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昆山合剂对类风湿关节炎合并贫血患者滑膜成纤维细胞增殖及MyD88、IL-6表达的研究
探讨昆山合剂（昆明山海棠、山血丹组成）对体外培养的类风湿关节炎（RA）致慢性病贫血患者滑膜成纤维细胞（FLS）增殖以及人类髓样分化蛋白88（MyD88）mRNA及其下游因子IL-6表达的影响和机制。方法：制备甲氨蝶呤和昆山合剂高、中、低剂量组的家兔含药血清；离体培养RA-FLS，取第3至5代细胞加入各组含药血清干预，MTT法检测各含药血清组和对照组RA-FLS的增殖情况，RT-PCR检测含药血清对该细胞MyD88 mRNA表达的影响。结果：干预24、48、72 h之后，与空白组比较，各浓度组的昆山合剂组和甲氨蝶呤含药血清作用均能明显抑制RA-FLS增殖（P<0.05），对脂多糖诱导的MyD88 mRNA高表达也有明显抑制作用（P<0.05），与脂多糖诱导组比较，48 h后昆山合剂高剂量组细胞培养上清的IL-6含量明显降低（P<0.05）。结论：昆山合剂含药血清能显著抑制RA-FLS增殖，并可下调脂多糖诱导的TLR4 mRNA及其下游炎症因子IL-6的表达，这可能为该方治疗RA的机制之一。
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补阳还五汤含药血清对Toll样受体4信号转导通路及氧化低密度脂蛋白受体-1表达的影响
目的:从补阳还五汤含药血清对脂多糖( lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs) Toll样受体4(toll-like receptor4,TLR4)信号转导通路及血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的影响,研究补阳还五汤防治动脉粥样硬化( atherosclerosis,AS)的机制.方法:含药血清的制备:选择新西兰大耳白兔20只,随机分为正常组、补阳还五汤高、中、低浓度组,每组5只.中药组分别以13.2,6.6,3.3 g·kg-1补阳还五汤ig,正常组以同等量的生理盐水ig,连续ig7 d.在末次ig给药2h后,心脏采血,离心后分离血清,获得3种不同浓度药物血清;体外培养人脐静脉内皮细胞,用脂多糖(LPS)(1 mg·L-1)刺激后,分别加入含10％高、中、低浓度补阳还五汤药物血清干预,24 h后收集细胞,用荧光定量PCR方法测定TLR4,MyD88,TRAF-6,TRAM,TRIF,NF-κB及LOX-1的基因表达,用Western blotting法测定TLR4,MyD88,TRAF-6,LOX-1的蛋白表达.结果:用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4,MyD88,TRAF-6,TRAM,TRIF,NF-κB及LOX-1的高表达(与空白对照组比较P＜0.01),用补阳还五汤含药血清干预后显著抑制TLR4,MyD88,TRAF-6,NF-κB及LOX-1的高表达(与模型组比较P＜0.05),而对TRAM和TRIF与模型组比较无明显抑制作用.结论:补阳还五汤可抑制TLR4和MYD88依赖性信号转导通路及LOX-1的表达,这可能是其治疗各种免疫炎症性疾病及防治动脉粥样硬化作用的机制之一.
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上中下通用痛风汤对大鼠急性痛风关节炎模型TLR/MYD88信号通路影响的研究
目的:研究上中下通用痛风汤对尿酸钠诱导大鼠急性痛风关节炎(GA)滑膜组织TOLL样受体(TLR)/髓样分化因子88(MYD88)信号通路相关蛋白表达的影响,揭示上中下通用痛风汤治疗痛风关节炎的作用机制.方法:取60只SD雄性大鼠,按随机数字表法分成对照组、模型组、吲哚美辛组、上中下通用痛风汤高、中、低剂量组6组各10只.除对照组外,其余5组采用尿酸钠晶体溶液踝关节注射建立急性痛风关节炎模型,以上中下通用痛风汤与吲哚美辛对比治疗,观察关节肿胀度、关节滑膜病理变化和关节滑膜TLR/MYD88蛋白表达.结果:上中下通用痛风汤高、中、低剂量在致炎后各时间点均能不同程度地减轻关节肿胀程度,可改善急性痛风关节炎大鼠模型踝关节组织的炎细胞浸润、滑膜组织破坏、血管扩张及充血,滑膜组织中TLR4、MYD88蛋白表达下降,与模型对照组比较差异有统计学意义.结论:上中下通用痛风汤对尿酸钠所致急性痛风关节炎症有较好的抗炎镇痛作用,其作用机制可能与降低炎症信号通路TLR4、MYD88的表达有关.
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髓样分化因子88与人卵巢癌紫杉醇耐药细胞系A2780/Taxol耐药性相关
目的 本研究希望通过外源改变MyD88的表达,明确其与紫杉醇耐药的相关性,检测MyD88对细胞生物学活性的影响.方法 通过在A2780/Taxol细胞中敲低和过表达MyD88后,利用real-time PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白质水平检测MyD88的表达变化；CCK-8法检测细胞转染前后对紫杉醇耐药性的变化,流式技术检测MyD88对细胞周期和凋亡的影响.结果 敲低MyD88表达水平,耐药细胞系A2780/Taxol对紫杉醇的耐药性明显降低(P＜0.01),抗凋亡能力减弱(P＜0.01)；过表达MyD88后,细胞对紫杉醇耐药性增加(P＜0.05).结论 抑制卵巢癌细胞中MyD88的表达,能促进耐药细胞系对紫杉醇的敏感性,为临床卵巢癌耐药患者以MyD88为靶向的基因治疗提供了新思路和手段.
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铜绿假单胞菌B细胞表位-MyD88表达质粒的构建及其相关研究
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)外膜蛋白F(OprF)的主动免疫能诱发机体产生特异性体液免疫应答,发挥局部保护作用.然而OprF的完整蛋白对机体具有潜在的危害性.现有研究表明OprF蛋白含有大量的B细胞表位,因此,应用OprF优势抗原表位设计的疫苗,既能诱导机体产生抗Pa的中和抗体,又能克服非抗原决定簇成分潜在的毒副作用.考虑到表位蛋白的免疫原性较弱,不足以引发良好的免疫应答,故利用新型免疫佐剂MyD88来调节机体.
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强直性脊柱炎髋关节病变中Toll样受体4表达的初步研究
目的研究强直性脊柱炎（AS）髋关节病变中滑膜Toll样受体2和4（TLR2和TLR4）等受体的表达，以探讨髋关节病变的发病机制。方法免疫组化染色法检测AS患者及对照组患者滑膜组织中TLR2、TLR4、髓样分化因子88（MyD88）、NFκB-p65表达情况。结果 AS组滑膜组织中TLR4、NFκB-p65表达阳性， TLR2、MyD88表达阴性，而对照组只NFκB-p65表达阳性，TLR2、TLR4、MyD88表达阴性。结论 AS患者髋关节病变存在TLR4高表达，并可能经MyD88非依赖性信号通路引起免疫炎症反应，导致髋关节破坏。
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白术内酯Ⅰ拮抗TLR4/MyD88信号通路介导的卵巢癌细胞IL-6的分泌及增强紫杉醇诱导的卵巢癌细胞生长的抑制作用
卵巢癌细胞异常表达Toll样受体4(TLR4)和髓样分化因子88(MyD88)可能与患者预后差和无进展生存期较短有关,也可能是紫杉醇化疗抵抗的机制之一.有研究证实,紫杉醇和脂多糖具有一个共同的结合位点TLR4 [1-4].紫杉醇作为TLR4的配体可模拟脂多糖结合TLR4,活化TLR4/MyD88信号通路,上调卵巢癌细胞中白细胞介素6(IL-6)和抗凋亡蛋白的表达,促进卵巢癌细胞的增殖,抵抗紫杉醇的促凋亡作用[5].
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华氏巨球蛋白血症:循证医学新进展及共识更新
华氏巨球蛋白血症(WM)是一种独特的B细胞肿瘤,其主要特征为骨髓淋巴样浆细胞浸润和单克隆IgM血症.新研究表明,WM细胞MYD88基因发生了突变(L265P),该突变通过一系列信号终激活NF-κB,导致B细胞异常增殖.WM临床主要表现为组织浸润和单克隆IgM引起的损害.WM需与其他产生单克隆IgM的淋巴系统肿瘤相鉴别,而MYD88 L265P检测是新的鉴别手段之一.目前,WM的推荐治疗方案包括烷化剂、核苷类似物、硼替佐米和利妥昔单抗等.
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黄芩汤对溃疡性结肠炎大鼠TLR4/MyD88通路调控作用研究
研究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)大鼠TLR4/Myd88通路及下游细胞因子表达的影响,探讨其治疗效果及作用机制.运用复合法(三硝基苯磺酸+乙醇)制备细胞免疫反应UC大鼠模型;将大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性药柳氮磺胺吡啶组(SASP)和黄芩汤(HQT)高中低剂量组(20、10、5 g·kg-1).治疗3天后,采用Griess法测定血清中NO含量,ELISA法测定血清中炎症介质IL-4、IL-10、IL-17和PGE2含量;治疗5天后,处死大鼠取结肠,运用免疫组化法检测COX-2、iNOS蛋白的阳性表达,采用Western blot法检测大鼠结肠TLR4、MyD88的蛋白表达.结果显示,模型组血清中NO、IL-17、PGE2水平,结肠组织TLR4、MyD88蛋白表达量及COX-2、iNOS阳性表达均高于正常组(P＜0.05);黄芩汤高剂量组大鼠上述指标均较模型组显著好转(P＜0.05).说明黄芩汤对溃疡性结肠炎的治疗作用可能是通过抑制TLR4/Myd88/NF-κB通路活化,进而下调促炎细胞因子NO、IL-17和PGE2表达实现的.
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脂多糖相关受体及其介导的信号转导通路
脂多糖(LPS)的识别与跨膜信号转导需要一系列分子的参与,如LPS结合蛋白、杀菌性/通透性增加蛋白、CD14、Toll样受体4等,是引起细胞炎性效应的关键,这一转导过程也是导致感染性休克、全身炎性反应综合征和多器官功能衰竭等疾病的重要机制.Toll样受体4与LPS结合后,活化髓样分化因子88依赖性和非依赖性两条信号途径.前者活化丝裂原激活的蛋白激酶和核因子KB信号通路,后者活化核因子kB和干扰素调节因子3信号通路.研究通路中的信号传递分子和信号转导环节可以为临床治疗寻找"新靶点".
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TLR4、MyD88mRNA在胆脂瘤型中耳炎中的表达
目的 建立一种实时荧光RT-PCR 方法,定量检测中耳胆脂瘤组织中TLR4、MyD88 的表达水平.方法 选取中耳胆脂瘤组织25 份为对照组(其中13 份为炎症组,12 份为非炎症组);10 份正常外耳道皮肤作为正常组.采用实时荧光RT-PCR 与Lightcyeler 荧光PCR 仪定量检测TLR4、MyD88 mRNA 的表达水平;采用2-ΔΔCT 法处理实时荧光定量RT-PCR 数据.结果 炎症组TLR4、MyD88mRNA 表达水平较正常外耳道组分别上升了4 倍和3 倍,且差异有统计学意义(P 值均<0.05);炎症组TLR4、MyD88mRNA 表达水平较非炎症组分别上升了2 倍和1 倍,且差异有统计学意义(P 值均<0.05).结论 中耳胆脂瘤组织中,尤其是炎症反应明显的胆脂瘤组织,TLR4 及其下游信号转导分子的表达量发生改变,提示TLR4-MyD88 信号传导途径可能参与了胆脂瘤型中耳炎的发病.
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TLR信号转导途径转接分子MyD88与衣原体感染关系的研究进展
肺炎衣原体和沙眼衣原体是衣原体家族与人类炎症疾病密切相关的两种重要原核微生物。衣原体诱导的疾病被认为是衣原体触发的炎症应答反应[1],其确切的分子免疫学机制尚未阐明。髓样分化因子MyD88是大多数Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)信号转导通路起动炎症应答的一个关键接头分子。近年研究发现,在宿主防御衣原体感染中,MyD88因子通过介导早期炎症应答,操纵适应性免疫向Th1表型转化,发挥保护宿主、控制衣原体感染、防止免疫病理损伤的作用[2-3]。本文对TLR信号转导途径关键转接分子MyD88与衣原体感染关系的研究进展综述如下。
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双表法对流感病毒感染小鼠肺组织MyD88及NF-κB P65mRNA表达的影响
目的 探讨双表法对流感病毒感染小鼠肺组织MyD88及NF-κB P65mRNA表达的影响,探讨双表法的作用机制.方法 将120只昆明种小鼠随机分为12组:模型组10只;正常组10只;利巴韦林对照组10只;解表药(银翘散)高、中、低剂量组各10只;固表药(玉屏风散)高、中、低剂量组各10只;双表法(银翘散+玉屏风散)高、中、低剂量组各10只.动物造模后正常组和模型组均以等体积的生理盐水灌胃,各中药治疗组分别予固表法(玉屏风散提取物)、解表法(银翘散提取物)、双表法(玉屏风散+银翘散)、利巴韦林灌胃给药.采用RT-PCR法检测MyD88及NF-κB P65mRNA表达情况.结果 正常组和模型组肺组织中均可检测到MyD88mRNA及NF-κB P65mRNA的表达,但模型组明显高于正常组(P＜0.05).双表法高剂量组MyD88mRNA及NF-κB P65mBNA表达低,与双表法中低剂量组、解表法各剂量组、固表法各剂量组、利巴韦林组比较均有显著性差异(P均＜0.05).结论 流感病毒感染小鼠时激活了MyD88/NF-κBP65信号通路,双表法能较好地抑制MyD88mRNA及NF-κB P65mRNA的表达.
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Toll样受体与信号转导
Toll样受体是一组Ⅰ型跨膜受体,通过识别入侵病原微生物的配体,激发天然免疫应答,启动促炎症细胞因子和共刺激分子的表达.Toll样受体在信号转导中发挥重要作用,MyD88是信号转导通路中的关键蛋白.通过对Toll样受体的研究有助于进一步认识宿主的免疫反应.
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贵州苗药杆努尽烟对慢性支气管炎模型大鼠肺组织M yD88蛋白表达的影响
①目的 基于TLR4-MyD88-NF-κB信号通路,研究贵州苗药杆努尽烟对慢性支气管炎大鼠肺组织MyD88蛋白表达水平及支气管 、肺组织炎症状况的影响.②方法 SD雄性大鼠60只,体质量(200±20)g,随机分为空白对照组,模型对照组,阳性对照组,杆努尽烟水提液高剂量组(8g/kg)、中剂量组(4g/kg)、低剂量组(2g/kg),每组10只.除空白对照组外,其余5组均采用烟熏和脂多糖气管滴注方法建立慢性支气管炎大鼠模型.造模成功后,杆努尽烟水提液高 、中 、低剂量组分别给予8g/kg、4g/kg、2g/kg(按生药计)的杆努尽烟水提液进行灌胃,阳性对照组给予桂龙咳喘宁1g/kg,空白对照组及模型组灌以等体积生理盐水,1次/d,连续给药28天,观察杆努尽烟水提液对大鼠咳嗽 、气喘症状的缓解作用.采用Western Blot法测定肺组织MyD88蛋白表达,通过HE染色并于光镜下观察大鼠支气管 、肺组织病理变化.③结果 给药28天后,杆努尽烟水提液中 、低剂量组大鼠MyD88含量与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),高剂量组与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);杆努尽烟水提液高剂量组大鼠MyD88含量与模型对照组相比均显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);中 、低剂量组大鼠MyD88含量与模型对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).④结论 苗药杆努尽烟治疗慢性支气管炎有助于控制炎症反应,减轻气管 、支气管及肺泡组织炎症,降低MyD88的蛋白含量,有效抑制MyD88蛋白的表达,下调TLR4-MyD88-NF-κB通路表达水平,从而改善气道及肺部的炎症状况;其中高剂量组与中 、低剂量组相比,有明显下降,表明其抗炎效果呈剂量依赖性,较高的杆努尽烟剂量可带来更好的抗炎效果.
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益气活血复方对内皮细胞TLR4及其下游MyD88、TRAF-6、TRAM、TRIF mRNA表达的影响
目的 研究益气活血复方对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4 ) 及其下游信号转导通路元件髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)、Toll样受体相关分子(TRAM)、 Toll样受体相关的干扰素活化子(TRIF)表达的影响,探讨益气活血复方含药血清防治动脉粥样硬化(AS)的机制.方法 选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高浓度组、中药中浓度组、中药低浓度组,每组5只.以上各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7 d.末次灌胃给药2 h后,心脏采血,离心后分离血清.体外培养人脐静脉内皮细胞,用LPS刺激后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预24 h,收集细胞,用Real time PCR方法测定TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF mRNA的表达.结果 用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4 、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF mRNA的高表达(与空白对照组比较,P<0.01),用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4 、MyD88及TRAF-6 mRNA的高表达(与模型组比较P<0.05或P<0.01),对TRAM及TRIF作用不明显.结论 益气活血复方可阻断TLR4高表达,同时阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,而对MyD88非依赖性途径作用不明显,因此益气活血复方主要是通过阻断MyD88依赖性途径来发挥其抗动脉粥样硬化的作用.
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TLR4介导大鼠肾脏缺氧复氧炎症反应依赖于MyD88
目的:探讨MyD88是否参与了TLR介导大鼠肾脏缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)引起的炎症反应.方法:体外分离获得Wistar大鼠原代肾小管上皮细胞(proximal tubule epithelial cells,PTECs),建立H/R模型.采用TLR4siRNA干扰PTECs,检测白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)的表达.之后,加入髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)的抑制剂ST2825后,检测IL-8和TNF-α的表达.结果:TLR4表达沉默后,IL-8、TNF-α和MyD88的表达均显著下降(P<0.05);加入ST2825后,IL-8、TNF-α和MyD88的表达均显著下降(P<0.05),且抑制MyD88活性后显著降低细胞的凋亡水平(P<0.05).结论:MyD88参与了TLR4介导的大鼠肾脏缺氧复氧引起的炎症反应.
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结直肠腺瘤及结直肠癌中TLR7 TLR9及MyD88的表达
目的:通过检测不同组织类型的腺瘤中Toll样受体7、9与MyD88的表达情况,探讨其在结直肠癌发生发展中的临床意义.方法:采用免疫组织化学EnVision法,检测50例增生性息肉、62例管状腺瘤、46例绒毛状腺瘤、26例混合型腺瘤、42例结直肠癌中TLR7、TLR9及MyD88的表达情况,其中8例绒毛状腺瘤与5例混合型腺瘤局灶发生癌变.结果:TLR7、TLR9的表达随着结直肠黏膜上皮病变程度增加,其阳性表达率均先升高后降低(P＜0.05).TLR7、TLR9蛋白表达均与腺瘤的病理类型及异型性相关(P＜0.05),而与年龄、性别及部位无关(P＞0.05).MyD88的表达随着腺上皮病变程度增加,其阳性表达率逐级升高(P＜0.05).MyD88蛋白表达仅与腺瘤的异型性相关(P＜0.05),而与年龄、性别、部位及病理类型均无关(P＞0.05).结直肠腺瘤组织TLR7、TLR9两者的表达均与MyD88表达呈负相关(P＜0.05).结论:TLR7、TLR9两因子的表达与MyD88蛋白的表达在结直肠肿瘤的发生发展中可能具有拮抗抑制作用,其联合检测能为结直肠肿瘤的早期临床诊断和治疗提供有利的生物学信息.
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青藤碱对佐剂性关节炎大鼠Toll 样受体2 mRNA 及 MyD88 mRNA 表达的影响
目的：探讨青藤碱对佐剂性关节炎大鼠Toll样受体（TLR）2mRNA及MyD88mRNA表达的影响。方法清洁级SD大鼠40只，随机分为模型组、青藤碱组、甲氨蝶呤组及正常对照组。前3组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂诱发大鼠佐剂性关节炎模型，正常对照组大鼠右后足跖皮内注射等量0.9％氯化钠注射液。各组分别干预4周后，取膝关节滑膜，采用实时聚合酶链反应（PCR）法检测TLR2mRNA，MyD88mRNA表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测肿瘤坏死因子（TNF）-α。结果模型组大鼠膝关节滑膜组织TLR2mRNA，MyD88mRNA表达及TNF-α均较正常对照组明显升高，差异有统计学意义（均为P＜0．01）。经青藤碱治疗后，TLR2mRNA，MyD88mRNA表达及TNF-α均较模型组明显下降，差异有统计学意义（均为P＜0．01）。结论青藤碱可改善佐剂性关节炎大鼠的关节炎症，该作用可能与抑制TLR2通路有关。
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电针对食源性肥胖小鼠肠黏膜TLR4/MyD88信号通路的影响
目的:探究电针对高脂饮食诱导的肥胖小鼠肠黏膜TLR4/MyD88信号通路的调控效应.方法:选取150只C57BL/6小鼠,适应性喂养1周后,随机选择15只作为正常组,余下135只饲养高脂饮食.8周后筛选出体重大于正常组均值20％的肥胖鼠50只,随机均分成模型组、电针7天组(EA-7组)、电针14天组(EA-14组)、电针21天组(EA-21组)、电针28天组(EA-28组).电针组选择针刺天枢、关元、足三里及三阴交等四穴,得气后,接通电针仪治疗10min.观察各组小鼠体重、Lee's指数、生殖器周围脂肪重量的差异,及肠中段黏膜组织中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量变化.应用实时荧光定量(QPCR)法检测TLR4及其下游信号通路关键因子MyD88基因表达情况,并通过免疫组织化学(IHC)观察肠黏膜TLR4蛋白分布变化.结果:治疗后电针组的体重、Lee's指数、生殖器周围脂肪重量显著低于模型组,肠组织IL-6、IL-10及TNF-α显著低于模型组;QPCR结果相对于正常组的TLR4(1.258±0.127)及MyD88(1.497±0.241)基因表达情况,肥胖组肠黏膜组织中TLR4(1.479±0.256)基因表达明显增加而MyD88基因(1.261±0.192)表达明显下降,电针干预后下调其过度表达;模型组IHC显示TLR4的光密度检测(0.1949±0.0040)显著高于正常组(0.1624±0.0180),电针后能够显著下调其蛋白密度.结论:电针通过调控TLR4/MyD88信号通路,降低TLR4的基因表达及蛋白分布,降低低水平的炎症反应相关过程,达到治疗肥胖的目的.
