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对奈韦拉平耐药的HIV-1毒株诱导研究
目的 探讨对NVP耐药的Ⅰ型艾滋病病毒(HIV-1)毒株的诱导方法,获得能够产生连续稳定传代的对NVP高度耐药的HIV-1毒株.方法 MT4细胞中先后加入终浓度为100TCID50的HIV-1实验室毒株89.6与终浓度为10倍IC50的NVP药物溶液,在药物浓度不变的条件下传代,培育HIV-1病毒.提取每代培养液上清病毒RNA,逆转录后使用巢式PCR扩增HIV-1 pol区基因,收集目标片段并进行测序分析.结果 诱导培养所得耐药株由第5代开始与野生株相比,出现NVP IC50变化,倍数约为3倍,培养11代后,变化倍数高达178倍.此外,发生Y181C和Y188Y位点突变.结论 本实验中在体外经诱导所得耐药株对NVP具有较高的耐药性,并可获得稳定传代.
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用于我国新生儿HIV-1感染早期诊断的单管降落巢式三重PCR检测方法的建立
目的 我国面临着艾滋病母婴垂直传播的挑战.发展经济、有效的新生儿HIV-1感染早期诊断方法至关重要.本研究拟结合降落PCR、巢式PCR、多重PCR技术,以期建立一种能够在同一个PCR反应体系中同时扩增Env、Gag、Pol三个基因区的单管降落巢式三重PCR方法用于我国新生儿滤纸干血斑样本(DBS)中的HIV-1前病毒DNA检测,并对所建立的方法进行初步评价.方法 样本采自云南、新疆、广西、河南四省HIV-1阳性母亲所生婴儿.用18个DBS样本进行方法优化(感染婴儿及未感染婴儿样本分别9个).采用由重组质粒及8E5细胞制备的涵盖HIV-1各亚型的DNA稀释盘确定方法的亚型适用性及检测下限.采用134个DBS样本进行临床评价(含25个感染婴儿的64个DBS样本及30个未感染婴儿的70个DBS样本).结果 所建方法对HIV-1 A、AE、AG、B、BC、C、D、F、H亚型均可适用,检测下限为3拷贝/PCR反应体系；其临床特异度100％,阳性检出率在3月龄时接近95％、6月龄时可达到100％.结论 本研究建立的方法能够检测出我国新生儿DBS样本中各亚型的HIV-1前病毒DNA,且省时、省力、节约成本,在我国新生儿HIV-1感染的早期诊断领域具备应用潜力.
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北京市2016年新确证未治疗HIV感染者传播性耐药突变研究
目的 分析北京市2016年新确证HIV感染者HIV病毒pol基因传播性耐药突变特征.方法 利用一步法逆转录PCR和巢式PCR扩增感染者体内HIV病毒的pol基因,并对扩增产物进行测序.对得到的序列信息进行分析,分别获得病毒的亚型分布、耐药突变类型和构成.结果 2016年北京市新确证HIV感染者传播性耐药突变比例为4.2％.712名感染者中,CRF01_AE亚型为主要流行亚型,占49.3％,CRF07_BC亚型占28.8％,B亚型占10.3％.结论 与往年的研究相比,北京市未治疗的HIV感染者耐药率有所下降,总体上属于低水平的HIV耐药流行.
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我国HIV-1CRF01_AE毒株辅助受体利用的基因预测可行性研究
目的 探讨HIV-1辅助受体基因预测工具对我国流行的CRF01_AE毒株辅助受体利用的可行性.方法 从北京市、广西壮族自治区、四川省的HIV-1感染者中分离出CRF01_AE毒株22株,利用基因型方法(11/25规则、WebPSSM和geno2pheno)对病毒辅助受体利用情况进行预测,将预测结果与经GHOST细胞系检测的表型实验结果进行比较.结果 经GHOST细胞系检测,22株CRF01_ AE毒株中,4株利用CCR5/CXCR4辅助受体,18株利用CCR5辅助受体.11/25规则预测与表型实验的一致率为86.4％;geno2pheno中,G2p-clinical、NGS-sanger和G2p-colon模型预测与表型实验的一致率分别为95.5％、86.4％和68.2％;WebPSSM中,PSSM-sinsi_B、PSSM-x4r5和PSSM-sinsi_C模型预测与表型实验的一致率分别为86.4％、72.7％和45.5％.结论 对于我国CRF01_AE毒株的HIV-1感染者,在使用辅助受体拮抗剂之前应进行辅助受体利用的预测,Geno2pheno是较准确的辅助受体基因预测工具.
关键词： HIV-1 CRF01_AE毒株 辅助受体 基因预测 -
非核苷类逆转录酶抑制剂耐药研究
随着高效抗逆转录病毒治疗(HAART)的临床应用,患者的生存期显著延长了,抗药性成为日渐突出的问题.NNRTIs的抗药屏障较弱,一类药物耐药突变的出现可能导致整类药物的治疗失败.本文阐述了HIV突变产生的机制,NNRTIs耐药的分子生物学基础,主要突变及其他突变产生后引起的药物相互作用及后果,从而为更好的应用NNRTIs提供理论依据.
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HIV-1表型耐药检测方法的研究进展
高效抗逆转录病毒疗法(HAART)的使用显著提高了HIV感染者和艾滋病人的存活率[1].然而,耐药性的产生却严重降低了治疗效率.因此,采用合适的HIV耐药检测方法,及时了解患者的HIV耐药性,对于治疗艾滋病患者和控制整个艾滋病疫情都有十分重大的意义.目前常用的耐药检测方法有基因型和表型耐药检测.基因型耐药检测是通过检测耐药相关基因序列的改变来判断毒株的耐药情况.由于该方法花费少、简便快捷[2]对检测条件和人员的要求比较低而被广泛应用.但是,基因型检测只是间接的耐药检测方法,只针对已被证实的突变位点,不能检测尚未被发现的潜在耐药突变位点,不能有效的解释多种耐药突变位点的协同、拮抗效应[3].能直接检测HIV耐药的表型耐药检测方法,可以克服以上的不足,更加准确的检测HIV病毒的耐药性.本文主要介绍了HIV-1表型耐药检测的基本原理,常用方法进展以及相对于基因型耐药检测方法的优缺点,并提出对其未来应用的展望.
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非核苷类逆转录酶抑制剂耐药研究
随着高效抗逆转录病毒治疗(HAART)的临床应用,患者的生存期显著延长了,抗药性成为日渐突出的问题.NNRTIs的抗药屏障较弱,一类药物耐药突变的出现可能导致整类药物的治疗失败.本文阐述了HIV突变产生的机制,NNRTIs耐药的分子生物学基础,主要突变及其他突变产生后引起的药物相互作用及后果,从而为更好的应用NNRTIs提供理论依据.
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RNA干扰--治疗HIV感染的新方法
RNA干扰(RNAi)是由双链RNA介导的,特异性沉默内源或外源性同源基因的过程.RNAi的分子生物学特征当前已被用于抗HIV感染和治疗AIDS病.本文就RNAi抗HIV机制和近两年来RNAi在抗HIV-1感染方面的新研究进展及在RNAi实验设计上需注意的问题等方面加以综述.
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浙江省绍兴市46例男男性行为者HIV感染基因特征分析及流行病相关因素分析
目的 了解浙江省绍兴市男男性行为者(MSM)人群中HIV-1感染者的亚型类型和特征.方法 分析2013年1月至2014年7月本地区新确证未经抗病毒治疗的50例MSM感染者样本,采用RT-PCR和nest-PCR方法扩增HIV-1的gag和pol全长基因区,成功扩增46份样品,构建系统进化树分析基因亚型.结果 46份样品中发现CRF01_AE、CRF07_BC和B三种亚型和1株AE、BC重组亚型,各占52.17％、39.13％、6.52％和2.17％.结论 绍兴市HIV-1感染的MSM人群中主要流行的亚型为CRF01_AE和CRF07_BC,该人群感染率高,应加强监测.
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2011年浙江省台州地区新发现HIV-1感染者分子流行病学调查
目的 了解2011年浙江省台州地区新发现艾滋病病毒(HIV)感染者的基本情况以及不同HIV-1基因亚型的分布情况.方法 选取台州市2011年新发现未经抗病毒治疗的HIV感染者抗凝全血标本140份,提取血浆中的病毒RNA,通过RT-PCR扩增HIV-1 pol区的蛋白酶基因全序列与反转录酶基因部分序列,使用HIV-Blast软件判定亚型.结果 2011年台州地区新发现的未经抗病毒治疗的HIV感染者男女性别比为3.24:1,感染者中92.86％为性传播感染,3.57％为注射毒品感染;共检测出5种HIV-1基因亚型,分别为CRF01 _AE、CRF07_BC、CRF08_BC、B和C亚型.性传播感染人群中57.14％为CRF01_AE亚型,注射毒品人群中以CRF07 _BC亚型为主.结论 台州地区艾滋病患者以性传播途径感染为主,HIV-1基因亚型呈多样性特点,CRF01_AE亚型流行于性传播感染人群,而CRF07_BC亚型流行于毒品注射感染人群.
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河南省2006～2008年吸毒人群HIV-1分子流行病学调查
目的 了解河南省吸毒人群HIV-1的亚型分布及流行特征.方法 采集27例HIV-1抗体阳性的吸毒者外周血单个核细胞(PBMC),应用套式聚合酶链反应(PCR)对其核酸样品进行扩增并测序,对其env基因C2-v3段及邻近350～450个核酸序列进行比较分析.结果 27份血样中,6份为BC重组亚型,其中4份为CRF07_BC,2份为CRF08_BC.与国际参考株(CRF07-BC.CN.97.CN54A.CRF08-BC.97CNGX6F.接近.21份为泰国B(B')亚型,与国际参考株RL42接近.结论 河南省吸毒人群感染的HIV-1以在中国中部地区献血人群中流行的泰国B(B')亚型为主,也存在主要以性传播途径感染的人群中流行的BC重组亚型.
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免疫组化实验检测尸体标本的HIV方法研究
[目的]建立一种有效的针对尸体标本进行HIV检测的方法,为口岸实施卫生检疫提供科学依据,预防和控制艾滋病的传入传出,降低其对我国卫生安全将造成的明确或潜在的危害.[方法]应用免疫组化技术对艾滋病患者尸体组织中艾滋病病毒(HIV-1)进行检测,并对采用不同抗体及组织等试验因素进行分析比较.[结果]建立了有效的针对尸体标本的免疫组化检测方法.[结论]免疫组化实验适用于进行尸体标本的HIV检测.
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北京入境人员中HIV-1感染毒株的序列特征和亚型分析
[目的] 了解北京入境人员中HIV-1型感染毒株的分子流行病学特征.[方法] 采集12份确认为HIV-1型感染者的全血,分离单核细胞(PNMC),提取前病毒DNA,通过套式PCR扩增得到12份样品的结果,并对其env C2-V3区进行序列测定和分析.[结果] 得到的样品分别属于HIV-1型的A、B、C亚型和重组AE型流行株.[结论] 北京口岸入境人员中HIV-1型毒株的感染情况比较复杂.提示应加强对入境人员的HIV-1的检测,防止其它亚型的HIV-1型毒株传入我国.
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HIV-1 gp41基因片段亚型多样性研究
[目的]应用HIV-1 env gp41基因分型技术进行出入境HIV感染者HIV-1亚型多样性研究.[方法]采用套式逆转录PCR方法对env gp41和gp120(C2-V3区)进行基因扩增、测序、亚型对比分析,以及应用威斯康星GCG公司软件进行系统树分析和用美国Los Alamos国家实验室的HIV-Blast软件进行序列的亚型鉴定.[结果]对22份样本的gp41和gp120(C2-V3区)的基因亚型进行对比分析,结果表明gp41和gp120(C2-V3区)在亚型上具有一致性.对65例来自中国、非洲、欧洲、美洲和东南亚的出入境HIV-1阳性者进行gp41扩增基因亚型分析,发现有A、B、C、D、F1、G亚型和重组亚型AC、01_AE、02-AG、07_BC、08_BC、06_cpx、18 cpx共计13种亚型,其中重组株占33.8%(22/65).中国籍出入境感染者包括了A、B、C、D、F1、G亚型和重组亚型01_AE、02_AG、07_BC、08_BC在内的10种亚型,其中重组株占25%(7/28).[结论]用gp41替代gp120(C2-V3区)进行HIV-1亚型分析较为理想.出入境人群中HIV感染者感染的HIV毒株几乎包括了全球流行的所有亚型,多种国内少见的亚型已经通过国际旅行者传入国内.
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澜沧江-湄公河次区域HIV-1分子流行病学及跨境传播研究进展
澜沧江-湄公河次区域是全球人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)感染为严重的地区之一,流行多种HIV-1病毒亚型,并且存在跨境传播的现象.该文总结了近年来澜沧江-湄公河次区域各个国家(省)的HIV-1感染情况和流行亚型.另外,对该区域流行的主要HIV-1亚型:B亚型、C亚型和CRF01_AE的跨境传播以及CRF07_BC和CRF08_BC在中国境内的跨省传播进行了介绍,希望能为该区域,特别是云南省和我国HIV-1的病毒起源、传播路线等研究提供一定的参考,也为该地区艾滋病(AIDS)疫情的预防控制提供科学依据.
关键词： 澜沧江-湄公河次区域 HIV-1 分子流行病学 跨境传播 -
云南省景颇族人群HIV-1感染相关基因多态性研究
目的:了解云南省景颇族人群与HIV-1感染相关基因CCR5-△32、CCR2-64I、SDF1-3'A的频率和多态性分布.方法:以云南省113例景颇族人群为研究对象,采用PCR、PCR/RFLP(聚合酶链式反应/限制性片段长度多态性分析)计算基因频率,并用统计学方法进行分析.结果:未发现CCR5-△32突变;CCR2-64I突变基因频率为16.37%;SDF1-3'G/3'G突变基因频率为17.70%,突变基因频率低于汉族.结论:由于未发现CCR5-△32突变和SDF1-3'G/3'G等位基因频率较低,云南省景颇族人群可能比汉族人对HIV-1(包括R5和X4HIV-1)有较大的遗传易感性.
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HIV-1感染男男性行为人群婚姻的相关因素及配偶HIV-1状况
目的 了解广西HIV-1阳性的男男性行为人群(Men Who Have Sex With Men,MSM)婚姻状况的相关因素以及婚内异性配偶HIV-1状况.方法 从艾滋病信息管理系统中筛查在广西随访的所有感染途径为“男男性行为”的个案所有相关信息,进行数据处理和信息核对,用SPSS 16.0软件分析.结果 共1443名MSMHIV-1阳性患者纳入分析.有过婚姻(已婚/离异)446人(30％),未婚997人(70％).Logistic回归分析,选择结婚可能性大的是年龄31 ～40岁(OR=55.100,95％CI:54.260～55.960);职业中农民/民工有婚姻的可能性大(OR=7.671,95％ CI:0.000 ～9.900),政府事业单位工作的有婚姻的可能性小(OR=0.443,95％ CI:0.436 ～0.450),但是政府事业单位工作人数只占9.36％.65.42％感染群体已经进行抗病毒治疗.异性配偶HIV-1检测阳性率11.51％,异性配偶未检测率为63.00％.结论 HIV-1感染的MSM群体大部分晚婚,且以工作不固定的流动人群为主,异性配偶对HIV-1不知情及不检测比例高.
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HIV-1 gp160多表位嵌合基因的构建及表达蛋白的免疫原性分析
目的:HIV感染引起的AIDS已经成为严重影响人类健康和社会发展的全球性疾病.酶联免疫吸附试验和免疫印迹检验组合则被认为是HIV检测的"金标准".因此本实验构建gp160的抗原多表位融合基因及在原核系统的高表达,为HIV抗体测定提供特异、价廉的抗原.方法:选定HIV-1 gp160基因中三个片段包含较多抗原表位的区域,设计带有酶切位点的引物,用PCR的方法从HIV-1HXB2全基因扩增编码这三个片段的基因序列,通过质粒提取、酶切、测序方法鉴定基因片段的正确性,SDS-PAGE和Western Blot测定融合蛋白的抗原特异性.结果:构建的HIV-1 gp160多表位嵌合基因的原核表达质粒,酶切和测序结果表明基因序列正确,基因全长969bp.在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达的重组蛋白分子量为37 kDa,以包涵体的形式存在.结论:应用western blot测定10例正常人和12例HIV/AIDS病人血浆显示HIV-1 gp160多表位融合蛋白具有良好的抗原特异性.成功构建了高表达HIV-1 gp160多表位蛋白的原核表达系统,纯化的融合蛋白有较强的抗原特异性.
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柳州市16例吸毒者HIV-1病毒流行株亚型分布及耐药情况分析
目的：了解2011-2013年柳州市吸毒人群人类免疫缺陷病毒1(human immunodeficiency virus 1, HIV-1)亚型分布和毒株耐药情况。方法从2011-2013年柳州市吸毒人群HIV-1感染者中，随机抽取16例作为研究对象，从血浆中抽提核酸RNA，用RT-PCR进行gag及pol基因扩增，并对扩增产物进行测序和序列分析。结果16例标本中存在2种HIV-1亚型：重组亚型CRF01_AE 14例(87.5%)，重组亚型CRF07_BC 2例(12.5%)。6株发生相关耐药突变，主要发生在NRTIs和NNRTIs相关突变。结论2011~2013年柳州市吸毒人群HIV-1感染主要以CRF01_AE为主，主要在NRTIs和NNRTIs相关耐药突变。
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河南省豫东南地区420例HIV感染者亚型分析
目的 了解河南省豫东南地区HIV-1流行株的亚型及序列变异特征.方法 在河南省豫东南地区的上蔡县及尉氏县采集420例有偿献血HIV-1感染者静脉血,分离单个核细胞(PBMC),用套式聚合酶链反应(nestPCR)对单个核细胞中前病毒脱氧核糖核酸(DNA)的膜蛋白(env)基因进行扩增,并对其C2-V3及邻区350～450个核苷酸序列进行了测定和分析.结果 420份样品间的基因离散率为8.37%.与国际A-E亚型参考序列及部分地区B′亚型代表株序列相比较,河南省上蔡县及尉氏县的420个毒株及流行与我国云南德宏、四川等地的B′亚型毒株序列接近,均属于泰国B′亚型,基因离散率为6.94%.系统树分析显示,420份样品仍和泰国B′亚型聚集,远离其他国际亚型.对V3环四肽序列的分析表明,具有泰国B′亚型基因型GPGQ的300例,具有欧美B′亚型的GPGR的70例.结论 根据以上数据及其他资料提示,目前河南省上蔡县及尉氏县的既往献血人群中,泰国B′亚型依然占主导地位,该流行区毒株的传入与流行在云南德宏州的相同亚型HIV-1毒株密切相关.但是根据其离散率及系统树的结果提示,既往献血人群中泰国B′亚型有向其他亚型进一步变异的趋势,应引起有关部门的注意.
