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类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞的蛋白质组学研究
目的 研究类风湿关节炎(RA)和骨性关节炎(OA)关节滑膜成纤维样细胞(FIS)蛋白质组的表达差异,分析差异蛋白在RA关节滑膜增生中的作用.方法 原代培养关节滑膜FLS,抽提细胞总蛋白并定量,通过高分辨双向电泳(2-DE)对RA和OA的滑膜FLs进行蛋白分离,找出其中表达差异的蛋白质点并进行质谱(MS)分析鉴定.结果 OA及RA滑膜FLS的2-DE图谱上分别显示有1324和1147个蛋白质点.其中47个蛋白质点在OA或RA滑膜FLS中有3倍以上的量变;12个蛋白质点只存在于OA滑膜FLS;15个蛋白质点只存在于RA滑膜FLS.选择54个蛋白质点进行MS,共成功鉴定34个蛋白质点.其中包括在OA中表达上升的人异天冬氨酸甲基转移酶(PIMT)和PIR(PIR),仅在RA中表达的硫氧还蛋白1(TRX-1)这三个与关节滑膜增生相关的蛋白质.结论 PIMT和PIR在RA中表达降低及TRX-1在RA中表达升高可能是RA关节滑膜增生,引起关节软骨破坏的原因之一.
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滑膜成纤维细胞与类风湿性关节炎相关研究的进展
类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是一种慢性起病的自身免疫性疾病,其病程终转归往往导致关节破坏,其显著特点是由免疫细胞参与的自身免疫调节紊乱.长期以来,一直认为T细胞、巨嗜细胞及其各自的细胞因子在RA病程中起着关键作用,然而这一学说在近年来受到了强力的挑战,相当一部分学者认为在RA长期的病程中成纤维样细胞(fibroblast-like synoviocytes, FLS)起着主导的作用,这种作用甚至在疾病早期就已经体现出来,而这类滑膜成纤维细胞(rheumatoid arthritis synovial fibro-blasts, RASFs)正是RA区别其他关节炎症的重要标志.
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艾拉莫德对骨关节炎滑膜成纤维样细胞特性的影响
目的观察骨关节炎(OA)滑膜成纤维样细胞(FLS)体外培养时生长、增殖特性,以及艾拉莫德(T-614)对其增殖能力的影响,探讨艾拉莫德的抗炎机制.方法噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪观察OA和滑膜正常者(NS)膝关节滑膜组织体外培养时FLS增殖能力和细胞周期的变化;用反转录-聚合酶链反应测定FLS的c-fos和COX-2表达情况,检测不同浓度T-614作用下FLS的细胞增殖、细胞周期和基因表达.结果OA和NS的FLS在体外培养时的生长活性、分化能力的差异无统计学意义.高剂量T-614对两种FLS的细胞存活分数(SF)的抑制作用差异无统计学意义,但与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).OA-FLS中加入1000 ml/L T-614可诱导细胞凋亡并抑制c-fos和COX-2表达,200 ml/LT-614延长G1期而缩短S期.结论无炎症介质激活时,OA-FLS在体外未表现出高增殖潜能;高剂量的艾拉莫德对OA-FLS的增殖分化及表达有直接抑制作用,并通过此机制对OA滑膜炎进行免疫调节.
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CC亚族趋化因子在类风湿关节炎的研究进展
类风湿关节炎(RA)的病理特点是慢性滑膜炎、血管翳形成、软骨及骨组织的破坏。关节组织内聚集大量细胞是RA的重要病理特征。RA关节腔滑液以嗜中性粒细胞浸润为主;滑膜组织中滑膜细胞(A型巨噬样细胞和B型成纤维样细胞)大量增生,多种炎细胞浸润,其中T淋巴细胞、巨噬细胞占大多数,还有较多的浆细胞和少量的B细胞、树突状细胞、活化成纤维细胞浸润。T淋巴细胞中,CD4+T细胞远多于CD8+T细胞,且多为CD4+CD45RO+的致敏状态的T淋巴细胞[1]。CD4+细胞中,Th1细胞占绝大多数(97.8%)[2]。浸润的细胞常聚集在新生血管周围形成类似淋巴滤泡样的结构。免疫系统的各种细胞在RA关节局部的选择性浸润与CC、CXC亚族趋化因子以及某些黏附分子和活化因素有关[3]。 在炎症发展过程中,T细胞归巢到组织是由多级因子调节引起的黏附到内皮细胞上,而后迁移到组织的过程。首先,选择素(selectin)介导的相互作用引起T细胞沿血管壁滚动,从而与一些固定在内皮细胞表面的细胞因子接触。这些细胞因子通过活化T细胞上凝集素(integrin),激发强大的与内皮细胞的黏附力,然后在局部活化的致迁移因子的引导下迁移到组织内,但负责激活T细胞凝集素黏附和引导T细胞迁移到局部组织的因子却不甚明确。近来的试验表明,趋化因子家族可激发黏附分子,使淋巴细胞亚群有选择地归巢或浸润组织,其作用有三方面:①触发、激活凝集素,确保T细胞与血管内皮细胞的牢固黏附。②不同趋化因子对不同淋巴细胞亚群的吸引,使炎细胞选择性地进入炎组织。③炎症局部的趋化因子引导不同炎性细胞分布到组织内不同部位。以下,将对其在RA的致病机制中的作用做一探讨。
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低氧对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞表达葡萄糖-6-磷酸异构酶及细胞周期的影响
目的 研究将通过对骨性关节炎(OA)和RA患者的关节滑膜成纤维样细胞(FLS)进行正常氧和低氧培养后,观察FLS表达葡萄糖-6-磷酸异构酶(G6PI)和缺氧诱导因子(HIF)-1α的变化情况及对细胞周期的影响.方法 原代培养OA和RA患者的滑膜成纤维细胞,分别在正常氧和3%氧环境中培养24 h,实时荧光定量PCR检测G6PI、HIF-1α mRNA表达水平,蛋白印迹法检测G6PI、HIF-1α蛋白表达水平.流式细胞仪检测细胞周期.采用t检验、Mann-Whitney U检验进行统计学处理.结果 与正常氧培养相比,经3%氧培养RA FLS G6PI mRNA的升高倍数(2.6±0.4)明显高于OA FLS的升高倍数(1.5±0.4)(t=4.94,P<0.05);RA FLS G6PI蛋白表达水平明显高于OA FLS(t=2.81,P<0.05).与正常氧培养相比,RA FLS经3%氧培养HIF-1α mRNA的升高倍数(2.9±0.8)明显高于OA FLS的升高倍数(1.4±0.4)(t=4.51,P<0.05);RA FLS HIF-1α蛋白表达水平明显高于OA FLS(t=14.54,P<0.05).在3%氧低氧培养环境中,与正常氧培养相比,RA FLS G1期显著减少(t=11.31,P<0.05),S期(t=-7.62,P<0.05)、G2期显著增加(t=-9.95,P<0.05).结论 在RA低氧环境中,G6PI、HIF-1αmRNA和蛋白水平在FLS中的表达增高,FLS细胞增殖加快.
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丹参及其单体治疗肝纤维化的研究进展
肝纤维化是所有慢性肝病进展成肝硬化的共同病理基础,而肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)的激活、增殖则是肝纤维化发生的中心环节.各种损伤因子导致肝损伤后,HSCs发生活化,细胞表型转变为肌成纤维样细胞,细胞增殖旺盛,生成细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的能力明显增强,生成胶原酶抑制物也明显增多,使胶原酶活性下降,这些变化使肝脏ECM生成增加而降解减少,终导致肝脏胶原沉积与纤维化.
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骨髓间充质干细胞简易分离纯化法
目前比较常用的分离骨髓间充质干细胞(MSC)的方法有全骨髓法.全骨髓法即根据干细胞贴壁特性,定期换液除去不贴壁细胞,从而达到纯化MSC的目的,此方法简单、易行,所得细胞多能分化能力和增殖力好,但是对成纤维样细胞污染的问题不易解决[1].
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G6PI对阿霉素诱导类风湿关节炎关节滑膜细胞凋亡的保护作用
研究葡萄糖-6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,G6PI)对阿霉素(adriamycin,ADR)诱导类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis RA)滑膜成纤维样细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡的影响,探讨其作用机制.本研究从RA的关节滑膜组织中分离培养FLS,利用ADR建立细胞凋亡模型,通过流式细胞仪检测G6PI对细胞凋亡的影响,并通过western blot、Q-PCR检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl2、Caspase 3、Fas、Cyclin B1的表达;收集细胞培养上清,通过ELISA方法测定IL-1β和TNF-α含量.结果显示,G6PI(1 μg/ml)和G6PI(10 μg/ml)组RA-FLS的凋亡指数均显著低于ADR对照组;G6PI(1 μg/ml)组与G6PI(10 μg/ml)组间无显著差异.ADR凋亡模型中,Caspase 3、Fas和Bax表达明显上调,Cyclin B1下调;G6PI作用后,Caspase 3和Fas表达明显低于对照组,Cyclin B1表达则明显高于对照组.G6P1处理组的细胞培养上清中IL-1β和TNF-α含量均显著高于ADR对照组.研究表明G6PI可能通过Fas介导的Caspase通路来保护FLS免遭凋亡,同时促进RA-FLS分泌炎症因子IL-1β和TNF-α,从而参与RA的发生与发展.
关键词: 类风湿性关节炎 成纤维样细胞 葡萄糖-6-磷酸异构酶 细胞凋亡 -
肝纤维化的发病机制及治疗进展
肝纤维化是肝脏内细胞外基质(Extracellular Matrix,ECM)弥漫性过度沉积性疾病,无假小叶形成,其发生机制主要是肝内ECM合成与降解失衡,表现为ECM大量沉积。肝纤维化是慢性肝病发展为肝硬化的中间环节,肝星状细胞(Hepatic Stellate Cell,HsC)在此过程中起关键性作用。HSC激活并转化为肌成纤维样细胞(Myofibroblastic-like cell, MFLC)和成纤维细胞fibroblastic cell,FC),是肝纤维化发生、发展的核心环节,肝损伤是引发肝纤维化的始动环节。肝细胞和其他肝非实质细胞旁分泌释放一些细胞因子激活HSC,活化的HSC增生,合成细胞外基质;同时表达部分细胞因子(自分泌),共同参与调控过程。与基质降解有关的金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMPS)、金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPS)、α2-巨球蛋白也相应发生变化,后导致ECM过度沉积,形成纤维化。……
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慢性肝炎肝纤维化患者肝组织和血清中TGF-β1、TIMP-1检测及其意义
肝纤维化发生的中心环节是肝星状细胞的激活、增殖、转化为成纤维样细胞并合成、分泌大量细胞外基质(extracellularmatrix,ECM),沉积于肝组织.
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肝纤维化
肝纤维化是各种原因所致肝损伤的共同结果.现代观点认为肝纤维化的发生是一个动态过程,是肝脏对损伤的一种创伤愈合反应.其过程主要涉及肌成纤维样细胞的动员和局部增生以及肝基质的再塑.肝纤维化研究中主要的进展之一是认识到肝星状细胞(HSC)在肝损伤和损伤修复中发挥中心作用.随着分子探针、细胞产物、HSC纯化和培养技术的发展,对肝纤维化分子机制的认识已取得了很大的进展.本文重点就现今有关肝纤维化的一些认识,如HSC的作用、肝纤维化的细胞介质和基质成分的变化等内容作一综述.
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成纤维样细胞和小电导钙激活钾通道3在调节胃肠平滑肌活动中的作用
功能性胃肠病(functional gastrointestinal disorders,FGID)和胃肠动力性疾病(disorder of gastrointestinal motility,DGIM)是临床常见病多发病,胃肠器质性疾病以及一些全身疾病如糖尿病、尿毒症等,亦可伴有胃肠运动异常.胃肠运动的调节异常是其病理生理基础.近年来发现的成纤维样细胞(fibroblast-like cell,FLC)、小电导钙激活钾通道(small conductance Ca2+ -activated K+claannels,SK)3亚型在调节胃肠平滑肌活动中有一定作用,为胃肠动力异常的研究提供新的思考.
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沙利度胺对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞影响的体外研究
目的 研究沙利度胺(Thalidomide)对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维样细胞(FLS)体外培养时的增生殖分化特性的影响.方法 关节镜、关节活检针取RA患者滑膜组织,分离培养和鉴定FLS, MTT法和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法观察沙利度胺对FLS细胞存活分数(SF)和c-fos、COX-2mRNA表达.结果 RA-FLS体外培养呈良性增生.沙利度胺对RA-FLS的SF值的抑制作用强(P<0.05).生理剂量的沙利度胺干预时的浓度与FLS的SF值呈负相关.RA-FLS的c-fos、环氧化酶2(COX-2)mRNA表达率高,加入沙利度胺共孵育3天后c-fos和COX-2mRNA的表达率均明显下降.结论 培养和鉴定RA滑膜细胞,证实体外培养传代的RA-FLS为非恶性无限制增生.实验剂量下沙利度胺通过抑制c-fos、COX-2的表达、降低FLS增殖能力等不同途径,发挥对RA滑膜细胞的免疫调节作用.
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间充质干细胞在造血干细胞移植中的作用
造血干细胞(hemapoietic stem cell,HSC)是早被认识也是至今研究得清楚的干细胞.很长一段时间,人们认为骨髓中只存在一种干细胞即造血干细胞,1867年Cohnheim提出了骨髓中可能存在另一类干细胞即非造血干细胞的观点,但直到1960年,Friedenstein[1]才证实了骨髓中非造血干细胞的存在,并称之为多能基质干细胞.此后,陆续有一系列的研究证实骨髓中确有非造血干细胞的存在,因为它们的形态呈成纤维样细胞外观,称它们为集落形成单位成纤维细胞、骨髓基质成纤维细胞等,目前这些名称已较少使用..1985年Owen[2]提出了基质系统的概念,并对其进行了描述,认为骨髓基质是造血微环境的重要组成部分,对骨髓造血具有重要意义.1994年Caplan[3]又将之命名为骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC).目前,间充质干细胞已成为相关组织工程、细胞移植和基因治疗等领域研究的重点之一.
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股骨头缺血性坏死骨髓活性的研究
目的:股骨头缺血性坏死的病因及发病机制不明.本研究旨在探讨因非创伤所致股骨头缺血性坏死骨髓活性有无异常,揭示骨坏死发生机理.方法:对1999年9月~2000年4月间骨坏死病人骨髓成纤维样细胞集落形成单位(FCFUs)进行培养,观察其生长特点及集落数目,观察骨坏死病人与对照组之间有无差异.结果:骨坏死组骨髓成纤维样细胞集落形成单位的贴壁生长增殖速度慢于对照组,FCFUs形成集落数目与对照组相比存在明显差异.结论:非创伤性股骨头缺血性坏死存在骨髓活性下降,成骨能力降低.
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巨颌症致病基因SH3BP2突变体对成纤维细胞的增殖抑制作用研究
目的:观察过表达突变型SH3BP2 (p.Asp419 Gly)的单核细胞对颌骨成纤维细胞增殖的影响,探讨巨颌症病灶内纤维异常增殖的机制.方法:构建巨颌症致病基因SH3BP2突变(c.1256A>G)载体,转染单核细胞系Raw264.7,筛选过表达稳定株;以过表达野生型SH3BP2的Raw264.7稳定株为对照.制备Raw264.7条件培养基,培养颌骨成纤维细胞并对比其生长状态.结果:成功建立过表达细胞系.突变型组条件培养基中成纤维细胞减少速率小于野生型组(P<0.05).结论:与野生型相比,突变型SH3BP2单核细胞对颌骨成纤维细胞生长抑制作用较弱,可能是巨颌症病灶常见纤维异常增殖的原因之一.
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Ⅰ型胶原在人颞下颌关节盘穿孔病变细胞中的表达
目的:研究颞下颌关节盘穿孔时关节盘细胞合成及分泌Ⅰ型胶原能力的改变及其在颞下颌关节盘穿孔发生中的作用.方法:收集颞下颌关节髁突肥大(对照组)及颞下颌关节盘穿孔(实验组)患者因手术切除的手术标本,采用酶消化法原代培养,培养的细胞经甲苯胺蓝染色及免疫荧光染色鉴定为成纤维样细胞.应用酶联免疫吸附测定法检测关节盘细胞培养上清液中Ⅰ型胶原蛋白的含量.采用蛋白质印迹法分析细胞内Ⅰ型胶原蛋白的表达.结果:实验组及对照组的颞下颌关节盘均可培养出成纤维样细胞,甲苯胺蓝染色、Ⅰ型胶原及Ⅱ型胶原免疫荧光染色均表达阳性.对照组细胞培养48 h后上清液中Ⅰ型胶原的含量显著高于实验组(P<0.05).蛋白质印迹法检测结果显示,实验组细胞内Ⅰ型胶原的蛋白表达明显低于对照组(P<0.05).结论:颞下颌关节盘细胞表达及分泌Ⅰ型胶原含量减少,Ⅰ型胶原表达降低可能导致人颞下颌关节盘穿孔的发生及进展.
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骨髓间充质干细胞的生物学特性及其在血液系统疾病中的应用
骨髓间充质干细胞(MSC)是骨髓中除造血干细胞(HSC)以外的另一类具有自我更新及多向分化潜能的干细胞.Friedenstein等于1966年首先从兔的骨髓成纤维样细胞中证实了MSC的存在;1991年Caplan等将其命名为骨髓MSC.由于MSC与造血微环境关系密切且有强大的免疫调控能力,使其在血液系统疾病的发生、发展、治疗等方面均有着及其重要的应用价值.本文就MSC的生物学特性及其在造血调控、血液系统疾病中的应用研究现状及进展简要综述如下.
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酪氨酸蛋白激酶及其抑制剂在肝星状细胞激活中的研究进展
肝纤维化(liver fibrosis)是继发于肝脏炎症或损伤后组织修复过程的代偿反应,表现为细胞外基质(extracellular matrix,ECM)在肝内过量沉积.[1] .肝星状细胞(又称贮脂细胞,Ito细胞或窦周细胞,hepatic stellate cells,HSC)激活并转化为肌成纤维样细胞(myofibroblastic-like cell,MFLC)和成纤维细胞(fibroblast cell,FC)是肝纤维化发生、发展的核心环节.[2] .酪氨酸蛋白激酶(tyrosine protein kinase,TPK)在HSC激活过程中细胞内信号传递方面起了重要的作用.酪氨酸蛋白激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)可能通过抑制细胞内信号传导而影响HSC激活.本文就酪氨酸蛋白激酶、酪氨酸蛋白激酶抑制剂与肝星状细胞的激活作一综述.
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正常人骨髓成纤维样基质细胞系对白血病细胞U937增殖的影响
目的: 观察正常人骨髓成纤维样细胞系HFCL对白血病细胞U937增殖的影响. 方法: 采用免疫组化对HFCL细胞进行鉴定. 建立U937细胞和HFCL细胞共培养体系,台盼蓝拒染法测定生长曲线;HE染色和瑞氏-吉姆萨染色后进行分裂指数(MI)测定;流式细胞仪(FCM)检测细胞周期的变化;Western Blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达. 结果: 与单独U937细胞培养相比,与HFCL细胞共培养后,U937细胞生长受抑,且与HFCL细胞直接接触组的抑制作用大于用transwell组. 其分裂指数单独白血病细胞组>用transwell组>与HFCL直接接触组. 细胞周期分析发现U937细胞与HFCL细胞共培养后,G1期细胞增高,S 期细胞减少,以直接接触组为甚. 与HFCL细胞共培养后,U937细胞的PCNA表达下调;而与U937细胞共培养,HFCL细胞生长和细胞周期无明显变化. 结论: 正常人骨髓成纤维样细胞HFCL能抑制白血病细胞U937的增殖,阻止U937细胞细胞周期的运行,而U937细胞对HFCL细胞的生物学特性影响不大.