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肝脏疾病干细胞治疗研究进展
各种类型的干细胞以其独特的模式在肝脏再生中发挥作用,这在许多报道中均已阐述.本文对当前广泛讨论的多种干细胞群体加以描述,试图将有关肝干细胞生物学方面不同的观点加以概括.本文重点阐述了用"细胞融合"而非"转分化"理论来解释肝脏再生的观点.并且认为在尝试干细胞对肝脏疾病进行临床治疗之前,尚有一系列未明确的问题需要进一步研究.
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肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化与肾间质纤维化的关系研究
肾脏疾病发展到一定阶段会引起患者肾间质纤维化,肾间质纤维化与患者病情的严重程度有着密切的联系,而肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化(EMT)与肾间质纤维化具有一定的关系,研究表明肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化受转化生长因子诱导.
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芪卫颗粒改善TGF-β1诱导的肾小球足细胞转分化的作用研究
目的 观察芪卫颗粒对转化生长因子 β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)诱导的足细胞转分化的影响.方法 以体外培养的小鼠肾小球足细胞株为研究对象,以TGF-β1(7.5 ng/mL)刺激足细胞建立转分化模型,分为正常组、模型组、芪卫颗粒组,干预24小时后,进行相关检测.采用CCK-8方法检测足细胞的活力,采用荧光定量PCR方法检测足细胞转分化相关指标Nephrin、Podocin、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和成纤维细胞特异蛋白-1(fibroblast-specific protein1,FSP-1)基因的水平,采用Western blot方法检测足细胞转分化标志蛋白Nephrin、Podocin、α-SMA和FSP-1蛋白表达的变化.结果 与正常组相比,TGF-β1诱导的模型组足细胞Nephrin和Podocin的基因和蛋白表达均减少(P<0.05),α-SMA和FSP-1的基因和蛋白表达均增加,足细胞活力下降(P<0.05);而与模型组相比,芪卫颗粒组足细胞Nephrin和Podocin的基因和蛋白表达均明显上调(P<0.05),α-SMA和FSP-1的基因和蛋白表达均有所下调(P<0.05),细胞活力有所升高.结论 TGF-β1能诱导足细胞发生转分化,芪卫颗粒能明显改善TGF-β1诱导的足细胞转分化.
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糖肾宁对糖尿病肾病KKAy小鼠的肾脏保护作用及其对Notch/Snail1信号转导通路的影响
目的:明确糖肾宁是否通过干预Notch/snail1通路抑制KKAy小鼠糖尿病肾病肾小管上皮细胞转分化肾间质纤维化.方法:KKAy小鼠30只,经过10周专用鼠料饲养,血糖＞16.7 mmol·L-1,24h尿蛋白＞0.4 mg为糖尿病肾病动物模型.造模成功小鼠按血糖和体质量分层随机分为模型组、厄贝沙坦组与糖肾宁组,灌胃给药,雌性C57BL/6J小鼠10只作为正常对照组.检测小鼠一般状况,称体重、测24h尿蛋白定量.干预16周后取材,检测血糖、尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN)、血清肌酐(Serum creatinine,Scr);肾组织行HE、Mallory染色.原位杂交及Western blotting法检测小鼠肾组织中Notch/snail1通路、α-SMA、E-Cadherin蛋白及mRNA表达.SPSS20.0软件进行统计学处理.结果:与模型组比较,糖肾宁组小鼠一般状态改善,体质量、24 h尿蛋白定量显著减少(P＜0.01),血清BUN及Scr含量降低(P＜0.01,P＜0.05),病理染色显示肾间质纤维化明显减轻,糖肾宁组肾组织Notch/snail1通路和α-SMA蛋白及mRNA表达明显降低,有显著统计学差异(P＜0.01),E-Cad蛋白及mRNA表达显著升高(P＜0.01).结论:糖肾宁可以保护糖尿病肾病肾功能,延缓糖尿病肾病进展,抑制糖尿病肾病肾小管上皮细胞转分化肾间质纤维化,改善糖尿病肾病EMT的机制可能是通过抑制Notch/snail1通路表达实现.
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黄芪对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子β1表达的影响
目的:动态观察黄芪(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾小管间质纤维化的拮抗作用及对转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响,初步探讨其可能的分子作用机制.方法:SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组和黄芪治疗组.在造模后3,7,14 d处死动物,观察肾脏病理改变.采用免疫组化方法检测肾组织中TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达.用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠TGF-β1 mRNA和α-SMA mRNA表达量.用westem blot检测大鼠TGF-β1蛋白表达量.结果:与假手术组相比,各时间点的UUO大鼠肾脏病理损害进行性加重,TGF-β1和α-SMA mRNA和蛋白表达随梗阻时间延长逐渐增高:黄芪治疗后可明显减轻UUO大鼠肾组织的肾小管损伤及.肾间质纤维化,使UUO大鼠肾组织中高表达的TGF-β1和α-SMA降低(p<0.05).结论:黄芪可能通过从核酸和蛋白水平抑制TGF-β1的表达,抑制肾小管上皮细胞转分化,减轻和改善UUO大鼠肾间质纤维化.
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人参皂苷Rg1对转化生长因子-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响
目的:探讨人参皂苷Rg1(Rg1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞转分化(TEMT)的作用及对细胞外基质(ECM)的影响.方法:将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白对照组,10 mg·L-1TGF-β1刺激组及不同剂量的Rg1干预组(10,20,40 mg·L-1).应用形态学、免疫组化技术、酶联免疫吸附法、荧光定量PCR,Western蛋白印迹等观察Rg1对TGF-β1诱导的NRK52E细胞转分化的作用及对ECM主要成分胶原I(col-I)和纤维粘连蛋白(FN)的影响.结果:与空白对照组相比,NRK52E培养3 d后,TGF-β1刺激组细胞形态学发生明显改变.免疫组织化学和Western蛋白印迹结果显示a-SMA的表达显著增加而E-cadherin的表达明显减少(P＜0.05);RT-PCR结果示a-SMA,Col-I和FN的mRNA表达明显增高(P＜0.05);细胞培养上清液col-I和FN的含量也显著增加(P＜0.05);与TGF-β1.刺激组相比,各Rg1干预组均不同程度的改善了TGF-β1刺激的细胞形态学改变;有效抑制了a-SMA的表达,部分恢复了E-cadherin的下调(P＜0.05);Col-I和FN的含量亦明显减少(P＜0.05).结论:TGF-β1可以诱导大鼠TEMT,刺激ECM成分Col-I和FN的升高.Rg1呈剂量依赖性地明显地抑制TGF-β1刺激的NRK52E细胞的转分化和ECM的增加.
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白藜芦醇对TGF-β1诱导的肾小球足细胞转分化抑制作用研究
目的 研究白藜芦醇(Resveratrol)对转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的肾小球足细胞转分化的影响.方法 体外分化条件下培养小鼠足细胞10天,分为正常组、模型组和白藜芦醇高、低剂量组.白藜芦醇高、低剂量组分别用5、2 μmol/L白藜芦醇干预30 min后,模型组和干预组各用5 ng/mL TGF-β1继续诱导72 h,正常组常规培养.分别采用免疫细胞化学、流式细胞术、Western blot技术等检测足细胞表型蛋白分子上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、胎盘钙黏蛋白(P-cadherin)、紧密连接蛋白 (zonula occludens-1,ZO-1)、肾小球足细胞相关蛋白1(NEPH1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达.用蛋白滤过试验检测单层足细胞的蛋白滤过功能.结果 与正常组比较,模型组E-cadherin +细胞百分率、P-cadherin、ZO-1、NEPH1蛋白表达及蛋白浓度均显著降低(P <0.05),α-SMA蛋白表达升高(P <0.05),透过单层足细胞的蛋白浓度显著增高(P <0.05).与模型组比较,白藜芦醇高、低剂量组E-cadherin+细胞百分率均升高(P <0.05),透过单层足细胞的蛋白浓度均降低(P <0.05);白藜芦醇低剂量组P-cadherin及 NEPH1蛋白表达均升高(P <0.05);白藜芦醇高剂量组P-cadherin、ZO-1及NEPH1蛋白表达均升高,α-SMA蛋白表达降低(P <0.05).白藜芦醇浓度与E-cadherin+、P-cadherin及NEPH1蛋白表达水平呈显著正相关(r E-cadherin+=0.772,r P-cadherin=0.756,r NEPH1=0.809,P <0.05).结论 白藜芦醇显著抑制TGF-β1诱导的足细胞表型异常可能是其维持肾小球滤过屏障的完整性,降低蛋白尿的重要机制.
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肝细胞向胆管上皮细胞转分化在继发性胆汁淤积性大鼠肝纤维化形成中的作用及黄芪汤组分的干预效应
目的 探讨肝细胞向胆管上皮细胞转分化在继发性胆汁淤积性大鼠肝纤维化形成中的作用及黄芪汤组分抑制肝纤维化的效应机制.方法 75只SD雄性大鼠,采用胆总管结扎(bile duct ligation,BDL)制备继发性胆汁淤积性肝纤维化模型,假手术组(Sham)仅作胆总管分离,不作胆总管结扎.大鼠BDL术后1周随机分为对照组(M)与干预组(Y组,经灌胃给予黄芪汤组分4周),Sham组于术后1周末随机抽取5只大鼠处死取材,M组分别于术后1、2、3、4周末随机抽取5只大鼠做动态观察,余下各组大鼠均于术后第5周末处死取材.观测肝脏组织学及羟脯氨酸(Hyp)含量;激光共聚焦显微镜观察肝组织胆管上皮细胞标志物角蛋白-7(cK7)与肝细胞特异性抗原(Hep Par)共定位,Western blot检测CK7、Hep Par的蛋白表达,IPP软件分析肝组织天狼猩红胶原染色.结果 随着造模时间推移,M组大鼠肝组织肝细胞Hep Par阳性细胞逐渐减少(Sham>M1周>M2周>M3周>M4周>M5周),胆管上皮细胞(CK7阳性细胞)及纤维化程度、Hyp含量、CK7蛋白表达均逐渐增加(Sham
关键词： 继发性胆汁淤积性肝纤维化 肝细胞 胆管上皮细胞 转分化 黄芪汤 -
骨形态发生蛋白-7对马兜铃酸诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响
目的 探讨骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)对马兜铃酸(Aristolchic acid,AA)诱导的肾小管上皮细胞转分化的拮抗作用,以期为马兜铃酸肾病(Aristolchic acid nephropathy,AAN)寻找治疗新措施.方法 应用不同浓度BMP-7(75 ng/mL、150 ng/mL、300 ng/mL)处理经AA(10 μg/mL)诱导转分化的体外培养人近端肾小管上皮细胞株(HK-2细胞),然后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blotting 技术分别检测α-SMA mRNA及蛋白的表达水平.结果 BMP-7呈剂量依赖方式逆转AA诱导的HK-2细胞α-SMA基因及蛋白的表达.结论 BMP-7可以通过抑制马兜铃酸诱导的人肾小管上皮细胞转分化从而可能成为AAN的防治潜在新药.
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三七总皂甙对IL-1α诱导大鼠肾小管细胞转分化的影响
目的研究三七总皂甙(PNS)能否通过阻断IL-1α诱导的肾小管上皮细胞转分化及减少细胞外基质分泌,防治肾间质纤维化的发生.方法体外培养正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E),应用倒置相差显微镜及扫描电镜观察NRK52E细胞形态学变化;流式细胞技术及免疫组织化学方法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;ELISA法定量检测细胞上清液中纤维连接蛋白(FN)水平.结果IL-1α可诱导肾小管上皮肌纤维母细胞转分化(TEMT),细胞肥大、拉长呈梭形,α-SMA表达明显增强,FN分泌增加(P＜0.05).加入不同浓度PNS后,细胞形态接近正常肾小管上皮细胞形态,α-SMA表达、FN分泌均较IL-1α诱导组明显抑制(P＜0.05).这些作用呈剂量依赖性抑制(P＜0.05).单独加入不同剂量PNS肾小管细胞无明显变化.结论IL-1α可诱导肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化,并可促进细胞外基质成分FN的沉积;PNS能抑制IL-1α诱导的NRK52E细胞转分化及细胞外基质分泌,可作为防治肾间质纤维化及终末期肾脏疾病的新药物.
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大鼠肌源性干细胞体外转分化为胰岛素分泌细胞
目的 探讨体外自体肌源性干细胞(MDSCs)定向诱导分化为胰岛素分泌细胞团的可行性.方法 用差速贴壁的方法 对SD大鼠MDSCs进行分离和培养,加入联合诱导剂培养7～12 d.通过形态学观察、双硫腙(DTZ)染色、免疫细胞化学染色、葡萄糖刺激实验和RT-PCR,对诱导细胞进行体外结构和功能鉴定.结果 联合诱导后12 d有典型的胰岛样结构出现;诱导后第12天细胞用表达胰岛素,而未诱导组细胞不表达;诱导后第7天检测到胰岛素(INS)、胰高血糖素(GLU)和生长抑素(SS)基因的表达.结论 体外诱导大鼠肌源性干细胞可定向分化为胰岛素分泌细胞存在可行性,本实验将可能为临床糖尿病干细胞治疗提供新的途径.
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精原干细胞体外转化和转分化的研究进展
精原干细胞(sSc)在睾丸曲细精管内微环境的精确调控下,只能单向分化为精子.然而,SSC可在特定条件下转化为多能干细胞,甚至直接重编程转分化为功能性终末分化细胞.该特殊潜能使其在再生和精准医学领域具有很好的运用前景.
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混合培养对骨髓基质细胞转分化为神经元的影响
目的研究神经干细胞(NSCs)与骨髓基质细胞(BMSCs)混合培养对骨髓基质细胞转分化为神经元的影响.方法将BMSCs传代培养2 d,10μg/L bFGF预诱导过夜,DAPI标记后加入到已贴壁分化2 d的NSCs中,神经元培养基混合培养7 d后进行神经元特异性烯醇化酶(Nse)染色.对照组于BMSCs传代2 d后,一组加bFGF处理过夜,另一组不加,神经元培养基培养7 d后NSE染色.结果实验组中部分BMSCs呈NSE染色强阳性,比例为(13.38±5.79)%,对照组呈NSE阴性结论NSCs与BMSCs混合培养可诱导BMSCs转分化为神经元.
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成年大鼠骨髓基质细胞转分化为胰岛样细胞的实验研究
目的 探讨二甲基亚枫(DMSO)对成年大鼠骨髓基质干细胞(MSC)定向诱导分化为胰岛样细胞团的作用.方法 用长骨骨髓腔冲洗的方法对Wistar大鼠MSC进行分离和培养,加入1%DMSO诱导3 d后,HDMEM培养7～10 d.通过形态学观察、双硫棕(DTZ)染色、免疫细胞化学染色、葡萄糖刺激实验和RT-PCR,对诱导细胞进行体外结构和功能鉴定.结果 1%DMSO诱导后第3 d有胰岛样结构出现;免疫细胞化学显示,诱导后第1 d MSC呈nestin免疫反应阳性,诱导后第10 d细胞团表达胰岛素、胰高血糖素,而未诱导组细胞不表达上述蛋白;RT-PCR结果表明,诱导后第10 d检测到胰岛素1(Ins1)、胰岛素2(Ins2)、胰高血糖素(glu)和生长抑素(SS)基因的表达.结论 体外经DMSO诱导,大鼠骨髓基质干细胞可定向分化为胰岛样细胞.
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肝脏干细胞和胰脏干细胞与其他细胞的联系和转分化
肝脏和胰脏均属消化腺,都具有内分泌和外分泌功能,都来源于内胚层,在发生上有密切联系,肝脏干细胞、胰脏干细胞与其他细胞在发生、功能、再生中的联系和转分化研究得越来越深入,我们就有关这方面的进展作简要综述.
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骨髓间充质干细胞可塑性研究
骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)具有跨系统、甚至跨胚层分化的特性,称为MSCs的可塑性(plasticity),成为细胞工程、再生医学中的主要选择细胞.但随着对成体干细胞可塑性质疑的出现,使MSCs是否具有转分化能力,存在着极大的分歧.对MSCs可塑性是否真正存在的进一步明确,越加显得急切和重要,也对干细胞基础理论及其临床应用具有指导性意义.
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上皮细胞转分化的信号转导研究进展及其在肾小管的研究现状
上皮细胞在特定生理和病理情况下向间充质细胞转分化的现象是肿瘤及慢性炎症性疾病中的重要细胞生物学现象.近年来研究发现,细胞内信号转导途径中的MAPK通路、Rho家族激酶、Src激酶、PI3激酶和Smad通路参与调控上皮细胞转分化过程.肾小管上皮细胞在病理条件下可转分化为肌成纤维细胞,其细胞内信号转导机制虽已有初步研究,但尚所知甚少.本文将就有关的研究进展及现状进行综述.
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上皮间质转化机制及其与肿瘤浸润转移关系的进展
上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)是指在胚胎发育过程中,上皮细胞通过一系列改变,转分化成间叶表型的细胞.有证据显示,EMT由宿主微环境诱导,经多条信号转导途径,受控于细胞内不同的转录因子,在多细胞生物体胚胎发育过程中促进细胞运动和新的组织类型生成,是一种进化上高度保守的重要机制;
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人脂肪干细胞分离培养鉴定及多向分化潜能的实验研究
目的:探讨在不同诱导条件下人脂肪干细胞((ADSC)的体外多向分化情况.方法:取人脂肪组织,用酶消化法分离、培养ADSC,用免疫细胞化学法鉴定ADSC.体外培养并测定第二、五、七代细胞增殖速率,绘制细胞生长曲线,计算群体倍增时间.流式细胞仪检测抗原CD44,CD49d,CD34,分析酶消化法获得的细胞分别向表皮细胞、成骨细胞、脂肪细胞定向诱导的能力,明确其分化能力.结果:第二、五、七代细胞生长稳定,群体倍增时间约60h,10代以内的脂肪干细胞随着传代次数的增加其增殖能力未现明显降低的趋势.免疫细胞化学显示,干细胞相关抗原CD44,CD49d为阳性,但与造血系统相关抗原CD34阴性.成表皮诱导组示:免疫组织化学鉴定结构显示有CK19的表达.成骨诱导组示:细胞碱性磷酸酶染色阳性.成脂肪细胞诱导组示:油红0染色,胞质内脂滴均被染成红色,证实为脂性液体.结论:脂肪干细胞体外增殖能力强,来源充足,细胞获得方便,又避免了伦理问题且具有向其他多种细胞分化的潜能,可能成为理想的组织工程种子细胞.
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氯沙坦对梗阻性肾病大鼠肾间质固有细胞的作用
目的研究氯沙坦对梗阻性肾病大鼠肾间质固有细胞的作用,寻找可能的临床抑制肾间质纤维化的方法.方法采用单侧输尿管结扎(UUO)模型,治疗组于造模当日至造模后14天给予科素亚[16 mg(kg·d)]灌胃,另设假手术组及手术组作为对照.应用免疫组织化学方法检测肾间质TGF-β的表达,组化双染色观察α-SMA、E-钙粘素的表达.激光共聚焦显微镜观察间质小管区α-SMA表达.结果手术组两周时出现近端肾小管区TGF-β表达明显增高(P＜0.01),伴α-SMA表达增高(P＜0.01),E-钙粘素表达下降(P＜0.05),部分肾小管细胞中可见α-SMA及E-钙粘素同时表达;治疗组与手术组相比TGF-β、α-SMA的表达明显下降(P＜0.05),而E-钙粘素的表达上调(P＜0.05).共聚焦显微镜下见部分小管基底膜损伤,上皮细胞表达α-SNA.结论氯沙坦可通过抑制肾间质固有细胞转分化过程的进展,从而对肾间质纤维化具有治疗作用.
