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骨髓间充质干细胞向肌成纤维细胞转化及一贯煎的影响
目的:观察体外诱导骨髓间充质干细胞向肌成纤维细胞分化及一贯煎的影响.方法:骨髓间充质干细胞分离、培养和鉴定,取第3代细胞加入转化生长因子(TGF-β1 5μg·L-1)诱导定向分化.骨髓间充质干细胞随机分为正常组、TGF-β1诱导组,TGF-β1诱导加一贯煎组,2周后通过免疫荧光、实时定量PCR法检测骨髓间充质干细胞分化情况及一贯煎的影响.结果:骨髓间充质干细胞鉴定结果显示CD44强阳性表达,CD29弱阳性表达.TGF-诱导后,免疫荧光及实时定量PCR均显示TGF-β1诱导组细胞α-SMA阳性表达,一贯煎组细胞α-SMA表达显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:经体外诱导骨髓间充质干细胞可以向肌成纤维细胞分化,一贯煎可阻止骨髓间充质干细胞向肌成纤维细胞分化.
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肾间质纤维化与Vimentin和α-SMA的表达
肾间质纤维化是以肾间质中细胞及胶原成分聚集增多、伴肾小管萎缩和扩张变形、小管周围毛细血管减少、肾单位进行性破坏、肾小球滤过率持续下降为特点的病理变化.肾小管间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)与肌成纤维细胞密切相关.RIF主要表现为肾小管上皮细胞变性,萎缩和消失,肾间质单核细胞的浸润,同时肌成纤维细胞增生和细胞外基质过渡集聚.
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人参皂苷Rg1对转化生长因子-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响
目的:探讨人参皂苷Rg1(Rg1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞转分化(TEMT)的作用及对细胞外基质(ECM)的影响.方法:将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白对照组,10 mg·L-1TGF-β1刺激组及不同剂量的Rg1干预组(10,20,40 mg·L-1).应用形态学、免疫组化技术、酶联免疫吸附法、荧光定量PCR,Western蛋白印迹等观察Rg1对TGF-β1诱导的NRK52E细胞转分化的作用及对ECM主要成分胶原I(col-I)和纤维粘连蛋白(FN)的影响.结果:与空白对照组相比,NRK52E培养3 d后,TGF-β1刺激组细胞形态学发生明显改变.免疫组织化学和Western蛋白印迹结果显示a-SMA的表达显著增加而E-cadherin的表达明显减少(P＜0.05);RT-PCR结果示a-SMA,Col-I和FN的mRNA表达明显增高(P＜0.05);细胞培养上清液col-I和FN的含量也显著增加(P＜0.05);与TGF-β1.刺激组相比,各Rg1干预组均不同程度的改善了TGF-β1刺激的细胞形态学改变;有效抑制了a-SMA的表达,部分恢复了E-cadherin的下调(P＜0.05);Col-I和FN的含量亦明显减少(P＜0.05).结论:TGF-β1可以诱导大鼠TEMT,刺激ECM成分Col-I和FN的升高.Rg1呈剂量依赖性地明显地抑制TGF-β1刺激的NRK52E细胞的转分化和ECM的增加.
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肝细胞生长因子抑制MRC-5成纤维细胞所致的纤维化作用
本研究采用人胎儿肺来源的成纤维细胞株MRC-5,作为体外研究肝细胞生长因子(HGF)抗组织纤维化的模型.成纤维细胞MRC-5被转化生长因子β1(TGF-β1)转化为肌成纤维细胞后,应用外源人重组HGF修饰细胞,检测细胞中分子表达水平的变化.研究发现,TGF-β1在诱导成纤维细胞株MRC-5转化为肌成纤维细胞的同时,上调HGF受体/c-Met在肌成纤维细胞中的表达.而且,应用外源人重组HGF修饰细胞后,内源性TGF-β1的表达水平被降低,内源性HGF的表达水平上调,基质金属蛋白酶I(MMP-I)mRNA表达增加,从而加速了细胞外基质主要成分-胶原蛋白I[Col(Ⅰ)]的水解.结果显示在组织纤维化过程中,HGF通过其受体c-Met直接作用于肌成纤维细胞,抑制细胞内TGF-β1的表达,在一定程度上抑制组织纤维化的发生和发展.研究中我们还发现,肝素结合表皮生长因子样生长因子(HB-EGF)上调肌成纤维细胞中HGF的表达,是其抑制肌成纤维细胞形成、抑制组织纤维化的可能机制之一.
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红景天抑制阿霉素肾病大鼠肾小管间质α平滑肌肌动蛋白表达
目的 探讨红景天对阿霉素肾病大鼠肾小管上皮细胞表型转化的作用.方法 用阿霉素诱导制成大鼠肾病模型,红景天治疗组第4周起喂服诺迪康胶囊[即圣地红景天0.672 g/(kg·d)],对照组及肾病组喂水[3 mL/(kg·d)],于第4、8、12、16和20周末分批处死大鼠,观察肾组织病理变化,检测肌成纤维细胞(MFB)的标记蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肾小管间质中的表达.结果 16周肾病组大鼠肾小管间质α-SMA半定量为6.24±0.57,明显高于红景天治疗组3.84±0.28(P＜0.01),且与小管间质损害程度相关(r=0.872,P＜0.01).结论 红景天能抑制肾小管间质细胞表型转化,对肾间质的纤维化有较好的防治作用.
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氨基胍降低肺纤维化大鼠肺成纤维细胞表达仅α-平滑肌肌动蛋白
肺纤维化主要的病理变化是肺间质中成纤维细胞活化为肌成纤维细胞(Myofibroblast,MF)及大量细胞外基质聚集.
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Fas与肝星形细胞凋亡
肝纤维化是多种慢性肝病晚期共有的组织学变化,其显著特征是细胞外基质(extracellularcellular matrix,ECM)的显著增加和成分的改变.研究表明,肝纤维化的中心环节是肝星形细胞(hepatic stellate cells,HSC)在组织炎症坏死区域向肌成纤维细胞(myofibroblasts,MFB)转型的激活过程[1].激活的结果导致MFB膨胀池的产生[2],即由于MFB生成与清除速度的不平衡,造成MFB数量的增加.慢性肝病时,活化HSC减少的机制只有两种可能的方式,一是MFB反分化为静止的HSC,二是改变细胞增殖和死亡之间的平衡,清除过剩MFB[3].越来越多的实验证明,机体大多通过程序性死亡,即凋亡的方式清除机体生长及病理过程中出现的过剩或多余细胞[4].目前为止,肝纤维化及纤维化过程中HSC凋亡及其调控的机制还不清楚.但研究表明,Fas和Fas配体参与HSC的凋亡.
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骨骼肌纤维化的细胞与分子机制研究进展
骨骼肌是具有完全再生能力的组织，在急性创伤性损害后骨骼肌多能完成再生修复。当出现慢性退行性病变如进行性肌营养不良和反复肌纤维损伤时，骨骼肌修复过程常伴随着纤维化的发生。通过近十余年来对骨骼肌纤维化机制的研究，发现多种细胞和系列调控分子参与该过程，特别是肌卫星细胞来源的肌成纤维细胞等相关细胞和转化生长因子β(TGF-β)等促纤维化发展的生长因子。本文就骨骼肌纤维化的细胞分子机制及相关拮抗策略进行综述。
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全反式维甲酸对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的作用
目的研究全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,at-RA)在单侧输尿管梗阻(unilateral uretreal obstructive,UUO)大鼠模型中对肾间质肌成纤维细胞(MyoF)的积聚及胶原Ⅲ(col Ⅲ)沉积的影响.方法将40只大鼠随机分为假手术组、UUO组、维甲酸大剂量组,维甲酸小剂量组,苯那普利组.后3组分别给予全反式维甲酸20mg、10mg·kg-1·d-1和苯那普利10mg·kg-1·d-1.术后第14天处死各组大鼠,用免疫组化方法测定α平滑肌肌动蛋白(α SMA)及colⅢ的表达.行HE、MASSON染色观察肾脏病理变化.结果全反式维甲酸可显著减少肾间质区MyoF积聚,减轻col Ⅲ的沉积,并改善肾脏的病理学变化.结论全反式维甲酸可通过减少肾间质区MyoF积聚,减轻colⅢ的沉积而改善UUO所致的肾间质纤维化.
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Smad蛋白家族在放射诱导颌骨纤维萎缩机制中的作用及研究进展
Smad蛋白家族在信号通路的信号转导中具有重要的作用。作为生长转化因子（transforming growth factorβ，TGF-β）受体唯一被证明的作用底物，在信号通路中从细胞表面受体传导至细胞核的过程起到关键性作用，且不同的Smad介导不同的TGF-β家族成员的信号转导。TGF-β超家族是多效性因子，在胚胎发育和组织调控中起重要作用[1]。TGF-β超家族信号分子经过膜受体的介导将信号传入细胞内，其下游的调控蛋白Smads在细胞内通过不同的方式调节各种基因的表达[2]。然而过度表达的TGF-β1/Smad与一些疾病相联系如纤维化疾病和恶性肿瘤等。近来研究表明，TGF-β1/Smad信号通路参与了颌骨的放射性纤维化的过程。放疗后TGF-β1表达增高，促进骨髓间充质干细胞分化为成纤维细胞，进而增殖分化为肌成纤维细胞，ECM沉淀和堆积重塑导致了颌骨的纤维萎缩过程。然而Smad蛋白可能在此过程中起到了关键的信号转导作用。本文将在Smad蛋白家族及其在放射线诱导的颌骨纤维萎缩机制机制中参与的作用作一综述。
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肝纤维化的治疗
当肝受到损伤时,炎症细胞和肝窦Kupffer细胞释放出活化因子激活肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC),使HSC转化为表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的肌成纤维细胞(myofibroblast),并且产生大量Ⅰ型胶原[1].
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RhoA/ROCK通路参与血管紧张素Ⅱ诱导的血管外膜成纤维细胞表型转化
目的 血管外膜成纤维细胞(AF)的表型转化在血管重塑过程中起了重要作用.通过观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管AF中RhoA/ROCK通路活性的影响,探讨该通路在AF/肌成纤维细胞(MF)表型转化中的作用.方法 AngⅡ刺激体外培养的SD大鼠血管AF,测定刺激后10、30 min RhoA的活性变化,并分别测定2、6、12、24 h ROCK底物肌球蛋白磷酸酶目标亚单位1(MYPT1)的磷酸化水平,Western blot检测AF/MF表型转化标记蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达,并观察腺病毒dominant negative N19RhoA(dnN19RhoA,MOI=200)和ROCK抑制剂Y27632(10μmol/L)对α-SM-actin表达的影响.结果 AngⅡ刺激使AF RhoA活性的明显增强及ROCK底物MYPT1的磷酸化水平明显增加.刺激30 min RhoA活性约为未刺激的3倍,刺激12 h MYPT1的磷酸化约为未刺激的3.5倍.dnN19RhoA和Y27632均可明显抑制AngⅡ诱导的血管Afα-SM-actin表达,抑制α-SM-actin表达程度均约为75％.结论 AngⅡ可激活血管AF中的RhoA/ROCK通路,该通路参与了AngⅡ诱导的血管AF/MF表型转化.
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正常及实验性肝纤维化大鼠肝脏中的金属蛋白酶组织抑制因子-1
目的:了解金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在正常及实验性肝纤维化大鼠肝组织中的定位及表达状态.方法:用人血白蛋白免疫攻击的方法制备实验性免疫性肝纤维化大鼠模型,以正常大鼠为对照.采用免疫组化法及原位杂交技术分别检测肝脏中TIMP-1 mRNA和相关抗原表达,同时用PCR技术检测肝脏中TIMP-1基因水平.结果:实验组肝脏中TIMP-1相关抗原表达在肌成纤维细胞、成纤维细胞,以汇管区及纤维间隔中明显,阳性信号位于细胞胞质中,未见细胞核表达.原位杂交检测结果也展示了上述相同的分布和定位.正常大鼠肝组织中可见TIMP-1基因表达,但表达水平极低.实验组肝组织中TIMP-1呈高水平表达.结论:在肝纤维化中,成纤维细胞及肌成纤维细胞是TIMP表达的主要细胞.随着病损肝脏中肝纤维化程度的加重,TIMP-1基因表达水平随之增高.
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肝纤维化中表观遗传学调控的研究进展
肝纤维化是机体对各种病因引起的肝脏的慢性损伤所产生的病理性修复的累积过程.促纤维化与抗纤维化基因表达失衡,是发生肝纤维化的中心环节.早期诊断与有效治疗是逆转肝纤维化的重要途径.表观遗传学改变被认为是肝纤维化发生过程中的早期事件.肝纤维化的表观遗传学调控机制错综复杂,主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰、microRNAs(miRNAs)等.近年来较多学者从表观遗传学水平探讨肝纤维化相关基因的表达及对肝星状细胞的活化、肌成纤维细胞的分化等的调控,进一步揭示肝纤维化的发病机制,本文就肝纤维化的表观遗传学调控作一综述,为肝纤维化的诊断、病情评估及靶向治疗提供新思路.
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纤维化肝脏中肌成纤维细胞的来源
肌成纤维细胞(myofibroblasts,MFBs)通过合成并分泌胶原促进肝脏细胞外基质(extracellular matrix)的累积,导致肝纤维化的发生、发展,其来源广泛.肝损伤时肝纤维化发展中的关键细胞-活化的肝星状细胞(hepatic stellate cells)是MFBs的主要来源；更有数据表明肝细胞和胆管上皮细胞在特定条件刺激下可以通过上皮-间质转分化(epithelial-tomesenchymal transition)过程转变为MFBs,但也有不少研究否定了该结论,因此也成为目前的研究热点之一;越来越多的研究表明,来源细胞包括汇管区成纤维细胞、骨髓细胞、肝内祖细胞等.因此本文就MFBs来源的研究进展做一综述.
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RhoA在肝纤维化发生与发展中的作用
肝纤维化是由各种慢性肝损害所导致的病理过程,主要表现为大量的细胞外基质沉积或瘢痕形成.肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)以及门脉成纤维细胞(portal fibroblasts,PFs)向肌成纤维细胞(myofibroblasts)转化,是生成细胞外基质的关键步骤.RhoA主要功能是调控细胞骨架,参与了HSCs/PFs活化的调节,具有明显的促纤维化作用.本文就该信号通路在肝纤维化发生、发展中作用的研究进展作一综述.
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肝内肌成纤维细胞和星状细胞在肝纤维化中的作用
肝纤维化是不同病因长期作用于肝脏所致损伤后修复反应,发病机制主要是肝内纤维生成,细胞活化、增殖,合成大量细胞外基质(extracellur matrix,ECM),并伴有ECM降解不足,终导致其在肝内大量积聚.近来有研究提示除肝星状细胞(hepatic satellite cell,HSC)外,肌成纤维细胞(myofibroblast,MF)可能是另一类参与肝纤维化进程并发挥重要作用的细胞,进一步确证上述研究结果将助于针对不同类型肝纤维化寻找和采取不同的干预方法.以更有效地阻断肝纤维化的进展.
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Ⅰ型血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对胰腺星状细胞的影响
目的近年来研究表明,静止状态的胰腺星状细胞(PSC)在多种因子的刺激下可发生表型转化而活化为肌成纤维细胞,后者参与细胞外基质(ECM)的代谢调节而促进胰腺纤维化的发生与发展.
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RhoA/ROKα反义寡核苷酸抑制TGF-β1诱导的血管外膜成纤维细胞α-SM-actin表达
目的 α-平滑肌-肌动蛋白(α-SM-actin)的表达是血管外膜成纤维细胞/肌成纤维细胞表型转化的分子标记.本研究观察阻断RhoA-ROKα信号转导通路对于转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)诱导的血管外膜成纤维细胞α-SM-肌动蛋白(actin)表达的影响,以揭示RhoA-ROKα信号通路在血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞过程中的作用.方法使用贴壁法体外培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞;用Western blot技术测定RhoA和ROKα在血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞过程中的表达.结果 RhoA-ROKα在血管外膜成纤维细胞表达,TGF-β1可以诱导RhoA表达上调.用反义寡核苷酸技术抑制RhoA或ROKα的表达后能够抑制α-SM-actin的表达.结论 RhoA-ROKα信号转导通路参与了TGF-β1诱导的血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞的过程.
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法舒地尔对压力超负荷大鼠心脏的肌成纤维细胞表型分化的影响
目的： Rho 激酶介导的肌动蛋白细胞骨架重组在肌成纤维细胞(MFB)表型分化中具有重要作用。本实验拟观察 Rho 激酶抑制剂法舒地尔对压力超负荷大鼠心脏 MFB 表型分化的影响。方法采用腹主动脉缩窄法建立压力超负荷诱导的心肌纤维化大鼠模型。假手术组(Sham 组)仅分离但不予结扎腹主动脉。术后4周末,将存活大鼠按随机数表法分为模型组(Model 组)、法舒地尔高剂量组(FH 组)和法舒地尔低剂量组(FL 组)。药物干预4周末,观察大鼠心肌病理学改变,并检测心肌羟脯氨酸(HYP)含量,评估心肌纤维化程度；酶联免疫吸附法检测血浆和心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量；免疫组织化学法分析心肌磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶蛋白亚基1(p-MYPT1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨桥蛋白(OPN)和转化生长因子β1(TGF-β1)的表达。结果 Model 组大鼠心肌纤维化程度较 Sham 组明显加重,AngⅡ含量显著升高,p-MYPT1(0.063±0.009比0.029±0.014)、α-SMA(0.034±0.009比0.004±0.003)、OPN(0.043±0.007比0.012±0.006)和 TGF-β1(0.058±0.019比0.019±0.009)的表达均明显升高(均为 P ﹤0.01)； FH 组和 FL 组大鼠心肌纤维化程度较Model 组减轻,AngⅡ含量均显著下降,p-MYPT1(0.029±0.013和0.040±0.011)、α-SMA(0.016±0.006和0.027±0.007)、OPN(0.018±0.004和0.036±0.006)和 TGF-β1(0.022±0.013和0.039±0.014)的表达也不同程度下降(P ﹤0.01或 P ﹤0.05)。结论法舒地尔改善压力超负荷大鼠心肌纤维化的作用至少与部分抑制 MFB 表型分化有关。
