首页 > 文献资料
-
Piezo1蛋白在人退变软骨细胞应力模型中的表达特点
目的:探索新型机械敏感性离子通道Piezo1蛋白在人退变软骨细胞应力模型中的表达特点.方法:构建人退变软骨细胞体外培养-应力刺激模型,采用多通道细胞牵张应力加载系统FX-4000T 处理软骨细胞,根据预试验结果 加载0.5 Hz的加载频率和20％的细胞拉伸率.按细胞的处理时间分成0 h,2 h,12 h,24 h和48 h机械应力组.采用RT-PCR 技术,Western-blot检测Piezo1蛋白在周期性牵张应力作用下的表达水平.利用激光共聚焦显微镜检测Piezo1蛋白荧光的强弱.结果:(1)RT-PCR 结果 显示,2 h牵张应力组Piezo1的基因相对表达量较0 h牵张应力组增加(F=13.917,q=0.037 1,P<0.05),24 h牵张应力组Piezo1基因相对表达量达峰值, 而48 h牵张应力组Piezo1基因相对表达量较24 h牵张应力组降低,差异有统计学意义(F=13.917,q=0.049 5,P<0.05).(2)Western-blot结果 显示,2 h牵张应力组Piezo1的蛋白表达量较空白对照组(0 h牵张应力组)略有增加(F=19.341,q=0.037 1,P<0.05),24 h牵张应力组的Piezo1蛋白的表达量多,而48 h牵张应力组的Piezo1蛋白表达量较24 h牵张应力组降低(F=19.341,q=0.017 7,P<0.05).(3)Piezo1蛋白表达于髓核细胞的细胞质与细胞核,并且随着加力时间的增加,蛋白的荧光强度也有相应的增加.结论:在人类退变软骨细胞中,新型机械敏感性离子通道Piezo1蛋白有微量表达,加载周期性机械拉伸力后,Piezo1蛋白的表达量增多,并且呈现时间依赖性.
关键词： Piezo1蛋白离子通道 机械牵张应力 软骨细胞 -
牵张应力对成骨肉瘤细胞MG-63中RhoA和ROCK表达的影响
目的:探索机械牵张应力对人成骨肉瘤细胞MG-63中RhoA/ROCK信号通路的影响.方法:将同一条件培养的细胞MG-63分为实验组(加力)与对照组(不加力),实验组采用Flexcell牵张应力加载系统,选择12％形变率作为加栽应力值,分为五个时间组,分别加载lh,4h,8h,12h,24h,RT-PCR检测RhoA、ROCKmRNA水平表达的变化,Westem-Blot检测RhoA与Rock蛋白含量变化.结果:RT-PCR显示MG-63细胞受应力刺激后1 hRhoA、ROCK均未见明显变化(P＞o.05),4小时后略有升高(P＜0.05),在8h达到大值(P＜0.05),12、24h降低,但仍高于对照组(P＜0.05);Western-Blot显示MG-63细胞受应力刺激后1 hRhoA、ROCK均未见明显变化,4h仍未见明显变化,在8h达到大值,12、24h降低,高于对照组.结论:机械牵张力加栽下MG-63细胞内RhoA、ROCK表达升高并随时间增加出现峰值,提示其可能在成骨细胞力学信号转导过程中发挥重要作用.
-
机械牵张应力对人根尖牙乳头干细胞增殖分化的影响
目的 根尖牙乳头干细胞(SCAP)被看作是根尖周组织再生的种子细胞并被用于以干细胞为基础的根尖周组织再生工程中.文章探讨不同力值的机械牵张应力对人SCAP增殖、分化潜能的影响.方法 利用组织块酶消化法及有限稀释法分离、培养人SCAP并加以鉴定.根据对细胞加载机械牵张应力大小不同将实验分为150、200、250 g组,另设空白对照组(未做加力处理).利用MTT法检测不同大小静态机械牵张应力刺激对SCAP增殖活性的影响.利用Western blot检测机械牵张应力作用下SCAP成骨/成牙分化相关蛋白(ALP、OSX、DSP)表达的变化以及不同大小静态机械牵张应力作用下SCAP内质网应激分子伴侣GRP78的表达情况.结果 SCAP细胞经过3周的成骨诱导后进行茜素红染色,镜下可见块状矿化结节的出现,SCAP细胞经过2周的成脂诱导后进行油红O染色,镜下可见红染的脂滴出现.SCAP细胞表面抗原表型通过流式细胞仪检测分析显示:SCAP对CD31(2.46%,内皮细胞标记物)和CD45(0.07%,造血干细胞标记物)呈阴性表达,对CD90(99.89%,间质细胞标记)和STRO-1(15.21%,干细胞标记)呈阳性表达.与150 g组比较,200 g加力组的加载机械牵张应力第2天,SCAP增殖能力明显下降(P<0.05);250 g加力组的加载机械牵张应力的第2、3、4、5天,SCAP增殖能力显著下降(P<0.05).与200 g组比较,250 g加力组的加载机械牵张应力的第2、3、4、5天,SCAP增殖能力显著下降(P<0.05).Western blot检测结果显示:加载牵张应力的第5天,与对照组相比,150 g组、200 g组、250 g组成骨分化相关蛋白ALP和OSX和DSP表达均显著升高(P<0.05).与150 g组相比,200g组ALP、OSX表达差异无统计学意义(P>0.05),DSP表达显著升高(P<0.05);250 g组ALP、OSX、DSP表达均显著降低(P<0.05).与200 g组相比,250 g组ALP、OSX、DSP表达均显著降低(P<0.05).Western blot检测显示:加载牵张应力的第5天,与对照组GRP78表达(0.279±0.085)相比,150、200、250 g组GRP78表达(1.085±0.128、1.289±0.076、0.810±0.067)均显著升高(P<0.05).结论 机械牵张应力对人根尖牙乳头干细胞的增殖和成骨/成牙本质分化具有调控作用.内质网应激参与了机械牵张应力作用下的SCAP成骨/成牙分化过程,并促进了SCAP成骨/成牙分化.
-
机械牵张应力对成骨细胞增殖和分化影响的初步研究
目的:研究不同力值及加力时间的机械牵张应力对成骨细胞增殖和分化能力的影响.方法:采用Flexcell牵张应力加载系统,对成骨样细胞Saos-2进行不同力值、不同时间的刺激,MTT法检测细胞受力后的增殖变化；ALP试剂盒检测细胞受力后ALP活性的变化;半定量RT-PCR检测骨钙蛋白(OC)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA的表达；用茜素红染色观察矿化结节形成.结果:当应变值为12％时,力学刺激对成骨样细胞Saos-2增殖以及ALP活性的促进作用强(P＜0.01).应变值为12％的力学刺激呈时间依赖性明显上调了成骨样细胞Saos-2的增殖、ALP活性以及骨桥蛋白和骨钙蛋白mRNA的表达(P＜0.01)；牵张应力刺激组较对照组更加容易形成矿化结节.结论:大小适宜的牵张应力可以促进成骨细胞的增殖以及分化指标如ALP活性、骨桥蛋白和骨钙蛋白mRNA的转录水平、矿化结节的形成等,说明机械牵张应力对于成骨细胞的增殖和分化发挥着重要的调控作用.
-
牵张应力下Cofilin在成骨细胞中表达变化的实验研究
目的:观察机械牵张应力作用下人成骨肉瘤细胞MG-63中丝切蛋白(Cofilin)的表达.方法:将MG-63细胞分为加力组与对照组(不加力),加力组采用Flexcell牵张应力加载系统,用12％变形率的应力值进行力学刺激1、4、8、12、24 h,用免疫荧光染色观察Cofilin的变化,RT-PCR检测Cofilin mRNA水平含量的变化,Western-Blot测定细胞内Cofilin蛋白含量.结果:MG-63细胞受应力刺激后1、4 h细胞内Cofilin染色逐渐增强,8、12、24 h细胞染色逐渐减弱,但仍高于对照组.应力作用下Cofilin mRNA水平无明显变化(P＞0.05).Western Blot显示,加载后lh细胞内Cofilin含量增高(P＜0.05),4h时达到高峰(P＜0.05),8、12、24 h后Cofilin含量逐渐减少,但仍高于对照组(P＜0.05).结论:机械牵张应力刺激可明显上调Cofi-lin在MG-63细胞中表达,且具有时间依赖性,提示其可能在成骨细胞力学信号转导过程中发挥重要作用.
