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血管外膜成纤维细胞在血管损伤后狭窄中的作用
血管损伤后狭窄是许多心血管疾病发展到后期的共同病理改变,严重影响了心血管疾病的治疗和预后.研究发现血管外膜成纤维细胞在此过程中发挥重要作用,该文对血管外膜成纤维细胞在血管损伤中的结构和功能变化等行为特征,如增殖,迁移,分泌细胞外基质及合成的细胞因子和酶等进行了综述.
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Ifi204基因表达对大鼠血管外膜成纤维细胞凋亡和迁移的影响
目的 探讨ifi204基因过表达与沉默对大鼠血管外膜成纤维细胞(VAF)凋亡和迁移的影响.方法 原代培养大鼠VAF,利用携带ifi204基因的慢病毒颗粒或空载体慢病毒颗粒感染VAF,分别作为实验组(ifi204 lv组)和阴性对照组(blank lv组).用ifi204基因小干扰RNA瞬时干预VAF使其沉默(ifi204 siRNA组)、空白小干扰RNA作为阴性对照组(control siRNA组),未经处理的VAF作为空白对照组(negative组).流式细胞仪检测细胞凋亡,细胞划痕法和Transwell法测定细胞迁移情况,用real-time PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白表达.结果 与blank lv组、control siRNA组、ifi204 siRNA组和negative组相比,ifi204 lv组的P204、P53 mRNA和蛋白表达及细胞凋亡率明显上调(P＜0.05),细胞迁移速度降低(P＜0.05).转染ifi204 siRNA可抑制P204、P53的mRNA和蛋白表达(P＜0.05),提高细胞活力,抑制细胞凋亡(P＜0.05),加快细胞迁移速度(P＜0.05).结论 ifi204基因表达对大鼠VAF细胞凋亡和迁移的影响可能与激活P53表达有关.
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磷酸二酯酶1A参与调节转化生长因子β1诱导的血管外膜成纤维细胞胶原表达
目的 探讨环核苷酸依赖的磷酸二酯酶1A(PDE1A)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的血管外膜成纤维细胞(AF)Ⅰ型胶原表达中的作用.方法 采用组织块贴壁法培养SD大鼠胸主动脉AF.Bradford方法测定蛋白浓度,免疫印迹技术观察Ⅰ型胶原和PDE1A蛋白表达,Leica Qwin软件进行图像灰度分析.结果 1)TGF-β1上调Ⅰ型胶原蛋白表达呈时间和剂量依赖性,以TGF-β1 (10 ng/mL)诱导AF 24 h上调Ⅰ型胶原蛋白表达强,较诱导前上调(147.5±38.7)%(P<0.05).2)TGF-β1上调PDE1A蛋白的表达呈时间和剂量依赖性,TGF-β1(20 ng/mL)诱导AF 24 h PDE1A蛋白表达量达(302.7±86.3)%,较诱导前显著上调(P<0.01);3)非特异性PDE抑制剂IBMX和特异性PDE1A抑制剂IC86340均显著抑制TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原的表达,抑制率分别达24.6%和15.8%,(P<0.05,P<0.05).结论 PDE1A参与TGFβ-1诱导的血管外膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的调节.
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RhoA/ROCK通路参与血管紧张素Ⅱ诱导的血管外膜成纤维细胞表型转化
目的 血管外膜成纤维细胞(AF)的表型转化在血管重塑过程中起了重要作用.通过观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管AF中RhoA/ROCK通路活性的影响,探讨该通路在AF/肌成纤维细胞(MF)表型转化中的作用.方法 AngⅡ刺激体外培养的SD大鼠血管AF,测定刺激后10、30 min RhoA的活性变化,并分别测定2、6、12、24 h ROCK底物肌球蛋白磷酸酶目标亚单位1(MYPT1)的磷酸化水平,Western blot检测AF/MF表型转化标记蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达,并观察腺病毒dominant negative N19RhoA(dnN19RhoA,MOI=200)和ROCK抑制剂Y27632(10μmol/L)对α-SM-actin表达的影响.结果 AngⅡ刺激使AF RhoA活性的明显增强及ROCK底物MYPT1的磷酸化水平明显增加.刺激30 min RhoA活性约为未刺激的3倍,刺激12 h MYPT1的磷酸化约为未刺激的3.5倍.dnN19RhoA和Y27632均可明显抑制AngⅡ诱导的血管Afα-SM-actin表达,抑制α-SM-actin表达程度均约为75％.结论 AngⅡ可激活血管AF中的RhoA/ROCK通路,该通路参与了AngⅡ诱导的血管AF/MF表型转化.
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RhoA/Rho激酶通路在血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管外膜成纤维细胞表达纤维连接蛋白中的作用
目的 观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠血管外膜成纤维细胞(VAF)纤维连接蛋白(FN)表达的影响,并探讨RhoA/Rho激酶通路在AngⅡ诱导FN表达中的相关机制.方法 分别以不同时间(0、6、12、24、48 h)和不同剂量(0、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L) AngⅡ刺激体外培养的SD大鼠VAF,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应及Western blot检测FN的表达变化,并分别应用表达目的基因N19RhoA的重组腺病毒和Rho激酶抑制剂Y27632进行干预,观察其对AngⅡ诱导FN表达的影响.结果 AngⅡ促进大鼠VAF表达FN.应用10-7 mol/LAngⅡ刺激VAF 24 h,FN mRNA表达和蛋白表达增高为明显(均P＜0.05).与AngⅡ刺激组比较,表达目的基因N 19RhoA的重组腺病毒和Y27632可明显抑制AngⅡ诱导的FN mRNA(N19RhoA组0.78±0.11,Y27632组0.72±0.08比AngⅡ刺激组1.82±0.12,均P＜0.05)和蛋白表达(N19RhoA组1.56±0.12,Y27632组1.43±0.12比AngⅡ刺激组3.89±0.32,均P＜0.05).结论 AngⅡ促进大鼠VAF表达FN,RhoA/Rho激酶通路参与了该过程的调控.
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抑制干扰素诱导蛋白16表达对人脑血管外膜成纤维细胞增殖、凋亡及迁移的影响
目的 探讨抑制干扰素诱导蛋白16(IFI16)表达后对人脑血管外膜成纤维细胞(HBVAF)增殖、凋亡与迁移的影响及其可能机制.方法 培养HBVAF分3组,未经处理的HBVAF作为空白对照组,转染非特异性小干扰RNA(siRNA)的HBVAF作为阴性对照组,转染IFI16 siRNA的HBVAF作为IFI16 siRNA组.应用蛋白免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定细胞中1FI16、p53、p21蛋白和mRNA表达水平.用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡,Transwell法测定细胞迁移情况.结果 与阴性对照组比较,转染IFI16 siRNA后,HBVAF中IFI16、p53及p21蛋白和mRNA表达水平下调,IFI16 siRNA组MTT吸光度值增高(0.70±0.01比0.65±0.01,P＜0.05),IFI16 siRNA组、阴性对照组与空白对照组之间在细胞迁移数目与凋亡比例上差异无统计学意义.结论 抑制IFI16表达可促进HBVAF增殖,其机制可能部分与抑制p53及p21表达有关.
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肝细胞生长因子对血管外膜成纤维细胞表型转化及迁移的作用
目的检测肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor/scatter factor , HGF)对血管外膜成纤维细胞(adventitial fibroblasts, AF)表型转化及迁移的影响,探索其在血管外膜重构中的可能作用.方法体外培养AF,以不同剂量(0、20、40、80 ng/ml)HGF刺激AF及40 ng/ml HGF刺激AF不同时间(0、4、16、24小时),蛋白免疫印迹方法(Western blotting)分析不同条件刺激后AF中α-平滑肌肌动蛋白(α-SM actin)的表达变化;用transwell检测不同浓度HGF对AF迁移的影响.结果 HGF可上调AF中α-SM actin表达,呈一定剂量依赖性和时间依赖性;40 ng/ml HGF可明显促进AF迁移,迁移细胞数目在一定范围内随着HGF浓度增加而增加.结论 HGF能诱导AF表型转化为肌成纤维细胞(myofibroblasts, MF),促进AF迁移,在血管外膜重构中可能具有一定作用.
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自发性高血压大鼠胸主动脉外膜胶原分布及含量的变化
目的 自发性高血压大鼠(SHR)胸主动脉外膜胶原分布及含量的变化。方法 天狼猩红染色法观察不同周龄组(4W、8W、24W)大鼠胸主动脉外膜胶原的分布，氯胺T氧化法测定不同周龄组胸主 动脉外膜胶原含量，组织块贴片法进行血管外膜成纤维细胞的培养，并采用细胞免疫化学法检 测血管外膜成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。结果 大鼠胸主动脉胶原主要分布于血管外膜；自发性高血压大鼠胸主动脉外膜胶原含量在8周、24周高于对照京都种Wistar大鼠(WKY)；血管外膜成纤 维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫细胞化学染色呈阳性。结论 胸主动脉外膜胶原的沉积可能参与高血压血管重塑过程，血管外膜成纤维细胞可合成Ⅰ、Ⅲ型胶原。
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E1A激活基因阻遏子基因表达与血管外膜成纤维细胞表型转化的关系
目的：探讨E1A激活基因阻遏子（CREG）基因表达与血管外膜成纤维细胞（AFs）表型转化间的关系。方法制作小鼠颈动脉损伤模型，免疫荧光染色观察血管外膜中CREG与平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达变化；培养小鼠原代AFs，外源性应用血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导其表型转化，RT-PCR和Western-blot检测不同作用时间及不同浓度AngⅡ刺激AFs后CREG和α-SMA mRNA和蛋白质表达。结果血管损伤后1 d、3 d血管外膜增生显著，外膜中α-SMA表达显著上调，而CREG表达显著下调；血管损伤后7 d、14 d外膜增生有所缓解，α-SMA表达水平逐渐下降，而CREG表达也有所恢复。应用AngⅡ诱导AFs发生表型转化，AFs中α-SMA mRNA和蛋白水平显著上调，而CREG mRNA和蛋白水平显著下调，并且呈时间和剂量依赖性。结论在体和离体模型均表明AFs表型转化过程中伴随CREG基因表达下调，提示CREG基因可能参与AFs的表型转化。
关键词： E1A激活基因阻遏子 血管外膜成纤维细胞 表型转化 -
血管外膜成纤维细胞及其还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶激活在血管损伤中的作用
血管外膜是血管壁复杂的组成部分，血管外膜成纤维细胞（AF）是血管外膜主要的细胞成分，在血管的病理生理过程中发挥着重要作用。AF的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶激活与活性氧生成是多种血管损伤的始发阶段和共同机制。本综述对AF及其NADPH氧化酶、活性氧在血管损伤中的作用进行了总结。
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晚期糖基化终产物对大鼠血管外膜成纤维细胞中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶p22phox亚基及活性氧表达的影响
目的:探讨晚期糖基化终产物(AGE)对大鼠血管外膜成纤维细胞(AF)中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶p22phox亚基及活性氧表达的影响.方法:用组织贴块法培养SD大鼠的血管外膜成纤维细胞,用逆转录-聚合酶链反应、蛋白质印迹检测不同浓度的糖基化人血清白蛋白(AGE-HSA,分为对照组、100 μg/ml AGE-HSA组,200 μg/ml AGE-HSA组、300 μg/ml AGE-HSA组)对NADPH氧化酶p22phox亚基信使核糖核酸(mRNA)及蛋白的表达的影响,并观察不同干预因素[分为对照组1、200 μg/ml AGE-HSA组(200 μg/ml处理组1)、200 μg/ml AGE-HSA+50 μg/ml抗RAGE中和抗体组(抗RAGE中和抗体组1)及200 μg/ml AGE-HSA+30 nmol/L坎地沙坦组(坎地沙坦组1)对AGE-HSA上调NADPH氧化酶p22phox亚基mRNA和蛋白表达的影响.用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐检测不同干预因素[空白对照组、AGE-HSA 200 μg/ml组(200 μg/ml处理组2)、200 μg/ml AGE-HSA+50 μg/ml 抗RAGE中和抗体组(抗RAGE中和抗体组2)、200 μg/ml AGE-HSA+30 μmol/L夹竹桃素组(夹竹桃组),200 μg/ml AGE-HSA+30 nmol/L坎地沙坦组(坎地沙坦组2)对血管外膜成纤维细胞内活性氧表达的影响.结果:3个浓度(100 μg/ml、200 μg/ml和300 μg/ml)的AGE-HSA组均与对照组比较,血管外膜成纤维细胞NADPH氧化酶p22phox亚基mRNA及蛋白的表达随AGE-HSA增加呈浓度依赖性上调;抗RAGE中和抗体组1、坎地沙坦组1比200 μg/ml处理组1的p22phox mRNA及蛋白表达降低;抗RAGE中和抗体组2、夹竹桃素组2及坎地沙坦组2比200 μg/ml AGE-HSA处理组2血管外膜成纤维细胞内活性氧相对荧光强度降低,上述比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论:AGE-HSA经由RAGE影响活性氧与NADPH氧化酶p22phox亚基的表达上调,活性氧的上调与NADPH氧化酶p22phox亚基表达相关.NADPH氧化酶抑制剂及坎地沙坦可通过下调NADPH氧化酶p22phox亚基的表达减少血管外膜成纤维细胞内活性氧的产生.
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17β-雌二醇抑制碱性成纤维细胞生长因子诱导的血管外膜成纤维细胞增殖
目的探讨17β-雌二醇(E2)对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的血管外膜成纤维细胞(VAF)增殖的影响.方法将培养的血管外膜成纤维细胞分4组:对照组,单纯bFGF组,单纯E2组,bFGF+E2组.用3H-Tdr掺入反映细胞DNA合成、3H-Proline掺入反映细胞的胶原合成状况;用Western Breeze检测血管外膜成纤维细胞中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)的蛋白表达及活性.结果bFGF使血管外膜成纤维细胞DNA合成增加18～23倍、胶原合成增加17～21倍、细胞数目增加18～22倍,E2可使bFGF的这些促血管外膜成纤维细胞增殖效应降低约50%.bFGF使VAF中ERK蛋白表达量增加350%,使ERK磷酸化蛋白表达量增加120%,E2使bFGF诱导的VAF中ERK蛋白表达量下降44%,ERK磷酸化蛋白表达量下降22%;E2使bFGF诱导的VAF中MKP-1的蛋白表达量增加154%.结论E2可抑制bFGF诱导的VAF增殖,其抑制VAF增殖与抑制VAF中ERK蛋白表达,降低ERK活性,促进MKP-1表达有关.
关键词： 雌二醇 成纤维细胞生长因子2 血管外膜成纤维细胞 -
血管外膜及其成纤维细胞在血管增殖性病变中的作用
血管增殖性病变导致的血管损伤和重塑是血管内膜损伤后再狭窄、动脉粥样硬化等多种心血管疾病发病的共同病理基础.有充足的证据表明,血管内皮细胞(VEC)、血管平滑肌细胞(VSMC)、血管外膜成纤维细胞(AF)、其他血管壁细胞和基质均参与血管增殖性病变.20年以来,人们把血管内膜作为研究的重点.传统的观点认为,处于血管外层的血管外膜只对血管起支持和营养作用[1,2].越来越多的证据表明,AF是血管新生内膜形成、不良血管重塑和血管再狭窄的病理基础.
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转化生长因子β对血管重塑的调节作用
转化生长因子β(TGF-β)是一种能够调节细胞生长、分化及细胞外基质生成的生长因子.血管重塑是很多心血管疾病发生的共同病理过程,TGF-β能够诱导血管外膜成纤维细胞增生及其向肌成纤维细胞的表型转化,在血管损伤部位促进血管重塑等一系列改变.Smad蛋白参与TGF-β细胞内信号转导,通过与不同蛋白相结合形成复合体,调控TGF-β靶基因的表达,从而发挥多种生物学功能.本文就TGF-β对血管外膜成纤维细胞增殖、迁移和表型转化的影响进行综述.
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血管紧张素Ⅱ及其受体阻断剂对大鼠血管外膜成纤维细胞亚群迁移和ET-1表达的影响
本研究旨在观察血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)及其受体阻断剂对SD大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞亚群迁移及内皮素-1 (endothelin-1,ET-1)表达的影响.采用克隆环法进行血管外膜成纤维细胞单克隆培养,并观察其细胞形态；RT-PCR方法进行细胞纯度鉴定;Transwell小室法检测Ang Ⅱ对细胞亚群迁移的影响；荧光定量-PCR方法检测Ang Ⅱ及其拮抗剂对preproET-1 mRNA表达的影响；ELISA法检测Ang Ⅱ及其拮抗剂对ET-1分泌的影响.结果显示,克隆环法获得血管外膜成纤维细胞两个亚群:纺锤形细胞亚群和圆形细胞亚群.RT-PCR检测显示所获得的成纤维细胞亚群是纯细胞系.Transwell小室实验结果表明,两个细胞亚群均具备迁移能力,与自身对照相比,Ang Ⅱ显著促进圆形细胞迁移,对纺锤形细胞迁移无明显影响；Ang Ⅱ (1×10-8～1×10-6 mol·L-1)对纺锤形细胞preproET-1 mRNA的表达及ET-1分泌无显著性影响,而呈浓度依赖性显著增加圆形细胞preproET-1 mRNA的表达及ET-1的分泌(P＜0.05,P＜0.01)；氯沙坦阻断Ang Ⅱ诱导的圆形细胞preproET-1 mRNA的表达及ET-1的分泌,对纺锤形细胞preproET-1 mRNA的表达及ET-1的分泌无明显影响.以上结果提示,SD大鼠血管外膜成纤维细胞有两个细胞亚群:纺锤形细胞亚群和圆形细胞亚群.AngⅡ显著促进圆形细胞的迁移和ET-1的表达,提示两个细胞亚群的迁移机制可能不同,两种亚群在血管重建和修复过程中可能发挥不同作用.
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紫杉醇对血管外膜成纤维细胞增殖和迁移的影响
目的 观察紫杉醇对血管外膜成纤维细胞(AF)增殖、表型转化和迁移的影响.方法 选取雄性SD大鼠,用贴壁法培养胸主动脉外膜AF,用免疫荧光法检测AF增殖细胞核抗原(PCNA),用流式细胞仪检测细胞周期,用Transwell法测定细胞迁移能力.结果 10 nmol·L-1紫杉醇对成纤维细胞存活率较空白组无明显差异,表明其对成纤维细胞无明显杀伤作用.与空白组比较,9 nmol·L-1紫杉醇可显著增加G0/G1期AF细胞百分比(P＜0.05),降低G2/M及S期细胞百分比(P＜0.05),并显著降低AF细胞PCNA表达,抑制其迁移能力(P＜0.01).结论 低浓度紫杉醇在不影响成纤维细胞生存活力的情况下,能显著抑制细胞增殖和迁移能力.
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熊果酸对大鼠血管外膜成纤维细胞增殖的影响
目的:研究采用MTT法检测不同浓度的熊果酸对大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞增殖的影响.方法:解剖分离SD大鼠的胸主动脉,获取胸主动脉血管外膜.对血管外膜成纤维细胞进行培养、纯化、传代.采用TGF-β1诱导血管成纤维细胞增殖,用不同浓度的熊果酸抑制细胞增殖,用MTT法检测不同浓度的熊果酸对TGF-β1诱导血管外膜成纤维细胞增殖的影响.结果:随着熊果酸浓度的增加,UA组的OD值逐渐减小,血管外膜成纤维细胞的抑制率逐渐增加,且各组UA细胞抑制率比较,差异均有统计学意义(P＜0.05 ),UA3组(UA浓度45μmol/L)的细胞抑制率作用强.结论:熊果酸对TGF-β1介导的胸主动脉外膜成纤维细胞增殖具有明显的抑制作用,该抑制作用随着熊果酸的浓度增加而增强.
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单壁碳纳米管对血管外膜成纤维细胞的毒性作用
目的 探讨不同剂量单壁碳纳米管(SWCNTs)对原代培养大鼠血管外膜成纤维细胞(VAF)的毒性作用,为SWCNTs的毒理学及生物安全性研究提供参考.方法 将SWCNTs制成颗粒悬液,设9个剂量组(0.80、1.60、3.20、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00μg/ml)对原代培养Wistar大鼠VAF细胞进行24h染毒,另设对照组.利用噻唑蓝(MTT)比色法和四唑单钠盐法(WST-1)检测SWCNTs对VAF细胞活性的影响.在此基础上计算出半致死浓度(IC50),再设5个剂量组(0.80、3.20、12.50、50.00、200.00μg/m1),另设对照组,检测SOD活性和MDA含量,以评价细胞的氧化损伤程度.结果 MTT实验结果显示,当剂量为100.00μg/ml时,细胞存活率为41.0%,明显低于对照组(72.3%),(P＜0.05);WST-1实验显示,当剂量为50.00μg/ml时,细胞存活率为51.2%,明显低于对照组(77.2%),(P＜0.05).当剂量为12.50μg/ml时,SOD活性为9.61 U/mg prot,明显低于对照组(14.24U/mg prot),(P＜0.05).当剂量为3.20μg/ml时,MDA含量为0.30nmol/mg prot,明显高于对照组(0.23 nmol/mg prot),(P＜0.05).结论 一定剂量的SWCNTs悬液可抑制VAF细胞活性,导致细胞氧化应激,产生毒性损伤.
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血管外膜成纤维细胞在动脉粥样硬化及PCI后再狭窄中的作用
血管外膜是动脉粥样硬化(AS)和经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后再狭窄等血管重构疾病的“积极参与者”.血管外膜不仅发挥简单的支持血管、提供营养物质的作用,越来越多的研究表明,外膜还主动参与了AS和PCI后再狭窄的病理过程.作为血管外膜重要的组成部分,外膜成纤维细胞(AF)通过活化、增殖、迁移,分泌细胞因子和细胞外基质导致血管外膜和内膜的增厚和管腔狭窄.另外,AF活化后还通过参与一氧化氮的调节、氧化应激和炎症反应等促进AS和PCI后再狭窄的形成.
关键词： 动脉粥样硬化 血管外膜成纤维细胞 经皮冠状动脉介入治疗 再狭窄 病理机制 -
过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型的改变
背景:近年来的研究表明,血管外膜成纤维细胞在血管损伤后新生内膜的增生中起重要作用,但对于引起血管外膜成纤维细胞表型转化的机制尚不十分清楚.目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptor,PPAR)γ激动剂对转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型改变,同时检测对Ⅰ胶原蛋白表达的作用.设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2007-07/2008-10在上海交通大学医学院附属第九人民医院组织工程实验室完成.材料;鼠龄2个月的健康雄性SD大鼠,体质量约120 g,用于体外培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞;转化生长因子β1由美国GenWay Biotech公司提供;罗格列酮粉剂为北京高盟化工有限公司产品.方法:实验分为3组:转化生长因子β1诱导组:以不同质量浓度的转化生长因子β1(3,5,10,15 μg/L)诱导成纤维细胞48 h;罗格列酮干预组:用不同浓度的PPAR-γ激动剂罗格列酮(5,10,30,50 μmol/L)干预成纤维细胞45 min后,加入转化生长因子β1 10 μg/L共同培养48 h:对照组:不添加任何干预措施.主要观察指标:①免疫组织化学α-平滑肌肌动蛋白检测不同浓度转化生长因子β1、罗格列酮干预后成纤维细胞的表型改变.②蛋白免疫印迹检测成纤维细胞中平滑肌α2肌动蛋白及Ⅰ型胶原蛋白的表达.结果:不同质量浓度转化生长因子β1诱导成纤维细胞48 h后,与对照组相比,5μg/L转化生长因子β1可明显刺激成纤维细胞表型改变及细胞中平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达,10μg/L转化生长因子β1刺激细胞表型改变及平滑肌α 2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达明显(P<0.05),随后转化生长因子β1再增加至15μg/L,与10μg/L转化生长因子β1浓度组相比,其刺激细胞表型改变及平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达不再增加(P>0.05).不同浓度罗格列酮干预10 μg/L转化生长因子β1诱导的成纤维细胞48 h后,与对照组相比,30 μmol/L可明显抑制成纤维细胞表型改变及细胞中平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达(P<0.05).结论:PPAR-γ激动剂罗格列酮能抑制转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型改变及平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达.
