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RhoA/ROCK通路参与血管紧张素Ⅱ诱导的血管外膜成纤维细胞表型转化
目的 血管外膜成纤维细胞(AF)的表型转化在血管重塑过程中起了重要作用.通过观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管AF中RhoA/ROCK通路活性的影响,探讨该通路在AF/肌成纤维细胞(MF)表型转化中的作用.方法 AngⅡ刺激体外培养的SD大鼠血管AF,测定刺激后10、30 min RhoA的活性变化,并分别测定2、6、12、24 h ROCK底物肌球蛋白磷酸酶目标亚单位1(MYPT1)的磷酸化水平,Western blot检测AF/MF表型转化标记蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达,并观察腺病毒dominant negative N19RhoA(dnN19RhoA,MOI=200)和ROCK抑制剂Y27632(10μmol/L)对α-SM-actin表达的影响.结果 AngⅡ刺激使AF RhoA活性的明显增强及ROCK底物MYPT1的磷酸化水平明显增加.刺激30 min RhoA活性约为未刺激的3倍,刺激12 h MYPT1的磷酸化约为未刺激的3.5倍.dnN19RhoA和Y27632均可明显抑制AngⅡ诱导的血管Afα-SM-actin表达,抑制α-SM-actin表达程度均约为75％.结论 AngⅡ可激活血管AF中的RhoA/ROCK通路,该通路参与了AngⅡ诱导的血管AF/MF表型转化.
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Rho激酶与心血管疾病
1996年,人们发现Rho激酶(Rho associated kinase,ROCK)是Rho的下游效应器之一,随着研究的深入,发现其参与了血管平滑肌细胞、内皮细胞、外膜细胞、心肌细胞的形态、收缩、迁移、增殖、凋亡、基因转录等多种病理生理改变,它的异常活化与心血管疾病的发病机制密切相关.近年来关于ROCK的研究主要集中在心血管系统方面,主要因为:(1)Rho/ROCK通路参与的各种细胞功能在心血管疾病的发生发展中发挥作用;(2)细胞内信号转导通路通过多种血管活性物质,如血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)、5羟色胺、凝血酶、血小板生长因子、胞外核苷酸和尾加压素Ⅱ等参与心血管疾病的病理生理过程;(3)他汀类药物在治疗心血管疾病中表现出的调脂外作用的多效性,也与抑制RhoA/ROCK相关[1].
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RhoA、ROCK Ⅰ在内异症组织中的表达
内异症是妇科常见的一种良性疾病,其发病率逐年上升,且具有与恶性肿瘤相似的侵袭、转移、复发等生物学行为特性,但其发病机制尚不明确,在临床上又缺乏理想的治疗方法,因此,对内异症临床及基础的研究一直是妇科研究领域的热点.而Rho/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)是机体各组织中普遍存在的一条信号传导通路,调节细胞骨架的活动,进而参与细胞迁移,已被证实ROCK与恶性肿瘤细胞的侵袭密切相关[1],但其在内异症发病中的作用报道极少.RhoA是Rho亚族的主要成员之一,属于小分子G蛋白超家族,广泛表达于不同类型的细胞和组织中,具有多种生物学功能,主要参与细胞骨架重组、细胞形态改变、细胞移动与黏附、细胞极化和激活DNA转录功能[2].ROCK又称Rho相关激酶,是位于Rho下游的关键激酶,能将Rho的活化信号传递给其底物,从而发挥上述各种生物学作用.
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抑郁大鼠模型额叶及海马区Rho激酶表达变化及其意义的初步探讨
我们观察抑郁大鼠模型前额叶及海马区Rho激酶(ROCK)表达情况,仞步探讨Rho/ROCK通路在抑郁障碍形成中的作用.
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处理好非预约病人带来的问题
Charles Davant先生是北卡罗莱纳州Blowing Rock市的一名家庭医生,近刚从波罗的海度假回来,这趟旅行的所有开支都来自于给非预约病人看病的收入.她说:"我的诊所有3个医生,我们对所有病人都一视同仁地提供服务,给予他们想要的,不管他们是否是我们的注册病人,不管他们是否提前进行了预约."
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ROCK抑制剂对Hep-2细胞生长、侵袭和迁移的作用
目的 用ROCK特异性抑制剂Y-27632处理Hep-2细胞系后,探讨ROCK信号转导通路对细胞的生长、侵袭和迁移的影响.方法 商品化细胞系Hep-2经Rho激酶ROCK抑制剂Y-27632处理后,分别在光镜下观察细胞形态学变化,通过迁移实验和Transwell matrigel侵袭实验及MTT实验,观察细胞运动、迁移增殖能力的变化.结果 经Y-27632处理后,Hep-2细胞的形态明显变化,细胞的侵袭能力明显下降,运动能力下降.结论 ROCK信号转导通路参与Hep-2细胞体外运动、侵袭、迁移的调节.ROCK特异性抑制剂Y-27632可降低Hep-2细胞的侵袭能力,干扰ROCK有望作为喉癌靶向治疗的新靶点,为喉癌的靶向治疗或新基因治疗带来希望.
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ROCK抑制剂Y-27632对Hep-2细胞中RhoC及ROCK表达的影响
目的 探讨ROCK抑制剂Y-27632对喉癌细胞系Hep-2中RhoC及ROCK表达的影响.方法 在体外培养的喉癌细胞系Hep-2的培养液中加入ROCK抑制剂Y-27632后,用免疫荧光法,RT-PCR及Western blot检测喉癌细胞Hep-2细胞系RhoC及ROCK-1,ROCK-2的mRNA及蛋白的表达水平.结果 经过Y-27632处理后,Hep-2中RhoC及ROCK-1和ROCK-2在细胞的mRNA及蛋白的表达下降.结论 Y-27632可抑制ROCK-1、ROCK-2及RhoC的表达.
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Rho激酶抑制剂治疗肺动脉高压的研究进展
Rho激酶(ROCK)是Rho蛋白下游效应分子之一,在血管平滑肌细胞收缩、细胞迁移、增殖以及凋亡等多项细胞功能中被证实具有重要的细胞内信号转导作用[1].已发现动脉粥样硬化、再狭窄、高血压、肺动脉高压和心肌肥厚等多种心血管疾病患者都存在ROCK的异常活化[2].动物实验和临床研究均表明ROCK抑制剂能够安全有效地治疗肺动脉高压.本文就近年来ROCK抑制剂治疗肺动脉高压的研究进展进行简要综述.
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Rho/ROCK信号通路在牙周膜细胞中作用的研究进展
Rho/Rho相关的盘绕蛋白激酶(ROCK)信号是细胞骨架动力学的重要调节因子之一,它主动地和(或)被动地决定着细胞的命运,如增殖、迁移、分化和凋亡.在牙周创面愈合过程中,重要的是在缺损部位吸收新生干细胞,以促进牙周组织的再生和稳态.牙周膜(PDL)细胞含有异质性成纤维细胞,包括间充质干细胞,有助于牙齿支持组织的重建.因此,PDL细胞的生物再生一直是牙周治疗的终目标.文章介绍了Rho/ROCK信号对牙周膜细胞的影响的新认识.
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替米沙坦对胰岛素抵抗大鼠冠状动脉Rho/ROCK信号通路的影响
目的:观察胰岛素抵抗大鼠和正常大鼠冠状动脉RhoA及ROCK表达水平及替米沙坦对胰岛素抵抗大鼠冠状动脉组织RhoA及ROCK表达水平的影响.方法:30只雄性SD大鼠随机分为3组,对照组予普通饮食;胰岛素抵抗(IR)组给予高果糖饮食+链脲佐菌素(25 mg/kg)造模,替米沙坦干预(Tel)组在胰岛素抵抗基础上给予替米沙坦5 mg/(kg·d)干预.干预4周后分离冠状动脉采用RT-PCR和Western Blotting法测定各组大鼠冠状动脉组织中RhoA、ROCK1、ROCK2 mRNA和蛋白表达水平.结果:IR组大鼠较对照组RhoA蛋白表达水平降低,ROCK1 mRNA的表达升高.Tel组大鼠RhoA蛋白表达水平较IR组明显升高.IR组及Tel组ROCK2蛋白表达水平较对照组升高,差异有统计学意义,其余组间RhoA mRNA、ROCK1 mRNA、ROCK1蛋白、ROCK2蛋白表达差异均无统计学意义.结论:替米沙坦可部分逆转胰岛素抵抗大鼠冠状动脉RhoA蛋白水平降低,但对RhoA mRNA、ROCK1、ROCK2mRNA及蛋白的表达水平的调节作用不明显.
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ROCK介导缓激肽开放SD大鼠血肿瘤屏障
目的 利用ROCK的特异性抑制剂Y-27632,研究ROCK是否介导缓激肽开放血肿瘤屏障.方法 应用ROCK的特异性抑制剂Y-27632预处理大鼠原代脑微血管内皮细胞后,用缓激肽诱导血肿瘤屏障开放,测量跨内皮阻抗值(TEER),辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量,分析血肿瘤屏障的通透性的改变；应用Westernblot法检测紧密连接相关蛋白ZO-1的表达；应用免疫荧光方法观察原代大鼠脑微血管内皮细胞紧密连接相关蛋白ZO-1和丝状肌动蛋白结构和分布的改变.结果 Y-27632显著抑制缓激肽诱导TEER值的降低,HRP的升高；Y-27632显著抑制ZO-1的表达；Y-27632抑制ZO-1由内皮细胞的边缘向细胞质转移,抑制丝状肌动蛋白由细胞膜边缘向细胞中央区分布,应力纤维形成明显减少.结论 ROCK介导缓激肽开放血肿瘤屏障.
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ROCK参与乙醇诱导肠上皮细胞屏障通透性增加
目的 探讨Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK)参与乙醇诱导的肠上皮细胞屏障通透性增加的作用.方法 应用ROCK特异性抑制剂Y-27632预处理Caco-2细胞后,测定跨上皮细胞阻抗值(TEER)及荧光黄透过率,分析肠上皮细胞屏障的通透性的变化.应用Western blot的方法检测肌球蛋白轻链(MLC)、p-MLC及紧密连接相关蛋白(occludin)的表达.结果 Y-27632显著抑制乙醇诱导的TEER值降低、荧光黄透过率升高、p-MLC/MLC及occludin(S/IS)比直的增加.结论 ROCK参与乙醇诱导肠上皮细胞屏障通透性增加.
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RhoA、ROCK1和ROCK2信号蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达
目的:探讨RhoA、ROCK1和ROCK2蛋白在乳腺浸润性导管癌组织中的表达.方法:用免疫组织化学检测RhoA、ROCK1、ROCK2、雌激素ER在35例乳腺浸润性导管癌组织中的表达.结果:与病理分级Ⅰ～Ⅱ级比较,病理分级Ⅲ级RhoA蛋白表达减少,ROCK1蛋白表达明显增加,ROCK2蛋白表达明显减少.与淋巴结未转移组比较,有淋巴结转移组RhoA蛋白和ROCK1蛋白表达增加,ROCK2蛋白表达明显增加.与ER蛋白阴性组相比,ER蛋白阳性组RhoA蛋白表达增加,ROCK1蛋白表达减少,ROCK2蛋白表达增加.RhoA蛋白高表达时,ROCK1蛋白低表达,但无相关性(r=-0.259,P＞0.05)；RhoA蛋白高表达时,ROCK2蛋白高表达,呈显著正相关(r=0.673,P＜0.05)；ROCK1蛋白高表达时,ROCK2蛋白低表达,但无相关性(r=-0.087,P＞0.05).结论:ROCK2蛋白高表达可能促进乳腺癌淋巴结转移,RhoA与ROCK信号途径有可能成为乳腺癌治疗靶点.
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兔脑缺血后自噬激活与ROCK-JNK信号通路的关系
目的 探讨脑缺血后神经元自噬激活与Rho蛋白激酶(ROCK)-C-Jun氨基酸末端激酶(JNK)信号通路的关系.方法 建立蛛网膜下腔出血(SAH)后脑缺血兔脑模型,检测脑组织梗死面积确定模型是否成功.在二次注血后的不同时间处死模型,取脑缺血区域脑组织,行Western印迹检测脑组织中神经元细胞坏死、凋亡和自噬现象.通过Western印迹检测自噬抗体蛋白在兔脑模型中的表达情况.免疫组化检测脑缺血区域的自噬蛋白和ROCK-JNK信号通路蛋白的表达情况.结果 采用 Longa 线栓法建立 SAH 模型成功率较高.兔脑组织中存在神经元细胞坏死、凋亡和自噬现象,模型组脑组织梗死面积相比对照组增多.Western印迹及免疫组化证实迟发型血管痉挛与神经元细胞自噬存在关联.结论 脑缺血后的脑组织中存在神经元自噬现象且和ROCK-JNK信号通路存在一定关系.
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牵张应力对成骨肉瘤细胞MG-63中RhoA和ROCK表达的影响
目的:探索机械牵张应力对人成骨肉瘤细胞MG-63中RhoA/ROCK信号通路的影响.方法:将同一条件培养的细胞MG-63分为实验组(加力)与对照组(不加力),实验组采用Flexcell牵张应力加载系统,选择12％形变率作为加栽应力值,分为五个时间组,分别加载lh,4h,8h,12h,24h,RT-PCR检测RhoA、ROCKmRNA水平表达的变化,Westem-Blot检测RhoA与Rock蛋白含量变化.结果:RT-PCR显示MG-63细胞受应力刺激后1 hRhoA、ROCK均未见明显变化(P＞o.05),4小时后略有升高(P＜0.05),在8h达到大值(P＜0.05),12、24h降低,但仍高于对照组(P＜0.05);Western-Blot显示MG-63细胞受应力刺激后1 hRhoA、ROCK均未见明显变化,4h仍未见明显变化,在8h达到大值,12、24h降低,高于对照组.结论:机械牵张力加栽下MG-63细胞内RhoA、ROCK表达升高并随时间增加出现峰值,提示其可能在成骨细胞力学信号转导过程中发挥重要作用.
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RhoB/ROCK蛋白分子在重度子痫前期的表达
目的:探讨RhoB/ROCK蛋白分子在重度子痫前期(severe preeclampsia,sPE)患者胎盘组织中表达水平以及意义.方法:取sPE产妇和正常产妇胎盘组织各20例,通过Western blot和免疫组化检测胎盘组织中Rho亚家族蛋白(RhoB、RhoC)及其Rho激酶即ROCK( ROCKⅠ、ROCKⅡ)蛋白的表达水平,应用Spearman等级相关分析法检验RhoB、RhoC与ROCKⅠ、ROCKⅡ蛋白表达水平的相关性.结果:RhoB、ROCKⅠ、ROCKⅡ蛋白在sPE表达水平增加(P＜0.05)；sPE患者胎盘组织中RhoB与ROCKⅠ、ROCKⅡ蛋白表达水平均呈正相关(r=0.793,r=0.901,P＜0.05).结论:RhoB及其与下游分子ROCKⅠ、ROCKⅡ构成的信号通路,在sPE的发病中可能发挥着重要的作用.
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Rho激酶/ROCK在心脑血管方面的研究进展
Rho相关蛋白激酶(ROCK)作为丝氨酸-苏氨酸激酶家族的一个成员是Rho(小GTP酶)第一下游效应器研究表明,诸多心脑血管疾病的发生常伴随着ROCK的异常活化.目前,具有潜在的抑制ROCK活性的小分子化合物已经被开发,并在心脑血管疾病的诊疗中开展了临床测试.本文对ROCK在心脑血管疾病中所发挥的作用及ROCK抑制剂开发应用的新研究进展进行综述.
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针刺对脑缺血再灌注模型大鼠ROCK表达影响的动态观察
目的：通过检测针刺局灶性脑缺血再灌注大鼠不同时间段缺血侧脑组织中ROCK的表达，掌握各时段针刺治疗局灶性缺血再灌注大鼠的各项相关数据，推断针刺治疗的佳时间点。方法选取180只成年Wistar雄性大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组和针刺组，模型组和针刺组又分为6 h、24 h、48 h、72 h和2 w 5个亚组，共12个小组，每组15只。采用线拴法阻塞大鼠右侧大脑中动脉复制局灶性脑缺血动物模型，假手术组仅作颈动脉分离，空白组和假手术组于造模后第2天取材，模型组各小组分别于造模后6 h、24 h、48 h、72 h和2 w取材检测；而针刺组各小组分别于造模后6 h、24 h、48 h、72 h和2 w进行针刺百会、大椎、足三里处理后取材检测。结果针刺可以显著改善脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损情况，其中针刺6h组神经功能评分下调幅度大，与其他针刺组(24 h、48 h、72 h)比较差异均具有统计学意义(P＜0.05)。假手术组ROCK表达与空白组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；模型组(缺血再灌注6 h、24 h、48 h、72 h)ROCK表达与空白组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05)，其中缺血再灌注6 hROCK达到峰值。针刺组(缺血再灌注6 h、24 h、48 h)ROCK表达与模型组(缺血再灌注6 h、24 h、48 h)点对点比较，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。其中，缺血再灌注6 h针刺组ROCK下调为显著。结论针刺对脑缺血再灌注模型大鼠Rho/Rock具有抑制作用，而缺血再灌注6 h针刺为佳治疗时间点，可以大程度保护和改善缺血后的脑组织损伤。
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RhoA、ROCK在乳腺癌组织中的表达及其意义
目的:研究RhoA、ROCK在乳腺癌组织中的表达,探讨其与乳腺癌转移的相关性.方法:应用免疫组化S-P法,检测30例正常乳腺、58例乳腺癌组织中RhoA、ROCK蛋白的表达情况.分析其表达结果与临床病理特征的关系.结果:①RhoA、ROCK蛋白在正常乳腺组织中的表达率分别为0％、0％,在乳腺癌组织中的表达率分别为70.7％、81.0％,两者在乳腺癌组织中的表达水平明显高于正常乳腺组织(P＜0.05).②RhoA、ROCK蛋白表达与患者年龄、组织学分级无关(P＞0.05),与肿瘤大小、临床分期及有无淋巴结转移有关.③RhoA、ROCK蛋白两者表达水平呈正相关关系(P＜0.05).结论:RhoA、ROCK蛋白的表达与乳腺癌转移及预后有一定关系.结论:RhoA、ROCK的表达对评估乳腺癌的转移和预后具有一定的临床价值.
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Rho/Rock信号通路与肺纤维化相关性的研究进展
Rho/Rock信号通路是调控细胞增殖和组织分化的重要信号通路,也是调节干细胞自我更新过程的信号转导通路.在各种炎症因子的刺激下,通过激酶级联反应,Rho/Rock通路参与了细胞的收缩、趋化、黏附和浸润等生物学行为.Rho/Rock信号转导通路与肺纤维化密切相关,深入了解Rho/Rock通路在肺纤维化中的作用及其机制,有可能为肺纤维化的防治找到新的突破点.
