).各AP染毒组FB增殖活性和FB Hyp含量与对照组比较,差异无显著性(P＞0.05).AP低、中、高剂量组肺组织TGF-β1mRNA表达水平均高于对照组(P＜0.05或P＜0.01).结论 AP增加了AM和肺组织TGF-β1表达,但尚未表现出致肺纤维化作用.
-
细胞外信号调节激酶1/2在慢性肺疾病新生大鼠肺成纤维细胞中的研究
目的 探讨持续吸入高氧致慢性肺疾病新生大鼠肺成纤维细胞中细胞外信号调节激酶(ERK) 1/2蛋白信号表达的动态变化.方法 足月新生鼠生后12 h内分别持续吸人体积分数90％的高氧和空气,于3、7、14 d随机处死动物后,进行肺成纤维细胞的原代培养,应用免疫组化、Western-blot及real-time PCR方法检测ERK1/2蛋白及mRNA表达.结果 免疫组化及Western blot结果显示,高氧7、14 d时高氧组肺成纤维细胞p-ERK1/2蛋白的表达均明显高于同时间点对照组(P＜0.01).Western blot结果同时显示各组间ERK1/2总蛋白的表达差异无统计学意义.real-time PCR结果表明各组间ERK1、ERK2 mRNA水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ERK1/2蛋白水平磷酸化活化参与了高氧致新生大鼠慢性肺疾病中肺纤维化的发生.
-
脂氧素抑制内毒素诱导大鼠原代肺成纤维细胞环氧合酶-2及前列腺素E2的表达
目的 探讨脂氧素对大鼠原代肺成纤维细胞环氧合酶-2及前列腺素E2表达的影响.方法 分离、纯化、鉴定得到大鼠肺成纤维细胞,用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)干预建立成纤维细胞体外急性炎症模型,并利用细胞增殖/毒性检测试剂MTT摸索出成纤维细胞急性炎症模型的适LPS质量浓度和药物干预时间.分别应用不同浓度(0、100、200、400 nmol/mL)的脂氧素作用于经过LPS诱导的体外培养原代肺成纤维细胞.采用酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液前列腺素E2(PGE2)水平,同时应用Western blot检测原代肺成纤维细胞环氧合酶(COX-2)蛋白的表达.结果 用1 μg/mL LPS干预体外培养的原代肺成纤维细胞6h能建立较为合理的急性炎症模型.脂氧素能抑制LPS诱导的原代肺成纤维细胞环氧合酶(COX-2)蛋白的表达.对照组、LPS组、LPS组与LPS+脂氧素组测PGE2质量浓度分别为55.84 pg/mL、411.73 pg/mL、307.07 pg/mL,LPS组与LPS+脂氧素组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 脂氧素能抑制LPS诱导的原代肺成纤维细胞环氧合酶-2及前列腺素E2的表达,并呈剂量依赖性.
-
肺成纤维细胞在博来霉素致肺纤维化中的作用机制
目的:探讨肺成纤维细胞(PFC)在博来霉素(BLM)致肺纤维化中的作用机制.方法:采用差时贴壁法培养与纯化PFC,传至第3代备用.分为Control组:细胞用正常的培养基培养;BLM组:依次分为0.01mol/L BLM组、0.03mol/L BLM组、0.1mol/L BLM组、1mol/L BLM组及10mol/L BLM,每组每孔细胞分别加上述浓度的BLM,5×104个PFC/孔(12孔板),干预24小时.TGF-β1组:每个孔用2ug/L TGF-β1,5×104个PFC/孔(12孔板),干预24小时.免疫细胞化学法鉴定PFC与肺肌成纤维细胞(PM FC).采用Real-time PCR及Western-blot技术检测Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及α-SMA mRNA表达与α-SMA蛋白水平.BrdU法检测细胞增殖.结果:BLM可剂量依赖性地抑制细胞增殖,BLM浓度从0.1 mol/L始抑制PFC的增殖较对照组(P＜0.05).0.1mol/L BLM干预24小时后,α-SMA免疫细胞化学染色鉴定呈阳性,α-SMA mRNA的较对照组表达增加(P＜0.05);Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达较对照组显著增加(P ＜0.01);0.1mol/L BLM能明显升高α—SMA的蛋白表达水平.结论:PFC转化成PMFC且显著增加Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达,成为BLM诱导肺纤维化中的重要作用机制之一.
-
转录活化蛋白1反义寡核苷酸对肺成纤维细胞增殖及分泌羟脯氨酸的影响
目的探讨转录活化蛋白1 (signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)反义寡核苷酸对肺成纤维细胞增殖及分泌羟脯氨酸的影响.方法取Wistar大鼠10只,随机分为博莱霉素(BLM)组和生理盐水(NS)组各5只,分别向气管内灌注BLM和NS后7 d处死动物,通过支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞(AM),并将BLM组的AM分为STAT1反义寡核苷酸(ASON)组、STAT1正义寡核苷酸(SON)组、地塞米松(DEX)组和空白对照组,分别加入ASON、SON、DEX(空白对照组只加培养基)后培养36 h,收集培养的条件上清液和细胞;分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测AM的STAT1、细胞间黏附分子1 (intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)mRNA和蛋白表达水平;将条件上清液加入肺成纤维细胞中继续培养30 h,用3氢标记的胸腺嘧啶核苷(3H-TDR)检测肺成纤维细胞的增殖情况,用对二甲氨基苯甲醛法检测肺成纤维细胞分泌羟脯氨酸情况.结果 (1)经ASON处理后,AM的STAT1 mRNA表达明显降低(31.8±3.5),与空白对照组(65.5±4.6)、SON组(64.2±4.3)、DEX组(44.1±4.6)比较差异有统计学意义(P＜0.05);与SON组和空白对照组比较,DEX处理后的AM的STAT1 mRNA表达也明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);而空白对照组和SON组AM的STAT1 mRNA表达比较差异却无统计学意义(P＞0.05);NS组AM的STAT1 mRNA表达(14.9±3.1)又明显低于空白对照组、ASON组、SON组、DEX组,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)AM的ICAM-1 mRNA表达与STAT1 mRNA表达的变化一致.(3)ASON组(4.4±0.6)、NS组(3.7±0.4)AM的STAT1蛋白表达均明显低于空白对照组(7.6±0.6)、SON组(7.7±0.7)、DEX组(5.9±0.4),P均＜0.05;DEX组的STAT1蛋白表达明显低于空白对照组和SON组(P＜0.05);而空白对照组和SON组的STAT1蛋白表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).(4)AM的ICAM-1蛋白表达、肺成纤维细胞分泌羟脯氨酸的能力和增殖情况与AM的STAT1蛋白表达的变化一致.结论 STAT1反义寡核苷酸能抑制AM内STAT1、ICAM-1mRNA和蛋白表达;STAT1反义寡核苷酸处理AM后的培养条件上清液能引起肺成纤维细胞的增殖能力及分泌羟脯氨酸的能力明显下降.
-
类胰岛素生长因子对人肺成纤维细胞糖代谢及功能的影响
研究类胰岛素生长因子(IGF-1)对肺成纤维细胞(LF)糖代谢及其分泌细胞外基质蛋白的调控作用,为从LF环节干预肺纤维化提供线索.
-
肿瘤坏死因子α和白细胞介素6对大鼠肺成纤维细胞基质金属蛋白酶及其抑制因子表达的影响
基质金属蛋白酶/组织抑制因子(MMPs/TIMPs)作为调节细胞外基质代谢的重要酶类系统,参与组织器官纤维化的发生,其基因表达与多种细胞因子及生长因子密切相关[1].由于体内细胞因子是作为一个极其复杂的网络系统在起作用,为了解单一及多个细胞因子对MMPs/TIMPs基因表达的影响,本实验选用肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)以及二者联合作用于大鼠肺成纤维细胞,观察其MMP-2、9及TIMP-1基因表达的变化情况,探讨TNF-α和IL-6在特发性肺纤维化(IPF)发病中的作用机制,从而为该病提供新的临床治疗策略.
-
基质金属蛋白酶组织抑制因子1对小鼠成纤维细胞增殖和细胞外基质的影响
肺纤维化的主要病理改变为肺成纤维细胞(LF)聚积和细胞外基质(ECM) 积聚.LF在肺纤维化过程中有着重要的作用.LF几乎能合成全部有ECM降解活性的基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制剂(TIMPs),特别是TIMP-1[1],当LF在静止状态下只能合成较低水平的TIMP-1,但其被激活后表达、合成并分泌大量的TIMP-1,阻止ECM的降解,特别是其中胶原的降解,从而促进肺纤维化的形成和发展.因此,我们将人的正义和反义TIMP-1(h TIMP-1)全长cDNA导入小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)中以期观察其对NIH3T3细胞增殖及细胞外基质成分表达的影响.
-
氟伐他汀对博来霉素所致大鼠肺纤维化的干预作用
肺泡炎和肺成纤维细胞的病理性增殖是肺纤维化的主要病理特点.研究结果表明,他汀类药物可抑制急、慢性炎性反应,并能抑制成纤维细胞的增殖,可能对肺纤维化有治疗作用[1-2].为此,我们观察了氟伐他汀对博来霉素致大鼠肺纤维化的干预效果.
-
高氧暴露对新生大鼠肺成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
目的 探讨持续吸入高氧后新生大鼠肺成纤维细胞中α平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscle actin,α-SMA)及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响.方法 30只足月新生Wistar大鼠,于生后12h内分别持续吸入90％的高浓度氧(高氧组,15只)和空气(空气组,15只).各组于3d,7d和14 d随机处死大鼠后,进行肺成纤维细胞的原代培养,应用免疫组织化学法检测大鼠α-SMA表达,ELISA法检测细胞培养液上清中Ⅰ型胶原蛋白的含量.结果 持续吸入高氧3d,高氧组与空气组大鼠α-SMA表达与Ⅰ型胶原蛋白含量比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).持续吸入高氧7d和14 d,高氧组大鼠肺成纤维细胞α-SMA表达的吸光度与空气组比较显著增加(112.60±4.61 vs 94.69±2.38,200.30±3.97 vs 103.04±1.91,P＜0.01).同时,细胞培养液上清中Ⅰ型胶原蛋白含量高氧组7d、14 d时也较空气组明显增加[(28.66±1.15) μg/L vs (24.62±3.15) μg/L,(30.60 ±0.65) μg/L vs (27.46±1.68) μg/L,P ＜0.05].高氧组大鼠α-SMA表达与Ⅰ型胶原蛋白含量呈正相关(r=0.72,P＜0.01).结论 高氧可促进新生大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化,Ⅰ型胶原合成增加,终导致肺纤维化的发生.
-
γ射线对肺成纤维细胞中Smad通路信号转导的影响及其意义
目的 检测不同剂量γ射线照射对肺成纤维细胞中Smad通路信号转导的影响并探讨其意义.方法:进行大鼠肺成纤维细胞的原代分离培养,应用3,5和8 Gyγ射线照射,通过免疫组织化学、免疫印迹和免疫共沉淀等方法检测照射后Smad3,4和7蛋白的表达部位和表达水平的变化及Smad3与Smad4相互作用的变化. 结果:3,5和8 Gyγ射线照射后,Smad3,4和7蛋白表达水平无显著改变,Smad3与Smad4复合物的形成增加,部分大鼠肺成纤维细胞中Smad3和Smad4主要表达于细胞核. 结论:一定剂量的γ射线能促进大鼠肺成纤维细胞中Smad3与Smad4的相互结合及核转位,对Smad通路具有活化作用.
