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三水白虎汤含药血清抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞迁移的临床研究
目的 探讨三水白虎汤(SSBH)含药血清抑制类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)迁移的临床研究.方法 利用组织块培养法来收集RA滑膜FLS,并进行体外传代培养,将20只大鼠随机分为对照组与研究组,各10只.选取3-6代细胞分别加入对照组(生理盐水制备的血清培养)与研究组(SSBH含药血清培养),在培养72 h后,提取细胞总蛋白,通过双向凝胶电泳(2-DE)将细胞总蛋白进行分离,利用凝胶经银染显色与图像数据来识别差异细胞蛋白的位点,随后对差异细胞蛋白的位点进行鉴别.结果 两组滑膜成纤维细胞蛋白的双向凝胶电泳图谱都出现差异细胞蛋白质点,在差异蛋白表达量超过3倍的中蛋白质点中选择26个差异细胞蛋白质点实施质谱分析,总共鉴定出24种上升的白细胞介素-1(IL-1)受体拮抗蛋白.研究组SSBH含药血清对RA-FLS分泌IL-1、白细胞介素-2(IL-2)影响优于对照组(P＜0.05).结论 SSBH可以通过类风湿关节炎患者FLS中的IL-1受体拮抗蛋白来抑制滑膜增生,同时也是治疗类风湿关节炎的一种药理机制.
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噬菌体随机十二肽库淘选三水白虎汤作用于类风湿关节炎滑膜细胞的靶点研究
目的:利用噬菌体随机十二肽库淘选出与三水白虎汤(SSBH)作用的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs)特异性结合的多肽,寻找SSBH治疗类风湿关节炎的蛋白靶点.方法:以SSBH处理过的RASFs为靶细胞,生理盐水(NS)处理的RASFs为吸附细胞,全细胞差减筛选法对噬菌体十二肽库进行3轮淘选,挑取单克隆、扩增纯化噬菌体,并初步鉴定噬菌体克隆的亲和力,阳性克隆测序后进行生物学分析.结果:3轮淘选后,随机挑选32个噬菌体克隆进行DNA序列分析,展示SGVYKVAYDWQH十二肽的噬菌体被富集约为56％ (18/32).结论:从噬菌体肽库筛选到SSBH作用RASFs的特异性结合短肽,并分析出相关作用蛋白.
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三水白虎汤含药血清抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞迁移的初步研究
目的 初步探讨三水白虎汤(SSBH)对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(SFs)侵袭迁移的影响和可能的机制,为后续研究奠定基础.方法 组织块培养法获得类风湿关节炎患者膝关节SFs并传代,培养3～5代进行实验.实验设置3组,即:生理盐水(NS)空白血清对照组,10％三水白虎汤含药血清组,sp600125(c-Jun氨基末端激酶信号通路抑制剂)药物血清组.细胞划痕实验观察RASFs在不同时间点的迁移状况并计算迁移率,Transwell实验分不同时间点观察侵袭情况并统计RASFs对小室膜的穿透数量;Western blot检测各组细胞整合素-β1(integrin-β1)的表达水平.结果 划痕实验显示10％三水白虎汤组、sp600125组划痕后细胞迁移率较生理盐水组明显下降(P＜0.05),且sp600125组的抑制作用强于三水白虎汤组(P＜0.05);Transwell实验显示药物组穿过小室膜的细胞数明显减少(P＜0.05),sp600125组的透膜细胞数明显少于三水白虎汤组(P＜0.05);三水白虎汤组integrins-β1表达量明显下调(P＜0.05),sp600125组与生理盐水组相比差异无显著性(P＞0.05).结论 三水白虎汤对RASFs的侵润迁移有一定的抑制作用,机制可能与下调细胞迁移相关蛋白和抑制JNK信号通路有关.
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三水白虎汤对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖的蛋白质组学影响
目的 探讨三水白虎汤(SSBH)对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)增殖的蛋白质组学影响.方法 组织块培养法收集RA患者的关节FLS,体外传代培养,取3～6代细胞,分别加入SSBH含药血清培养(SSBH组)及加入生理盐水制备的血清培养(对照组).培养72 h后提取细胞总蛋白,用双向凝胶电泳(2-DE)分离细胞总蛋白,凝胶经银染显色和图像数据分析识别差异蛋白位点；基质辅助激光解析电离飞行时间质谱对差异蛋白位点进行鉴定.结果 两组FLS蛋白2-DE图谱均出现差异蛋白质点.在差异蛋白表达量超过3倍的蛋白质点中,选取27个差异蛋白位点进行质谱分析,共鉴定出包括表达上升的IL-1受体拮抗蛋白等25种蛋白质.结论 SSBH可能通过上调RA患者FLS中IL-1受体拮抗蛋白来抑制滑膜增生,这可能是该方剂治疗RA的药理作用机制之一.
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三水白虎汤对胶原诱导性关节炎TNF-α、MMP-1、MMP-3表达的影响
目的 探讨三水白虎汤对胶原诱导性关节炎模型关节滑膜组织中TNF-α、MMP-1、MMP-3 mR-NA表达的影响.方法 胶原诱导性关节炎模型鼠33只随机分为3组,分别给予生理盐水、三水白虎汤水煎剂、来氟米特灌胃治疗.灌胃30天后处死大鼠,用原位杂交的方法 探测关节局部组织中MMP-1、MMP-3 mRaqA的表达;用ELISA法检测血清TNF-α含量.结果 三水白虎汤组、来氟米特组血清TNF-α的含量显著低于对照组(P<0.05).SSBH组MMP-1、MMP-3mRNA的表达强度和面积均显著低于对照组(P<0.05).结论 三水白虎汤对胶原诱导性关节炎组织中TNF-α、MMP-1、MMP-3 mRNA的表达有一定的抑制作用.
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三水白虎汤治疗活动期类风湿关节炎59例临床观察
目的:观察三水白虎汤治疗活动期类风湿关节炎的临床疗效.方法:采用队列研究的方法,将纳入的117例类风湿关节炎热痹证型患者随机分为2组,对照组58例给予来弗米特治疗,治疗组在对照组基础上加服三水白虎汤.疗程为1年.结果:治疗组起效快于对照组,能较快控制热痹征象.2组患者在治疗2月、6月以及1年后,其炎症指标如自觉痛评分、疼痛关节数、肿胀关节数等均显著改善(P＜0.05).对照组治疗1年后与6月相比,疼痛关节数、IgG-RF、CCP-Ab等指标改善不明显.而治疗组不存在这种治疗上的"平台期",其自觉痛评分、疼痛关节数、肿胀关节数、HAQ、CRP、IgC-RF在治疗1年后,其改善程度均优于对照组(P＜0.05).治疗组不良反应也轻于对照组.结论:三水白虎汤可以增强治疗活动期类风湿关节炎的临床疗效,有助于控制类风湿关节炎局部炎症,同时还可以减轻单纯用来弗米特的不良反应.
