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三七总皂苷对局灶性脑缺血大鼠不同恢复时点神经重塑和突触重建的影响
目的:观察三七总皂苷(PNS)对局灶性脑缺血大鼠不同恢复时点RhoA、Rock2、Syp和PSD-95蛋白表达的影响,以探索PNS对神经重塑与突触重建的作用机制.方法:采用健康雄性SD大鼠,将其分为假手术组、手术组和Y27632组、PNS加Y27632组,对除假手术组外所有动物采用Longa法建立大脑中动脉阻塞MCAO模型,再将手术组动物随机分为模型组、PNS组、尼莫地平组,每组均为6只,利用HE染色和免疫组化方法观察术后14d和28d大鼠皮层梗死周围区RhoA、Rock2、Syp和PSD-95蛋白表达及梗死周围区形态学变化.结果:MCAO术后14d和28d,均可见模型组大鼠RhoA和Rock2蛋白的表达升高(P＜0.01),Syp和PSD-95蛋白表达下降(P＜0.01);各用药组中RhoA和Rock2蛋白的表达(除28d尼莫地平组的Rock2外)均比模型组减少(P＜0.05,P＜0.01),术后Syp和PSD-95蛋白(除14d尼莫地平组的Syp外)与模型组相比增加(P＜0.05,P＜0.01).结论:PNS可抑制脑梗死后RhoA和Rock2蛋白表达并促进Syp和PSD-95蛋白表达,从而促进神经重塑和突触重建.
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基于以方测证的肾阳虚哮喘大鼠模型建立与评价研究
目的:建立并评价哮喘大鼠肾阳虚病证结合模型.方法:将SD大鼠随机分为正常组、哮喘模型组、肾阳虚哮喘模型组、肾阳虚哮喘+金匮肾气汤组(简称金匮肾气汤组)、肾阳虚哮喘+六味地黄汤组(简称六味地黄汤组)5组,每组10只.除正常组外,其余各组均利用卵蛋白诱发哮喘.肾阳虚哮喘模型组、金匮肾气汤组、六味地黄汤组灌胃地塞米松混悬液2周制作肾阳虚哮喘模型,2周后金匮肾气汤组、六味地黄汤组分别灌胃金匮肾气汤和六味地黄汤治疗.末次给药12h后处死大鼠取材固定,病理切片观察大鼠肺组织病理学变化,荧光免疫组化法测定大鼠肺支气管壁RhoA、Rock2蛋白表达.结果:病理切片显示正常组支气管管壁完整,无炎性渗出.哮喘模型组、肾阳虚哮喘模型组大鼠支气管壁塌陷,周围有大量炎性细胞渗出,且肾阳虚哮喘模型组的病理变化重于哮喘模型组;金匮肾气汤组支气管壁结构塌陷程度较肾阳虚哮喘组明显减轻,周围有少量炎性细胞渗出;六味地黄汤组的病变程度与肾阳虚哮喘模型组无明显差别.荧光免疫组化法显示RhoA、Rock2在各组大鼠支气管壁和肺泡壁均有表达;哮喘模型组RhoA、Rock2蛋白表达显著高于正常组(P＜0.05),肾阳虚哮喘模型组明显高于哮喘模型组(P＜0.05),金匮肾气汤组与肾阳虚哮喘模型组比较,RhoA、Rock2表达明显下降(P＜0.05).结论:基于以方测证的实验室指标的结果分析判定地塞米松灌胃结合卵蛋白诱发哮喘制造肾阳虚哮喘模型成功.
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RhoA和肌球蛋白轻链在肝纤维化大鼠肝组织中的表达
目的 观察Rho/Rho激酶信号转导通路关键信号分子RhoA和磷酸化肌球蛋白轻链[p-MLC(Thr18/Ser19)]在大鼠肝纤维化组织中的表达规律. 方法 HE及Masson三色染色观察肝病理组织学变化;用Western blot检测RhoA、p-MLC(Thr18/Ser19)蛋白的表达;RT-PCR方法检测RhoA mRNA的表达. 结果 随着肝纤维化的进展,RhoA、p-MLC(Thr18/Ser19)蛋白表达明显增加,RhoA mRNA基因表达也逐渐加强.RhoA和p-MLC(Thr18/Ser19)分别与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)呈显著正相关. 结论 Rho/Rho激酶信号转导通路在肝纤维化形成过程中发生变化.
关键词： RhoA p-MLC(Thr18/Ser19) 肝纤维化 信号通路 -
RhoA/ROCK信号通路在动脉粥样硬化发生中的作用
RhoA/ROCK通路参与细胞肌动蛋白骨架的调节、细胞的收缩、黏附、增生、分化及基因的表达等.越来越多的证据表明,其在动脉粥样硬化的发生发展中起着重要作用.对RhoA/ROCK通路的研究将拓展对有关心血管疾病的认识,有望为心血管疾病提供新的治疗靶点.
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PI3K调控血小板聚集过程中RhoA活性及其与mDia1相互作用
本研究探讨RhoA/mDia1通路在血小板聚集过程中的作用及PI3K抑制剂对该过程的调控作用.分离人外周血中血小板,采用GST pull-down法及免疫共沉淀法检测血小板聚集过程中RhoA、Racl及Cdc42活性的变化;采用免疫共沉淀法检测血小板聚集过程中RhoA、Rac1及Cdc42是否与mDia1相互结合并形成复合体,并进一步检测PBK抑制剂对上述过程的影响.结果表明:凝血酶能够诱导聚集血小板中RhoA活性上调,且与mDia1相结合的RhoA-GTP显著增高;渥曼青霉素(wortmannin)能够阻断由凝血酶诱导的聚集血小板中RhoA活性上调,并阻断凝血酶诱导的RhoA-GTP与mDia1的结合.凝血酶能上调聚集血小板中Rac1和Cdc42生物活性,但并未诱发其与mDia1结合,该过程也不能被wortmannin阻断.结论:PI3K通过RhoA/mDia1参与调控凝血酶诱导的血小板聚集等actin细胞骨架重构过程.
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电针对脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力及RhoA蛋白表达的影响
目的：探讨电针神庭、百会穴对脑缺血再灌注模型大鼠学习记忆能力的影响及其可能机制。方法45只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(n=15)、模型组(n=15)和电针组(n=15)。模型组和电针组均采用左侧大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注模型。电针组电针神庭、百会穴共7 d。采用Morris水迷宫测试观察大鼠学习记忆能力；尼氏染色观察大鼠海马神经元形态结构变化；Western blotting法检测大鼠左侧海马RhoA蛋白的表达。结果与模型组相比，电针组学习记忆能力改善(P<0.05)，海马神经元损伤减少(P<0.05)，海马组织中RhoA蛋白表达降低(P<0.05)。结论电针能够改善脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力，其机制可能与抑制RhoA蛋白表达有关。
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辛伐他汀对大鼠神经病理性疼痛行为学和RhoA通路表达的影响
目的:观察RhoA相关细胞骨架调控信号通路在慢性坐骨神经结扎(chronic sciatic nerve constriction injury,CCI)神经病理性疼痛大鼠背根神经节激活及辛伐他汀(simvastatin)鞘内给药对该通路影响.方法:42只质量180～200 g SD雄性大鼠随机分为5组:Na(i)ve组(n=6)、Sham组(n=6)、CCI组(n=18)、Simvastatin组(n=6)及Rho激酶(Rho kinase,ROCK)抑制剂Y-27632组(n=6).对大鼠行鞘内置管,于造模后7天结扎CCI组、Simvastatin组及Y-27632组大鼠单侧坐骨神经构建CCI模型,术后Simvastatin组每天鞘内注射10 μl辛伐他汀(10 μg/μl),Y-27632组每天鞘内注射12μl Y-27632(4 mg/ml),Na(i)ve组、Sham组、CCI组术后每天鞘内注射生理盐水10 μl,连续注射7天.于CCI建模后1、3、7、14天进行动物行为学评估,观察大鼠对机械和热刺激的反应.于建模后第14天处死大鼠,取手术侧L4-6背根神经节(dorsal root ganglion,DRG),并进行实时定量PCR观察RhoA、ROCK的mRNA表达变化,免疫荧光观察RhoA蛋白在DRG伤害性神经元中的分布及改变,以及免疫荧光强度随建模时间梯度增加,Western blot检测通路中主要因子RhoA、LIMK和cofilin蛋白水平表达的改变.结果:①Simvastatin组大鼠给予辛伐他汀后第3天起缩足反射热辐射潜伏期、缩足反射机械刺激闽值明显高于CCI组,差异具有统计学意义(P＜0.05);ROCK抑制剂Y-27632组大鼠缩足反射热辐射潜伏期、缩足反射机械刺激阈值给药后3天起较CCI组明显提高,差异具有统计学意义(P＜0.05).②CCI组大鼠DRG中RhoA、ROCK mRNA于术后第7天起表达显著增加(P＜0.05);RhoA蛋白在背根神经节神经元中表达,CCI术后14天RhoA免疫荧光强度与Na(i)ve组比显著增高(P＜0.05).③鞘内注射辛伐他汀能显著抑制通路主要因子RhoA、p-LIMK、p-cofilin的表达(P＜0.05).结论:大鼠CCI慢性神经病理性疼痛存在RhoA/LIMK/cofilin通路的激活,辛伐他汀鞘内注射可抑制该通路的活化,为治疗神经病理性疼痛提供新的靶点.
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RhoA基因转染对QZG肝细胞生物学行为的影响及其机制的研究
目的 探讨RhoA基因转染QZG肝细胞系后细胞骨架和体外侵袭能力的变化.方法 构建持续激活型的RhoA真核表达载体,以脂质体介导转染肝细胞系QZG,用RT-PCR检测RhoA mRNA表达水平,观察细胞骨架的变化和体外侵袭能力.结果 RT-PCR表明稳定转染细胞株中有RhoA mRNA高表达,而且在荧光显微镜下可见到细胞株绿色荧光,细胞形态和骨架发生变化.Boyden 小室体外侵袭试验中实验组比空白对照组侵袭能力增加41.4%(P= 0.006).结论 RhoA影响细胞的骨架变化和侵袭能力,在肝癌发生和发展中发挥重要作用.
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人脑胶质瘤中RhoA 的表达及其临床意义
目的 研究RhoA 在人脑胶质瘤组织中的表达情况及其与病理分级的相关性,探讨RhoA 在胶质瘤的诊断、恶性程度及预后判断中的临床意义.方法 采用SABC 免疫组化法、RT-PCR 法对53 例不同病理级别的星形细胞瘤及9 例正常脑组织标本,进行RhoA 蛋白和RhoA mRNA 的检测.结果 (1)免疫组化结果 显示53 例胶质瘤组织中RhoA 蛋白表达全部呈阳性,对照组正常脑组织存在弱表达或不表达.(2)不同级别星形细胞瘤标本的RhoA 阳性细胞率、RhoA mRNA 与GAPDH mRNA 灰度比值均存在差异;Ⅰ级和Ⅲ、Ⅳ级之间差异有统计学意义(P ＜0.05),Ⅲ、Ⅳ级RhoA mRNA 表达均高于Ⅰ级;Ⅱ级和Ⅲ、Ⅳ级之间差异有统计学意义(P ＜0.05),Ⅲ、Ⅳ级RhoA mRNA 表达均高于Ⅱ级.(3)相关性分析:RhoA 阳性细胞率和RhoA mRNA 表达量与胶质瘤病理分级均呈正相关性(r ＝0.875,r ＝0.817,P ＜0.001).结论 (1)RhoA 在所有已检测的胶质瘤标本中均存在表达,且表达程度与胶质瘤病理分级呈正相关.检测RhoA 的mRNA 和(或)蛋白的表达,可以作为胶质瘤诊断、判断预后的一个可靠指标.(2)RhoA 表达水平与肿瘤恶性程度呈正相关,提示我们可以将其作为星形细胞瘤Ⅰ～Ⅳ级新的有效的诊断标记物,同时作为常规组织病理学的分级标准的补充.这将有助于描述肿瘤的生物学行为特征,选择术后进一步的治疗方案.
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RhoA/ROCK通路参与血管紧张素Ⅱ诱导的血管外膜成纤维细胞表型转化
目的 血管外膜成纤维细胞(AF)的表型转化在血管重塑过程中起了重要作用.通过观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管AF中RhoA/ROCK通路活性的影响,探讨该通路在AF/肌成纤维细胞(MF)表型转化中的作用.方法 AngⅡ刺激体外培养的SD大鼠血管AF,测定刺激后10、30 min RhoA的活性变化,并分别测定2、6、12、24 h ROCK底物肌球蛋白磷酸酶目标亚单位1(MYPT1)的磷酸化水平,Western blot检测AF/MF表型转化标记蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达,并观察腺病毒dominant negative N19RhoA(dnN19RhoA,MOI=200)和ROCK抑制剂Y27632(10μmol/L)对α-SM-actin表达的影响.结果 AngⅡ刺激使AF RhoA活性的明显增强及ROCK底物MYPT1的磷酸化水平明显增加.刺激30 min RhoA活性约为未刺激的3倍,刺激12 h MYPT1的磷酸化约为未刺激的3.5倍.dnN19RhoA和Y27632均可明显抑制AngⅡ诱导的血管Afα-SM-actin表达,抑制α-SM-actin表达程度均约为75％.结论 AngⅡ可激活血管AF中的RhoA/ROCK通路,该通路参与了AngⅡ诱导的血管AF/MF表型转化.
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接头蛋白SH2B1和RhoA蛋白在食管癌患者中的表达及临床病理意义
目的:研究食管癌组织中接头蛋白SH2B1和RhoA的表达及临床病理意义.方法:应用免疫组织化学方法检测SH2B1和RhoA在食管癌组织及正常组织中的表达情况.结果:1 34例食管癌组织中SH2B1和RhoA阳性表达率显著性高于正常组织(84.2％ vs33.6％,P=0.028＜0.05; 79.8％ vs 22.4％,P=0.022＜0.05),且SH2B1,RhoA表达与浸润程度,TNM分期及淋巴结转移有关(P＜0.05),与患者性别、年龄、肿瘤类型、分化程度无关(P＞0.05).结论:SH2B1、RhoA在食管癌组织中高表达,且与食管癌临床病理学特征有着密切关系.
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骨髓间充质干细胞调控肝星状细胞RhoA、P27的表达
目的:观察体外大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)对肝星状细胞(HSCs)RhoA信号因子及其细胞周期调控因子P27表达的影响,探讨MSCs调控HSCs细胞周期G1/S转换机制.方法:贴壁筛选法培养、纯化SD大鼠MSCs,传代至第4代使用;大鼠肝星状细胞(HSC-T6)系及纤维原细胞系冻融后传代使用.应用6孔塑料细胞培养盒,每孔使用半透膜(transwellinsert)建立上下双层细胞共培养体系,常规培养.实验分3组:空白对照组、阴性对照组、MSCs实验组.用WST-8法对HSCs增殖率进行测定:流式细胞仪检测细胞周期:RT-PCR、Western blot检测MSCs与HSCs共培养后HSCs内RhoA,P27 mRNA和蛋白的表达.结果:(1)HSCs与MSCs共培养24 h后,HSCs表现明显增殖抑制(P<0.01),且呈现时间依赖性,MSCs实验组与空白对照组、阴性对照组比较均有显著性差异(均P<0.01).(2)共培养12 h后,MSCs可阻滞HSCs由G0G1期向S期转换,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,与空白对照组、阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01),(3)共培养12 h后,MSCs实验组RhoAmRNA表达与空白对照组、阴性对照组比较均有统计学差异(P<0.05,P<0.01),随时间的延长呈递减趋势;共培养后,MSCs实验组P27mRNA表达与空白对照组、阴性对照组比较均无统计学差异.(4)共培养12 h后,MSCs实验组RhoA蛋白表达与空白对照组、阴性对照组比较均有统计学差异(均P<0.01),随时间的延长呈递减趋势:共培养12 h后,MSCs实验组P27蛋白与空白对照组、阴性对照组比较均有统计学差异(均P<0.01),随时间的延长呈递增趋势.(5)相关性分析显示:RhoA与P27mRNA的表达无明显相关(r=0.105);RhoA与P27蛋白的表达呈显著负相关(r=-0.943,P<0.01).结论:MSCs抑制HSCs增殖的机制可能是通过RhoA-P27通路调控HSCs细胞周期改变;RhoA活性的下调可能是引起HSCs内P27蛋白表达增加的原因.
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骨髓间充质干细胞对大鼠急性肝损伤修复的影响
目的: 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植通过抑制RhoA-ROCK信号转导通路对大鼠急性肝损伤修复过程的影响.方法: 贴壁筛选法培养、纯化♂ S D大鼠BMSCs.将健康♀SD大鼠随机分为3组: 正常对照组(N组,n = 10)、CCl4组(C组,n = 10)及CCl4+BMSCs组(T组,n = 10).N组不予任何处理;T组和C组腹腔注射0.1 mL/100 g 600 mL/LCCl4花生油溶液制造急性肝损伤模型后24 h,分别经鼠尾静脉移植的间充质干细胞和等量PBS.各组于不同时间点留取标本,采用HE染色和血清肝功能酶学指标观察受损肝脏恢复过程;RT-PCR方法检测RhoA mRNA的表达;Western blot检测RhoA蛋白的表达.结果: 与C组相比,T组移植BMSCs后能显著改善CCl4急性损伤大鼠肝功能(1 d,ALT: 89.70±3.09 U/L vs 147.59±6.83 U/L,AST: 263.67±17.05 U/L vs 472.68±19.04 U/L,P＜0.01或0.05;7 d,ALT: 42.38±14.31 U/L vs 92.75±6.70U/L,AST 173.85±16.80 U/L vs 260.41±25.35U/L,均P＜0.05),并迅速修复肝脏结构.N组大鼠肝脏RhoA mRNA和蛋白表达量极低,C组经CCl4损伤后RhoA mRNA和蛋白表达量迅速增加(1.39±0.046 vs 0.57±0.010,1.23±0.020vs 0.35±0.036,均P＜0.01),此后表达量缓慢降低.T组经BMSCs移植后,与C组比较,RhoAmRNA和蛋白表达水平迅速下降.结论: Rho-ROCK信号转导通路参与CCl4导致的急性肝损伤发生、发展和修复全过程.BMSCs可能通过抑制RhoA-ROCK信号转导通路加速受损肝脏修复.
关键词： 急性肝损伤 骨髓间充质干细胞 RhoA Rho-ROCK信号转导通路 -
幽门螺杆菌对人胃癌细胞SGC-7901中SHP-2及细胞骨架的影响
目的: 研究幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H pylon)刺激人胃癌细胞SGC-7901后,对细胞内SHP-2表达及细胞骨架的影响.方法: 将临床分离的胃癌Hpylori菌体裂解,以超声提取物刺激SGC-7901细胞1 h,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量法测定刺激前后SHP-2表达量的变化;并将PCR产物进行克隆和测序.将不同疾病(胃炎,胃溃疡,胃癌)的菌株Hpylori超声提取物刺激SGC-7901细胞10 min,采用phalloidin对细胞内骨架进行荧光染色,研究其对细胞骨架的影响.将野生型和突变型RhoA质粒转入细胞后,再以胃癌Hpylori超声提取物刺激,进一步观察细胞内骨架的变化.结果: 胃癌Hpylori菌体超声提取物刺激SGC-7901细胞1 h后,细胞内SHP-2表达量没有明显变化.胃炎,胃溃疡,胃癌Hpylori菌体超声提取物刺激人胃癌细胞SGC-7901后.与对照组相比,细胞内骨架增多(65.4±0.510,63.37±0.475.64.53±0.522 vs 20.34±1.376.均P<0.05),但这三种菌株间相比无统计学意义.转染入野生型RhoA质粒的细胞经胃癌Hpylori菌体超声提取物刺激后,细胞内骨架较未转染者增多(72.99±1.818vs61.78±1.288,P<0.05),而转染入无活性突变型RhoA质粒的细胞经刺激后,细胞内骨架与未转染者无明显差别.结论: 胃癌Hpylori超声提取物未能引起细胞内SHP-2 mRNA表达量的改变;胃炎,胃溃疡,胃癌Hpylori菌体超声提取物能够增加细胞内骨架的形成,其作用与Hpylori菌种无关,RhoA活性的增强是其中的一个重要中间环节.
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RhoA在肝纤维化发生与发展中的作用
肝纤维化是由各种慢性肝损害所导致的病理过程,主要表现为大量的细胞外基质沉积或瘢痕形成.肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)以及门脉成纤维细胞(portal fibroblasts,PFs)向肌成纤维细胞(myofibroblasts)转化,是生成细胞外基质的关键步骤.RhoA主要功能是调控细胞骨架,参与了HSCs/PFs活化的调节,具有明显的促纤维化作用.本文就该信号通路在肝纤维化发生、发展中作用的研究进展作一综述.
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RhoA/ROKα反义寡核苷酸抑制TGF-β1诱导的血管外膜成纤维细胞α-SM-actin表达
目的 α-平滑肌-肌动蛋白(α-SM-actin)的表达是血管外膜成纤维细胞/肌成纤维细胞表型转化的分子标记.本研究观察阻断RhoA-ROKα信号转导通路对于转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)诱导的血管外膜成纤维细胞α-SM-肌动蛋白(actin)表达的影响,以揭示RhoA-ROKα信号通路在血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞过程中的作用.方法使用贴壁法体外培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞;用Western blot技术测定RhoA和ROKα在血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞过程中的表达.结果 RhoA-ROKα在血管外膜成纤维细胞表达,TGF-β1可以诱导RhoA表达上调.用反义寡核苷酸技术抑制RhoA或ROKα的表达后能够抑制α-SM-actin的表达.结论 RhoA-ROKα信号转导通路参与了TGF-β1诱导的血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞的过程.
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磷脂酰肌醇3-激酶δ-Ras同源基因家族成员A通路在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能障碍中的作用
目的 探讨磷脂酰肌醇3-激酶δ(PI3 Kδ)-Ras同源基因家族成员A(RhoA)通路在慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)小鼠肺泡巨噬细胞(AM)吞噬功能低下中的作用.方法 40只SPF级8周龄雄性BALA/c小鼠,20只使用烟草烟雾暴露法建立慢阻肺模型,20只常规饲养.根据随机数字表分为健康对照组、慢阻肺组、健康IC87114(PI3 Kδ抑制剂)组及慢阻肺IC87114组.其中IC87114组AM培养基中加入终浓度1 nmol/L IC87114培养24 h.不连续密度梯度离心法分离AM,流式细胞术测AM吞噬异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌(FITC-E.coli的能力,以平均荧光强度(MFI)和吞噬FITC-E.coli阳性细胞百分比(吞噬％)表示;实时荧光定量PCR及蛋白印迹法(Western blot)测AMPI3Kδ、RhoA mRNA和蛋白表达;小G蛋白活性试剂测量AM RhoA活性;激光共聚焦显微镜观察细胞骨架.结果 AM吞噬能力:慢阻肺组MFI和吞噬％[(4 512 ±517)、(32.2±4.6)％]均低于健康对照组[(9857±1 042)、(68.0±4.0)％,均P＜0.01];慢阻肺IC87114组[(6 894±472)、(50.6±2.1)％]均高于慢阻肺组(均P ＜0.01).AM PI3Kδ mRNA和蛋白表达:慢阻肺组(3.14 ±0.54、0.84 ±0.08)均高于健康对照组(1.00±0.00、0.57±0.07,均P＜0.01);慢阻肺IC87114组(1.52±0.28、0.66 ±0.13)均低于慢阻肺组(均P＜0.01).AM RhoA mRNA、蛋白表达及活性:慢阻肺组(0.70 ±0.07、0.41 ±0.10、0.70 ±0.06)均低于健康对照组(1.00±0.00、0.56 ±0.09、1.19 ±0.09,均P＜0.01);慢阻肺IC87114组(0.91 ±0.08、0.48±0.06、0.86 ±0.06)均高于慢阻肺组(均P＜0.05).AM细胞骨架变化:健康对照组和健康IC87114组伪足伸出良好,吞噬FTTC-E.coli能力较强;慢阻肺组伪足伸出不良甚至缺失,吞噬FITC-E.coli能力受损;慢阻肺IC87114组伪足伸出情况及吞噬能力较慢阻肺组改善.相关性分析:基础状态和IC87114干预后,AM的PI3Kδ mRNA、蛋白表达与RhoAmRNA、蛋白表达及活性均呈负相关,PI3Kδ mRNA、蛋白表达与MFI均呈负相关,RhoA mRNA、蛋白表达及活性与MFI均呈正相关.结论 慢阻肺小鼠AM吞噬功能低下,细胞骨架异常重排;PI3 Kδ特异性调控RhoA,且两者呈负相关;慢阻肺小鼠AM PI3Kδ过度活化致RhoA活性降低从而使AM细胞骨架异常重排与其吞噬功能低下有关;PI3 Kδ抑制剂IC87114抑制慢阻肺小鼠AM PI3Kδ活化,使RhoA活性改善,部分恢复慢阻肺AM吞噬功能.
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RhoA与2型糖尿病大鼠心肌病变的关系及法舒地尔的干预作用
目的 探讨RhoA在糖尿病心肌病变中的作用及法舒地尔治疗的影响.方法 以高脂高糖饲料联合小剂量链脲佐菌素(30 mg/kg)腹腔注射制备2型糖尿病SD大鼠模型(n=30),将成模大鼠随机分为糖尿病组(n=15)和法舒地尔干预组(n=15),正常SD大鼠(n=10)作为对照组.法舒地尔干预组给予法舒地尔10 mg·kg-1·d-1腹腔注射,糖尿病组和对照组均给予等体积生理盐水腹腔注射.药物干预持续4周.实验末,取大鼠心脏,称重并计算心脏肥厚指数.取左心室组织,进行光镜、电镜观察;应用免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应分别检测RhoA在心肌组织中的蛋白表达(用累积吸光度值表示)及mRNA表达.两组数据比较采用t或t'检验.结果 糖尿病组大鼠心脏肥厚指数(0.0060±0.0004)高于正常对照组(0.0030±0.0003)(t=-21.121,P=0.005),法舒地尔干预组大鼠心脏肥厚指数(0.0050±0.0004)低于糖尿病组(t=4.523,P=0.008).光镜、电镜观察显示糖尿病组心肌病理改变明显,法舒地尔干预组心肌病理变化减轻.免疫组化分析示糖尿病组大鼠心肌RhoA的累积光密度值(70±10)是对照组(24±3)的2.89倍,法舒地尔干预组(53±6)比糖尿病组降低了25%.糖尿病组大鼠心肌RhoA mRNA表达(1.43±0.16)高于正常对照组(0.42±0.06)(t=-33.437,P=0.012),法舒地尔干预组(0.73±0.13)较糖尿病组减少(t=8.145,P=0.038).大鼠心肌RhoA的蛋白表达水平及mRNA表达水平与心脏肥厚指数均呈正相关(r=0.94、0.85,均P<0.05).结论 RhoA与糖尿病心肌病变的发生发展存在密切关系,法舒地尔通过下调RhoA的表达发挥对2型糖尿病心肌的保护作用.
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肝细胞肝癌中RhoA基因表达及其与肿瘤临床病理特征的关系
目的 研究RhoA基因在肝细胞肝癌中的表达及其与肝癌临床病理特征的关系.方法 应用实时荧光定量RT-PCR与Western blot同步检测64例肝细胞肝癌及对应癌旁组织中RhoA mRNA及蛋白的表达情况,分析RhoA基因的表达与肝细胞肝癌临床病理参数的关系.结果 肿瘤组织中RhoA mRNA的表达量明显高于癌旁组织(t=3.445,P=0.0006),RhoA mRNA肝癌中的表达水平与肿瘤病理分期密切相关,在门静脉受侵犯(t=2.667,P=0.009)、有微卫星灶(t=2.172,P=0.038)和pTNM分期较晚(Ⅲ和Ⅳ期,t=2.551,P=0.013)的患者中明显升高.Western blot结果显示肿瘤组织中RhoA蛋白的水平明显高于癌旁组织(t=3.532,P=0.0002),RhoA蛋白的含量在门静脉受侵犯(t=2.087,P=0.042)、有微卫星灶(t=2.254,P=0.031)和pTNM分期较晚(Ⅲ和Ⅳ期;t=2.812,P=0.007)的患者中明显升高.RhoA在肝癌组织中高表达,其表达量与肿瘤侵袭能力、门静脉癌栓以及肿瘤分期相关.结论 RhoA基因可能成为一种新的肿瘤标志物,用于判断良恶性、肿瘤转移能力和估计预后.
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RhoA、ROCK Ⅰ在内异症组织中的表达
内异症是妇科常见的一种良性疾病,其发病率逐年上升,且具有与恶性肿瘤相似的侵袭、转移、复发等生物学行为特性,但其发病机制尚不明确,在临床上又缺乏理想的治疗方法,因此,对内异症临床及基础的研究一直是妇科研究领域的热点.而Rho/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)是机体各组织中普遍存在的一条信号传导通路,调节细胞骨架的活动,进而参与细胞迁移,已被证实ROCK与恶性肿瘤细胞的侵袭密切相关[1],但其在内异症发病中的作用报道极少.RhoA是Rho亚族的主要成员之一,属于小分子G蛋白超家族,广泛表达于不同类型的细胞和组织中,具有多种生物学功能,主要参与细胞骨架重组、细胞形态改变、细胞移动与黏附、细胞极化和激活DNA转录功能[2].ROCK又称Rho相关激酶,是位于Rho下游的关键激酶,能将Rho的活化信号传递给其底物,从而发挥上述各种生物学作用.
