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高效液相色谱法测不同产地雷公藤内酯醇的含量
采用高效液相色谱法测定并比较了4个不同产地雷公藤根芯及昆明山海棠根芯乙醇提取物中雷公藤内酯醇(triptolide)的含量,结果表明湖南长沙产的雷公藤根芯中雷公藤内酯醇含量高,湖南株州产的雷公藤根芯中雷公藤内酯含量次之,福建泰宁、长汀产的雷公藤根芯中雷公藤内酯醇含量再次之,昆明山海棠根芯乙醇提取物中雷公藤内酯醇的含量低.
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雷公藤内酯醇抑制尾加压素-Ⅱ诱导的人晶状体上皮细胞增殖及信号转导机制
目的 探讨雷公藤内酯醇(Triptolide,Tri)抑制尾加压素Ⅱ(Urotensin Ⅱ,U-Ⅱ)诱导的人晶状体上皮细胞(human lensepithelial cell,HLEC)增殖及cAMP、cGMP信号转导机制.方法 将U-Ⅱ诱导体外培养的HLEC发生增殖,并用不同浓度的Tri与其共同孵育后,用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测HLEC的活性;用流式细胞术(flow cytometer,FCM)检测HLEC增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达;用荧光分光光度法检测HLEC内游离钙离子浓度;用放射免疫分析法检测HLEC内环化腺苷酸(cyclicadenosine monophosphate,cAMP)和环化鸟苷酸(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)浓度.结果 U-Ⅱ组HLEC活性、PCNA蛋白表达和cGMP浓度均高于对照组(P<0.001);Tri组HLEC活性、PCNA蛋白表达和cGMP浓度均比U-Ⅱ组降低(P<0.001).U-Ⅱ组HLEC[Ca2+]i比对照组显著升高(P<0.001);Tri组与U-Ⅱ组比较[Ca2+]i也显著升高(P<0.001).U-Ⅱ组cAMP浓度比对照组显著降低(P<0.001),Tri组cAMP浓度与U-Ⅱ组比较显著升高(P<0.001).结论 Tri可抑制U-Ⅱ诱导的HLEC增殖.[Ca2+]、cAMP-PKA、cGMP-PKG是其重要的细胞信号转导机制.Tri有可能成为防治后发性白内障的有效药物.
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雷公藤内酯醇对神经胶质瘤侵袭的体外抑制作用
目的:研究雷公藤内酯醇对胶质瘤侵袭性的体外抑制作用,并探讨其作用分子机制.方法:通过MTT法测定雷公藤内酯醇对胶质瘤细胞株U87细胞增殖抑制作用,划痕实验和Transwell实验评价雷公藤内酯醇对细胞侵袭能力的影响,Real-Time PCR和Western印迹法检测雷公藤内酯醇对U87胶质瘤细胞的组织蛋白酶B(cathepsins B,CB)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和核因子NF-κB(p65)表达的影响.结果:雷公藤内酯醇对胶质瘤细胞增殖有显著的抑制作用,同时可降低U87胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力,下调其CB,MMP-9和NF-κB表达水平.结论:雷公藤内酯醇降低U87胶质瘤细胞侵袭能力的机制可能与抑制NF-κB通路、下调CB及MMP-9的表达、降低恶性胶质瘤水解细胞外基质的能力有关.
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紫云金对雷公藤内酯醇引起静脉炎的作用
紫云金系紫草、白芷、冰片、银花等的醇提物,ig紫云金2～4g/kg对雷公藤内酯醇引起的小鼠尾静脉炎、大鼠足跖肿胀、小鼠耳廓水肿及疼痛反应均有显著的抑制作用.提示,紫云金对雷公藤内酯醇iv引起的静脉炎有防治作用.
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雷公藤内酯醇逆转肿瘤多药耐药研究进展
雷公藤内酯醇(TPL)是目前从传统中药雷公藤中分离出活性高的化学成分,具有高效的抗炎、抗生育、抗类风湿、免疫调节等作用,近年来发现TPL还具有高效、广谱的抗肿瘤活性,且其抗肿瘤机制已成为国内外研究热点.目前化疗是肿瘤的主要疗法,但肿瘤细胞产生的多药耐药(MDR)常使化疗难以取得良好效果,且肿瘤多药耐药机制十分复杂,因此寻找高效低毒的MDR逆转剂显得尤为重要.文献检索发现肿瘤MDR机制主要包括多药耐药蛋白引起的多药耐药,调控基因介导的多药耐药,酶介导的多药耐药3个方面,以及肿瘤细胞内pH改变,药代动力学改变等.TPL不仅能协同增强多种化疗药物的抗肿瘤效应,还可逆转肿瘤多药耐药,TPL针对肿瘤MDR的逆转机制主要涉及下调MDR1/P-糖化蛋白(P-gp)的表达,抑制蛋白激酶B/核转录因子-κB(Akt/NF-κB)的活性,提高细胞内活性氧(ROS)水平,诱导细胞凋亡,抑制多药耐药相关蛋白(MRP)表达,调节促凋亡基因/抗凋亡基因(Bax/Bcl-2)表达,抑制Bcr/abl融合基因T315I点突变7个方面.现从肿瘤多药耐药机制及TPL逆转多药耐药机制两方面作一概述,为逆转肿瘤多药耐药提供新思路.
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神经营养因子的局限与雷公藤类天然药物的机遇
神经营养因子在神经元的发育、营养、存活、凋亡及损伤后修复中扮演着重要角色.然而,不易通过血脑屏障的性质限制了其临床应用.天然药物雷公藤内酯醇可促进神经营养因子的分泌,且具有分子量小、易通过血脑屏障的分子特征,引起了国内外研究机构的广泛关注.文章将对神经营养因子在治疗神经疾病的局限以及雷公藤内酯醇及其衍生物所带来的研究机遇做一综述,为进一步探索天然植物药雷公藤对神经系统疾病的治疗提供新的视角或新途径.
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高效液相色谱法测定痹痛灵酊中雷公藤内酯醇的含量
目的 建立痹痛灵酊中雷公藤内酯醇的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法(HPLC),DionexAcclaim 120 C18柱,以甲醇-水(35∶65)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为218 nm.结果 HPLC测定雷公藤内酯醇,可达基线分离,雷公藤内酯醇对照品在0.019 2～0.115 2 μg 内呈线性关系,r＝0.999 8,平均回收率为100.76%,RSD＝1.85%(n＝6).结论 本法简便快速,结果准确,重复性好,可作为该制剂的质量控制方法.
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雷公藤内酯醇上调纤维肉瘤HT-1080细胞基质金属蛋白酶-9基因甲基化水平
目的:研究雷公藤内酯醇(triptolide,TL)抑制纤维肉瘤HT-1080细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP-9)表达的机制.方法:用终浓度分别为6,12,18 nmol·L~(-1)的TL处理HT-1080细胞72 h,对照组不加药物处理,甲基化特异性PCR检测TL对MMP-9基因启动子甲基化水平的影响,RT-PCR检测TL对基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP-1,-2,-3和-4 mRNA表达的影响.结果:与对照组比较,3个TL处理组中仅18 nmol·L~(-1)处理组MMP-9基因甲基化指数明显上调(0.39±0.10 vs 0.61±0.10,P＜0.05);所有TL处理组TIMP-1,-2,-3和-4的mRNA表达均无明显变化.结论:TL上调HT-1080细胞MMP-9基因甲基化水平,这可能是TL抑制肿瘤MMP-9表达的一种新机制.
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雷公藤内酯醇对大鼠脑局灶性缺血再灌注后脑神经细胞凋亡的影响
目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide, TL)对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织内神经细胞凋亡的影响.方法:采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.观察雷公藤内酯醇(0.2～0.4 mgkg-1,ip)对各组大鼠神经功能缺失评分的影响,应用免疫组化染色技术,观察大鼠大脑中动脉闭塞侧髓过氧化物酶(MPO)免疫染色阳性细胞数、细胞原位凋亡(TUNEL)染色阳性细胞数的变化.结果:与损伤模型组比较,雷公藤内酯醇两治疗组可明显改善大鼠神经功能的受损程度,并减少MPO及TUNEL染色阳性细胞数.结论:雷公藤内酯醇具有抑制局灶性脑缺血再灌注时白细胞浸润、抗神经细胞凋亡作用,从而改善受损的神经功能.
关键词： 雷公藤内酯醇 脑缺血再灌注损伤模型 凋亡 -
HPLC测定雷公藤总萜片中雷公藤内酯醇的含量
目的:建立雷公藤总萜片中雷公藤内酯醇含量的HPLC测定方法.方法:采用Lichrospher CN色谱柱,甲醇-水为流动相,梯度洗脱,检测波长255 nm.结果:雷公藤内酯醇在0.742～59.36 μg·mL-1线性关系良好,r=0.999 8,平均加样回收率为99.2%(n=5),RSD 1.7%.结论:方法简便快捷,无干扰,重复性好,可用于雷公藤总萜片的质量控制.
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雷公藤内酯醇对雄性大鼠的生殖毒性及其机制研究
评价雷公藤内酯醇的雄性生殖毒性,观察染毒后雄性大鼠精子的畸形率、睾丸组织脂质过氧化物、睾丸组织标志酶活力和血清中激素水平的改变.设阴性和阳性对照组,以低(0.025 mg·kg-1)、中(0.05 mg· kg-1)、高剂量(0.1 mg·kg-1)的雷公藤内酯醇混悬液对健康雄性Wistar大鼠连续灌胃染毒30 d,1次/d,于末次染毒24 h后处死大鼠,测定睾丸组织和血清中各项指标,并考察附睾精子畸形率.结果显示阳性对照组相比阴性对照组,各组具有显著性差异.中剂量染毒组的大鼠睾丸组织SOD,LDH,G-6-PD,Na+-K+-ATPase,Ca+-Mg+-ATPase含量较阴性对照组显著降低,并随着染毒达到高剂量,以上各指标的下调更加明显.大鼠睾丸组织GSH-Px和β-G水平只在染毒高剂量时,表现出明显的下降.而各染毒组的MDA,FSH,LH水平均表现差异无统计学意义.雷公藤内酯醇染毒中、高剂量组精子畸形率高于阴性对照组.提示在该实验染毒和剂量范围内,雷公藤内酯醇对睾丸组织具有脂质过氧化作用,导致生精细胞、支持细胞和间质细胞的损伤;同时伴有睾丸标志酶活力的下降,阻碍睾丸组织的有氧代谢和细胞对能量的利用,形成了一条对雄性生殖系统的损伤链.
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雷公藤内酯醇对AA大鼠脊髓和背根神经节中iNOS,SP表达的影响
目的:观察不同剂量雷公藤内酯醇(triptolide,TP)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠的镇痛效应,及相应节段脊髓背角和背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、P物质(substance P,SP)表达的影响,探讨TP对类风湿性关节炎(RA)镇痛作用的可能机制.方法:选用SD大鼠50只,随机分成正常组(A组)、模型组(B组)、TP低(C组)、中(D组)、高(E组)剂量治疗组.除A组外,每组大鼠右后足跖皮内注入0.1 mL弗氏完全佐剂造模.造模后14 d,C,D,E组大鼠采取不同剂量(C组0.1 mg·kg-1,D组0.2 mg·kg-1,E组0.4 mg·kg-1)TP腹腔注射给药,每天1次,连续给药9d之后检测50％机械痛阈(mechanical withdraw threshold,MWT),用免疫组织化学方法检测腰5(L5)脊髓背角和DRG节段中iNOS,SP的表达变化情况.结果:B组大鼠50％ MWT显著低于A组(P＜0.01),经过TP治疗后,C,D,E组热痛阈显著高于B组(P＜0.01),TP可显著提高AA大鼠MWT,呈一定的量效关系;免疫组化结果表明,B组iNOS,SP阳性表达水平显著升高(P＜0.01),而C,D,E组大鼠L5节段脊髓背角和DRG中iNOS,SP阳性表达水平显著低于B组(P＜0.01),呈一定的量效关系.结论:TP对AA具有良好镇痛作用;TP可抑制AA大鼠脊髓背角和DRG中iNOS,SP的表达,这可能是TP产生镇痛作用机制之一.
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雷公藤内酯醇对人Th17细胞分化的调节作用
目的:研究雷公藤内酯醇对体外培养的人Th17细胞分化的调节作用.方法:在体外将不同浓度雷公藤内酯醇作用于人外周血单一核细胞、纯化的CD4+T细胞和CD4+CD45RA-记忆性T细胞,采用MTT法检测淋巴细胞增殖,流式细胞术分析单个细胞内表达IL-17和IFN-γ的频数,ELISA法测定细胞分泌IL-17和IFN-γ的水平.结果:雷公藤内酯醇以剂量依赖的方式抑制淋巴细胞增殖、细胞内IL-17的表达频数和细胞产生IL-17的水平.此外,雷公藤内酯醇对细胞内IFN-γ的表达和产生也有抑制作用.结论:雷公藤内酯醇可抑制人TH17细胞的分化,这可能是雷公藤内酯醇免疫抑制和抗炎作用的机制之一.
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雷公藤内酯醇调控COX2/PGE2轴抑制Th17细胞分化的研究
雷公藤内酯醇(TPT)是雷公藤的主要活性单体,用于治疗类风湿关节炎(RA).该研究在体外用不同浓度(0,10,50,100 nmol·L-1)TPT干预RA患者的滑膜成纤维细胞(RASFs)后,用qRT-PCR检测环氧化酶(COX)的mRNA表达,ELISA法测定前列腺素E2(PGE2)的水平.进一步添加或不添加外源性PGE2,用TPT干预的RASFs与健康志愿者CD4+T细胞共培养,流式细胞术检测产生IL-17和IFN-γ的CD4+T细胞亚群.结果显示,TPT以剂量依赖的方式抑制RASFs的COX2的mRNA表达以及PGE2的分泌(P ＜0.05);TPT预处理的RASFs呈剂量依赖性抑制Th17细胞分化,而外源性PGE2能逆转TPT预处理的RASFs抑制Th17细胞分化(P＜0.05).综上表明TPT通过抑制COX2下调RASFs分泌PGE2,进而抑制Th17细胞分化.
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雷公藤内酯醇对足细胞和肾小管上皮细胞保护作用的研究
雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)系卫矛科雷公藤属多年生藤本植物的全株,其主要药理作用为抗炎症、抗增殖、抗肿瘤、抗生育等,对它的研究和利用几乎涉及了大部分医、药基础和临床学科[1].
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雷公藤内酯醇对伊马替尼耐药的K562/G01细胞增殖抑制及诱导凋亡作用的研究
本研究旨在探讨雷公藤内酯醇对K562/G01细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的影响及其可能的机制.MTT法检测伊马替尼、雷公藤内酯醇单药及联合用药对K562/G01增殖的影响；流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡率和P-gp蛋白表达的变化；Western blot分析P-gp蛋白的表达情况；实时荧光定量PCR检测BCR/ABL基因的表达.结果表明:雷公藤内酯醇能增强伊马替尼对K562/G01细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用；雷公藤内酯醇能将细胞阻滞在G1期,下调P-gp蛋白和BCR/ABL基因表达.结论:雷公藤内酯醇对K562/G01细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与细胞周期的G1期阻滞、降低P-gp蛋白表达和抑制BCR/ABL基因表达有关.
关键词： 雷公藤内酯醇 伊马替尼 K562/G01细胞株 细胞增殖抑制 细胞凋亡 -
雷公藤内酯醇联合高三尖杉酯碱对KG-1α细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨低浓度雷公藤内酯醇(triptolide,TPL)联合高三尖杉酯碱(homoharringtonine,HHT)对KG-1α细胞增殖与凋亡的影响及其可能机制.方法:应用CCK-8法检测不同浓度TPL和HHT单用及联用对KG-1α细胞增殖的影响,并计算其药物联合作用指数(combined index,CI);甲基纤维素集落形成实验检测细胞集落形成能力;流式细胞术检测细胞表面分子、细胞凋亡率及细胞周期变化;Western blot检测Akt信号通路相关蛋白在TPL及HHT作用前后的表达情况.结果:KG-1α细胞高表达CD34CD123而CD38缺失;TPL及HHT单用对KG-1α细胞增殖抑制并具剂量依赖性(r =0.952,r =0.992);低浓度联合用药与单药对比,前者细胞增殖、集落形成率更低,而细胞凋亡率增高;CI值亦提示低浓度TPL联合HHT呈高度协同作用.低浓度TPL联合HHT作用KG-1α细胞后,P-AktSer473、P-AktThr308、BCL-2、PARP及Survivin蛋白表达降低而PARP裂解增加.结论:低浓度TPL联合HHT可通过PI3K/Akt信号通路及下游蛋白协同抑制KG-1α细胞增殖,并诱导其凋亡.
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雷公藤内酯醇诱导MUTZ-1细胞凋亡及其机制研究
为了探讨雷公藤内酯醇(triptolide)诱导骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系MUTZ-1细胞凋亡及其作用机制,将triptolide与MUTZ-1细胞共育,采用MTT法观察细胞生长,DNA片段化分析和Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR及Western blot方法检测基因和蛋白质水平.结果表明:triptolide对MUTZ-1细胞具有明显的生长抑制作用,呈量效与时效关系,24小时半数抑制率(IC50)为55.06ng/ml;triptolide能诱导MUTZ-1细胞DNA断裂产生DNAladder,且能诱导MUTZ-1细胞磷脂酰丝氨酸转位,其发生率随药物浓度增加而增加;triptolide作用于MUTZ-1细胞12小时导致caspase-3激活,PARP酶解及c-IAP2 mRNA表达水平下调,凋亡率与caspase-3原酶及c-IAP2表达量呈负相关(r=-0.907,P=0.000;r=-0.919,P=0.000).结论:triptolide能通过诱导凋亡抑制MUTZ-1细胞的生长,triptolide诱导MUTZ-1细胞凋亡是通过caspase-3激活及PARP酶解所介导的,且caspase-3的激活可能与凋亡蛋白抑制因子c-IAP2的下调有关.
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雷公藤内酯醇对硼替佐米诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响
本研究旨在探讨雷公藤内酯醇对硼替佐米诱导骨髓瘤细胞株NCI-H929(H929)凋亡的影响.通过MTT法检测不同浓度的雷公藤内酯和硼替佐米单用及联用对H929细胞的增殖抑制作用；采用Annexin Ⅴ -FITC/P1双染流式细胞术检测细胞凋亡率.结果表明:雷公藤内酯醇(10 - 100 ng/ml)和硼替佐米(10 - 100 nmol/L)单用和联用均可抑制H929细胞增殖,呈浓度依赖性,雷公藤内酯醇和硼替佐米联用组的细胞凋亡率明显高于单用硼替佐米组.经非抑制浓度的雷公藤内酯醇(10 ng/ml)联合硼替佐米(40 nmol/L)处理H929细胞24h后的凋亡率明显高于单用硼替佐米组(P＜0.05).结论:雷公藤内酯醇能够显著增强硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞的促凋亡活性.
关键词： 雷公藤内酯醇 硼替佐米 骨髓瘤 NCI-H929细胞 -
肿瘤坏死因子α和雷公藤内酯醇调节Raji细胞内VEGF的表达及基质胶中ECV304细胞血管形成作用的研究
为了探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)和雷公藤内酯醇作用Raji细胞VEGF(血管内皮细胞生长因子)的表达及VEGF与ECV血管形成的关系,采用MTT法检测雷公藤内酯醇抑制Raji细胞增殖的影响;用ELISA法对Raji细胞上清的VEGF定量;用基质胶上的内皮细胞网络形成检测ECV304(人类脐静脉内皮细胞起源的细胞系)血管生成;用RT-PCR检测VEGF mRNA含量.结果表明:雷公藤内酯醇对Raji细胞增殖抑制作用呈时间和剂量依赖方式,适合作用时间为24小时,24小时半数抑制浓度IC50为25 nmol/L;Raji细胞上清VEGF的含量在TNF-α组明显高于空白对照组,雷公藤内酯醇处理组则明显低于空白对照组,两者比较有极显著差异(P＜0.01);Raji细胞内VEGF mRNA主要为VEGFi65和VEGF121,其含量在TNF-α处理组与空白对照组比较有增加,而雷公藤内酯醇抑制VEGF mRNA表达,并呈剂量依赖方式;Raji细胞上清、VEGF(10 ng/ml)和TNF-α(10 ng/m1)处理的Raji细胞上清在基质胶中作用ECV304细胞后可促进血管形成,而雷公藤内酯醇(25 nmol/L)处理的Raji细胞上清和1640培养基作为的对照组加入基质胶中ECV304细胞未见血管形成.结论:在TNF-α、雷公藤内酯醇作用Raji细胞过程中,TNF-α促进VEGF的表达而雷公藤内酯醇则抑制其表达;TNF-α处理的Raji细胞上清在基质胶中促进血管形成,而雷公藤内酯醇则抑制血管形成.
