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脂肪MSCs分泌的DKK-1抑制慢性粒细胞白血病细胞K562的增殖
目的 研究间充质于细胞(MSCs)抑制慢性粒细胞白血病细胞K562增殖的分子机制,为临床治疗提供理论依据.方法 利用脂肪来源的MSCs与慢性粒细胞白血病细胞K562共培养,通过中和抗体实验、3H-TdR掺入法、细胞周期流式分析、RNA干扰和定量PCR等技术,分析K562细胞增殖能力、WNT信号通路的基因表达变化.结果 与MSCs共培养后,K562的增殖减少了77%(P<0.05),处于G0/G1期的细胞比例为62.1%±5.8%,明显高于K562单独培养时的45.2%±6.9%(P<0.05).当用Transwell隔开MSCs和K562细胞后,上述抑制作用仍然存在.利用中和抗体实验发现MSCs抑制K562增殖是通过分泌DKK-1.将MSCs表达的DKK-1用RNA干扰敲低后,再与K562共培养,可重新增加K562细胞WNT信号通路中β-CATENIN、C-MYC和CYCLIN D2的表达,减弱了对K562增殖的抑制作用.结论 脂肪来源的MSCs可以通过分泌可溶性分子DKK-1抑制白血病细胞K562的WNT信号通路,将其细胞周期阻滞在G0/G1期,从而抑制其增殖.
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HepG2肝癌细胞中干扰素-α对抑癌基因Dickkopf-1上调表达的研究
目的 探讨重组干扰素-α (IFN-α)对肿瘤抑制作用的靶分子及可能作用机制.方法 选用HepG2肝癌细胞系,分别应用1000 U/ml、2000 U/ml浓度的IFN -α作用于HepG2细胞,在药物作用6h、16 h后应用RT-PCR；Dickkopf-1(DKK-1)方法分别检测各实验组DKK-1 mRNA表达水平,Western blot杂交法检测DKK-1蛋白表达水平.结果 定量RT-PCR结果显示,IFN-α处理能增强DKK-1mRNA表达.2000 U/mL IFN-α作用HepG2细胞16h组其DKK-1 mRNA表达(0.00039±0.000057)高于处理6h组(0.000195±0.000021,t=6.994,P=0.0022)以及1000 U/mL作用16 h组(0.000307±0.000012,t=2.876,P=0.0452); Western blot显示重组IFN-α作用于HepG2细胞后,均能够导致细胞内DKK-1蛋白表达增强(P值均＜0.05).结论 IFN -α能够上调DKK-1表达,DKK-1可能是IFN -α作用的下游调节靶基因,这可能是IFN-α发挥抗肿瘤作用机制之一.
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Dickkopf(DKK-1)在骨肉瘤组织中的表达及临床意义
目的 研究DKK-1在骨肉瘤中的表达情况,探讨其与临床病理及预后的关系.方法 S-P免疫组织化学染色法对74例骨肉瘤DKK-1蛋白的表达进行检测,并对其与骨肉瘤临床病理及预后的关系进行统计学分析.结果 74例骨肉瘤标本中58例为阳性,总阳性率为78.4%(58/74).DKK-1的表达在不同年龄、性别、骨肉瘤亚型中无显著性差异.Enneking分期I-IIA与IIB-Ill之间,肿瘤DKK-1表达率有显著性差异(p<0.05).结论 DKK-1在骨肉瘤组织中有较高比例的表达,并与肿瘤的外科分期密切相关.
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Wnt信号通路抑制因子DKK-1在骨质疏松发生中的研究进展
Wnt信号通路对成骨细胞的发育及分化起着重要作用.近年来的研究发现,作为Wnt信号通路的抑制因子DKK-1能抑制骨形成,导致骨质疏松,而通过拮抗DKK-1的作用町使骨量增加.DKK-1可能成为治疗骨质疏松的新靶点.笔者对DKK-1在成骨细胞中的信号传导途径及其在骨质疏松中的作用做了综述.
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激素性股骨头坏死与髋关节骨关节炎患者离体标本相关因子表达水平的比较研究
目的 探讨激素性股骨头坏死与髋关节骨关节炎患者股骨头标本内PPARγ、Runx2、DKK-1表达水平的差异性.方法 选取于四川大学华西医院骨科因股骨头坏死和髋关节骨关节炎行全髋关节置换术患者共40例,其中激素性股骨头坏死(A组)和髋关节骨关节炎(B组)患者各20例.经患者及家属同意后收集该40例患者所置换的股骨头标本进行HE染色及免疫组化检测PPARγ、Runx2、DKK-1三因子表达水平.结果 A组患者股骨头标本HE染色显示空骨陷窝率均大于50％,符合股骨头坏死病理诊断标准；免疫组化结果显示PPARγ、DKK-1因子大量阳性表达,其中PPARγ阳性表达面积百分比约13％,DKK-1阳性表达面积百分比约53％,而runx2极少阳性表达,阳性表达面积百分比约2％.而骨关节炎组患者股骨头标本HE染色显示较少空骨陷窝.免疫组化结果显示PPARγ、DKK-1少量阳性表达,其中PPARy阳性表达面积百分比约2％,DKK-1阳性表达面积百分比约4％,而Runx2大量阳性表达,阳性表达面积百分比11％左右.结论 PPARγ和DKK-1两因子在A组表达水平显著高于B组,而Runx2则在骨关节炎组表达水平显著高于A组,均具有显著统计学意义(P＜0.05).PPARγ、DKK-1、Runx2三因子属于调控骨髓基质细胞向成骨细胞和脂肪细胞分化以及骨吸收的重要调控因子.因此,激素性ONFH发生可能是通过影响骨髓基质细胞代谢失衡导致ONFH的发生,主要为通过增加PPARγ表达量减少Runx2表达量使骨髓基质细胞向脂肪细胞分化增加而向成骨细胞分化减少,同时破骨细胞活性增强,骨坏死修复作用减弱,终导致ONFH发生.
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DKK-1与骨髓瘤骨病发生关系的研究进展
目的:研究DKK-1(Dickkopf-1)在多发性骨髓瘤细胞中的表达水平,以及与骨髓瘤骨病发生的关系.方法:以DKK-1和骨髓瘤为检索词,检索1989-2009年中国知识资源总库CNKI系列数据库和PubMed数据库.纳入标准:1)DKK-1基因结构及生物学特征的研究;2)DKK-1与骨髓瘤发生关系研究.粗选有56篇关于DKK-1结构特点及其与骨髓瘤关系的研究文章,根据纳入标准,精选27篇文献.结果:DKK-1是Wnt/β-catenin信号通路的可溶性的抑制剂,目前已被认为在多发性骨髓瘤及骨髓瘤骨病的发生中起到一定作用.结论:中和DKK-1和(或)促进Wnt/B-catenin信号通路能够治疗骨病及抑制骨髓瘤细胞生长,提示DKK-1可能成为骨髓瘤骨病治疗的新靶点.
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Dickkopf-1在脑出血大鼠神经元凋亡中的作用及机制研究
目的：探讨Dickkopf‐1（DKK‐1）在脑出血大鼠神经元凋亡中的作用及机制。方法采用随机数字法将40只成年雄性SD大鼠分成对照组（n＝13）、假手术组（n＝13）及脑出血组（n＝14）。通过颅内注射自体外周血制作脑出血模型。采用平衡木行走实验和肌力测验进行脑出血模型评估，并利用Real‐time PCR和Western blot检测大鼠脑组织中Bcl‐2、Bax、p‐Akt、Akt及DKK‐1蛋白和mRNA表达水平。分离培养原代大鼠皮质神经元，分为对照组、空载体组、DKK‐1过表达组、BTBD10（Akt磷酸化激活剂）过表达组，检测细胞中DKK‐1表达水平和Akt磷酸化水平，利用流式细胞术检测各组细胞凋亡。结果脑出血组大鼠平衡木行走得分高于对照组和假手术组（P＜0.05），而肌力测验评分低于对照组和假手术组（P＜0.05）。与对照组和假手术组比较，大鼠脑出血部位脑组织Bcl‐2表达降低（P＜0.05），而Bax表达则升高（P＜0.05），p‐Akt表达水平下降（P＜0.05），DKK‐1表达水平上升（P＜0.05）。DKK‐1过表达组神经元凋亡率及 p‐Akt表达水平均高于空载体组和对照组（均P＜0.05）。Akt磷酸化激活剂BTBD10过表达组p‐Akt水平、Bcl‐2蛋白表达高于对照组和空载体组，而Bax蛋白表达则低于对照组和空载体组。B T BD10过表达组神经元存活率高于对照组和空载体组（均 P＜0.05），且BTBD10和DKK‐1共转染组大鼠神经元存活率高于DKK‐1转染组（P＜0.05）。结论 DKK‐1可能通过抑制Akt的磷酸化促进出血性脑卒中大鼠神经元的凋亡。
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侵袭性牙周炎及慢性牙周炎患者血清Dickkopf-1水平的影响因素研究
目的 观察牙周炎与血清Dickkopf-1(DKK-1)水平的关系,探讨影响血清DKK-1水平的可能因素.方法 收集侵袭性牙周炎(aggressive periodontitis,AgP)、慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)患者各20例(分别为AgP组、CP组)及分别与AgP、CP患者年龄匹配的健康对照者各20名(分别为H1组、H2组),采用酶联免疫吸附测定法检测血清DKK-1水平.采用t检验比较各组血清中DKK-1水平的差异,并采用相关分析和多元线性回归方法分析血清DKK-1水平与牙周临床参数及年龄等因素的关系,检测水准为双侧α =0.05.结果 AgP组血清DKK-1水平[(12.36±3.19) μg/L]显著高于CP组[(8.90 ±2.73) μg/L] (P=0.001),但与其对照组H1组[(12.37±2.74) μg/L]相比差异无统计学意义(P=0.99),CP组与H2组[(8.85 ±2.56) μg/L]相比差异也无统计学意义(P =0.896)；AgP与CP组血清DKK-1水平与牙周探诊深度、附着丧失、出血指数、探诊出血阳性位点百分比间均未见显著相关(AgP组r值分别为-0.029、-0.223、0.062、-0.412;CP组r值分别为-0.156、0.185、-0.379、0.051)；总体样本血清DKK-1水平与年龄呈显著负相关(r=-0.453,P =0.000)；多元线性回归分析显示年龄对血清DKK-1水平有影响(β=-0.391,t=-3.626,P=0.001).结论 未发现牙周炎对血清DKK-1水平产生影响；年龄是影响血清DKK-1水平的重要因素,血清DKK-1水平随年龄增加而降低.
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食管癌患者围术期血清热休克蛋白27、70、DKK-1及红细胞免疫黏附促进、抑制因子变化规律研究
目的 研究食管癌患者围术期血清热休克蛋白27(HSP27)、70(HSP70)、DKK-1及红细胞免疫黏附促进因子(RFER)、抑制因子(RFIR)的变化规律.方法 选取2009年11月~2011年11月于本院进行手术治疗的62例食管癌患者为观察组,同时选取同期62例健康体检人员为对照组,将对照组与观察组术前、术后1、5、10 d的血清HSP27、HSP70、DKK-1及RFER、RFIR水平进行对比.结果 观察组血清HSP27、HSP70、DKK-1及RFIR水平均高于对照组,RFER低于对照组,差异有统计学意义(P < 0.05);与术前相比,观察组术后1、5、10 d的HSP27、HSP70、DKK-1及RFIR水平持续下降,而RFER则持续上升,且术后TNM分期Ⅰ期患者因子水平优于Ⅱ、Ⅲ期患者,差异均有统计学意义(均P < 0.05).结论 食管癌患者围术期血清HSP27、HSP70、DKK-1及RFER、RFIR的变化规律可反映手术效果,并且对于疾病的诊断也有较为明显的价值.
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Dickkopf-1在肺癌相关恶性胸腔积液中的表达和临床意义
目的 分析Dickkopf-1 (DKK-1)在良恶性胸腔积液中的表达,探讨其在鉴别胸水良恶性和判断预后中的价值.方法 分别用酶联免疫吸附测定(ELISA)法和放射免疫法检测2010年4月～2012年9月阜阳市第一人民医院收治的56例肺癌相关恶性胸腔积液和41例良性胸腔积液患者胸水中DKK-1和癌胚抗原(CEA)水平.结果 肺癌相关恶性胸腔积液DKK-1水平为(43.9±19.4)ng/mL,显著高于良性胸腔积液的(18.5±8.6)ng/mL(P＜0.01);肺癌相关恶性胸腔积液的CEA水平为8.57(5.22,13.08)ng/mL,亦高于良性胸腔积液的3.46(2.49,5.10)ng/mL(P＜0.01);异常升高的DKK-1与肿瘤分期有关,而CEA升高与肿瘤病理性质有关;ROC曲线分析显示DKK-1升高佳临界值为36.3 ng/mL,对于诊断恶性胸腔积液的灵敏度和特异度分别为68.7％和73.5％;而CEA的灵敏度和特异度依次为60.4％和77.2％,CEA与DKK-1联合运用时,灵敏度和特异度可提高至77.2％和80.4％.在肺癌相关恶性胸腔积液患者中,DKK-1 ＜43.9 ng/mL患者3年总生存率为42.85％,高于DKK-1≥43.9 ng/mL的患者(21.42％)(P＜0.05).结论 Dickkopf-1在肺癌相关恶性胸腔积液中明显升高,了解Dickkopf-1水平有助于鉴别胸水性质并协助判断总体预后,有一定的临床应用价值.
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β-连环蛋白在骨折修复过程中的表达及其意义
目的 观察β-连环蛋白在骨折愈合期间变化规律,探讨其在骨折愈合期间可能的作用.方法 对32只Tcf报道鼠制作胫骨骨折模型.随机分为三组:I组-对照组2只;II组-骨折组24只;III组-Dkk-1注射组6只.应用Western blot分析对各组骨折愈合不同时间点β-连环蛋白水平进行测定.同时进行组织形态学测量等.结果 正常骨组织中β-连环蛋白水平低,在整个骨折愈合期间呈现高表达.Dkk-1腺病毒处理的骨痂样本显示β-连环蛋白水平低于未用Dkk1的骨痂样本.组织形态学测量发现,Ad-Dkk1处理组骨痂切片诸参数测量(软骨和骨组织占整个骨痂组织量的比例,小梁骨的直径(μm),数量(每毫米)数值均低于对照组,II组小梁骨的间隔(μm)明显短于Ad-Dkk-1处理组.结论 β-连环蛋白在骨折愈合中发挥重要作用,激活它的措施可能有助于骨折愈合.
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Dickkopf-1在类风湿关节炎滑膜细胞致炎中的作用
目的：探讨Dickkopf-1（ Dkk-1）在类风湿关节炎（ RA）滑膜炎症的作用。方法将Dkk-1特异性siRNA转染至分离培养的滑膜成纤维细胞（ RASF）使Dkk-1基因沉默；将Dkk-1质粒转染至RASF使Dkk-1基因过表达。应用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）及酶联免疫吸附测定法（ELISA），检测RASF在转染前后几种致炎因子在mRNA及蛋白水平的表达变化。结果 Dkk-1特异性siRNA转染后随着Dkk-1表达水平受到抑制，白细胞介素（ IL）-1β、肿瘤坏死因子（ TNF）-α、IL-6及IL-8的表达水平降低。 Dkk-1质粒转染后随着Dkk-1基因过表达，上述致炎因子表达水平增高。更为重要的是，RASF在TNF-α和IL-1β活化后，上述效应仍较为显著。结论 Dkk-1促进RASF分泌多种致炎因子，加重RA关节局部滑膜炎症。抑制关节局部Dkk-1的表达可减轻RA关节滑膜炎症，因此DKK-1有可能成为RA生物治疗的新靶标。
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近端胃腺癌中DKK-1和β-catenin的表达及其相关性
目的：探讨DKK-1和β-catenin蛋白表达在胃近端癌发生过程中的作用。方法：采用免疫组织化学S-P方法分别检测61例胃近端癌、癌旁组织及20例正常胃黏膜组织的DKK-1和β-catenin蛋白表达，并分析其临床意义。结果：胃近端癌中DKK-1阳性表达率和β-catenin异常表达率分别为34.4%（21/61）和68.9%（42/61），癌旁组织中DKK-1阳性表达率和β-catenin异常表达率分别为8.2%（5/61）和6.6%（4/61），正常组织中DKK-1阳性表达率和β-catenin异常表达率分别为15.0%（3/20）和10.0%（2/20）。胃近端癌的表达明显高于其他两者（P<0.05），胃近端癌中DKK-1和β-catenin的表达呈正相关（r=0.454，P<0.05），而在癌旁组织及正常胃黏膜中的表达无明确相关性。结论：DKK-1高表达和β-catenin异常表达上升与胃近端癌的发生密切相关。
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Wnt信号通路及其调节因子与骨质疏松的关系
在骨发育过程中Wnt信号通路发挥着非常重要的作用,而DKK1是Wnt信号通路的重要抑制因子.本文就Wnt信号通路、DKK1及其拮抗剂在骨代谢中的作用及其对骨质疏松发生发展的影响等相关研究进展进行综述,为骨质疏松症的有效治疗提供理论依据.
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强直性脊柱炎患者血清Dkk-1的检测及其临床意义
探讨血清中骨形成抑制因子Dkk-1的表达水平在强直性脊柱炎(AS)中的应用价值.方法:应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测应用抗肿瘤坏死因子(TNF)-α类制剂治疗3个月以上以及未用任何抗TNF-α类制剂的疾病活跃期AS患者的血清Dkk-1表达水平.同时对比检测8例未用该剂治疗的疾病活跃期类风湿性关节炎(RA)患者和20例健康对照个体血清Dkk-1的水平.AS患者的病情活跃程度采用AS疾病活动指数(BASDAI)进行评估,RA患者的病情活跃程度采用疾病活动评分(DAS28)进行评估.所有研究对象均测定炎性指标血沉(ESR)和C反应蛋白(CRP)水平.结果:未用药AS患者血清中Dkk-1水平显著低于RA患者和健康对照组(均P＜0.01).AS患者血清Dkk-1水平与BASDAI、ESR和CRP均无明显相关性.使用该剂治疗的AS患者血清Dkk-1水平显著高于未治疗的AS患者(P＜001).结论:AS患者血循环中Dkk-1的水平降低,血清Dkk-1的水平与炎症活跃程度无关.抗TNF-α类制剂可诱导AS患者血清Dkk-1的表达.
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GSK －3β、DKK －1、β－catenin 在近端胃癌中的表达及临床意义
目的：探讨GSK－3β、DKK－1、β－catenin在近端胃癌中的表达情况及其临床意义。方法采用免疫组织化学S－P方法分别检测79例患者近端胃癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜组织的GSK－3β、DKK－1、β－catenin表达情况，并分析其临床意义。结果 GSK－3β在近端胃癌组织的表达比癌旁组织及正常胃黏膜组织表达量明显降低（P均＜0．05）， GSK－3β阳性表达率与TNM分期、分化程度、肌层浸润程度、淋巴结转移显著相关（ P均＜0.05）。 DKK－1在近端胃癌的表达比癌旁组织及正常胃黏膜的表达量均明显升高（ P均＜0.05），DKK－1阳性表达率与TNM分期、分化程度、肌层浸润程度显著相关（P均＜0．05）。β－catenin在近端胃癌中细胞质及细胞核的异常表达比癌旁组织及正常胃黏膜的异常表达均明显升高（P均＜0．05）。 GSK－3β的表达与DKK－1的表达及β－catenin的异常表达呈负相关（P均＜0．05）。结论 GSK－3β、DKK－1、β－catenin在近端胃癌的发展、侵袭和转移中起重要作用，可作为近端胃癌诊断和判断预后的指标。
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肺癌患者血清和胸水中Dickkopf-1的表达及临床意义
目的：探讨肺癌患者血清以及胸水中Dickkopf-1（DKK-1）的表达，以及其在临床应用中的诊断价值。方法选取2011年3月至2012年4月呼吸科肺癌82例，良性病变者38例。酶联免疫吸附法（ enzyme-linked immu-nosorbent assay，ELISA）检测肺癌以及肺部良性病变患者血清以及胸水中DKK-1的浓度，比较肺癌与肺部良性病变患者血清以及胸水中DKK-1的表达情况。结果肺癌患者血清以及胸水中DKK-1的含量均较肺部良性病变患者显著增高（ P ＜0 n．05）。血清中与胸水中DKK-1的表达正相关（ r ＝0．72， P ＜0．05）。血清以及胸水中DKK-1用于诊断肺癌以及肺癌骨转移的敏感性及特异性均较高。非小细胞肺癌（ NSCLC ）患者予以正规化疗2个疗程后患者血清中DKK-1表达降低（ P ＜0．05）。结论 DKK-1有望成为肺癌以及肺癌骨转移的诊断与治疗新的靶点。
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Wnt抑制信号DKK-1在激素性股骨头坏死中的作用研究进展
Wnt/连环蛋白信号在骨的发展和骨代谢的平衡,许多骨骼疾病与其失调有关。有研究表明,Wnt拮抗信号Dickkopf-1( DKK-1)引起的骨代谢变化对激素性股骨头坏死( steroid-induced Avascular Necrosis of Femoral Head,SANFH)的发生和发展起着非常重要的作用。糖皮质激素( GCs)能通过拮抗Wnt信号( Wnts)影响骨形成和成骨细胞的功能,使得Dkk-1的表达显著增加。因此,我们回顾了近几年关于DKK-1在SANFH中作用的相关文献,旨在阐明DKK-1对Wnt信号通路的调控及其在SANFH发病机制中的作用做一综述。
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骨髓间充质干细胞成脂和成骨分化过程中Wnt信号通路的调控效应
背景:骨髓间充质干细胞的成脂肪分化与成骨分化比例的失衡与许多骨疾病密切相关,而近些年发现Wnt信号通路在调控骨髓间充质干细胞的分化方向中起重要作用.目的:通过Wnt信号通路PCR基因芯片观察大鼠骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞和成骨细胞后相关基因表达的变化,寻找Wnt信号通路中调控骨髓间充质干细胞分化的靶基因.方法:采用大鼠第3代骨髓间充质干细胞分别进行成骨诱导和成脂诱导,7 d后用Trizol萃取培养瓶中的细胞总RNA,倒置显微镜下观察骨髓间充质干细胞形态特征及成骨诱导后和成脂诱导后细胞形态特征.采用Wnt信号通路PCR芯片(大鼠)进行摹因芯片检测,以未诱导组为对照,计算成脂肪诱导,成骨诱导后相关基因上调/下调的比值.结果与结论:①倒置显微镜下观察,传3代后可获得均一性较高的骨髓间充质干细胞,骨髓间充质干细胞经成骨诱导后向成骨细胞方向分化,经成脂诱导后向脂肪细胞方向分化.②与未诱导组相比,骨髓间充质干细胞成脂诱导后Wnt信号通路表达上调的基因(Dkk-1,kremen,FZD1,FZD7)等15个(ratio＞2),下调的基因(sFrp 5,β-catenin,Dvl3,Tcf7)等16个(ratio＜0.5).成骨诱导后,Wnt信号通路表达上调的基因(Dkk1,kmmen,β-catenin,Wnt11)6个,表达下调的基因(sFrp5,sFRP4,Fzd1)等15个.提示WnI信号通路在骨髓间克质干细胞成脂细胞分化和成骨细胞分化中发挥重要作用.
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骨质疏松治疗靶点:骨硬化蛋白及DKK-1与年龄、体质量指数、血糖和血脂之间的关系
背景:研究显示,破骨细胞通过抑制骨硬化蛋白的表达发挥促进骨生成的作用,而调控骨吸收和骨形成平衡的关键在于骨吸收过程抑制骨硬化蛋白表达的程度.目的:分析成年男性骨硬化蛋白、DKK-1与年龄、体质量指数、空腹血糖、血脂之间的关系.方法:筛选健康体检的成年男性70例,46-67岁;收集其年龄、身高、体质量和既往病史等相关信息.检测空腹血糖、血脂,ELISA的方法测定血清骨硬化蛋白及DKK-1水平.结果与结论:①不同年龄、体质量指数、空腹血糖的受试者血清骨硬化蛋白水平差异有显著性意义(P<0.05);年龄57-67岁受试者血清DKK-1水平显著高于年龄46-56岁者(P<0.05);②血清骨硬化蛋白与DKK-1之间不存在相关性;③多元线性回归分析显示血清骨硬化蛋白与空腹血糖、体质量指数显著相关,血清DKK-1与年龄显著相关.因此,在进行骨硬化蛋白和DKK-1的相关研究时,需关注年龄、体质量指数、空腹血糖的影响.
