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应对复杂食品中农药残留分析的挑战
深入进行农药残留分析时,需要分析人员在各种复杂基质中检测出大量化合物,这使农药残留分析成为一项极具挑战性的工作.降低检出限的需求更进一步增加了该项工作的难度.在使用气相色谱进行农药残留分析时,大多数分析都采用质谱分析法(MS)来进行检测.无论采用何种样品前处理方式,进入仪器的样品中都难免会包含一些能引起系统污染及影响分析结果的样品基质杂质.这些杂质会影响不稳定农药的准确分析,降低色谱柱的使用寿命,并需要经常维护色谱进样口以及质谱离子源.解决这一问题的方法是采用装有安捷伦新型的带玻璃毛超高惰性进样口衬管以及多模式进样口,并使用GC/MS或GC/MS/MS系统进行检测.该方法可以用于分析数百种样品,并获得了理想的分析结果,而且停机时间短.
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质谱分析法在现代食品仪器检测中的重要性
本文主要从食品检测的角度入手,对仪器分析法在食品检测分析中的应用进行研究,重点阐述了质谱分析法在食品检测仪器分析中的应用,从做好食品检测工作的重要意义、仪器分析法和质谱分析法的相关概述以及质谱分析法在食品检测分析中的具体应用这三个方面进行具体阐述.
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仪器分析方法在食品检测分析中的应用
随着科技的发展，仪器分析方法的技术及种类愈加丰富，凭借方便、快捷、准确的优势在各行各业的检验检测工作中得到了广泛应用。在此背景下，笔者从食品安全检测的特点出发，分析了电化学分析法、光学分析法、色谱分析法、质谱分析法这四种仪器分析方法在食品检测分析中的实际应用。
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两种国产抗结核固定剂量复合剂中利福平的药代动力学和生物等效性研究
目的 研究两种国产抗结核固定剂量复合剂四药复方中和福平的药代动力学和相对生物利用度,评价复合剂中利福平的生物等效性,以期揭示抗结核固定剂量复合剂的内在质量,为临床合理用药提供理论依据.方法 复合剂作为受试制剂,利福平胶囊作为参比制剂,采用单次给药自身交叉对照的方法,考察两种受试制剂分两批试验进行,按照编号法将每批18名健康男性受试者随机分为2组,每组9名,第一批试验中组1受试者在第一周口服受试制剂1,每批试验入组18名受试者,两批试验共计入组36名受试者.第二周口服参比制剂,组2受试者在第一周口服参比制剂,第二周口服受试制剂1,每名受试者每周各服一次药物;第二批试验中受试制剂1改为受试制剂2,其他操作不变.服药后,抽取不同时间点受试者的静脉血,采用液相色谱-质谱联用法测定血药浓度,应用DAS 3.1.5版软件计算药代动力学参数及判断生物等效性.结果 两种固定剂量复合剂中利福平主要药代动力学参数分别如下,峰浓度(Cmax)为(11.4±3.4)mg/L和(12.2±3.8) mg/L,半衰期(T1/2)为(3.7±1.2)h和(3.6±1.3)h,时间点0至24 h的血药浓度-时间曲线下面积(AUC(0-t))为(91.4±30.8)mg· L-1 ·h-1和(92.1±25.3)mg·L-1·h-1,时间点0至无穷大时血药浓度-时间曲线下面积(AUC(0～∞))为(93.3±31.3)mg· L-1 ·h-1和(94.1±26.5)mg·L-1·h-1.AUC(0-t)相对生物利用度分别为94.7％和91.4％,置信区间为89.5％～100.2％和81.4％～95.6％,等效区间为80％～125％.结论 两种受试制剂中利福平的Gmax、Tmax与参比制剂比较均无显著性差异.经生物等效性检验,判定两种受试制剂中利福平与参比制剂中利福平生物等效.
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日本血吸虫成虫性别差异蛋白的筛选及鉴定
目的 筛选和鉴定日本血吸虫成虫性别差异蛋白.方法 自日本血吸虫(Schistosomajaponicum,S.japonicum)尾蚴感染的2只家兔颈动脉灌注生理盐水冲虫,分别收集雌雄成虫各约200条.提取雌、雄成虫的水溶性和脂溶性蛋白各300μg,采用双向凝胶电泳技术分别进行分离.银染后扫描成像,用ImageMaster Platinum 2D 5.0软件进行分析,筛选差异蛋白,并予质谱鉴定.结果 雌虫和雄虫的水溶性蛋白分别检出(255±10)、(224±12)个蛋白点,疏水蛋白分别检出(200±11)、(132±8)个蛋白点;鉴定的6个差异蛋白质中,5个雌性表达上调的差异蛋白为硫氧还蛋白,铁蛋白-1重链,泛素结合酶样蛋白Mms2-泛素复合体可溶性结构B链,热休克蛋白10和胞浆脂肪酸结合蛋白突变体H,1个雄性表达上调的差异蛋白为48 kDa组胺受体亚基肽4.结论 获得了日本血吸虫成虫性别差异蛋白质.
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一种新的保健食品安全监测手段质量轮廓技术
目的 提出有效监控保健食品安全的新方法质量轮廓技术,力图将违禁药物的监控由被动转为主动,有效保障保健食品的安全.方法 以高效液相色谱和直接电喷雾质谱法初步研究质量轮廓技术.高效液相色谱法采用0.05%磷酸水和乙腈作为流动相,在C18柱上全梯度洗脱,以223 nm为检测波长,对减肥和降糖保健食品进行化学成分轮廓分析,考察6份不同批号减肥样品A和降糖样品B的高效液相色谱质量轮廓稳定性.在保健食品中分别添加酚酞、西布曲明、罗格列酮、格列本脲、格列齐特,分析质量轮廓中出现的异常成分;另外直接电喷雾质谱法采用ESI+采集模式,毛细管电压:3.5 kV,锥孔电压:30 V,萃取电压:4 V,聚焦电压:0.5 V,源温度:105℃,脱溶剂温度:300℃,脱溶剂气流速:260 L/h,锥孔气流速:50 L/h,扫描范围:m/z 100-600.考察减肥保健食品C中添加单去甲基西布曲明时,质量轮廓中的异常成分.结果 高效液相色谱质量轮廓具有一定的稳定性(色谱相似度大于0.877),且高效液相色谱质量轮廓对保健食品中混入的酚酞、西布曲明、罗格列酮、格列本脲、格列齐特均有反应,直接电喷雾质谱质量轮廓也能明确反映保健食品中混入的单去甲基西布曲明.结论 质量轮廓技术可有效监控保健食品中违禁药物的添加情况,防止有害成分的"证后"添加.
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针对无标签鸟枪法蛋白质定量的新方法
目的 通过所检测到的肽段丰度计算蛋白质丰度是蛋白质组学的一个重要部分.由于退化肽段的丰度可能由多个蛋白质提供,简单剔除退化肽段可消除这种不确定性并简化问题.但是由于退化肽段的信息没有被充分利用,蛋白质定量的准确性会受到影响,还可能显著降低可以定量的蛋白质规模.如何充分利用退化肽段的信息,提高蛋白定量的准确性和全面性,并且不会导致问题规模更为复杂,成为一个重要的问题.方法 为了在不引入更多误差的情况下充分利用退化肽段来进行更准确的定量,本文提出一个基于误差小化的方法(error-minimization-based quantification for protein,EMQ).不同于以往的大多数算法,EMQ利用退化肽段中的信息,大限度地将肽段层面信息还原到蛋白质层面,得到了更多的蛋白质定量结果并提高了结果的精度.结果 多个实验数据上的表现证明本方法可以在较小的时间代价下获得更高的精度,并提高结果的规模.结论 本文提出的基于误差小化的方法可以快速准确地对大规模蛋白质组学问题进行定量.
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抗原修复技术研究发展的新起点
7年多前，我们曾经受贵刊编辑部之邀发表过“抗原修复技术研究进展”一文［1］。在那篇文章里，尽管已经有片言只语提到可以应用抗原修复技术原则从石蜡切片中提取蛋白质和核酸。但是，全文的主题与绝大部分内容还是局限在免疫组织化学染色的问题方面。转瞬过去的7年在后基因组时代的舞台上大放异彩，高通量检测数以千计的蛋白质组学分析技术的开发以及各种形形色色的蛋白质质谱分析技术的开发，在探讨人类疾病的多种相关生物标志物及其在诊断治疗上，正在扮演着先锋作用的重要角色［2-4］。图像质谱分析是近开发出来的一门新技术，它是建立在质谱分析法特别是通过基质辅助激光解析（ matrix-assisted laser desorption ionization ）技术或者次级离子质谱分析法（ secondary ion mass spectrometry ）能够在一张组织切片上进行蛋白质、脂质等细胞组成成分在组织结构内的质谱分析。1997年，离子质谱分析法（ IMS ）早由Caprioli的实验室发表。此后不久即开始用于临床研究，如癌组织中HER2表达以及分布等的研究显示出颇具魅力的发展前景。但是，这些新兴的技术从开始起步就面临着和20多年前免疫组织化学在常规甲醛固定石蜡包埋（ FFPE ）组织切片染色上同样的尴尬局面：必须依赖新鲜组织冷冻切片。随着抗原修复技术在石蜡切片免疫组织化学染色的广泛推广，人们从数以万计的近代有关加热抗原修复技术的文章中，毫不怀疑地认识到，加热抗原修复技术在免疫组织化学染色等方面取得的优异成果，开启了如何把现代分子生物学技术用于FFPE组织科研宝库的途径。继免疫组织化学染色之后，加热抗原修复技术的基本原理已经成功地被用于包埋前、后免疫电镜染色，核酸原位杂交，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记，从石蜡包埋组织中提取蛋白质或核酸等一系列的重要成绩。2008至2011年期间，意大利的Ronci等［5］、澳大利亚的Gustafsson等［6］、美国的Casadonte和Caprioli［7］相继发表了他们经过反复试验、成功地采用加热抗原修复技术方法，使得IMS能够用于常规FFPE组织切片的文章，由于从事IMS技术开发的科学家们逐渐从与日俱增的加热抗原修复在免疫组织化学染色等方面令人瞩目的成绩中，认识到FFPE人体组织是不可取代的极为宝贵的科学研究资源，任何一种现代化的分子生物学技术都不能够仅仅局限于新鲜组织冷冻切片。必须千方百计地寻求一种能够克服FFPE处理给予组织内高分子成分带来的负面影响的有效方法。于是，一切从事与常规FFPE组织标本相关联的科学研究和技术开发都顺理成章地归结到加热抗原修复技术。有力地证明这一极为简单的加热修复方法的确提供了解放石蜡组织中的蛋白质等高分子结构成分的坦途，开启了为病理学家和形态学家步入分子病理学、形态学的大门。
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类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞的蛋白质组学研究
目的 研究类风湿关节炎(RA)和骨性关节炎(OA)关节滑膜成纤维样细胞(FIS)蛋白质组的表达差异,分析差异蛋白在RA关节滑膜增生中的作用.方法 原代培养关节滑膜FLS,抽提细胞总蛋白并定量,通过高分辨双向电泳(2-DE)对RA和OA的滑膜FLs进行蛋白分离,找出其中表达差异的蛋白质点并进行质谱(MS)分析鉴定.结果 OA及RA滑膜FLS的2-DE图谱上分别显示有1324和1147个蛋白质点.其中47个蛋白质点在OA或RA滑膜FLS中有3倍以上的量变;12个蛋白质点只存在于OA滑膜FLS;15个蛋白质点只存在于RA滑膜FLS.选择54个蛋白质点进行MS,共成功鉴定34个蛋白质点.其中包括在OA中表达上升的人异天冬氨酸甲基转移酶(PIMT)和PIR(PIR),仅在RA中表达的硫氧还蛋白1(TRX-1)这三个与关节滑膜增生相关的蛋白质.结论 PIMT和PIR在RA中表达降低及TRX-1在RA中表达升高可能是RA关节滑膜增生,引起关节软骨破坏的原因之一.
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急性心肌梗死患者血清代谢物谱的筛选研究
目的 分析急性心肌梗死(AMI)患者血清代谢轮廓,寻找早期诊断急性心肌梗死的代谢指标.方法 病例对照研究.收集2011年5月至2012年3月天津市第三中心医院住院确诊的AMI患者42例及同期体检的健康成人35名采用超高效液相色谱与质谱联用(UPLC-MS)代谢组学研究平台筛选特征代谢物,利用SPSS17.0软件进行统计分析,同时利用ROC曲线对特征代谢物的临床诊断效能进行评估.结果 构建了“急性心肌梗死患者-健康对照组”的主成分分析(R2X=75.6％,Q2 =39.7％)及正交偏小二乘代谢轮廓分析模型(R2Y=97.8％,Q2=97.0％)并鉴定了19个差异代谢物,其中甘油磷脂类物质在AMI患者血清中均呈下调趋势,而鞘磷脂类物质大部分均呈上调趋势,鉴定出的代谢物的曲线下面积均大于0.8,验证结果模型的预测准确度达到100％.结论 利用代谢轮廓分析方法所找到的特征代谢物具有很好的区分AMI患者与健康人群的能力,可以作为潜在的疾病诊断标志物及新治疗靶点在临床领域做进一步研究.
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应用Vitek MS质谱检测PSM-mec对医院感染MRSA快速分型
目的 评估Vitek MS质谱快速检测PSM-mec在医院感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分型的应用价值.方法 前瞻性研究.收集天津市第一中心医院2012年6月至2013年12月非重复分离的MRSA 167株和耐甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA) 100株,通过2种SCCmec分型技术检测MRSA的型别,以Vitek MS质谱对所有菌株进行常规鉴定并对菌株获取图谱和Myla结果图谱进行分析,探明不同SCCmec型别MRSA的特征峰谱.结果 167株MRSA的SCCmec型别占比为SCCmec Ⅰ型6株,占3.6％;Ⅱ型10株,占6.0％;SCCmecⅢ型和Ⅲa型共141株,占84.4％;Ⅳ型和Ⅳa型共8株,占4.8％;Ⅴ型2株,占1.2％.SCCmecⅡ、Ⅲ型菌株中分泌delta毒素者(m/z 3 005 ～3 009或m/z 3 037 ～3 056)可检测到PSM-rmec峰谱,位于紧邻m/z 2 500坐标左侧,不分泌delta毒素者和其余型别以及MSSA在该位置无峰谱.结论 Vitek MS质谱对医院感染MRSA能够初步快速分型并预测耐药表型,该技术可辅助常规监测MRSA流行情况,指导临床医生经验用药.
关键词： 交叉感染 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 基因型 细菌毒素类 质谱分析法 -
同位素稀释电感耦合等离子体质谱法测定血清钾
目的 建立同位素稀释电感耦合等离子体质谱法(ID-ICP-MS)测定血清钾的分析方法.方法 方法学建立研究.收集2010年朝阳医院检验科体检血清,制备成不同钾浓度的冰冻混合人血清.血清样品处理前加入待测元素39K的富集同位素41K,1％硝酸将血清准确稀释100倍,选择和优化ICP-MS分析条件后,测定其同位素比值,用内插法计算待测血清39K的浓度.3个不同浓度水平的血清各测定3批,评价该方法的精密度,美国国家标准与技术研究所(NIST)血清标准物质SRM909b-Ⅰ、Ⅱ评价正确度,两份血清加入不同浓度钾标物评价回收率,计算不确定度.结果 血清钾测定的总变异系数CV为0.14％～0.11％；NIST血清标准物质SRM909b水平Ⅰ、Ⅱ的总CV为0.39％～0.32％,相对偏差分别为+0.12％、+0.49％.两份血清钾测定回收率为99.68％ ～100.12％.结论 成功建立的血清钾同位素稀释电感耦合等离子体质谱法精密度高、准确性好,是准确定量测定无机元素的理想方法.
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液相色谱串联质谱检测尿醛固酮方法的建立
目的 建立一种液相色谱串联质谱检测尿醛固酮(Aldosterone,ALD)的方法.方法 方法学建立及评价.首先将尿液样本置于37 ℃温箱酸解,然后加入氘代同位素内标,再加入硫酸锌除蛋白,离心取上清,使用阴离子固相柱萃取,收集洗脱液,上机检测.在负离子模式下,经电喷雾电离,多离子反应监测模式下检测尿ALD.评价该方法的线性、精密度、回收率和检测限.通过检测80例患者24 h尿和血清ALD的含量,评估血尿ALD的相关性.应用本研究建立的LC-MS/MS法和索灵化学发光免疫法检测70例24 h尿标本,比较两种方法的相关性.招募114名表观健康人,研究尿ALD在表观健康人群中的分布.结果 该方法的分析时间为4.5 min,在2～1 000 pg/ml范围内线性良好(R2＞0.990); ALD 的重复性和实验室内不精密度分别小于4.0%和5.0%;回收率结果为100.4%～108.2%;定量限为1 pg/ml.血ALD和尿ALD的检测结果呈正相关,相关系数r为0.396.化学发光免疫法(CLIA)与LC-MS/MS法共同测定70例24 h尿ALD的线性方程为:Y＝0.998 8X+0.046 4(r＝0.991). LC-MS/MS法获得尿ALD在表观健康人群分布(P2.5～P97.5)为0.74～17.09 μg/24 h.结论 本研究建立了一种液相色谱串联质谱法测定尿ALD的方法并优化了尿ALD的酸解方法,该方法性能满足临床需求,且简便、快速、特异,可用于临床辅助诊断原发性醛固酮增多症.
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迎接质谱技术进入检验医学领域
质谱技术因具有高灵敏度、高分辨率、高准确性、检测范围宽等特性在临床诊疗中得到日益广泛地使用.质谱检测技术进入临床医学检验仍面临较多问题.借鉴国外对质谱技术的发展和管理模式,我们应该建立一套适应我国临床医学检验实验室质谱发展与管理的模式.
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液质联用在临床检验:为何?是何?如何?
质谱技术在未来精准医学时代挑战和机遇并存.我们力图解读什么是临床质谱方法,阐述其基本框架和生命周期,结合CLSI指南和克里夫兰医疗中心临床质谱实验室的实践经验,总结建立临床液质联用方法的要点.在此基础上,对液质联用技术在临床诊断中遇到的挑战进行剖析,并与研究型质谱做简单对比,分析为何质谱应用难于从研究型跨界服务于临床诊断.我们进一步剖析临床质谱在中国应用普及所面临的挑战及已作出的努力.后展望液质联用在临床诊断的趋势和方向.
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基于质谱的蛋白质组学诊断所面临的挑战
过去的几年中,基于质谱技术的蛋白质组学分析方法已经成为寻找新的疾病标志物的重要手段之一.由于它具有高灵敏度、高通量、快速以及能和生物信息学技术结合同时快速分析大量的蛋白质或多肽的优点,使之成为临床研究的有力工具.然而,近的一些研究显示,因为这项技术的重复性和数据统计分析等方面的不足而受到了争议.本文介绍了采用该方法进行标志物筛查时在实验设计、质谱技术以及数据分析等方面面临的一些挑战,探讨其在血清或血浆分析中的应用.
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同位素稀释质谱法在甾体激素测定中的应用
同位素稀释质谱法是目前公认的可准确测量小分子化合物的分析原理.该法精密、准确,具有高度的特异性,适于测定甾体激素这一类浓度极低、干扰多的项目.目前国内外发表的相关参考方法都是基于这一分析原理.本文就同位素稀释质谱法在甾体激素测定中的应用进行了归纳和分析.
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关注糖尿病肾病的蛋白质组学研究进展
糖尿病肾病是导致终末期肾病的主要病因之一。近年来基于质谱的蛋白质组学技术在发现糖尿病肾病生物标志物的研究中发挥了重要作用，并且新型多标志物联合可以帮助鉴定高风险患者并给予积极的治疗指导。（中华检验医学杂志，2016，39：885－887）
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质谱技术在肝脏疾病检测中的研究进展
近年来随着质谱技术的发展,越来越多的临床实验室开始采用质谱技术进行临床检测.肝脏疾病是临床常见的消化道疾病,严重危害人们的身体健康.质谱技术可用于病毒性肝病病原体的检测和分型,以及肝硬化和肝癌等慢性肝病的血清学标志物鉴定.
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感染性疾病个性化实验室诊断时代的到来:质谱技术的深入开发与临床应用
感染性疾病的精准诊疗关乎患者生命,其中快速、高效、准确且全面的实验室检测扮演了重要角色.质谱技术的出现,在临床实验室生物大分子检测中掀起了一场革命.而对于感染性疾病实验室诊断的贡献,则以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)为突出.若对MALDI-TOF MS的原理及微生物专业知识了解足够全面,不但能够发现一些容易忽视的细节,更能对其进行深入开发、拓展应用,使之锦上添花.另一方面囊括MALDI-TOF MS、液相色谱-质谱(LC-MS)及气相色谱-质谱(GC-MS)的全息质谱也就成为了临床实验室的终极理想.多种质谱技术的整合形成优势互补,应用范围更广泛,不仅可以精确诊断病原微生物,还可实现感染相关致病标志物、代谢产物的检测,以获得病原体及宿主双向的信息,使得感染性疾病的实验室诊断更为全面、精准、个性化.全息质谱的应用使感染性疾病的诊断突破传统方法,在体现快速准确的同时,反映了科学技术水平与研究能力的提升.
