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雷公藤内酯醇诱导MUTZ-1细胞凋亡及其机制研究
为了探讨雷公藤内酯醇(triptolide)诱导骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系MUTZ-1细胞凋亡及其作用机制,将triptolide与MUTZ-1细胞共育,采用MTT法观察细胞生长,DNA片段化分析和Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR及Western blot方法检测基因和蛋白质水平.结果表明:triptolide对MUTZ-1细胞具有明显的生长抑制作用,呈量效与时效关系,24小时半数抑制率(IC50)为55.06ng/ml;triptolide能诱导MUTZ-1细胞DNA断裂产生DNAladder,且能诱导MUTZ-1细胞磷脂酰丝氨酸转位,其发生率随药物浓度增加而增加;triptolide作用于MUTZ-1细胞12小时导致caspase-3激活,PARP酶解及c-IAP2 mRNA表达水平下调,凋亡率与caspase-3原酶及c-IAP2表达量呈负相关(r=-0.907,P=0.000;r=-0.919,P=0.000).结论:triptolide能通过诱导凋亡抑制MUTZ-1细胞的生长,triptolide诱导MUTZ-1细胞凋亡是通过caspase-3激活及PARP酶解所介导的,且caspase-3的激活可能与凋亡蛋白抑制因子c-IAP2的下调有关.
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c-IAP1、c-IAP2和Smac与凋亡的关系及其在白血病和恶性肿瘤中的表达
细胞凋亡是一种由基因控制的自主性有序死亡,对保持组织的健康和正常生长有十分重要意义,细胞凋亡受抑,将导致细胞生存期延长,有利于转化突变的细胞生长积聚,终可致肿瘤的产生.已知的细胞凋亡存在3条通路:死亡受体通路、线粒体通路和内质网通路.3条通路是相互密切关联的,它们和P53、C-myc、bcl-2家族、Smac、抑制凋亡蛋白家族(IAPs)及胞内信号转导等通路构成一个复杂的网络对凋亡进行精细的调控.IAPs是一类具有抗凋亡活性的蛋白,是近年来发现的一类细胞内凋亡抑制蛋白,其在进化中相当保守,初是在杆状病毒中发现的,它可以抑制病毒感染的细胞死亡,同时可以增强病毒复制.
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c-IAP1、c-IAP2和Beclin-1在胃癌组织中的研究进展
胃癌是严重威胁人类健康的一种常见的恶性肿瘤,迄今为止,其病因和发病机制尚完全明确.众多研究表明,它的发生和发展是多因素、多步骤的复杂过程.逃避细胞死亡是恶性肿瘤发生的一种重要机制,也是当前肿瘤治疗过程中的关键阻力[1].细胞凋亡和自噬生细胞死亡是程序性细胞死亡的两种重要形式[2],近年来成为肿瘤研究中的热点和重点.c-IAP1、c-IAP2是人类凋亡抑制蛋白IAPs(inhibitor of apoptotic proteins)家族中的两个重要成员,广泛表达于多种恶性肿瘤细胞中.
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人类免疫缺陷病毒-1vpr基因沉默后细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达研究
目的 通过RNA干扰HIV-1vpr基因的表达后观察凋亡相关蛋白c-凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)2的表达情况,同时检测各组Jurkat细胞的凋亡情况.方法 将空载体(NC组)、HIV1 vpr质粒(vpr组)、vpr+磷酸化RNAT-U6.1/Neo-vpP56质粒(Si56组)、vpr+磷酸化RNAT-U6.1/Neo-vpr-160质粒(Si160组)分别转染Jurkat细胞并培养48 h,分别进行总RNA、蛋白提取,利用实时PCR检测vpr基因的表达,证实质粒转染成功,以实时PCR和蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白人类内源性抗凋亡蛋白(inhibitor of apoptosisprotein 2 c-IAP2)的表达情况,流式细胞仪检测各组Jurkat细胞的凋亡情况.结果 vpr组、Si56组、Si160组均可检测到vpr基因的表达,与vpr组比较,Si56组、Si160组HIV-1vpr基因表达的mRNA水平均出现明显降低,分别下降82.2％、87.2％,差异均有统计学意义(均P＜0.05).与NC组比较,vpr组、Si56组及Si160组c-IAP2基因表达的mRNA水平明显升高,分别为NC组的3.75、2.49、2.65倍;但Si56组、Si160组c-IAP2基因表达的mRNA水平均低于vpr组,分别下降33.7％和29.5％;蛋白质印迹法检测显示,c-IAP2蛋白表达水平与mRNA结果一致,其中Si56组、Si160组c-IAP2蛋白表达水平比vpr组分别下降42.2％和46.8％(均P＜0.05).NC组、vpr组、Si56组和Si160组均可检测到Jurkat细胞凋亡,与NC组比较,vpr组细胞凋亡率明显升高,为NC组的1.76倍,而Si56组和Si160组细胞凋亡率与NC组比较差异无统计学意义(均P＞0.05);与vpr组比较,Si56组和Si160组细胞凋亡率明显降低,分别为19.26％和18.05％ (P＜0.05).结论 通过沉默HIV-1vpr基因可下调Jurkat细胞c-IAP2基因的转录和蛋白表达水平,抑制Jurkat细胞的凋亡.
关键词： HIV-1 细胞凋亡 RNA干扰 HIV-1vpr基因 c-IAP2 -
细胞凋亡抑制蛋白-2研究进展
细胞凋亡抑制蛋白-2(inhibitor of apoptosis protein-2)基因是细胞凋亡抑制蛋白(IAPs)家族重要组成部分,属于抗凋亡基因.编码细胞凋亡抑制蛋白-2,可与多种细胞因子作用,抑制细胞凋亡.研究提示细胞凋亡抑制蛋白-2在诊断肿瘤、判断预后、选择治疗方法以及保护正常细胞方面具有重要作用.本文对近年来C-IAP2的研究作一综述.
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NF-κBp65,c-IAP2,Caspase-3在宫颈癌中的表达及意义
目的:探讨核因子-κB(NF-κB)p65、细胞凋亡抑制蛋白-2(c-IAP2)和半胱氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)在宫颈癌组织中表达的意义.方法:应用免疫组织化学方法检测NF-κBp65、c-IAP2和Caspase-3在44例宫颈癌、50例宫颈上皮内瘤变(CIN)及30例正常宫颈组织中的表达情况.结果:宫颈癌和CIN中NF-κBp65,c-IAP2的阳性表达率高于正常宫颈组织(P＜0.05),而Caspase-3的表达率低于正常宫颈组织(P＜0.05),3个指标在CIN Ⅰ和正常宫颈组织中的表达无差异(P＞0.05),在CINⅡ～Ⅲ中NF-κBp65,cIAP2的表达高于正常宫颈组织(P＜0.05),而Caspase-3的表达低于正常宫颈组织(P＜0.05);NF-κBp65,C-IAP2,Caspase-3在宫颈癌的不同临床分期中的表达无差异(P＞0.05),NF-κBp65,c-IAP2在低分化和有淋巴结转移组宫颈癌组织中的表达高于高分化组织和无淋巴结转移组(P＜0.05),而Caspase-3的表达低于高分化组织和无淋巴结转移组(P＜0.05);NF-κBp65与c-IAP2在宫颈癌中的表达呈正相关,NF-κBp65,c-IAP2在宫颈癌中的表达与Caspase-3的表达呈负相关.结论:宫颈癌中NF-κBp65、c-IAP2高表达而Caspase-3低表达可能和宫颈癌的发生发展有关.
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NF-κB,c-IAP2,Caspase-3在宫颈癌中的研究进展
目的 介绍NF-κB,c-IAP2,Caspase-3在宫颈癌和其他恶性肿瘤中的研究情况.方法 以国内外发表的文献为依据,综述NF-κB,c-IAP2,Caspase-3在宫颈癌和其他恶性肿瘤细胞中的研究情况.结果 NF-κB在宫颈癌中存在组成性激活,主要是抗细胞凋亡和保护细胞;c-IAP2基因是细胞凋亡抑制蛋白(IAPs)家族的重要组成部分,属于抗凋亡基因,在多种肿瘤细胞中表达;Caspase-3是Caspase家族中重要的成员,与真核细胞凋亡密切相关,还参与细胞因子的成熟、细胞生长和分化,在宫颈癌中表达降低;蛋白活化的NF-κB诱导c-IAP2基因表达,从而使宫颈癌细胞增殖,IAP主要通过抑制Caspase-3,7等关键酶的活性而发挥作用.结论 NF-κB,c-IAP2 ,Caspase-3在宫颈癌和其他恶性肿瘤中均有表达,怎样调控三者之间的活性表达来达到根治宫颈癌的目的,值得进一步研究.
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凋亡调控因子c-IAP1,c-IAP2和Caspase-3在大肠肿瘤中的表达及意义
目的:探讨凋亡调控因子c-IAP1,c-IAP2和Caspase-3在大肠肿瘤中的表达,了解其在大肠肿瘤的发生发展中的作用.方法:收集我院2002年至2004年手术后经病理证实并有完整随访资料的大肠腺癌标本45例,同时收集外伤后手术切除的正常大肠组织为正常对照,采用免疫组化SP法和半定量积分法分别检测c-IAP1,c-IAP2和Caspase-3在大肠腺癌、大肠腺瘤及正常大肠黏膜中的表达.结果:c-IAP1,c-IAP2和Caspase-3的阳性表达率在正常大肠黏膜组与大肠腺瘤组、正常大肠黏膜组与大肠腺癌组、大肠腺瘤组与大肠腺癌组之间均有显著性差异(P＜0.05).c-IAP1与Caspase-3在大肠腺癌中的表达呈负相关(r=-0.321,P＜0.05).c-IAP2和Caspase-3在大肠腺癌中表达无相关性,(P＞0.05,r=-0.164).c-IAP1和c-IAP2在大肠腺癌中的表达无相关性.(P＞0.05,r=0.066).结论:凋亡受阻在大肠肿瘤形成过程中起着一定的作用;c-IAP1,c-IAP2可能参与了大肠腺瘤和腺癌的发生和发展,并在一定程度上反映大肠腺癌的恶性程度;凋亡抑制蛋白c-IAP1,c-IAP2的表达与患者的性别、年龄、5年生存率、肿瘤部位、组织学类型、有无淋巴结转移及Dukes分期等因素无关.
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Livin和c-IAP2在新疆维吾尔族食管癌中的表达
目的:探讨ivin和c-IAP2基因在新疆维吾尔族食管癌组织中的表达及其与临床病理因素的关系.方法:分别采用RT-PCR和Western blot方法检测Livin和c-IAP2 mRNA和蛋白在60例食管癌组织及其相应癌旁正常组织中的表达,并分析Livin、cIAP2 mRNA的表达与临床病理因素的关系.结果:Livin和c-IAP2 mRNA在60例癌组织中的阳性表达率均为90.0％ (54/60),在60例癌旁正常组织中表达的阳性率均为56.7％ (34/60),癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P＜0.01)；且Livin和c-IAP2 mRNA阳性表达分别与淋巴结转移和TNM分期相关(P均＜0.05),Western blot检测结果显示在60例癌组织标本中Livin和c-IAP2蛋白的阳性表达率依次为86.67％ (52/60)和68.33％ (41/60),均明显高于相应癌旁正常组织,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:Livin和c-LAP2基因的表达可能与新疆维吾尔族食管癌的发生、发展有关.
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三氧化二砷诱导A375细胞凋亡过程中的信号传导途径研究
背景与目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)在诱导人黑素瘤A375细胞凋亡中,对NE-κB、C-IAP2以及Caspase-3信号传导途径的影响.材料与方法:将As2O3,和Caspase-3抑制剂Ae-devd-cho单独或联合作用A375细胞后,采用Western blot法检测NF-κB p65和Caspase-3表达水平,免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的表达,RT-PCR法检测GIAP2 mRNA表达.结果:5.0μmol/LAs2O3单独处理A375细胞12 h和24 h以及As203联合Ac-devd-cho处理24 h组,随着As2O3作用时间的延长,Caspase-3激活蛋白增多、NF-κB p65核蛋白和C-IAP2mRNA表达下降,Ac-devd-cho能够阻断Caspase-3蛋白的活化,而对NF-κBp 65核蛋白和C-IAP2 mRNA表达无明显影响;免疫组织化学法也显示,Caspase-3激活型蛋白随着AsO3作用时间的延长而增高,但能被Ae-devd-cho阻断.结论:As2O3可诱导A375细胞凋亡,能抑制A375细胞胞NF-κB、C-IAP2基因的表达,且不被Ac-devd-cho所阻断;As2O3能活化Caspase-3蛋白表达,而此效应可被Ao-devd-cho阻断.推测NF-gB-C-LAP2-Caspase-3通路可能是As2O3诱导A375细胞凋亡的途径之一.
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三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡过程中ROS、NF-kB和C-IAP2的变化
背景与目的:探讨As2O3(arsenic trioxide,ATO)对HL-60细胞凋亡过程中细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、NF-kB(nuclear factor kappa B).及GIAP2(cellular inhibitor of apoptosis proteins 2)的影响.材料与方法:以7.5 umol L As2O3单独应用及与500 umol L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-Lcysteine,NAC)联合作用于HL-60细胞12、24 h后,流式细胞术检测HL-60细胞ROS的产生量;Western blot法检测NF-kB P65核蛋白的变化情况;半定量RT-PCR法检测C-IAP2的相对表达量.结果:7.5 umol L的As2O3作用HL-60细胞12、24 h后细胞内ROS的生成增加,与阴性对照比较,差异具有统计学意义(P<0.05).NF-kB P65核蛋白的相对含量分别为49.3%±4.4%和23.1%±2.1%,C-IAP2的相对表达分别为72.9%±5.8%和59.3%±4.4%,较对照组均明显降低(P<0.05).500 umol L NAC和7.5 umol L As2O3共同作用HL-60细胞12、24 h后细胞ROS生成量相对减少,与AS2O3单独作用组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);NF-kB P65核蛋白的相对含量分别为65.4%±4.9%和37.1%±3.4%,C-IAP2的相对表达量分别为81.1%±5.8%和73.7%±4.9%.较As2O3单独作用组均明显增加(P<0.05).结论:As2O3诱导HL-60细胞凋亡过程中,细胞内ROS生成增加,抑制NF-kB活性,同时下调其靶基因C-IAP2等的表达;NAC能阻断As2O3诱导HL-60细胞凋亡过程中ROS的生成,部分阻断了NF-kB活性的抑制.
