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齐墩果酸抑制3T3-L1脂肪细胞脂质堆积
目的：从57个中药化合物筛选具有抑制3T3-L1脂肪细胞脂质堆积的活性成分。方法：3T3-L1细胞培养至融合后用化合物进行干预，并诱导使其分化，采用高内涵影像方法检测细胞中脂滴含量。对发现的活性成分用ToxInsight体外毒性检测方法评价其肝毒性。结果：发现并验证活性成分齐墩果酸（OA）具有显著的脂质形成抑制作用，其半数抑制浓度（IC50）为14.5μmol·L-1，且在60μmol·L-1测试浓度范围内对HepG2细胞无显著损伤作用。结论：OA具有显著的降低脂质形成作用，是潜在的降脂候选化合物。
关键词： 齐墩果酸 3T3-L1脂肪细胞 脂质形成 -
葛根对地塞米松诱导的胰岛素抵抗的影响
目的:探讨葛根提取物对地塞米松造成的胰岛素抵抗的影响及其作用机理.方法:采用地塞米松诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗,检测药物对细胞培养基中葡萄糖浓度的影响;采用肌肉注射地塞米松(1 mg·kg-1,隔日1次)的方法建立胰岛素抵抗动物模型,测定空腹血糖(FBG)、血清胰岛素(FINS),并计算胰岛素抵抗指数(IRI)与胰岛素敏感指数(ISI).结果:葛根提取物能够明显降低胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞培养基中的葡萄糖水平,增强细胞对胰岛素的敏感性;葛根提取物显著降低胰岛素抵抗大鼠空腹血清胰岛素水平及胰岛素抵抗指数,有效改善了大鼠的胰岛素抵抗状态.结论:葛根对地塞米松造成的胰岛素抵抗具有明显的改善作用.
关键词： 地塞米松 葛根 3T3-L1脂肪细胞 胰岛素抵抗 -
小檗碱对3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响
目的:探讨小檗碱和胰岛素对3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响.方法:检测分别经小檗碱及胰岛素处理后3T3-L1脂肪细胞脂联素表达水平改变,以β-actin为内对照,半定量法RT-PCR测定脂联素mRNA表达.结果:经小檗碱(10 μmol·L-1)干预后3T3-L1脂肪细胞脂联素表达显著增加(P<0.05),加入胰岛素后脂联素的表达受到抑制,高浓度胰岛素有显著抑制作用(P<0.05). 结论:体外实验中,小檗碱使3T3-L1脂肪细胞脂联素的表达增加,而胰岛素可抑制小檗碱增加脂联素表达的作用.
关键词： 小檗碱 脂联素 胰岛素 3T3-L1脂肪细胞 -
黄蜀葵花中黄酮类成分对前脂肪细胞增殖、分化及胰岛素抵抗的影响
黄蜀葵花中富含黄酮类成分,具有保护心血管、改善肾功能等作用.该文采用3T3-L1前脂肪细胞诱导分化的成熟脂肪细胞,建立胰岛素抵抗模型,分为正常组,模型组,异槲皮苷(HY)、金丝桃苷(JY)、槲皮素(QT)、槲皮素-3'-O-葡萄糖苷(QG)、棉皮素-8-O-β-葡萄糖醛酸(GG)给药组,BCA法检测细胞培养液中葡萄糖的含量,荧光定量qPCR检测PPARγ,C/EBPα,SREBP-1,脂联素,内酯素,抵抗素基因mRNA的表达水平.结果显示,5种黄酮类化合物5 μmol·L-1浓度时可促进3T3-L1前脂肪细胞的增殖,浓度为100 μmol·L-1时可抑制前脂肪细胞的增殖;与正常组比较,模型组细胞对葡萄糖摄取量降低(P＜0.01);与模型组相比,5种黄酮类化合物100 μmol·L-1给药组细胞葡萄糖消耗量显著上升(P＜0.01),PPARγ,C/EBPα,脂联素表达明显增加(P＜0.01),SREBP-1,抵抗素,内酯素的表达明显降低(P＜0.01),促使脂肪细胞分化.研究表明,HY,JY,QT,QG,GG能调控前脂肪细胞增殖,促进脂肪细胞分化及糖脂代谢相关因子PPARγ,C/EBPα,SREBP-1,脂联素,内酯素,抵抗素的表达,促进前脂肪细胞分化,增加葡萄糖利用,从而改善胰岛素抵抗.
关键词： 锦葵科 黄属葵花 胰岛素抵抗 黄酮类成分 3T3-L1脂肪细胞 -
葛根芩连汤激活PPARγ上调脂联素和GLUT4表达改善脂肪胰岛素抵抗
该实验研究复方葛根芩连汤体内外改善脂肪胰岛素抵抗(IR)的药效及相关分子机制.采用高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,葛根芩连汤给药干预3个月,检测糖尿病大鼠空腹血糖、胰岛素和糖化血清蛋白,计算胰岛素抵抗指数.提取大鼠脂肪组织总RNA,qPCR检测糖尿病大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脂联素(ADPN)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)、乙酰辅酶A羧化酶α基因(ACACA)和乙酰辅酶A羧化酶β(ACACB)基因mRNA表达水平.1μmol·L-1地塞米松诱导建立稳定IR-3T3-L1脂肪细胞模型,CCK-8法检测葛根芩连汤含药血清对细胞活力的影响,采用5％,10％,15％葛根芩连汤含药血清干预24 h检测细胞培养液葡萄糖含量、游离脂肪酸(NE-FA)含量和外泌脂联素含量,测定细胞内甘油三酯(TG)含量.荧光定量qPCR和Western blot分别检测IR-3T3-L1细胞PPARγ,ADPN和GLUT4mRNA和蛋白质表达水平.结果显示葛根芩连汤给药3个月可明显降低糖尿病大鼠的空腹血糖、胰岛素和糖化血清蛋白(P＜0.01),下调胰岛素抵抗指数(P＜0.05),具有较好的降糖效果.葛根芩连汤可显著升高糖尿病大鼠脂肪组织PPARγ,ADPN,GLUT4,GLUT2,ACACA和ACACB基因mRNA表达水平.5％,10％,15％葛根芩连汤含药血清均可显著性上调IR-3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗量(P＜0.0l);降低IR-3T3-L1细胞TG含量(P＜0.01);一定程度下调NEFA含量但并不显著.此外,葛根芩连汤含药血清剂量依赖上调外泌ADPN,15％含药血清上调ADPN非常显著(P＜0.01);各剂量含药血清显著上GLUT4表达(P＜0.01).该研究显示葛根芩连汤激活PPARγ上调ADPN和GLUT4调节糖代谢改善脂肪IR.
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葛根调节脂肪细胞糖脂代谢改善胰岛素抵抗的研究
该实验通过检测葛根对胰岛素抵抗(IR) 3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗,甘油三脂(TG)含量及PPARγ,ADPN,GLUT4,LPL,FABP4,FASn表达量的影响来探讨葛根调节糖脂代谢改善脂肪IR的作用机制.先采用3T3-L1前脂细胞诱导分化的成熟脂肪细胞,地塞米松诱导建立IR模型,将脂肪细胞分为正常组,IR模型组,罗格列酮阳性组,低、中、高剂量葛根含药血清组,以葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(glucose oxidase-peroxidase,GOD-POD)法检测细胞培养液葡萄糖含量和甘油磷酸氧化酶(glycerol phosphate oxidase,GPO-POD)法测定胞内TG含量,荧光定量qPCR检测PPARγ,ADPN,GLUT4,LPL,FABP4(aP2),FASn基因mRNA水平.结果显示1μmol·L-地塞米松作用3T3-L1脂肪细胞96 h,与正常组比较,模型组葡萄糖消耗量降低(P＜0.01),胞内TG含量增加(P＜0.01),由此确认建立IR模型;与IR组比较,葛根含药血清干预IR细胞24 h葡萄糖消耗量上升(P＜0.01),胞内TG含量降低(P＜0.01),中、高剂量葛根含药血清组升高PPARγ,ADPN和GLUT4表达(P＜0.01),PPARγ与后两者基因表达呈现一致性.脂代谢相关基因检测结果显示仅高剂量葛根含药血清显著升高LPL表达(P＜0.05);各剂量葛根含药血清下调FABP4表达(P＜0.01);中、高剂量的葛根含药血清上调FASn基因表达(P＜0.01).该实验表明葛根提高IR-3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的摄取能力,降低细胞内TG积聚,干预多个重要糖脂代谢基因,推测以PPARγ为中心多靶点调节糖脂代谢改善脂肪IR.
关键词： 葛根含药血清 胰岛素抵抗 3T3-L1脂肪细胞 糖脂代谢 -
药根碱多重调控脂肪胰岛素抵抗细胞葡萄糖转运蛋白的降糖效应研究
该实验采用3T3-L1前脂细胞诱导分化的成熟脂肪细胞,1μmol· L-地塞米松诱导建立稳定胰岛素抵抗(IR)模型,在此基础上研究药根碱对脂肪IR细胞降糖效应,重点研究其对葡萄糖转运体系的多重调控.细胞给药分组如下:正常组、IR模型组、10μmol·L-1罗格列酮阳性组、药根碱组(0.5,1,5,10,20 μmol·L-).以葡萄糖氧化酶法检测不同时间点(12,24,30,36,48 h)3T3-L1细胞培养液葡萄糖含量,甘油磷酸氧化酶法测定细胞内甘油三酯含量,CCK-8法检测细胞活力;Western blot法检测胰岛素受体底物2(IRS2)、磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基1(PI3KR1)、磷酸化蛋白激酶B[p-AKT(Ser473)]、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶[p-AMPK(Thr172)]、葡萄糖转运蛋白(GLUT4/1/2)等蛋白的表达水平.结果表明,与正常组相比,IR模型组葡萄糖消耗量显著降低(P＜0.01);与IR组比较,0.5,1,5,10,20μmol·L-1药根碱及罗格列酮组给药36,48 h显著升高IR-3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗量(P＜0.01),药根碱佳作用时间为48 h.1,5,10,20 μmol·L-药根碱作用48 h后,3T3-L1脂肪细胞内甘油三酯含量降低(P＜0.05).各浓度药根碱和罗格列酮组不同程度显著上调IRS2,PI3 KR1,p-AKT,p-AMPK,GLUT4/1/2等蛋白表达水平(P＜0.01).药根碱对IR-3T3-L1脂肪细胞降糖降脂药效推测,激活胰岛素降糖通路IRS2/PI3 KR 1/p-AKT/GLUT4,增加p-AMPK表达激活GLUT4/1/2来减轻脂肪IR.
关键词： 药根碱 葡萄糖转运蛋白 降糖效应 胰岛素抵抗 3T3-L1脂肪细胞 -
小檗碱抑制核因子NF-κB p65表达及转位改善游离脂肪酸诱导的3T3-L1细胞胰岛素抵抗的分子机制
目的 观察小檗碱对游离脂肪酸诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型核因子(nclcar transcription factor kappaB,NF-κB p65)表达及转位的影响,探讨小檗碱改善胰岛素抵抗的分子机制.方法 以0.5 mmol/L软脂酸诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗,予以小檗碱进行干预,同时以阿司匹林作为阳性对照,用葡萄糖氧化酶法检测培液中的葡萄糖消耗量,以2-脱氧-[3H]-D-葡萄糖摄入法观察葡萄糖的转运率,用Western blot检测3T3-L1脂肪细胞总NF-κB p65蛋白及核NF-κB p65蛋白的表达,用激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)对NF-κB p65进行定位显示.结果 0.5 mmol/L软脂酸作用24 h使3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗降低41%,胰岛素刺激的葡萄糖转运抑制67%,NF-κB p65蛋白表达明显增加,CLSM显示NF-κBp65核转位增加;同时加入小檗碱或阿司匹林则可逆转上述效应.但软脂酸、小檗碱、阿司匹林对3T3-L1脂肪细胞总NF-κB p65蛋白的表达无明显影响.结论 小檗碱可以改善游离脂肪酸诱导的胰岛素抵抗,其分子机制可能是小檗碱通过抑制NF-κB的活化转位调节相关基因的表达而起作用.
关键词： 小檗碱 NF-κBp65 胰岛素抵抗 3T3-L1脂肪细胞 游离脂肪酸 -
杨梅素联合围脂滴蛋白基因沉默促进前脂肪细胞系3T3-L1的降脂
目的 探讨杨梅素(Myric)与围脂滴蛋白(PLIN1)基因沉默对3T3-L1脂肪细胞脂解通路的影响.方法 采用经典"鸡尾酒"方法诱导分化3T3-L1前脂肪细胞,筛选出杨梅素佳干预浓度和时间.杨梅素联合sh-PLIN1干扰载体对成熟的脂肪细胞进行干预,实验共分为4组:对照组(control group)、转染组(sh-RNA group)、杨梅素组(Myric group)和联合干预组(Myric+sh-RNA group).油红O染色脂滴,观察脂滴形态;Western blot检测细胞中ERK、p-ERK、MEK、p-MEK和激素敏感性脂肪酶磷酸化蛋白(p-HSL)的表达;ELISA测定细胞中环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)和磷酸化的蛋白激酶C(p-PKC)的含量.结果 与Myric组和sh-RNA组相比,Myric+sh-RNA组脂滴形态变小,数量明显减少.与sh-RNA组和对照组相比,Myric+sh-RNA组和Myric组细胞内p-PKC含量、p-ERK/ERK和p-MEK/MEK的比值以及p-HSL表达显著升高(P<0.05).同时,Myric+sh-RNA组和Myric组细胞内cAMP和PKA含量低于sh-RNA组和对照组(P<0.05).结论 杨梅素的促脂解作用可能是通过激活PKC-MEK/ERK信号通路,增加该通路中p-HSL的表达量来实现的;杨梅素同时可能对cAMP/PKA信号通路中相关因子的活性有一定的抑制作用.
关键词： 杨梅素 PLIN1沉默 3T3-L1脂肪细胞 脂解机制 -
硫化氢抑制小鼠胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞系抵抗素的分泌
目的 观察硫化氢(H2S)是否通过AMPK信号通路影响小鼠胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞系抵抗素的分泌.方法 将细胞分为对照组、胰岛素抵抗3T3-L1组和50μmol/L NaHS组,利用ELISA法检测抵抗素(resistin)的分泌,Western blot检测AMP激活的蛋白激酶(AMPK)及乙酰辅酶A羧化酶(ACC)磷酸化蛋白的表达,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测resistin及AMPK mRNA表达.结果 与对照组比较,给予NaHS后抵抗素分泌明显降低(P＜0.05).正常和胰岛素抵抗细胞中AMPK和ACC磷酸化蛋白表达显著增加(P＜0.05).AMPK通路特异性阻断剂compound C可减弱NaHS对AMPK及ACC蛋白磷酸化的作用,且降低正常和胰岛素抵抗细胞抵抗素的分泌.结论 H2S可能通过激活AMPK通路来抑制小鼠正常和胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞的抵抗素分泌.
关键词： 硫化氢 AMP蛋白激酶 3T3-L1脂肪细胞 抵抗素 小鼠 -
丝氨酸蛋白酶抑制剂对棕榈酸诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响及机制
目的 观察脂肪细胞因子丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)是否通过IRS/PI3K/Akt/Glut信号通路改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗.方法 以棕榈酸(PA)培养3T3-L1脂肪细胞构建胰岛素抵抗模型,分为PA组、PA+ 100 ng/ml Vaspin组、PA+200 ng/ml Vaspin组、PA+400 ng/ml Vaspin组及PA+400 ng/ml Vaspin+Wortmannin(PI3K抑制剂)组.运用2-脱氧-H3-D-葡萄糖掺入法及葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法分别检测细胞葡萄糖摄取和消耗量.以RT-PCR和Westem blot检测胰岛素信号通路中、酪氨酸磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS-1)、Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和Glut-4的mRNA和蛋白表达水平.结果 与PA组相比,随着Vaspin浓度增加,葡萄糖摄取和消耗量逐渐增加(P＜0.05),IRS-1和Akt的mRNA和蛋白磷酸化水平逐渐上升(P＜0.05),p-IRS-1/IRS-l、p-Akt/Akt比值逐渐增加,同时Glut-4的mRNA和蛋白表达也相应上调(P＜0.05).与400 ng/ml Vaspin干预组相比,PA+400 ng/ml Vaspin+Wortmannin组葡萄糖摄取和消耗量降低,IRS-1和Akt的mRNA和蛋白磷酸化水平下降(P＜0.05),p-IRS-1/IRS-1、p-Akt/Akt比值下降,且Glut-4的mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05).结论 Vaspin通过激活IRS/PI3K/Akt/Glut胰岛素信号通路,改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗.
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血管紧张素Ⅱ对3T3一L1脂肪细胞Apelin表达的影响
背景 Apelin是新近发现的脂肪因子,具有舒张血管、降低血压的作用,可能参与高血压的发生.目的观察血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)对成熟的3T3一L1脂肪细胞Apelin和受体APJ表达的影响,探讨脂肪因子Apelin的调控因素.方法 用AngⅡ不同浓度和不同作用时间孵育诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞,酶联免疫吸附试验检测培养基中Apelin分泌蛋白的浓度,免疫印迹(Western blot)检测细胞内受体APJ蛋白表达,运用实时荧光定量聚合酶链反应技术(RT PCR)测定细胞Apelin mRNA和APJ mRNA表达量,并用血管紧张素受体拮抗剂氯沙坦干预,观察AngⅡ是否通过血管紧张素Ⅱ1 型受体(AT1R)发挥其对Apelin的作用.结果 Apelin mRNA和APJmRNA的表达量在3T3-L1前体脂肪细胞分化过程中升高(与分化前比较,第5天至第10天均P<0.01).Ang Ⅱ不同浓度和不同作用时间均下调Apelin mRNA和APJ mRNA以及Apelin分泌蛋白和APJ蛋白的表达水平(每组P<0.05或P<0.01),氯沙坦能抵消AngⅡ的下调作用(每组P<0.01).氯沙坦单独孵育能提高Apelin-APJ的表达(Apelin mRNA和APJ mRNA,P<0.05).结论 AngⅡ通过AT1受体抑制3T3-L1脂肪细胞Apelin-APJ的表达.
关键词： 3T3-L1脂肪细胞 血管紧张素Ⅱ Apelin 肥胖相关高血压 -
二甲双胍对胰岛素抵抗状态的小鼠胚胎成纤维细胞中腺苷酸活化蛋白激酶及葡萄糖转运子4表达的影响
目的 观察二甲双胍对IR状态的小鼠胚胎成纤维(3T3-L1)细胞中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及葡萄糖转运子4(GluT4) mRNA表达的影响. 方法 诱导分化3T3-L1前脂肪细胞为成熟脂肪细胞并用油红O染色证明.用地塞米松诱导建立3T3-L1细胞IR模型,以葡萄糖氧化酶法测定不同时段细胞培养基中剩余葡萄糖浓度,以确定IR模型的建立.给予二甲双胍进行药物干预后,测定细胞培养基中剩余葡萄糖浓度并运用实时荧光定量PCR技术检测细胞AMPK和GluT4的mRNA基因水平.结果 药物干预组给予不同浓度二甲双胍后,细胞培养基中剩余葡萄糖浓度均较模型组降低(P＜0.01).药物干预组AMPK、GluT4 mRNA水平较模型组均增加(P＜0.01). 结论 二甲双胍上调处于IR状态的3T3-L1细胞中AMPK和GluT4 mRNA水平,增加细胞对葡萄糖利用.
关键词： 腺苷酸活化蛋白激酶 葡萄糖转运子4 3T3-L1脂肪细胞 二甲双胍 -
葡萄糖和胰岛素对3T3-L1脂肪细胞内脏脂肪素mRNA表达的影响
目的 研究不同浓度葡萄糖和胰岛素对3T3-L1脂肪细胞中内脏脂肪素(Visfatin)mRNA表达的影响.方法 通过real-time RT-PCR方法检测不同浓度葡萄糖和胰岛素培养下3T3-L1脂肪细胞Visfatin mRNA的表达.结果 葡萄糖增加了3T3-L1脂肪细胞Visfatin mRNA的表达;胰岛素降低其表达.结论 葡萄糖和胰岛素对3T3-L1脂肪细胞中Visfatin mRNA的表达有调控作用.
关键词： 内脏脂肪素 葡萄糖 胰岛素 3T3-L1脂肪细胞 -
高尿酸诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗及其机制的研究
目的 探究高尿酸血症(HUA)对3T3-L1脂肪细胞IR的影响,并且探讨其分子机制. 方法 3T3-L1脂肪细胞先经不同浓度UA单独预处理或与N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)共同预处理后再接受胰岛素刺激,采用CCK-8法检测3T3-L1脂肪细胞活力,采用葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖消耗量,采用Western blot检测IRS-1和Akt蛋白磷酸化水平及GluT4蛋白水平. 结果 HUA可抑制胰岛素诱导的葡萄糖消耗、Akt磷酸化(Thr308)和IRS-1去磷酸化(Ser307),以及GluT4蛋白表达(P<0.05),这些作用可被NAC可阻断(P<0.05). 结论 HUA可抑制胰岛素激活的IRS-1/Akt信号通路和GluT4蛋白表达,导致3T3-L1脂肪细胞发生IR.
关键词： 高尿酸 胰岛素抵抗 3T3-L1脂肪细胞 胰岛素受体底物1 葡萄糖转运子4 -
脂肪因子补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3对胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞胰岛素信号通路影响的研究
目的 观察脂肪因子补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP3)对IR的3T3-L1脂肪细胞胰岛素信号通路的影响. 方法 以软脂酸培养构建IR的3T3-L1脂肪细胞模型,分为对照组、CTRP3(10、50、250 ng/ml)干预组及CTRP3(250 ng/ml)+渥曼青霉素(Wortmannin)[磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂]干预组.以葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖消耗量,以Western blot检测PI3K及蛋白激酶B[PKB(ser437)]蛋白相对表达量. 结果 与对照组相比,CTRP3干预组(10、50、250 ng/ml)葡萄糖消耗量分别增加了22.1％、42.9％及76.6％(P均＜0.01),PI3K蛋白相对表达量分别增加了62.5％、100.0％及137.5％(P均＜0.01),PKB(ser437)蛋白相对表达量分别增加了46.4％、160.7％及192.9％(P均＜0.01);与CTRP3(250 ng/ml)干预组相比,CTRP3 (250 ng/ml) +Wortmannin干预组葡萄糖消耗量下降53.2％ (P＜0.01),PI3K及PKB(ser437)蛋白相对表达量分别下降了43.4％及56.1％(P均＜0.01). 结论 脂肪因子CTRP3可能通过改善胰岛素信号转导增加IR的3T3-L1脂肪细胞IS.
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持续激活的Akt减少了 3T3-L1脂肪细胞脂联素蛋白的表达
目的研究蛋白激酶B(Akt/PKB)的持续激活与灭活对3T3-L1脂肪细胞内脂联素蛋白表达的影响. 方法通过腺病毒表达系统将持续激活的Akt(myrAkt)和无酶活性的Akt(Akt-AA)导入3T3-L1脂肪细胞内,应用免疫印迹法检测3T3-L1脂肪细胞脂联素蛋白的表达. 结果表达myrAkt的3T3-L1脂肪细胞中脂联素明显减少,表达Akt-AA的3T3-L1脂肪细胞中脂联素无明显变化. 结论 Akt的激活抑制了3T3-L1脂肪细胞中脂联素蛋白的表达,且Akt的激活是影响脂联素的充分条件,而不是必要条件.
关键词： 脂联素 蛋白激酶B 3T3-L1脂肪细胞 -
糖基化终产物对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性及SAA3基因表达的影响
目的 探讨糖基化终产物(AGE)对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性及SAA3基因表达的影响.方法 以2-DG摄入法观察葡萄糖的摄取率,用RT-PCR检测脂肪因子SAA3 mRNA的表达. 结果 AGE显著减少3T3-L1脂肪细胞在胰岛素刺激下的葡萄糖摄取,呈剂量和时间依赖效应;AGE显著增加脂肪细胞SAA3 mRNA的表达,呈剂量依赖方式. 结论 AGE能降低3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的摄取,增加3T3-L1脂肪细胞对淀粉样蛋白的表达.
关键词： 糖基化终产物 3T3-L1脂肪细胞 葡萄糖摄取 血清淀粉样蛋白A -
肿瘤坏死因子α对人脂联素3T3-L1细胞PPARγ2 mRNA表达的影响
目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对稳定表达人脂联素3T3-L1细胞过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ2mRNA表达的影响,为进一步研究脂联素功能提供了实验基础.方法 重组脂联素真核表达质粒(pcDNA3.1+-hADPN)脂质体法稳定转染3T3-L1细胞.用TNF-α(100ng/ml)处理未转染、转染空载载体、转染pcDNA3.1+-hADPN的3T3-L1细胞,RT-PCR检测PPARγ2 mRNA的表达量.结果 (1)稳定转染了pcDNA3.1+-hADPN的未分化和已分化3T3-L1细胞中,PPARγ2表达量较未转染组明显增加(P<0.01).(2)TNF-α可明显抑制PPARγ2 mRNA的表达(P<0.05).(3)稳定转染pcDNA3.1+-hADPN可改善TNF-α抑制作用(P<0.05).结论 稳定转染pcDNA3.1+-hADPN可明显增加未分化和已分化的3T3-L1细胞PPARγ2 mRNA表达.TNF-α抑制PPAR-γ2mRNA表达,而转染pcDNA3.1+-hADPN可改善TNF-α抑制作用.
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Chemerin过表达致3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗减少
目的 应用重组慢病毒构建3T3-L1脂肪细胞chemerin过表达模型并进一步探讨其对糖代谢的影响及可能机制.方法 构建鼠chemerin过表达重组慢病毒,并设对照慢病毒,感染3T3-L1细胞,实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测转染后chemerin表达水平;应用胰岛素、3-异丁基1-甲基黄嘌呤、地塞米松诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,油红O染色鉴定;诱导分化第8天加入慢病毒重组体,继续培养5d,葡萄糖氧化酶法检测各组葡萄糖消耗;RT-PCR法检测各组胰岛素受体底物1(IRS1)、胰岛素受体底物2(IRS2)、蛋白激酶B1 (Akt1)、叉头状转录因子O1 (FoxO1)基因表达水平;Western-blotting检测chemerin、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(pAkt)、FoxO1、磷酸化叉头状转录因子O1 (pFoxO1)蛋白水平.两组数据比较应用t检验.结果 Chemerin过表达慢病毒感染3T3-L1细胞72 h后细胞中可见红色荧光,RT-PCR结果显示:过表达组与空载对照组相比chemerin基因表达明显增加(分别为3.04±0.19比1.01±0.11,t=15.65,P＜0.05);chemerin过表达组葡萄糖消耗减少[分别为(3.30± 1.44)比(6.07±1.15) mmol/L,t=-0.35,P＜0.05];RT-PCR结果显示:IRS1、IRS2基因水平无明显变化(均P＞0.05),Akt1基因表达下降(分别为0.76±0.08比1.07±0.15,t=-3.11,P＜0.05),FoxO1基因表达上调(分别为1.53±0.30与1.03±0.21,t=2.34,P＜0.05).Western-blotting结果显示:Chemerin过表达后chemerin蛋白水平增加(相对表达量分别为1.08±0.06比0.72±0.03,t=-10.12;P＜0.05);Akt、pAkt蛋白水平均降低(分别为0.74±0.21比1.23±0.20,0.58±0.17比0.92±0.07;t=2.81、3.17,均P＜0.05),FoxO1蛋白水平升高(分别为1.04±0.09比0.76±0.14,t=-2.91,P＜0.05)、pFoxO1蛋白水平降低(分别为0.61±0.13比0.89±0.10,t=2.93,P＜0.05).结论 Chemerin可能通过下调Akt1 mRNA使3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗减少.
关键词： 慢病毒 Chemerin 过表达 3T3-L1脂肪细胞 葡萄糖消耗
