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Piezo1蛋白在人退变软骨细胞应力模型中的表达特点
目的:探索新型机械敏感性离子通道Piezo1蛋白在人退变软骨细胞应力模型中的表达特点.方法:构建人退变软骨细胞体外培养-应力刺激模型,采用多通道细胞牵张应力加载系统FX-4000T 处理软骨细胞,根据预试验结果 加载0.5 Hz的加载频率和20％的细胞拉伸率.按细胞的处理时间分成0 h,2 h,12 h,24 h和48 h机械应力组.采用RT-PCR 技术,Western-blot检测Piezo1蛋白在周期性牵张应力作用下的表达水平.利用激光共聚焦显微镜检测Piezo1蛋白荧光的强弱.结果:(1)RT-PCR 结果 显示,2 h牵张应力组Piezo1的基因相对表达量较0 h牵张应力组增加(F=13.917,q=0.037 1,P<0.05),24 h牵张应力组Piezo1基因相对表达量达峰值, 而48 h牵张应力组Piezo1基因相对表达量较24 h牵张应力组降低,差异有统计学意义(F=13.917,q=0.049 5,P<0.05).(2)Western-blot结果 显示,2 h牵张应力组Piezo1的蛋白表达量较空白对照组(0 h牵张应力组)略有增加(F=19.341,q=0.037 1,P<0.05),24 h牵张应力组的Piezo1蛋白的表达量多,而48 h牵张应力组的Piezo1蛋白表达量较24 h牵张应力组降低(F=19.341,q=0.017 7,P<0.05).(3)Piezo1蛋白表达于髓核细胞的细胞质与细胞核,并且随着加力时间的增加,蛋白的荧光强度也有相应的增加.结论:在人类退变软骨细胞中,新型机械敏感性离子通道Piezo1蛋白有微量表达,加载周期性机械拉伸力后,Piezo1蛋白的表达量增多,并且呈现时间依赖性.
关键词： Piezo1蛋白离子通道 机械牵张应力 软骨细胞
