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AKT是骨髓增殖性肿瘤的治疗靶点
目的:研究AKT抑制剂对骨髓增殖性肿瘤(MPN)的治疗效果及其意义.方法:逆转录病毒感染介导MPLW515L过表达,构建MPN细胞模型.蛋白印迹实验检测信号通路的组成型活化.AKT信号通路抑制剂处理细胞并行细胞计数法,应用克隆形成单位试验检测MPN细胞的增殖.Annexin V染色检测细胞凋亡,BrdU法检测细胞周期.应用动物生存实验分析AKT信号通路抑制剂对MPN小鼠模型存活率的影响.结果:MPL W515L过表达可以显著活化PI3K/AKT、JAK/STAT等信号通路.阻滞上述信号通路能够抑制MPN细胞模型的增殖、促进凋亡,其中以PI3K/AKT抑制剂效果显著,并使G1ME细胞处于有丝分裂S期的比例减少、处于G/Go期的比例升高,显示出细胞周期阻滞功能.同时,在MPN病人的血液样本中,阻滞PI3 K/AKT也能够抑制骨髓祖细胞的克隆形成单位,并显著增加动物模型的存活率.结论:AKT是骨髓增殖性肿瘤的治疗靶点.
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乳宁Ⅱ号方对HER-2过表达型乳腺癌PI3K/Akt信号通路的作用机制研究
目的:采用乳宁Ⅱ号方血清干预人乳腺癌细胞株MDA-MB-453细胞,观察中药调控乳腺癌细胞HER-2过表达后对PI3 K/Akt通路的影响,探讨乳宁Ⅱ号方治疗HER-2过表达型乳腺癌的作用靶点.方法:选用雌性Wistar大鼠分组给药制备含药血清,给药血清干预MDA-MB-453细胞.采用Western blot技术检测中药血清干预乳腺癌细胞后HER-2、p-HER-2表达以及PI3K/Akt通路相关蛋白p-Akt、Bad表达.结果:Western blot结果显示,联合组HER-2、p-HER-2灰度比较对照组明显降低,但HER-2、p-HER-2表达含量差异无统计学意义(P＞0.05);中药组、西药组、联合组p-Akt主条带灰度比较对照组显著降低,表达含量差异有统计学意义(P＜0.05).联合组Bad灰度比较对照组显著降低,Bad表达含量差异有统计学意义(P＜0.05).结论:实验各用药组p-Akt蛋白表达含量均较对照组显著降低,表明用药组能够通过抑制Akt蛋白的磷酸化水平发挥抗乳腺癌的作用.联合组Bad表达含量明显较对照组明显升高,表明用药后可通过诱导调亡蛋白的变化引起细胞凋亡.
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西地那非衍生物SDN447对大鼠前列腺增生的影响
目的：研究西地那非衍生物SDN447，即3-（6，7-二氢-1-甲基-7-氧代-3-丙基-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-5-基）-N-（正丁氧羰基）苯磺酰胺的药代动力学特征以及对去势后丙酸睾酮诱导大鼠前列腺增生模型的影响。方法：SD雄性大鼠灌胃给药，液相色谱串联质谱分析给药后0．2、0．5、1、1．5、2、4、6和8 h大鼠血浆中SDN447浓度，用Winnonlin 6．3软件计算药代动力学参数。SD雄性大鼠去势后皮下注射丙酸睾酮（5 mg·kg－1·d－1）构建前列腺增生模型，灌胃给药。40 d后，检测大鼠前列腺湿重、前列腺指数，观察前列腺组织形态学变化。结果：药代动力学结果表明， SDN447相较于西地那非半衰期延长。与模型组比较，SDN447给药组大鼠前列腺湿重和前列腺指数明显降低（P＜0．05）。HE染色结果表明，SDN447给药组大鼠前列腺腺上皮乳头和细胞层数较模型组减少。结论：SDN447比西地那非半衰期延长，可以显著抑制大鼠前列腺增生。
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抵抗素促进子宫内膜癌细胞生长作用机制的探讨
目的：：研究抵抗素对子宫内膜癌细胞增殖的影响及其对子宫内膜癌细胞PI3 K/Akt信号传导通路的作用。方法：CCK-8法检测不同浓度抵抗素(0 ng/ml、10 ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml)对Ishikawa 和 KLE 两种子宫内膜癌细胞系增殖的影响。Western blot法检测不同浓度抵抗素作用下PI3 K/Akt信号通路的变化及PI3 K/Akt信号通路抑制剂对抵抗素活化PI3 K/Akt信号通路作用的影响。结果：抵抗素能促进两种子宫内膜癌细胞系Ishikawa和KLE的生长，并呈时间和浓度依赖性。抵抗素可促进两种子宫内膜癌细胞系中PI3 K/Akt信号通路的激活。 PI3 K/Akt信号通路抑制剂LY29004可减弱抵抗素诱导的Akt磷酸化水平。结论：抵抗素能促进子宫内膜癌细胞增殖，这种作用可通过激活PI3 K/Akt信号通路来实现。
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联合抑制Notch和PI3K/Akt通路对胃癌细胞增殖的影响
目的 初步探讨Notch和PI3K/Akt信号通路在胃癌细胞SGC-7901中是否存在交叉作用.方法 应用Notch信号通路的抑制剂GSI和PI3K/Akt信号通路的抑制剂LY294002分别单独和联合处理体外培养的胃癌SGC-7901细胞,以无药物处理的细胞作为对照组.MTT法检测癌细胞的增殖抑制率,Western blotting法检测磷酸化Akt(p-Akt)和Notch-1蛋白的表达水平.结果 GSI能抑制癌细胞的增殖(53.56±2.04)％,并降低蛋白Notch-1的表达水平,而p-Akt的表达水平则较对照组增加.LY294002能抑制癌细胞的增殖(42.93±1.64)％,并降低p-Akt的表达水平,Notch-1水平则无明显变化,两种信号通路的抑制剂联合应用后能明显降低癌细胞的增殖率[(86.01±2.02)％,P=0.00],p-Akt和Notch-1蛋白的表达水平均降低.结论 在抑制Notch信号通路的基础上,抑制PI3K/Akt通路可进一步增强抑制Notch通路的抗肿瘤增殖效果,并提示PI3K/Akt和Notch两条信号通路在胃癌SGC-7901细胞中存在交叉作用.
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PI3K/Akt通路在硫化氢后处理保护心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用
目的 探讨硫化氢后处理对原代培养的新生大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及可能机制.方法 以硫氢化钠(NaHS)作为外源性硫化氢供体.原代培养新生大鼠的心肌细胞随机分为5组:①正常对照组；②缺氧复氧组（hypoxia-reoxygenation,HR组）；③二甲基亚砜组（dimethyl sulfoxide,DMSO组）；④硫化氢后处理组(hydrogen sulfide post-conditioning,H2S组)；⑤Y294002+ H2S后处理组（LY+ H2S组）.分别于缺氧前和复氧2h检测各组的心肌细胞存活率、培养液中CK和LDH的活性；复氧末,用流式细胞学技术检测各组心肌细胞凋亡情况；Westemblot检测HIF-1α、p-Akt与Akt蛋白的表达情况.结果通过比较可知,复氧2h时,H2S组心肌细胞存活率较HR组升高显著[(71.55±1.46)％vs(62.03±1.29)％,P＜0.01],CK、LDH活性以及心肌细胞凋亡率明显降低[(244.99 ±21.38) U/L vs(329.53±26.14) U/L,(371.64±18.62)U/L vs(427.69±13.25) U/L,( 10.37±1.51)％ vs(17.38±2.04)％,P＜0.01]；同时,HIF-1α和p-Akt蛋白表达水平明显升高[(63.93±4.64)％ vs(41.82±6.14)％,(62.59±2.11)％vs(41.04±4.01)％,P＜0.01].然而,在H2S后处理同时加入PI3 K/Akt信号通路特异性抑制剂LY294002后,与H2S组相比,LY+ H2S组心肌细胞存活率降低明显(63.65±2.01)％,CK、LDH活性以及心肌细胞凋亡率升高显著[(307.80±21.68) U/L,（421.51±15.95）U/L,(15.17±1.56)％,P＜0.01]；HIF-1α和p-Akt蛋白表达水平亦降低明显[(51.79±4.27)％,(47.42±3.15)％,P＜0.05和P＜0.01].结论 H2S后处理可通过PI3K/Akt信号通路促进HIF-1α表达,从而拮抗心肌细胞的缺氧复氧损伤.
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右归丸对糖尿病视网膜病变大鼠 Pl3 K/Akt 信号通路的影响
目的：探讨“阴中求阳”立法之右归丸对糖尿病视网膜病变大鼠PI3 K/Akt信号通路的影响。方法：SD大鼠80只,随机分组,10只为正常组,余大鼠通过一次性腹腔注射链脲佐菌素溶液(60 mg/kg )联合大鼠玻璃体腔注射VEGF(0.05μg)的方式建立糖尿病视网膜病变增殖期大鼠模型。模型建立成功后,将终成模大鼠随机分为4组：右归丸高中低剂量组、模型组,右归丸高中低剂量组每天给予相应右归丸浓缩液浓度进行灌胃,模型组、正常组每天给予等剂量蒸馏水灌胃。连续灌胃3 mo后,采取SP免疫组织化学、Western-blot法分别观察检测大鼠视网膜组织PI3 K和Akt的表达情况。结果：免疫组织化学观察显示PI3 K和Akt免疫组化染色的阳性表达,在视网膜上均为棕黄色颗粒；正常组PI3 K和Akt表达部分分布于神经节细胞层,内核也有少量表达,呈弱阳性免疫反应；模型组、右归丸各治疗组大鼠视网膜神经节细胞层、内丛状层及内外颗粒层都有阳性表达；与模型组比较,右归丸中、高剂量组PI3 K和Akt表达均减弱,右归丸低剂量组表达减弱不明显；与右归丸低剂量组比较,右归丸中、高剂量组PI3 K和Akt表达减弱；右归丸中、高剂量组表达强弱比较无差异。 Western-blot检测结果显示与正常组比较,模型组、治疗组表达差异有显著统计学意义( P<0.01),模型组、治疗组PI3 K和Akt蛋白表达水平显著升高；与模型组比较,右归丸中、高剂量组表达差异有统计学意义(P<0.05),右归丸中、高剂量组PI3 K和Akt蛋白表达水平均降低,右归丸低剂量组表达差异无统计学意义(P>0.05)；与右归丸低剂量组比较,右归丸中、高剂量组表达差异有统计学意义(P<0.05),右归丸中、高剂量组PI3 K和Akt表达水平下降；右归丸中、高剂量组表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论：基于“阴中求阳”立法之右归丸可以通过影响PI3 K和Akt蛋白表达水平,抑制PI3 K/Akt 信号通路活化,延缓糖尿病视网膜病变的病变进程,为糖尿病视网膜病变防盲治疗提出新的治疗思路与科学依据。
