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益气活血复方对内皮细胞TLR4及其下游MyD88、TRAF-6、TRAM、TRIF mRNA表达的影响
目的 研究益气活血复方对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4 ) 及其下游信号转导通路元件髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)、Toll样受体相关分子(TRAM)、 Toll样受体相关的干扰素活化子(TRIF)表达的影响,探讨益气活血复方含药血清防治动脉粥样硬化(AS)的机制.方法 选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高浓度组、中药中浓度组、中药低浓度组,每组5只.以上各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7 d.末次灌胃给药2 h后,心脏采血,离心后分离血清.体外培养人脐静脉内皮细胞,用LPS刺激后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预24 h,收集细胞,用Real time PCR方法测定TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF mRNA的表达.结果 用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4 、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF mRNA的高表达(与空白对照组比较,P<0.01),用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4 、MyD88及TRAF-6 mRNA的高表达(与模型组比较P<0.05或P<0.01),对TRAM及TRIF作用不明显.结论 益气活血复方可阻断TLR4高表达,同时阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,而对MyD88非依赖性途径作用不明显,因此益气活血复方主要是通过阻断MyD88依赖性途径来发挥其抗动脉粥样硬化的作用.
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白藜芦醇抑制哮喘幼鼠肺组织TLR4与TRIF的表达
目的 探讨白藜芦醇对哮喘幼鼠肺组织toll样受体4(TLR4)与β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)表达的影响.方法 45只BALB/e幼鼠随机分为对照组、哮喘组和白藜芦醇组.采用卵清蛋白(OVA)刺激,建立幼鼠哮喘模型.HE染色观察各组幼鼠肺组织病理学改变,测定各组幼鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及嗜酸粒细胞(EOS)数,Western blot方法检测各组幼鼠肺组织TLR4与TRIF的蛋白表达变化,real time PCR方法检测各组幼鼠肺组织TLR4 mRNA与TRIF mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,哮喘组幼鼠肺组织可见明显的炎性细胞浸润,气道管壁明显增厚,BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞计数显著升高,P＜0.01;与哮喘组相比,白藜芦醇组幼鼠肺内炎性细胞浸润明显减轻,BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞计数显著降低,P＜0.01.与对照组相比,哮喘组幼鼠肺组织TLR4与TRIF的蛋白与mRNA表达水平显著升高,P＜0.01;与哮喘组相比,白藜芦醇组幼鼠肺组织TLR4与TRIF的蛋白与mRNA表达水平显著降低,P＜0.01.结论 白藜芦醇能够抑制哮喘幼鼠肺组织TLR4与TRIF的表达.
关键词： 哮喘 白藜芦醇 Toll-like receptor 4 TRIF 幼鼠 -
新生儿缺氧缺血性脑病患儿外周血单核细胞CD14、TLR4及TRIF的表达水平及意义
目的 探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿外周血单核细胞CD14、TLR4和TRIF表达水平与HIE严重程度和预后的相关性.方法 选取2017年1-10月在中国人民解放军第101医院住院的HIE息儿36例为HIE组,另选取同期在该院体检的健康新生儿23例为对照组,采用实时荧光定量PCR方法检测两组新生儿外周血单核细胞CD14、TLR4和TRIF mRNA的表达水平,分析CD14、TLR4和TRIF表达差异及与HIE严重程度和预后的相关性.结果 HIE患儿外周血单核细胞CD14、TLR4和TRIF水平高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).CD14、TLR4和TRIF与HIE严重程度呈正相关关系(P＜0.05),与预后效果呈负相关关系(P＜0.05).结论 CD14,TLR4和TRIF表达水平与HIE的发生发展有关.
关键词： 新生儿缺氧缺血性脑病 外周血单核细胞 CD14 TLR4 TRIF -
GEFH1在LPS诱导树突细胞IL-6和IL-12a表达中的作用
为探讨GEFH1与树突细胞(dendritic cell,DC) TLR4两条下游信号途径的关系,从野生型和TRIF基因、IFNα/β受体基因敲除小鼠中分离和培养DC,LPS或IL-6刺激后收集细胞制备总cDNA,通过实时定量PCR检测GEFH1的mR-NA表达.再用GEFH1的siRNA转染DC, LPS刺激后检测IL 6和IL-12a的mRNA表达.结果,在LPS刺激后,GEFH1的mRNA表达在野生型小鼠的DC中显著增加,在TRIF基因、IFN-a/β受体基因敲除小鼠的DC中则未被上调.此外,GEFH1 siRNA处理后,IL-6和IL-12a的mRNA表达均上升显著(P＞0.05),而在IL-6刺激的野生型小鼠的DC中,GEFH1的mRNA没有明显改变.以上结果提示在转录水平,TRIF-IFNβ信号通路、而非IL-6可诱导GEFH1基因表达.GEFH1可能对MyD88途径中细胞因子IL-6和IL-12a的表达有负调节作用.
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肝癌中TLR3信号分子与自噬相关基因表达的相关性及临床意义
目的:研究肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)及信号分子含TIR结构域的转接蛋白(TIR-domain-containing adaptor protein including IFN-β,TRIF)表达与细胞自噬相关蛋白Beclin1和LC3表达的相关性及临床意义,并探讨相关机制.方法:收集与随访101例HCC病例,构建肝组织芯片.HE染色判断HCC的组织分化,免疫组化染色检测HCC组织中Ki-67、TLR3、TRIF、LC3和Beclin l的表达,应用TUNEL方法检测肿瘤细胞凋亡信号.统计学分析其临床病理因素和预后.结果:本组HCC中TLR3和TRIF表达呈正相关(ρ=0.640,P＜0.001),其高表达分别与肿瘤HbsAg感染、硬化背景、细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)及患者5年总生存率呈正相关,与肿瘤细胞增殖、血管浸润、Edmondson分级和TNM分期呈负相关.Beclin1和LC3表达呈显著正相关(ρ=0.587,P＜0.001),两者高表达分别与肿瘤脉管浸润、Edmondson分级、TNM分期、肿瘤细胞增殖呈正相关,与AI和预后呈负相关.并且TLR3、TRIF分别与LC3和Beclin1的表达呈负相关(P均＜0.001).结论:HCC中TLR3及其信号分子TRIF表达,细胞自噬相关基因Beclin1和LC3的表达分别通过调控细胞增殖、凋亡和自噬来影响肿瘤的生物学行为和预后.HCC组织中Beclin1介导的自噬途径与TLR3信号凋亡通路存在交叉,两条通路异常可能是HCC发生、进展的机制之一.
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黄芩苷对流感病毒性肺炎小鼠肺组织TLR3/TRIF信号通路的作用
目的 探讨黄芩苷是否通过TLR3/TRIF信号传导途径对甲型流感病毒诱导的肺损伤的调节作用.方法 用流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)复制流感病毒性肺炎小鼠模型,通过不同剂量黄芩苷溶液灌胃治疗后,采用实时荧光定量PCR技术测定TLR7/TRIF mRNA表达,采用Western blot方法测定肺组织磷酸化NF-κB-65蛋白表达,应用ELISA法检测肺匀浆炎性细胞因子TNF-α及IFN-β的含量.结果 甲型流感病毒感染机体后,TLR3及TRIF mRNA表达水平显著升高;磷酸化NF-κB-65蛋白表达水平也显著升高;肺匀浆TNF-α、IFN-β分泌显著升高.经黄芩苷治疗后,黄芩苷750 mg/kg、375mg/kg剂量均能够有效下调TLR3及TRIF mRNA表达(P＜0.01);降低磷酸化NF-κB-65蛋白表达(P＜0.01);降低TNF-α的分泌(P＜0.01)、增强IFN-β的合成(P＜0.01).结论 黄芩苷可通过调节TLR3/TRIF介导的磷酸化NF-κB的活性而减轻肺组织炎性病理损伤及增强机体的抗病毒能力.
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MyD88及Trif对心脏移植小鼠体内供者特异性抗体及记忆性T淋巴细胞的影响
目的 探讨髓样分化因子88( MyD88)及Trif对皮肤移植预致敏的心脏移植小鼠体内供者特异性抗体(DSA)及记忆性T淋巴细胞的影响.方法 实验分为空白组(C57BL/6野生型小鼠,不行移植手术)、对照组(C3H小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者)和实验组(C3H小鼠为供者,MyD88及Trif基因敲除的C57BL/6小鼠为受者).将C3H小鼠皮片移植给受鼠,进行预致敏,2周后检测受鼠血清中 DSA的水平,并且将C3H小鼠心脏移植给相应受鼠,观察移植心脏存活时间.在观察终点时,再次检测受鼠血清中DSA水平,同时检测受鼠脾脏中记忆性T淋巴细胞的比例.结果 皮肤移植2周后,实验组受鼠DSA IgG2水平低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),DSA IgG1和IgG3的水平亦低于对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05).心脏移植3d后,与对照组相比较,实验组受鼠DSA IgG2水平明显降低(P＜0.01),受鼠脾脏中CD4+和CD8+记忆性T淋巴细胞的比例低于对照组(P＜0.01,P＜0.05).两组受鼠心脏移植后平均存活时间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 敲除小鼠MyD88及Trif基因虽然不能延长预致敏小鼠移植心脏的存活时间,但是能显著降低受鼠血清中DSA的水平及脾脏中记忆性T淋巴细胞的比例.
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PolyI：C对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究
目的：观察特异性激活Toll样受体3（Toll‐like receptor 3，TLR3）‐Toll／IL‐1受体结构域接头分子（Toll／IL‐1 receptor domain containing adaptor inducing IFN‐β，TRIF）信号通路药物聚肌胞苷酸（polyinosinic polycytidylic acid ，Poly I：C）对局灶性脑缺血损伤小鼠是否有保护作用，并探讨保护作用是否与抑制炎性作用有关。方法对小鼠进行一次性肌肉注射0.3 mg／kg Poly I：C ，24 h后进行左侧大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion ，MCAO），栓塞2 h后进行再灌注6、12、22 h ，诱导小鼠的脑缺血再灌注损伤模型，T TC染色方法测定脑缺血体积；Western blot方法检测缺血侧脑组织TRIF蛋白表达；ELISA方法检测小鼠缺血侧半脑脑组织炎性因子干扰素‐β（interferon‐β，IFN‐β）、白细胞介素‐10（interleukin‐10，IL‐10）、白细胞介素‐6（interleukin‐6，IL‐6）、肿瘤坏死因子‐α（tumor necrosis factor‐α，TNF‐α）的含量。结果缺血2 h再灌注6、12、22 h的小鼠出现明显的神经缺陷症状及脑组织梗死，在缺血再灌注各个时间点，小鼠缺血侧脑组织中IL‐6、TNF‐α表达均升高。0.3 mg／kg Poly I：C能减少梗死面积，改善神经缺陷，提高小鼠缺血侧脑组织 TRIF蛋白的表达，能在不同时间点升高IFN‐β水平并降低缺血再灌注缺血侧脑组织IL‐6和 TNF‐α的含量。结论0.3 mg／kg Poly I：C对脑缺血损伤小鼠有保护作用，保护作用机制与抑制小鼠脑缺血再灌注损伤过程中的炎症反应有关。
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TLR4对脑缺血再灌注小鼠海马TRIF表达的影响
目的 探讨Toll样受体4(TLR4)对脑缺血再灌注小鼠海马TRIF表达的影响.方法 采用TLR4抗体封闭阻断TLR4,Western blot和RT-PCR 检测海马TLR4蛋白、IFN-β蛋白和TLR4 mRNA表达量,免疫组化方法检测TRIF袁达变化.小鼠随机分为3组:假手术组(S组)、缺血再灌注组(I组)、TLR4阻断组(T组),各组又分1、2、3及4d 4个时间点组.结果 缺血再灌注组 TLR4 蛋白、TLR4 mRNA、IFN-β和TRIF表达水平明显高于假手术组表达水平(P<0.05),而TLR4阻断组TLR4蛋白、TLR4 mRNA、IFN-β和TRIF表达水平明显少于缺血再灌注组(P<0.05).结论 缺血再灌注可激活TLR4,并引起TRIF和IFN-β表达量增加,而采用TLR4抗体封闭阻断TLR4后,TRIF和IFN-β表达量减少.本研究提示,TLR4通过上调TRIF表达参与脑缺血再灌注的反应机制.
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大肠杆菌麦芽糖结合蛋白激活TLR2介导的MyD88依赖途径和TLR4介导的TRIF/TRAF3依赖途径诱导Th1活化
目的 探讨TLR2/TLR4介导的信号通路在大肠杆菌麦芽糖结合蛋白诱导Th1活化中的调控作用.方法 免疫磁珠分选方法获取纯的CD4+T细胞,经CD3/CD28抗体活化后的CD4+T细胞分别用MBP、MBP+anti-TLR2、MBP+anti-TLR4刺激.ELISA检测培养上清中IFN-γ和IL-4的分泌;RT-PCR检测CD4+T细胞IFN-γ、MyD88、TRIF、TRAF3和TRAF6的mRNA表达;Western blotting方法检测CD4+T细胞MyD88、TRIF、TRAF3和TRAF6的蛋白表达.结果 MBP组IFN-γ水平升高、IFN-γ、MyD88、TRIF、TRAF3的rnRNA上调、TRAF6的mRNA下调;MBP+anti-TLR2组IFN-γ水平降低、TRAF6的mRNA上调、MyD88的mRNA下调、TRIF、TRAF3的mRNA无影响;MBP+anti-TLR4组IFN-γ水平升高、TRAF6的mRNA上调、MyD88、TRIF、TRAF3的mRNA下调,Western blotting实验也出现了相似的结果.结论 TLR2介导的MyD88依赖途径和TLR4介导的TRIF/TRAF3依赖途径在MBP诱导的Th1活化过程中发挥了重要的调控作用.
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TRIF在Buerger's病患者腰交感神经节中的表达及其意义
目的 观察β干扰素Toll样受体结构域衔接蛋白(Toll/IL-1 receptor domain containing adaptor inducing IFN-β,TRIF)在Buerger's病患者腰交感神经节中的表达,探讨TRIF在Buerger's病发病中的作用机制.方法 收集2012年8月至2013年5月我院行腰交感神经节切除术的Buerger's病患者手术标本30例为Buerger's病组,同期肝移植供体者腰交感神经节6例为对照组.应用免疫组化、反转录PCR(RT-PCR)技术及蛋白质印迹(Western blot)技术测定2组腰交感神经节中TRIF的表达水平并且比较组间差异.进一步采用激光共聚焦技术,检测TRIF在Buerger's病患者神经元中的表达特点.结果 Buerger's病患者腰交感神经节中TRIF的mRNA和蛋白表达水平明显高于对照组(P＜0.01).并且,在Buerger's病患者腰交感神经节组织中,TRIF主要分布于神经细胞之中.结论 TRIF与Buerger's病的发生和发展关系密切;Toll样受体信号通路激活可能是Buerger's病发病的重要因素.
关键词： Buerger's病 TRIF 腰交感神经节 -
Toll样受体TRIF信号因子在乳腺癌中的表达与临床关系
目的 观察Toll样受体信号TRIF(TIR结构域接头分子,TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-β,TRIF)在不同分期乳腺癌中及癌旁组织中的表达,为进一步深入研究先天免疫下游信号因子与乳腺癌发病机制中的关系提出初步依据.方法 收集35例乳腺癌患者的一般情况和临床病理特征等资料,应用RT-PCR、Western blot方法检测TRIF在乳腺癌及癌旁组织中的基因和蛋白表达水平.同时应用免疫组化检测TRIF在乳腺癌及癌旁组织结构中的分布,以观察在该组织中的表达特点.结果 RT-PCR和Western blot结果显示,与癌旁组织中相比,乳腺癌组织中TRIF基因和蛋白表达水平具有显著差异(P＜001)；Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ期相比,TRIF的表达水平差异也具有显著性,且分期越晚表达越强(P＜0.01)；癌细胞及炎性细胞、浆细胞、纤维母细胞等在细胞核和细胞浆中均有强烈高表达和分布,不同细胞类型差异性表达TRIF,且与肿瘤的TNM分期、肿瘤大小、淋巴侵袭转移密切相关.结论 TRIF的表达与乳腺肿瘤的增殖和分化密切相关.
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β2GPI/抗 β2GPI抗体复合物激活THP-1细胞内TRIF途径
目的:观察β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能否激活单核细胞株THP-1的TRIF途径,以探讨TRIF依赖途径在抗磷脂综合征(APS)发病机制中的作用.方法:采用一定剂量β2GPI/抗β2GPI抗体复合物刺激THP-1细胞一定时间,收集细胞总RNA及总蛋白,荧光定量PCR (RT-PCR)检测细胞TRIF mRNA水平,Western blot检测细胞TRIF蛋白表达情况；进一步观察TLR4途径抑制剂-TAK-242是否干预β2GPI/抗β2 GPI抗体复合物对TRIF的诱导表达以及相关细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α的表达.结果:β2GPI/抗β2 GPI抗体复合物( 100 mg/L)能够诱导THP-1细胞表达TRIF(mRNA 及蛋白),并显示时间效应,分别于刺激1h和2h时TRIF mRNA及蛋白表达至高峰.TAK-242(5μmol/L)能够明显抑制β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对THP-1细胞TRIF的诱导表达,同时抑制IL-6、IL-8、TNF-α等炎症因子的表达.结论:TRIF依赖的TLR4途径参与了β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对THP-1细胞的激活,提示其在抗磷脂综合征的病理机制中发挥一定作用.
关键词： 抗磷脂综合征 β2 GPI/抗β2GPI抗体 TLR4 TRIF 炎症因子
