首页 > 文献资料
-
昆山合剂对类风湿关节炎合并贫血患者滑膜成纤维细胞增殖及MyD88、IL-6表达的研究
探讨昆山合剂（昆明山海棠、山血丹组成）对体外培养的类风湿关节炎（RA）致慢性病贫血患者滑膜成纤维细胞（FLS）增殖以及人类髓样分化蛋白88（MyD88）mRNA及其下游因子IL-6表达的影响和机制。方法：制备甲氨蝶呤和昆山合剂高、中、低剂量组的家兔含药血清；离体培养RA-FLS，取第3至5代细胞加入各组含药血清干预，MTT法检测各含药血清组和对照组RA-FLS的增殖情况，RT-PCR检测含药血清对该细胞MyD88 mRNA表达的影响。结果：干预24、48、72 h之后，与空白组比较，各浓度组的昆山合剂组和甲氨蝶呤含药血清作用均能明显抑制RA-FLS增殖（P<0.05），对脂多糖诱导的MyD88 mRNA高表达也有明显抑制作用（P<0.05），与脂多糖诱导组比较，48 h后昆山合剂高剂量组细胞培养上清的IL-6含量明显降低（P<0.05）。结论：昆山合剂含药血清能显著抑制RA-FLS增殖，并可下调脂多糖诱导的TLR4 mRNA及其下游炎症因子IL-6的表达，这可能为该方治疗RA的机制之一。
-
Wnt/β-catenin信号通路在类风湿关节炎中的表达
类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是以滑膜炎为主要病理表现的系统性疾病,目前已有研究证实,Wnt/β-catenin信号通路是类风湿关节炎发生发展的关键环节.一方面Wnt/β-catenin信号通路活化促进成骨细胞增殖分化,促进骨组织修复;另一方面,成纤维样滑膜细胞中Wnt/β-caten in通路上调,促进成纤维样滑膜细胞增殖,加重软组织增生,破坏骨关节.因此如何通过调节Wnt/β-catenin通路抑制成纤维样滑膜细胞增殖的同时促进骨修复对RA治疗具有重要研究意义.
-
羟基积雪草苷对佐剂关节炎大鼠滑膜成纤维细胞活化的影响
目的:研究羟基积雪草苷对佐剂关节炎大鼠滑膜成纤维细胞活化的影响.方法:将完全弗氏佐剂于大鼠右后足趾皮内注射0.1 mL致炎,建立佐剂关节炎大鼠模型,造模30 d后脱臼处死,取出关节处的滑膜,培养原代大鼠滑膜成纤维细胞(FLS),第3～6代细胞用于体外细胞实验.将对数生长期FLS以105个/mL接种于96孔板,利用白介素1β(IL-1β)诱导白介素-6(IL-6)的表达,羟基积雪草苷(终浓度1,5,10,20 μmol·L-1)和IL-1β(终浓度10 μg·L-1)作用24 h后收集上清.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中炎症因子IL-6的水平;实时定量PCR(Real time PCR)检测IL-6 mRNA的表达;蛋白印记法检细胞丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)、蛋白激酶C(PKC)、反应元件结合蛋白(CREB)的表达.结果:与正常组比较,模型组(IL-1β组)IL-6水平和IL-6 mRNA的表达明显升高.羟基积雪草苷预孵24 h后,浓度依赖性抑制IL-6的分泌并下调IL-6mRNA的表达.模型组中细胞外信号调节激酶(ERK)、p38及PKC的磷酸化水平显著提高,羟基积雪草苷逆转了IL-1β诱导的ERK、p38及PKC的磷酸化;同时抑制IL-1β引起的CREB磷酸化.结论:羟基积雪草苷抑制佐剂关节炎大鼠滑膜成纤维细胞活化,其机制可能与抑制MAPK和PKC通路活化,降低CREB的磷酸化有关.
-
苗族药金乌健骨汤对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞NF-κB p65,IKK-α及IKK-β表达的影响
目的:探讨苗族药金乌健骨汤对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞核转录因子-κB p65(NF-κB-p65),IκB激酶-α(IKK-α)及IκB激酶-β(IKK-β)表达水平的影响,并探讨其作用机制.方法:通过细胞培养,在体外构建类风湿关节炎滑膜成纤维细胞模型,将3～5代细胞随机分为6组,分别是空白组、苗族药金乌健骨汤含药血清冻干粉高、中、低剂量(28.8,9.6,3.2 g·kg-1)组、雷公藤多苷(3 mg·kg-1)组和泼尼松(1.5 mg·kg-1)组,用各药物含药血清冻干粉对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞进行干预24 h后,观察类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的形态学改变,采用流式细胞仪检测各组类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中NF-κB p65,IKK-α及IKK-β蛋白表达水平.结果:与空白组比较,类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡随着金乌健骨汤浓度的升高,凋亡率明显升高(P＜0.05),类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中IKK-α,IKK-β及NF-κB p65的表达水平明显下调(P＜0.05).结论:苗药金乌健骨汤能够诱导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡,下调NF-κB p65,IKK-α及IKK-β的表达水平.
-
白芍总苷对人膝骨关节炎滑膜成纤维细胞增殖的影响
目的:研究不同浓度的白芍总苷在不同时间干预下对人膝关节骨性关节炎滑膜成纤维细胞增殖活性的影响,探讨时间与浓度的变化规律和对滑膜炎症反应的作用.方法:膝关节置换术中取得新鲜滑膜组织经胶原酶法分离培养,于倒置显微镜下观察细胞形态;将白芍总苷以1mg/mL为初始浓度,4倍稀释成11个浓度依次作用于滑膜成纤维细胞,用四甲基偶氮唑盐法分别测定不同浓度的白芍总苷在24、48、72h干预后对滑膜成纤维细胞增殖水平的影响,并计算生长抑制率和存活分数.结果:经24、48、72h的干预后,低浓度的白芍总苷对人膝关节骨性关节炎滑膜成纤维细胞生长有轻度促进作用,中高浓度(＞15.625μg/mL)则有显著的抑制作用(P＜0.05),且呈时间和浓度依赖性.结论:四甲基偶氮唑盐实验可用于评价白芍总苷对滑膜成纤维细胞增殖活性的影响;测定并计算各生长抑制率和存活分数,探讨中药有效成分与细胞增殖活性的关系,为进一步明确其药理作用机制、建立相应滑膜炎症反应细胞模型、探寻针对骨性关节炎各环节的靶向治疗提供实验参数.
-
雷公藤内酯醇调控COX2/PGE2轴抑制Th17细胞分化的研究
雷公藤内酯醇(TPT)是雷公藤的主要活性单体,用于治疗类风湿关节炎(RA).该研究在体外用不同浓度(0,10,50,100 nmol·L-1)TPT干预RA患者的滑膜成纤维细胞(RASFs)后,用qRT-PCR检测环氧化酶(COX)的mRNA表达,ELISA法测定前列腺素E2(PGE2)的水平.进一步添加或不添加外源性PGE2,用TPT干预的RASFs与健康志愿者CD4+T细胞共培养,流式细胞术检测产生IL-17和IFN-γ的CD4+T细胞亚群.结果显示,TPT以剂量依赖的方式抑制RASFs的COX2的mRNA表达以及PGE2的分泌(P ＜0.05);TPT预处理的RASFs呈剂量依赖性抑制Th17细胞分化,而外源性PGE2能逆转TPT预处理的RASFs抑制Th17细胞分化(P＜0.05).综上表明TPT通过抑制COX2下调RASFs分泌PGE2,进而抑制Th17细胞分化.
-
IL-22诱导类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞分泌 IL-6促进 Th17细胞分化的研究
目的：探讨白细胞介素-22（IL-22）刺激类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（RASF）产生白细胞介素-6（IL-6）的水平，及间接调控IL-17＋CD4＋T（Th17）细胞分化的能力。方法分离RASF 6例，建立体外培养体系，IL-22刺激RASF，qRT-PCR及ELISA检测IL-6的表达；IL-22R1封闭抗体及抑制剂实验检测IL-6产生所涉及的特异性受体及其下游信号通路；建立RASF与健康志愿者CD4＋T细胞共培养体系和Transwell 体系，流式细胞术检测体系中各组 Th17细胞比例。结果 IL-22刺激RASF呈时间和剂量依赖性产生IL-6（P＜0．05），且IL-6产生依赖于IL-22R1及其下游的p38和JAK2通路（P＜0．05）；共培养体系和Transwell体系中发现IL-22预刺激RASF组较未刺激组Th17细胞比例增加，阻断IL-22R1或IL-6均能降低Th17细胞比例。结论 IL-22刺激RASF产生IL-6，进而促进Th17细胞分化，中和IL-22是RA治疗的有效策略。
-
双向电泳和质谱技术在类风湿关节炎滑膜细胞差异蛋白分析中的应用及意义
目的 采用2-DE和质谱技术分析RA患者和创伤件关节炎患者关节滑膜组织中FLS蛋白质组学的变化,寻找RA关节滑膜特异性自身抗原.方法 采用2-DE分离6例创伤性关节炎患者及3例RA患者关节滑膜组织中FLS总蛋白质,凝胶经银染显色和图像数据分析识别差异蛋白质点,并用MALDI-TOF-MS对筛选出的差异蛋白质点进行鉴定.结果 RA患者与创伤性关节炎患者中的FLS蛋白质通过2-DE检测,分别检出1 633、1 603个蛋白质点;对2组相互匹配的蛋白质点进行差异分析后,其中蛋白质差异量大于3倍的差异点共有92个,从中选取在RA患者FLS中表达上调的33个差异蛋白质点进行MALDI-TOF-MS 鉴定分析,并与IPI和Swiss-Prot数据库进行比对,共鉴定出包括肿瘤型丙酮酸激酶、α-烯醇化酶、二硫键异构酶A3 前体、谷胱甘肽转移酶、泛素结合酶E2K、血小板活化因子乙酰水解酶、二氢嘧啶酶样2、腺苷酸酶、转醛醇酶、乙酰基辅酶A异构酶、26S蛋白调节亚单位S6a、膜联蛋白A11、过氧化物还原酶1、人色氨酰tRNA合成酶、核纤层蛋白、肌间蛋白、核基质蛋白、肌动蛋白、T-复合物多肽1、葡萄糖调节蛋白75、αB-晶体蛋白、葡萄糖调节蛋白78、未知蛋白:如PSMFA和SELENBP1等30个与RA发病有关的蛋白.结论 RA患者与创伤性关节炎患者FLS间存在差异表达的蛋白质,这些差异蛋白有可能是构成RA关节滑膜的相关自身抗原,并可能在诱导RA自身免疫反应中发挥一定作用.
-
滑膜成纤维细胞代谢改变与类风湿关节炎
滑膜成纤维细胞(SF)是类风湿关节炎(RA)炎性增生的滑膜中主要的细胞类型.在炎性因子微环境的刺激下,SF活化并分化为侵袭性亚型,侵蚀关节软骨和骨组织,导致受累关节组织结构破坏和功能障碍.SF活化后,其增殖、迁移及侵蚀能力增强,胞内代谢亦发生改变.SF中包括碳水化合物、蛋白质、脂质和核酸在内的4种主要生物大分子的代谢均发生变化,某些代谢中间产物通过参与胞内相关信号转导,进一步促进SF功能异常,导致RA炎性关节中滑液成分改变,炎性滑膜中血管异常增生,SF增殖、迁移及侵蚀能力增强.代谢改变增加了SF与其他类型滑膜细胞间的代谢物质交换,并可潜在激活SF.上述代谢变化促发SF参与免疫反应启动或异常的免疫反应过程,并终导致关节骨质破坏.SF代谢过程的适应性调整促进了RA的发生发展,并为疾病治疗提供了新的策略和靶标.
-
IL-6R抗体调节PMMA骨水泥介导的滑膜成纤维细胞MMPs和血管化因子mRNA表达
目的 探讨IL-6R抗体对PMMA骨水泥介导的滑膜成纤维细胞MMP-1和MMP-3、VEGF和PDGF mRNA表达的调节.方法 从全髋关节置换术中获取滑膜组织消化并传代培养.倒置相差显微镜对滑膜细胞进行形态学观察,免疫细胞化学(SABC法)染色对滑膜成纤维细胞进行鉴定.根据加入不同培养物,实验分为3组:PMMA组:75μg/mL PMMA骨水泥颗粒;IL-6R抗体组:10 ng/mL IL6R抗体+75μg/mL PMMA骨水泥颗粒;空白对照组.采用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测IL-6R抗体、PMMA对滑膜成纤维细胞增殖活力影响;实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)检测MMP-1、MMP-3、VEGF和PDGF mRNA 表达.结果 原代滑膜细胞贴壁后,初期为短梭形.连续3次传代后,95%以上细胞为长梭形成纤维细胞样细胞.SABC法染色检测结果显示:上述成纤维样细胞抗CD68抗体阴性,抗vimentin抗体呈棕黄色,为阳性反应.CCK-8检测显示:与PMMA组和空白对照组相比,IL-6R抗体组吸光度(A)值明显降低(P<0.01);而空白对照组与PMMA组间吸光度(A)值无统计学差异(P>0.05).FQ-PCR 检测发现:与PMMA组和空白对照组相比,IL-6R抗体组中MMP-1和MMP-3、VEGF和PDGF mRNA 的表达明显受到抑制(P<0.01);PMMA组中MMP-1和MMP-3、VEGF和PDGF表达较空白对照组升高(P<0.05).结论 IL-6R抗体能显著抑制滑膜成纤维细胞MMP-1和MMP-3、VEGF和PDGF mRNA的表达,为生物制剂预防和治疗假体无菌性松动提供分子生物学的理论依据.
-
滑膜成纤维细胞与类风湿性关节炎相关研究的进展
类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是一种慢性起病的自身免疫性疾病,其病程终转归往往导致关节破坏,其显著特点是由免疫细胞参与的自身免疫调节紊乱.长期以来,一直认为T细胞、巨嗜细胞及其各自的细胞因子在RA病程中起着关键作用,然而这一学说在近年来受到了强力的挑战,相当一部分学者认为在RA长期的病程中成纤维样细胞(fibroblast-like synoviocytes, FLS)起着主导的作用,这种作用甚至在疾病早期就已经体现出来,而这类滑膜成纤维细胞(rheumatoid arthritis synovial fibro-blasts, RASFs)正是RA区别其他关节炎症的重要标志.
-
P38MAPK在滑膜细胞表达炎性因子中的作用
目的:研究p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)在脂多糖(LPS)诱导大鼠滑膜成纤维细胞(synovial fibroblast,SF)合成炎性因子IL-1β、MMP3中的作用.方法:采用酶消化法分离获得大鼠SF,体外培养并鉴定,分别作为空白对照组、与不同浓度LPS共培养、以SB203580预处理后与LPS共培养,24h后免疫化学染色、RT-PCR分别检测通路活化水平和炎性因子蛋白及mRNA表达量.结果:LPS可刺激SF使IL-1β、MMP3蛋白和mRNA表达上调,表达量随LPS浓度增高而增加(与对照组相比P＜0.05);且与LPS共培养后SF中p38 MAPK通路活化,阻断p38 MAPK后,炎性因子表达显著下调(P＜0.05).结论:LPS诱导SF高表达IL-1β、MMP3,p38 MAPK在其中发挥重要作用.
-
双乌宣痹颗粒对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响
目的 观察双乌宣痹颗粒对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)凋亡及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响,探讨其作用机制.方法 胶原酶消化法分离RA患者膝关节FLS,传代培养并鉴定后,取4～7代细胞用于实验.RA-FLS分别用高[17.28g/(kg.d)]、中[8.64g/(kg.d)]、低[4.32g/(kg.d)]剂量双乌宣痹颗粒含药血清培养24h,即高、中、低剂量双乌宣痹组;另设阳性药物对照[来氟米特,1.04mg/(kg.d)]组和阴性对照(生理盐水)组.采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blotting检测PI3K、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平.结果 高、中、低剂量双乌宣痹含药血清及来氟米特含药血清均能明显促进FLS的凋亡,下调PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白表达,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);与来氟米特组比较,高、中双乌宣痹组PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白的表达明显下调,Bax蛋白表达明显上调,差异有统计学意义(P<0.05).结论 双乌宣痹含药血清能促进RA-FLS凋亡,下调Bcl-2、PI3K、p-Akt蛋白的表达,这可能是其治疗RA的机制之一.
关键词： 类风湿关节炎 滑膜成纤维细胞 双乌宣痹颗粒 细胞凋亡 PI3K/Akt信号通路 -
10-羟基喜树碱对类风湿关节炎基质金属蛋白酶-3的影响
目的 研究10-羟基喜树碱(10-Hcdroxycamptotbecine,10-HCPT)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(Rheumatoid Arthritis synovial fibroblasts,RASF)基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase-3,MMP3)mRNA表达的影响.方法 选取北京大学人民医院2016年8月-2017年1月行全膝关节置换术或关节镜滑膜切除术的类风湿关节炎患者的关节滑膜组织,体外分离培养RASF,用不同浓度的10-HCPT及MTX(1.0、10.0μg/mL)处理RASF,分别为10-HCPT、MTX低、高浓度组,不加药物的细胞作为对照组,培养24 h后,提取细胞RNA,采用荧光定量PCR方法(RT-PCR)检测MMP3-mRNA表达.结果 与对照组比较,10-HCPT及MTX高浓度组MMP 3 mRNA表达降低(P＜0.01).对比10-HCPT低浓度组,10-HCPT和MTX高浓度MMP 3 mRNA表达同时降低(P＜0.01).10-HCPT及MTX同浓度组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 10-HCPT可抑制RASF MMP-3 mRNA表达.
-
类风湿关节炎新靶点药物治疗进展
类风湿关节炎(RA)是一种异质性疾病,多种细胞参与发病并终导致关节破坏,但其病理生理过程尚不明确,可能涉及遗传和(或)环境因素.近年来,随着基础研究深入,RA治疗有了显著进展,除传统抗风湿药物(DMARDs),生物制剂已扩展了RA治疗手段.笔者主要综述近年来该领域药物治疗现状.
-
三水白虎汤含药血清抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞迁移的临床研究
目的 探讨三水白虎汤(SSBH)含药血清抑制类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)迁移的临床研究.方法 利用组织块培养法来收集RA滑膜FLS,并进行体外传代培养,将20只大鼠随机分为对照组与研究组,各10只.选取3-6代细胞分别加入对照组(生理盐水制备的血清培养)与研究组(SSBH含药血清培养),在培养72 h后,提取细胞总蛋白,通过双向凝胶电泳(2-DE)将细胞总蛋白进行分离,利用凝胶经银染显色与图像数据来识别差异细胞蛋白的位点,随后对差异细胞蛋白的位点进行鉴别.结果 两组滑膜成纤维细胞蛋白的双向凝胶电泳图谱都出现差异细胞蛋白质点,在差异蛋白表达量超过3倍的中蛋白质点中选择26个差异细胞蛋白质点实施质谱分析,总共鉴定出24种上升的白细胞介素-1(IL-1)受体拮抗蛋白.研究组SSBH含药血清对RA-FLS分泌IL-1、白细胞介素-2(IL-2)影响优于对照组(P＜0.05).结论 SSBH可以通过类风湿关节炎患者FLS中的IL-1受体拮抗蛋白来抑制滑膜增生,同时也是治疗类风湿关节炎的一种药理机制.
-
黄芪总苷对兔关节软骨和滑膜作用的体外实验
目的:从体外实验观察黄芪总苷(AST)对关节损伤的作用.方法:检测兔关节软骨35S掺入量和滑膜成纤维细胞的[3H]TdR掺入量.结果:AST(0.8～3.2mg·L-1)可明显上调rhIL-1(30U·mL-1)或Fe2+-H2O2体系(Fe2+和H2O2各10μmol稬-1)引起过低的兔关节软骨蛋白聚糖合成量,下调Fe2+-H2O2体系(各20 μmo稬-1)引起的过高的滑膜成纤维细胞增殖;进一步研究显示AST对OH.有直接清除作用.结论:AST对Fe2+-H2O2体系和rhIL-1引起的兔关节损伤有保护作用,机制可能与直接清除OH.有关.
-
化瘀祛湿方对早期膝骨关节炎滑膜成纤维细胞COX-2mRNA表达的影响
目的 通过观察化瘀祛湿方对早期膝骨关节炎(KOA)患者滑膜成纤维细胞(FLS)中COX-2 mRNA表达的影响,阐释化瘀祛湿方对早期KOA治疗的作用机制.方法 通过切断膝关节前交叉韧带和内侧副韧带,将成年健康新西兰雄性大耳白兔16只造成KOA模型,并将其随机分为生理盐水组(A组)、补肾活血组(B组)、化瘀祛湿组(C组)、塞来昔布组(D组),造模成功后6周,连续喂药7d后处死实验兔,静脉穿刺采血,离心后取血清备用.将收集的早期KOA患者滑膜组织,经分离、纯化培养后,使用四代FLS用于实验,依次分别加入含A、B、C、D组药物的DMEM培养基中培养.重复离心后,应用RT-PCR检测四组含药血清干预后早期KOA患者FLS中COX-2 mRNA的表达水平.结果 早期KOA患者FLS经不同含药血清干预后均能检测到COX-2 mRNA,A组的COX-2 mRNA表达水平高,与B、C、D组比较差异有高度统计学意义(P＜0.01);B组与C、D组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);C组与D组COX-2 mRNA表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 化瘀祛湿方可有效抑制早期KOA患者FLS中COX-2 mRNA的表达,在治疗早期KOA中发挥重要作用.
-
Dickkopf-1在类风湿关节炎滑膜细胞致炎中的作用
目的：探讨Dickkopf-1（ Dkk-1）在类风湿关节炎（ RA）滑膜炎症的作用。方法将Dkk-1特异性siRNA转染至分离培养的滑膜成纤维细胞（ RASF）使Dkk-1基因沉默；将Dkk-1质粒转染至RASF使Dkk-1基因过表达。应用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）及酶联免疫吸附测定法（ELISA），检测RASF在转染前后几种致炎因子在mRNA及蛋白水平的表达变化。结果 Dkk-1特异性siRNA转染后随着Dkk-1表达水平受到抑制，白细胞介素（ IL）-1β、肿瘤坏死因子（ TNF）-α、IL-6及IL-8的表达水平降低。 Dkk-1质粒转染后随着Dkk-1基因过表达，上述致炎因子表达水平增高。更为重要的是，RASF在TNF-α和IL-1β活化后，上述效应仍较为显著。结论 Dkk-1促进RASF分泌多种致炎因子，加重RA关节局部滑膜炎症。抑制关节局部Dkk-1的表达可减轻RA关节滑膜炎症，因此DKK-1有可能成为RA生物治疗的新靶标。
-
10-羟基喜树碱对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的增殖抑制作用
目的 探讨10-羟基喜树碱(10-HCPT)对类风湿关节炎(RA)患者滑膜成纤维细胞(FLS)的增殖抑制作用.方法 用不同剂量的10-HCPT和甲氨蝶呤(MTX)处理类风湿关节炎和骨关节炎(OA)滑膜成纤维细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制,Annexin-V APC/7-AAD染色法检测细胞凋亡.结果 经1.0 mg/L、10.0 mg/L 10-HCPT组作用48 h和72 h后的RA滑膜成纤维细胞的存活率分别为(66.68±0.48)％与(44.05±1.29)％、(60.09±0.95)％与(30.63±1.79)％.而MTX组48 h和72 h后的RA滑膜成纤维细胞的存活率分别为(78.24±0.99)％与(72.80±1.39)％、(69.08±0.86)％与(56.79±2.33)％.作用过的RA及OA滑膜成纤维细胞存活率均下降,且随着作用时间的延长,细胞存活率进一步下降.与MTX组相比10.0 mg/L 10-HCPT组可明显抑制滑膜成纤维细胞的增殖(P＜0.05).经1.0 mg/L、10.0 mg/L 10-HCPT组作用48、72 h后的RA滑膜成纤维细胞的凋亡率分别为(24.87±2.69)％与(35.45±3.79)％、(30.10±2.97)％与(46.16±0.99)％.与对照组比较(16.38±1.68)％,两种浓度的10-HCPT、MTX[(20.46±4.87)％与(25.37±0.98)％、(22.14±1.86)％与(28.26±3.95)％]均可诱导RA及OA滑膜成纤维细胞的凋亡,其凋亡率高于对照组;随着作用时间的延长(72 h),诱导凋亡的作用显著增强(P＜0.05).对于RA滑膜成纤维细胞,作用时间为48 h,10-HCPT组诱导滑膜成纤维细胞的凋亡率高于相同浓度的MTX组,其中10.0 mg/L10-HCPT组诱导凋亡作用更强(P＜0.05);作用72 h时,10.0 mg/L 10-HCPT组凋亡率明显高于其他各组(P＜0.05).结论 10-HCPT具有较MTX更强的抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用.
