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雷公藤内酯醇对阿尔茨海默病大鼠海马drebrin和cofilin表达的影响
目的 观察雷公藤内酯醇对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经元drebrin和cofilin表达的影响.方法 雄性Sprague-Dawley大鼠60只随机等分成对照组(n=20)、模型组(n=20)和用药组(n=20).大鼠右侧海马内注射β淀粉样蛋白(Aβ1-40)造模,对照组右侧海马内注射等量生理盐水.用药组在右侧海马注射Aβ1-40后每天腹腔注射雷公藤内酯醇0.4 mg/kg,共15 d.Golgi染色检测各组海马神经元树突棘密度的变化.免疫组化染色和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组海马神经元drebrin和cofilin表达的变化.结果 用药组大鼠海马神经元树突棘密度高于模型组(P<0.05).用药组大鼠海马drebrin阳性产物平均光密度较模型组明显升高(P<0.01),cofilin阳性细胞数和平均光密度较模型组减少(P<0.05).用药组大鼠海马dre-brin mRNA表达高于模型组(P<0.05),cofilin mRNA表达明显低于模型组(P<0.01).结论 雷公藤内酯醇可能通过调节drebrin和cofilin的表达,延缓AD模型大鼠海马神经元树突棘的退化.
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体外肝细胞极性重建中cofilin的去磷酸化及其调节
目的 观察SSH1L对肝细胞cofilin去磷酸化的调节作用.方法 通过体外三明治构型培养肝细胞诱导cofilin的去磷酸化,应用免疫共沉淀法进行SSH1L的体外酶活性分析.进一步对体外培养大鼠肝细胞进行野生型和无活性型SSH1L质粒的转染以实现SSH1L在肝细胞的过表达,观察肝细胞的cofilin去磷酸化水平.结果 三明治构型培养肝细胞96 h和1周后,与对照组相比,cofilin的去磷酸化增加,SSH1L酶活性增强.野生型SSH1L在肝细胞的过表达与无活性SSH1L过表达相比,P-cofilin去磷酸化显著增加.结论 三明治构型培养肝细胞存在cofilin的去磷酸化,且为SSH1L活性所调节.
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Cofilin调节细胞迁移研究进展
Cofilin(丝切蛋白)是普遍存在于真核细胞的一种肌动蛋白结合蛋白.Cofilin的基本功能是在细胞内结合和解聚F-肌动蛋白(F-actin),其活性是通过磷酸化、去磷酸化、磷酸肌醇、pH改变等进行调节.Cofilin介导了细胞内的信号途径,从而调节肌动蛋白骨架的重组,对细胞迁移起到重要作用.细胞运动中的每个步骤都受到精巧的调节控制,以保证原料和能量的合理利用和细胞迁移的有效进行.Cofilin正是在这一调节中起作用的一个蛋白.肿瘤细胞的转移是肿瘤发生发展的一个关键环节,本文根据目前对Cofilin的研究结果,从Cofilin在细胞迁移及肿瘤细胞转移中的作用作以综述.
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Cofilin与学习记忆的研究进展
Cofilin(丝切蛋白)是主要的肌动蛋白解聚因子,与学习记忆密切相关.但是其具体机制仍然不是很清楚.近年来,突触可塑性被认为是学习记忆的一种细胞机制.Cofilin可以调节AMPA受体转运和肌动蛋白动态变化.突触后AMPA受体的数量变化和肌动蛋白动态变化可以影响突触可塑性.因此,Cofilin可能通过影响突触可塑性而与学习记忆有关.现根据近年来对Cofilin与学习记忆的研究进展予以综述.
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Cofilin、CREB及P38/MAPK分子信号与宫内生长受限大鼠学习记忆障碍的关系
[目的]研究宫内生长受限(intrauterine growth restriction,IUGR)大鼠前额叶皮质内Cofilin、CREB和P38蛋白及其磷酸化表达状况.[方法]通过孕鼠子宫动脉结扎方法建立宫内生长受限大鼠模型,对30 d大鼠进行新位置/新物体实验和y-型迷宫测试以反映其学习记忆能力.应用Western blotting方法检测30 d大鼠前额叶皮质中Cofilin、CREB、磷酸化CREB、P38及磷酸化P38的表达变化.[结果]IUGR大鼠探索新事物和新空间的时间百分数均明显低于对照组(P＜0.05),表明IUGR大鼠学习记忆能力较弱.Western blotting检测显示,IUGR大鼠前额叶皮质中Cofilin蛋白相对表达量与对照组相比明显降低;CREB和P38蛋白相对表达量与对照组相比未见明显差异,但p-CREB明显低于对照组(P＜0.01),而p-P38明显高于对照组(P＜0.05).[结论]IUGR大鼠学习记忆功能障碍与Cofilin蛋白的相对表达量下降以及CREB和P38的磷酸化修饰异常有关.
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小分子化合物G-052抑制胃癌细胞侵袭及其分子机制
目的 研究小分子化合物G-052对于人胃癌细胞增殖和侵袭的影响及可能分子机制.方法 用MTT检测不同浓度小分子化合物G-052对胃癌细胞BGC823和MKN-45增殖能力的影响.分别用0、20、40、60μ mol/L浓度的G-052处理BGC823和MKN-45两种胃癌细胞,应用Transwell小室检测其对上述胃癌细胞侵袭能力的抑制作用,Western Blot检测化合物对金属基质蛋白酶2(MMP2)表达及丝切蛋白(Cofilin)磷酸化水平的影响.结果 化合物G-052以剂量依赖的方式抑制BGC823和MKN-45细胞的侵袭能力,但对增殖能力无明显影响.Western Blot结果显示G-052下调胃癌细胞BGC823中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平.结论 G-052抑制胃癌细胞BGC823、MKN-45的侵袭可能与下调MMP2的表达及Cofilin磷酸化水平相关.
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小分子化合物M-364抑制胃癌细胞侵袭及机制研究
目的 研究小分子化合物M-364对人胃癌细胞BGC823、MKN-45增殖和侵袭能力的影响及其可能机制.方法 应用MTT检测不同浓度小分子化合物M-364对于胃癌细胞BGC823和MKN-45增殖能力的影响.分别用0、20、40、60μmol/L浓度的化合物M-364处理BGC823和MKN-45两种胃癌细胞,应用Transwell小室检测其对上述两种细胞侵袭能力的抑制作用,Western Blot检测化合物对金属基质蛋白酶2(MMP2)表达及丝切蛋白(Cofilin)磷酸化水平的影响.结果 化合物M-364以剂量依赖的方式抑制BGC823和MKN-45两种胃癌细胞的侵袭能力,但对增殖能力无明显影响.Western Blot结果显示M-364能够下调胃癌细胞BGC823中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平.结论 化合物M-364抑制BGC823、MKN-45胃癌细胞侵袭可能与下调MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平相关.
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小分子化合物E-039抑制胃癌细胞迁移侵袭及其分子机制
目的 研究小分子化合物E-039对人胃癌细胞增殖、迁移侵袭的影响及其分子机制.方法 用MTT检测不同浓度小分子化合物E-039对胃癌细胞BGC823和MKN-45增殖能力的影响.分别用0、20、40、60μmol/L浓度的E-039处理BGC823和MKN-45两种胃癌细胞,应用Transwell小室检测其对上述细胞迁移侵袭能力的抑制作用,Western Blot检测化合物对金属基质蛋白酶2(MMP2)表达及丝切蛋白(Cofilin)磷酸化水平的影响.结果 化合物E-039对于BGC823和MKN-45两种胃癌细胞的增殖能力无明显影响,却能够以剂量依赖的方式抑制BGC823及MKN-45细胞的迁移和侵袭.Western Blot结果显示E-039下调胃癌细胞BGC823中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平.结论 化合物E-039能够通过下调胃癌细胞中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平,抑制胃癌细胞BGC823、MKN-45的迁移和侵袭.
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丙泊酚对老年大鼠海马神经元肌动蛋白及其结合蛋白的影响
目的：研究老年大鼠丙泊酚麻醉后一定时间内海马神经元肌动蛋白及其结合蛋白的变化,并探讨其相关机制。方法采用免疫荧光和Western blot技术观察丙泊酚麻醉后1、3、7、14 d老年大鼠海马神经元F-actin、Cofilin、MARCKS、Drebrin A和ERK1/2通路的变化。结果丙泊酚麻醉后7 d内老年大鼠海马F-actin形成异常增加(P<0.01),p-Cofilin显著增加(P<0.01),p-MARCKS、Drebrin A显著降低(P<0.05),ERK1/2通路被激活,14 d时以上各水平均有所改善但仍未达到对照水平。结论丙泊酚麻醉导致的老年大鼠海马肌动蛋白异常聚合伴肌动蛋白结合蛋白的显著变化参与术后认知功能障碍( POCD)的病理过程,且该变化与MAPK/ERK1/2通路的激活有关。初步阐明了丙泊酚导致认知功能障碍的机制。
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淀粉样前体蛋白-C端片段对胚鼠原代皮层神经元cofilin磷酸化的影响
目的 探讨淀粉样前体蛋白-C端游离片段(APP-CTFs)对ADF/cofilin的影响及作用机制.方法 APP-CT99-pEGFP转染胎鼠原代皮层细胞,采用细胞免疫组化方法和蛋白印迹方法观察磷酸化cofilin和LIMK1的分布形态和表达水平.处理S3肽,LIMK1的特异性竞争性抑制剂后再观察磷酸化cofilin表达.结果 细胞免疫组化实验结果,转染APP-CT99-pEGFP的细胞中,磷酸化cofilin和LIMK1在细胞质和细胞核中均有分布,与空载体转染组比较分布较高.S3肽处理后,磷酸化cofilin的表达水平减少.蛋白印迹实验结果,转染APP-CT99-pEGFP的细胞中,磷酸化cofilin和LIMK1蛋白水平增高,与空载体转染组比较具有显著性差异(P＜0.05).S3肽处理后,磷酸化cofilin蛋白水平降低.结论 APP-CTFs通过LIMK1激酶调控cofilin磷酸化.
关键词： 淀粉样前体蛋白-C端片段 cofilin LIMK1 磷酸化 -
Cofilin与肿瘤
Cofilin是肌动蛋白相关蛋白,对肌动蛋白动力学特性的调节很重要.近年发现Cofilin活化与肿瘤细胞的恶性侵袭性质有关.Cofilin的局部激活可以诱导片状伪足的形成,并影响肿瘤细胞运动的方向,从而增强肿瘤细胞的运动和迁移;抑制Cofilin的活性可以减少肿瘤细胞的运动和迁移.本文对Cofilin的结构、功能、调控机制和与肿瘤的关系进行综述.
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法舒地尔对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织中Cofilin、GAP-43表达的影响
目的:研究法舒地尔对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织中Cofilin、GAP-43表达影响,并探索其对脑部损害潜在的机制.方法:随机选取7d龄Wistar新生大鼠180只,分为3组:空白组,HIBD组和药物组.建立HIBD动物摸型,各组动物于造摸后6h、24h、48h、72h、7d、14d分批次处死.兔疫组化检测海马中Cofilin、GAP-43的表达及法舒地尔干预后两者表达变化及其神经保护机制.结果:空白组新生大鼠脑组织中Cofilin可见少量表达;HIBD组新生大鼠脑组织中Cofilin表达在24h明显增加,于7d表达多,14d略下降,与空白组相比,各相应时间点Cofilin表达增多(P<0.05);药物组与HIBD组相比,表达明显减少(P<0.05);与空白组比较,表达升高(P<0.05).空白组GAP-43可见少量表达,GAP-43表达在HIBD后24h明显增加,于7d表达多,14d略下降,HIBD组与空白组相比,表达增多(P<0.05);法舒地尔组与HIBD组相比,表达升高(P<0.05);药物组与空白组比较,表达升高(P<0.05).结论:法舒地尔对HIBD新生大鼠有神经保护作用,其可能机制是通过下调Cofilin的表达、上调GAP-43表达发挥神经保护作用.
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雪胆素甲诱导非小细胞肺癌系NCI-H460和A549的凋亡效应及其作用机制初探
目的 雪胆素甲(CuⅡa)诱导肺癌NCI-H460和A549的凋亡效应及其作用机制初探.方法 利用CCK-8检测CuⅡa对肿瘤细胞抑制活性;流式细胞术检测CuⅡa对肿瘤细胞凋亡以及周期的影响;Western blot检测CuⅡa对Aurora A、STAT3以及Cofilin蛋白磷酸化的影响.结果 CuⅡa对肺癌细胞NCI-H460和A549具有明显抑制作用,其IC50分别为224.9和108.3 nmol·L-1;CuⅡa能诱导肿瘤细胞凋亡,并阻滞细胞周期于G2/M期;Western blot实验结果显示CuⅡa对STAT3和Cofilin的磷酸化具有抑制作用,且呈现剂量依赖性,CuⅡa能抑制Aurora A磷酸化,符合Aurora A激酶抑制剂抗肿瘤效应重要特征-阻滞细胞于G2/M期.结论 CuⅡa对非小细胞肺癌细胞系NCI-H460和A549具有明显的抑制作用,CuⅡa可作为抗非小细胞肺癌的先导化合物进行下一步研究.
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Cofilin与分化的研究进展
Cofilin是肌动蛋白结合蛋白,在维持actin的动态化过程中起着重要的作用.近年发现Cofilin与细胞的分化有关.许多机体内外因素可通过细胞内相关信号途径对Cofilin进行调控,从而调节actin骨架诱导细胞分化.该文对Cofilin的活性调节与分化的关系做一综述.
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微小RNA-23a调节前列腺癌细胞骨架蛋白的分子机制
目的 探讨微小RNA-23a(miR-23a)影响前列腺癌细胞骨架迁移及侵袭行为的分子机制.方法 PC-3前列腺癌细胞转染siPAK6、miR-23a模拟物,48 h后以共聚焦显微镜观察细胞骨架的改变；Western blot法检测LIMK1、磷酸化LIMK1( p-LIMK1)、丝切蛋白(cofilin)和磷酸化丝切蛋白(p-eofilin)蛋白的表达.结果 转染siPAK6组及miRNA-23a组PC-3细胞骨架的应力纤维均明显减少,肌动蛋白形态皱缩.Western blot检测显示转染siPAK6组的p-LIMK1、p-cofilin的表达分别下降75％、80％(P＜0.01),而LIMK1、cofilin表达量无明显变化(P＞0.05)；转染miRNA-23a组的p-LIMK1、p-cofilin的表达分别下降60％、70％ (P ＜0.01),LIMK1、cofilin的表达量无明显变化(P＞0.05).结论 miR-23a可通过p21活化激酶6(PAK6)-LIMKl-cofilin信号通路,影响前列腺癌细胞骨架的重构,抑制癌细胞迁移及侵袭能力.
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COPD患者肺泡及外周血单核源性巨噬细胞Cofilin的表达与其吞噬烟曲霉功能的相关性
目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺泡及外周血单核源性巨噬细胞Cofilin的表达与其吞噬烟曲霉功能的相关性.方法 选取2015年7月至2016年5月南方医科大学珠江医院呼吸内科门诊20名COPD患者,其中观察组1(2011版GOLD中A和B组),观察组2(2011版GOLD中C和D组),健康对照组10人.3组行支气管肺泡灌洗术、采取外周血,分别提取AM和MDM,检测各组的AM和MDM对烟曲霉孢子的吞噬能力.运用实时荧光定量(qRT-PCR)和免疫蛋白印迹实验(Western blot)检测3组Cofilin蛋白的表达,比较其差异.结果 3组人群MDM/AM吞噬烟曲霉孢子的菌落数分别为(17±3)个、(16±2)个、(42±3)个(F=73.446,P<0.001),两观察组与健康组差异明显,而两观察组无明显差异.qRT-PCR和Western blot结果显示,两观察组中Cofilin蛋白表达明显高于健康组.结论 COPD患者肺泡及外周血单核源性巨噬细胞吞噬烟曲霉功能降低可能与Cofilin蛋白升高有关.
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葫芦素E对人结肠癌细胞Caco-2增殖与迁移的影响及其作用机制
目的 研究葫芦素E(CuE)对人结肠癌细胞Caco-2增殖与迁移的影响,并探讨CuE作用的分子机制.方法 用0.001、0.01、0.1、1、10 μmol/L的CuE分别处理培养的Caco-2细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力,采用划痕实验及Transwell小室细胞跨膜实验检测细胞迁移能力,荧光法检测细胞F-actin与G-actin相对含量,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架F-actin,Western blot分别检测cofilin、p-cofilin、LIMK2及p-LIMK2蛋白表达.结果 CCK-8法、划痕实验与Transwell跨膜实验显示:0.1、1、10 μmol/L的CuE对Caco-2细胞的增殖与迁移均具有明显的抑制作用(P＜0.05),并呈现出剂量与时间依赖性;荧光法表明0.1 μmol/L的CuE能增加Caco-2细胞G-actin含量(P＜0.05),引起F-actin/G-actin的动态平衡失调,并在0.1μmol/L的CuE处理1、2、6、12、24 h后,对细胞骨架F-actin有明显的破坏作用,Western blot检测显示,不同浓度CuE处理Caco-2细胞后,cofilin、p-cofilin及p-LIMK2的蛋白表达明显降低(P＜0.05),而LIMK2表达与对照组比较无明显差异.结论 CuE可能通过抑制LIMK/cofilin信号通路而损害细胞骨架actin,从而导致结肠癌Caco-2细胞的增殖与迁移受到抑制.
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Cofilin在子宫内膜异位症在位内膜及异位内膜中的表达及意义
目的:探讨子宫内膜异位症(EMT)在位内膜及异位内膜中候选基因cofilin的表达在EMT发生和发展中的作用.方法:选取我院35例经病理证实为EMT的在位内膜及异位内膜[增殖期17例,分泌期18例;轻度组(Ⅰ、Ⅱ期)18例,重度组(Ⅲ、Ⅳ期)17例]为研究组,以同期16例非EMT患者的子宫内膜标本为正常对照组(增殖期7例,分泌期9例).应用原住杂交方法检测cofilin的表达,并对各组内膜中cofilin表达水平进行统计学分析.结果:研究组的在位内膜cofilin表达水平(2.2569±1.0005)明显高于对照组(1.2525±0.7549)(P<0.01);研究组中EMT异位内膜cofilin表达水平(4.2274±1.2091)明显高于EMT在位内膜(2.2569±1.0005)(P<0.01);研究组中EMT重度组在位内膜及异位内膜cofilin表达水平(分别为2.6941±0.9517及4.5965±1.0353)高于轻度组(分别为1.8439±0.8809及3.8789±1.2846)(P<0.01).对照组内膜组织和研究组中在位内膜及异位内膜的分泌期与增殖期cofilin表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论:EMT患者在位内膜中cofilin表达水平异常升高在该病的发生、发展中可能起一定作用.
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LIMK的研究进展
LIM-激酶(LIMK)家族包含两个成员:LIM激酶1(LIMK1)及LIM激酶2(LIMK2).LIMK1主要参与肿瘤细胞的侵袭迁移过程,其磷酸化作用可引起细胞骨架肌动蛋白动力学变化及微管解聚,在许多恶性肿瘤组织如前列腺肿瘤、乳腺癌、肺癌、恶性胶质瘤细胞等高表达.LIMK2可能参与细胞骨架的改建,可促进肌动蛋白的合成,磷酸化丝切蛋白从而使之失去解聚多聚体纤维状肌动蛋白(LIMK的结构、功能、在肿瘤及其他疾病中的研究作一综述,LIMK可能是一个很有潜力的遏制肿瘤侵袭转移的治疗靶点.F-actin)的能力.
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小分子化合物O-565抑制胃癌细胞迁移侵袭及机制研究
目的：研究小分子化合物 O -565对人胃癌细胞 BGC823、MKN -45增殖、迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法：应用 MTT 检测不同浓度小分子化合物 O -565对胃癌细胞 BGC823和 MKN -45增殖能力的影响。分别用0、20、40、60μmol/ L 浓度的化合物 O -565处理 BGC823和 MKN -45两种胃癌细胞，应用Transwell 小室检测其对上述两种细胞迁移侵袭能力的抑制作用，Western blot 检测化合物对金属基质蛋白酶2（MMP -2）表达及丝切蛋白（Cofilin）磷酸化水平的影响。结果：化合物 O -565对于 BGC823和 MKN -45两种胃癌细胞的增殖能力无明显影响，却能够以剂量依赖的方式抑制上述细胞的迁移和侵袭。Western blot 结果显示 O -565能够下调胃癌细胞 BGC823中 MMP -2的表达及 Cofilin 的磷酸化水平。结论：化合物 O -565可能通过下调细胞中 MMP -2的表达及 Cofilin 的磷酸化水平，抑制 BGC823、MKN -45胃癌细胞的迁移和侵袭。
