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激光治疗扁平苔藓基础研究
目的 本研究检测口腔扁平苔藓(OLP)及正常黏膜组织中MMP2和MMP9的表达情况,并在体外OLP细胞模型中进行激光照射下的MMP2和MMP9表达状况的检测,旨在探索其可能的作用机制,以期为激光治疗OLP提供临床及实验依据.方法 (1)应用免疫组化法和RT-PCR法测定20例OLP及20例正常口腔黏膜组织中MMP2、MMP9的表达水平;(2)激光处理上皮细胞HaCat cell,Western blot检测MMP2、MMP9蛋白的表达.结果 (1)MMP2在OLP中表达弱阳性,而在正常黏膜组织中几乎无免疫组化着色;MMP9在OLP中强烈表达于表皮角质形成细胞及真皮淋巴细胞胞浆,其表达显著高于正常黏膜组织(P<0.05);(2)激光呈时间和剂量依赖性下调上皮细胞HaCat cell MMP2、MMP9的表达.结论 (1)MMP2、MMP9表达在扁平苔藓患者中高于正常黏膜,提示MMP2、MMP9与OLP发病有关;(2)激光可下调体外OLP细胞模型中MMP2、MMP9的表达,提示激光可用于临床治疗OLP.
关键词： OLP MMP2 MMP9 激光 Hacat cell -
MMP2和CA50在膀胱移行细胞癌、癌旁组织及正常膀胱组织中的表达及临床意义
膀胱移行细胞癌是泌尿系常见的肿瘤,术后易复发,肿瘤在侵袭和转移过程中基质金属蛋白酶类(MMP2)和糖链抗原CA50起重要作用,采用免疫组化法,联合检测MMP2和CA50在各组织中的表达,据其不同的阳性表达程度,分析其与肿瘤分期、分级的关系及意义.
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扶正消癌方对乳腺癌患者癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响
目的:探讨扶正消癌方对乳腺癌患者癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响,并研究凋亡分子机制.方法:66例乳腺癌患者随机分为对照组30例和治疗组36例,对照组患者接受化疗药物表阿霉素和环磷酰胺治疗,治疗组患者在对照组基础上加用扶正消癌方,日1剂,连服9周;2组患者治疗结束后接受手术,术中留取瘤体组织.用免疫组化法检测乳腺癌组织中Ki67、MMP2、Fas基因的表达水平,Western blotting分析凋亡分子Bax、Bcl-2的蛋白表达情况.结果:治疗组乳腺癌组织Fas阳性率明显高于对照组(P<0.05);治疗组乳腺癌组织Ki67、MMP2的阳性表达率明显低于对照组;Western blotting结果显示治疗组乳腺癌细胞Bax蛋白表达显著多于对照组,而Bcl-2蛋白表达明显少于对照组,差异比较均有统计学意义(P<0.05).结论:扶正消癌方可抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭转移,促进癌细胞凋亡,这可能是扶正消癌方治疗乳腺癌的作用机制.
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姜黄素对前列腺癌PC3细胞迁移的抑制作用及对MMP2体内外表达影响
目的:观察不同浓度姜黄素对前列腺癌PC3细胞侵袭浸润的抑制作用以及对金属基质蛋白酶2(MMP2)表达的影响.方法:采用细胞划痕实验观察姜黄素对PC3细胞迁移能力的影响;建立PC3裸鼠移植瘤,western blotting检测PC3细胞和移植瘤组织中MMP2蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测MMP2 mRNA的表达.结果:姜黄素可减弱PC3细胞的迁移浸润能力,并下调MMP2的表达且呈剂量依赖性.结论:姜黄素可有效地抑制PC3细胞的迁移能力,下调MMP2的表达.
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ERK1/2与MMP2在结肠癌中的表达及意义
目的 检测ERK1/2及MMP2在结肠癌组织中的表达,探讨其表达的相关性及临床病理学意义.方法 收集结肠腺癌标本56例及相应的癌旁结肠黏膜组织,分别应用Western Blotting和免疫组化方法检测ERK1/2及MMP2蛋白的表达.结果 与癌旁结肠黏膜组织相比,结肠癌组织中ERK1/2和MMP2蛋白表达水平明显增高(P＜0.05).结肠癌组织中,ERK1/2和MMP2的阳性率分别为80.4％(45/56)和75％(42/56),明显高于癌旁结肠黏膜组织8.9％ (5/56)和5.4％ (3/56)的阳性率(P＜0.05);低分化结肠癌组织中,ERK1/2和MMP2阳性率分别为100％(24/24)和91.7％(22/24),明显高于高、中分化结肠癌组织65.6％(21/32)和62.5％(20/32)的阳性率;Ⅲ、Ⅳ期结肠癌组织中,ERK1/2和MMP2阳性率分别为93.3％(28/30)和90％(27/30),均高于Ⅰ、Ⅱ期的65.4％(17/26)和57.7％ (15/26);淋巴结转移无进展生存期(PFS)、＜5年的结肠癌组织中,ERK1/2和MMP2阳性率均分别高于无淋巴结转移组织和PFS ＞5年者,差异显著(P＜0.05).ERK1/2与MMP2在结肠癌组织中的表达呈正相关(r =0.649,P ＜0.05).结论 在结肠癌组织中ERK1/2和MMP2的表达增强,且两者的表达呈正相关,其高表达与结肠癌分化程度、临床分期、淋巴结转移及预后密切相关.
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MMP2、MMP9、Galectin-3、CK19、及Ret在甲状腺滤泡型肿瘤中的表达
目的探讨MMP2、MMP9、Galectin-3、CK19和Ret在甲状腺良、恶性滤泡型肿瘤中的表达情况,以及其在病理诊断中的价值.方法运用免疫组化方法检测35例甲状腺滤泡癌、36例甲状腺腺瘤MMP2、MMP9、 Galectin-3、 CK19和Ret的表达情况.结果 MMP2 和MMP9在甲状腺滤泡癌表达阳性率为100%,而在甲状腺腺瘤中表达分别为27.8%及47.2%,二者在良、恶性肿瘤的表达差异极显著(P<0.01). Galectin-3表达阳性率分别为48.6%及13.9%(P<0.05).CK19 在甲状腺滤泡癌中阳性有所增高,但与腺瘤比较表达无差异.Ret几乎不在甲状腺滤泡型肿瘤中表达.同时观察15例甲状腺滤泡癌癌旁组织,5种蛋白均不表达或表达甚少.结论 MMP2、MMP9及Galectin-3在恶性甲状腺滤泡型肿瘤中的表达高于良性,可能三者与促进甲状腺滤泡型肿瘤的浸润机制有关,其免疫组化染色虽无绝对特异性,但联合检测可能更有助于临床鉴别诊断.
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曲普瑞林对子宫肌瘤组织中Ki67、MMP2表达的影响
目的：探讨曲普瑞林对子宫肌瘤组织中Ki67基因、MMP2基因表达的影响。方法选择2011年5月~2013年8月温岭市第一人民医院就诊的66例子宫肌瘤患者，将其分为对照组(30例)和治疗组(36例)，治疗组患者使用曲普瑞林3.75 mg/次进行肌内注射，每4周给药1次，连续3个月为1个疗程；对照组患者入院后不服用任何药物，直接手术，术中均取瘤体及内膜。用免疫组化SP法检测子宫肌瘤及内膜组织中Ki67、MMP2基因的表达水平。结果治疗组子宫肌瘤Ki67、MMP2的阳性表达率(38.9%、41.7%)明显低于对照组(76.7%、70.0%)，差异均有统计学意义(P<0.01、P<0.05)；但治疗组子宫内膜组织中Ki67、MMP2的阳性表达率(72.2%、47.2%)与对照组(80.0%、53.3%)比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论曲普瑞林能下调子宫肌瘤细胞Ki67、MMP2基因的表达，抑制肌瘤细胞的增殖和侵袭转移，这可能是曲普瑞林治疗子宫肌瘤的作用机制。
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p-STAT3通过上皮间质转化影响结肠癌的转移性研究
目的:研究p-STAT3的活化在结肠癌中的表达与Snail、MMP2的相关性,及其在离体细胞实验中激活受抑后对结肠癌细胞迁移能力的影响并探讨其机制.方法:免疫组织化学染色检测p-STAT3与Snail、MMP2的表达及其相关性,分析三者与TNM分期、远处转移、淋巴结转移及分化程度之间的关系;MTT实验筛选AG490对增殖无影响的浓度和时间,并用该浓度和时间进行后续实验;采用Western blot法检测AG490抑制p-STAT3活化后STAT3、Snail、MMP2蛋白表达情况;划痕实验观察p-STAT3活化受抑后,结肠癌细胞迁移情况.结果:免疫组织化学染色结果表明,p-STAT3的表达与Snail、MMP2均存在相关性,且均与淋巴结转移相关(P<0.05).在两个结肠癌细胞系中,通过MTT实验,选出10μM作为AG490的佳作用浓度,并采用该浓度进行后续实验.AG490抑制p-STAT3活化后Snail、MMP2表达明显下降,而STAT3总蛋白表达无明显变化.且当AG490抑制p-STAT3活化后,细胞的迁移能力明显下降.结论:p-STAT3可以通过上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)促进结肠癌的转移.
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利用组织芯片技术研究Akt1 MMP2和PTEN在胃腺癌中的表达及其相关性
目的:研究MMP2和PTEN在正常胃粘膜、癌旁组织和胃腺癌中的表达及相关性.方法:利用组织芯片技术通过免疫组织化学SP法检测胃腺癌、癌旁组织及正常胃粘膜中Akt1、MMP2和PTEN的表达.结果:在正常胃粘膜、癌旁组织和胃癌组织中,Akt1、MMP2和PTEN表达的阳性率差异均有显著性(P＜0.05);在高、中、低分化不同病理级别的胃腺癌中MMP2和PTEN的表达率差异有显著性(P＜0.05),Akt1表达率差异无显著性(P＞0.05),但高分化和低分化比较差异显著性(P＜0.05).Spearmen 等级相关分析得出,PTEN的表达与Akt1、MMP2的表达呈负相关(P＜0.05),Akt1 的表达与MMP2的表达呈正相关(P＜0.05).结论:Akt1、MMP2在癌组织中表达的阳性率高于正常胃粘膜,且随病理级别的升高阳性率也升高,PTEN 在癌组织中的表达则与之相反,它们对于胃癌的发生发展可能有重要作用.
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MMP2,MMP9在肝细胞癌中表达的比较研究
目的分析MMP2和MMP9在肝细胞癌中的表达,探讨不同的基质金属蛋白酶(MMPs)与肝细胞癌侵袭转移的特异相关性.方法免疫细胞化学检测HepG2细胞系中MMP2和MMP9的表达,免疫组织化学检测38例HCC肝癌组织中MMP2和MMP9的表达.结果MMP9在HepG2细胞系的表达高于MMP2的表达.在HCC组织中MMP9的表达率84.2%(32/38)明显高于MMP2的表达52.6%(20/38),二者有显著差异(P<0.05).结论MMP9在体内外的表达均高于MMP2,推测可能MMP9与HCC的侵袭转移关系更为密切.
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小分子化合物G-052抑制胃癌细胞侵袭及其分子机制
目的 研究小分子化合物G-052对于人胃癌细胞增殖和侵袭的影响及可能分子机制.方法 用MTT检测不同浓度小分子化合物G-052对胃癌细胞BGC823和MKN-45增殖能力的影响.分别用0、20、40、60μ mol/L浓度的G-052处理BGC823和MKN-45两种胃癌细胞,应用Transwell小室检测其对上述胃癌细胞侵袭能力的抑制作用,Western Blot检测化合物对金属基质蛋白酶2(MMP2)表达及丝切蛋白(Cofilin)磷酸化水平的影响.结果 化合物G-052以剂量依赖的方式抑制BGC823和MKN-45细胞的侵袭能力,但对增殖能力无明显影响.Western Blot结果显示G-052下调胃癌细胞BGC823中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平.结论 G-052抑制胃癌细胞BGC823、MKN-45的侵袭可能与下调MMP2的表达及Cofilin磷酸化水平相关.
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小分子化合物M-364抑制胃癌细胞侵袭及机制研究
目的 研究小分子化合物M-364对人胃癌细胞BGC823、MKN-45增殖和侵袭能力的影响及其可能机制.方法 应用MTT检测不同浓度小分子化合物M-364对于胃癌细胞BGC823和MKN-45增殖能力的影响.分别用0、20、40、60μmol/L浓度的化合物M-364处理BGC823和MKN-45两种胃癌细胞,应用Transwell小室检测其对上述两种细胞侵袭能力的抑制作用,Western Blot检测化合物对金属基质蛋白酶2(MMP2)表达及丝切蛋白(Cofilin)磷酸化水平的影响.结果 化合物M-364以剂量依赖的方式抑制BGC823和MKN-45两种胃癌细胞的侵袭能力,但对增殖能力无明显影响.Western Blot结果显示M-364能够下调胃癌细胞BGC823中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平.结论 化合物M-364抑制BGC823、MKN-45胃癌细胞侵袭可能与下调MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平相关.
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芍药苷对四氯化碳诱发肝纤维化大鼠血清TGF β1 TMP1 MMPP2及MMP9的影响
目的:探讨芍药苷对四氯化碳诱发肝纤维化大鼠血清TGFβ1、TMP1、MMP2及MMP9的影响.方法:清洁级Sprague-Dawley大鼠60只,随机分成6组,A组(正常对照组)、B组(模型组)、C1组(芍药苷小剂量组)、C2组(芍药苷中荆量组)、C3组(芍药苷大剂量组)、D组(水飞蓟素对照组).除正常对照组外,均经皮下注射400mL/L四氯化碳8周,后各治疗组给予不同剂量芍药苷干预8周,阳性对照组给予水飞蓟素干预8周,ELISA法检测大鼠血清TGFβ1、MMP2、MMP9及TMP1.结果:TGFβ1:与B组比较,A组P<0.01,C1组、C2组、C3组、D组P<0.05;TMP1:与B组比较,A组P<0.01,C1组、C2组、C3组、D组P<0.05;MMP2:与B组比较,A组P<0.01,C1组、C2组、C3组、D组P<0.05;MMP9:与B组比较,A组P<0.01,C1组、C2组、C3组、D组P<0.05;结论:芍药苷能够通过降低大鼠血清TGFβ1、TMP1、提高大鼠血清MMP2、MMP9而发挥抗肝纤维化作用,并且量效关系明显.
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TGF-β1和MMP2对大鼠胰腺坏死后再生作用的研究
急性胰腺炎是指胰腺及其周围组织被胰腺分泌的消化酶自身消化的化学性炎症.急性出血坏死性胰腺炎病情发展迅猛,治疗棘手,死亡率高,其发病机理尚未完全阐明,一旦主要致病因素解除,胰腺的结构和功能常可以完全恢复[1].大剂量注射精氨酸可以损害胰腺造成胰腺坏死,常应用这一原理制成急性胰腺炎实验动物模型,依据转化生长因子-β1(TGF-β1)和基质金属蛋白酶-2(MMP2)的生物学特性,运用免疫组化方法检测这两个因子在注射L-精氨酸后1 d、3 d、7 d、10 d、14 d的免疫反应性,明确它们在急性坏死性胰腺炎后再生作用的角色,以便对急性胰腺炎特别是坏死后再生有更深入的认识,现报道如下.
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TGF-β1和MMP2对大鼠胰腺坏死后再生作用的研究进展
急性胰腺炎是指胰腺及其周围组织被胰腺分泌的消化酶自身消化的化学性炎症.按病理组织学及临床表现,分为急性水肿型胰腺炎与急性出血坏死型胰腺炎两种.
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CD147蛋白表达与子宫颈癌生物学行为的关系
目的:检测CD147蛋白、MMP2 mRNA在子宫颈癌中的表达,探讨它们与子宫颈癌浸润、转移的关系.方法:采用免疫组织化学Maxvison法、RT-PCR技术检测65例子宫颈癌、21例癌旁正常组织中CD147蛋白、MMP2 mRNA的表达.应用图像分析软件Image-Pro Plus 6.0及Image Tool分别对CD147和MMP2 mRNA的表达行平均光密度和灰度分析.结果:宫颈癌组织中CD147蛋白和MMP2 mRNA的表达高于癌旁正常组织,二者之间差异具有显著性(P<0.01),宫颈癌组织中CD147蛋白和MMP2 mRNA的表达与组织学分级、TNM分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05),而与年龄、肿块大小、组织学类型无相关性(P>0.05).本组中CD147蛋白和MMP2 mRNA的表达存在正相关(r=0.513,P<0.05).结论:CD147可能促进了MMP2的表达,二者可成为判断宫颈癌生物学行为和指导临床治疗的指标.
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重楼皂苷Ⅰ抑制肺腺癌A549细胞侵袭转移作用机制研究
目的:通过研究重楼皂苷Ⅰ对人肺腺癌A549细胞侵袭转移能力及MMP2、E-cad表达的影响,探讨重楼皂苷Ⅰ抑制肺腺癌A549细胞侵袭转移的作用机制.方法:①应用CCK8法检测重楼皂苷Ⅰ对人肺腺癌A549细胞增殖的影响.②应用Transwell及细胞划痕实验检测重楼皂苷Ⅰ对人肺腺癌A549细胞侵袭转移能力的影响.③应用Western blot、Qrt-PCR检测重楼皂苷Ⅰ对肺腺癌A549细胞MMP2、E-cad表达的影响.结果:①细胞增殖实验结果表明浓度为0.25、0.5、1、2、4、8、16 mg/L重楼皂苷Ⅰ对肺腺癌A549细胞增殖的抑制率分别为(2.10±1.2)％、(11.98±2.4)％、(24.32±3.5)％、(38.76±4.3)％、(49.25±4.9)％、(62.55±5.3)％、(83.85±6.4)％,各抑制率比较差异有统计学意义(P<0.05);并且随着剂量的增加抑制率升高,抑制率与剂量呈正相关,具有量效关系.②Transwell及细胞划痕实验结果表明不同浓度的重楼皂苷Ⅰ与空白对照组比较,划痕愈合距离缩短,穿过的细胞数量减少,具有抑制细胞侵袭转移的能力,随着剂量的增加,抑制作用增强,各组比较差异有统计学意义(P<0.05).③Western blot、Qrt-PCR实验结果表明不同浓度的重楼皂苷Ⅰ与空白对照组比较,MMP2表达降低,E-cad表达升高,随着剂量的增加,变化幅度增大,各组比较差异有统计学意义(P<0.05),说明重楼皂苷Ⅰ可以下调MMP2表达,上调E-cad表达,并且有量效依赖关系.结论:重楼皂苷Ⅰ具有抑制肺腺癌A549细胞侵袭转移的能力,作用机制可能为通过下调MMP2的表达、上调E-cad的表达实现.
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基质金属蛋白酶2(MMP2)对血管平滑肌增生迁移的影响
目的探讨MMP2表达与血管平滑肌增生迁移的影响.方法应用酶谱(SDS-page zymorgroph)及免疫组化的方法,分别检测组织中MMP2及平滑肌的增生的表达.结果在球囊损伤血管组织中MMP2表达与对照组相比分别为:3天组,174±18%,n=4,P＜0.05,7天组,154±27%,n=5,P＜0.05.免疫组化球囊损伤血管组织中平滑肌细胞增生与正常组织相比分别为:在内膜,3天组,17.2±3.8%,7天组,7.2±1.8%,P＜0.05;在中膜,3天组,10.3±0.3%,7天组,6.24±0.2%,P＜0.05.结论 MMP2促进平滑肌细胞增生和迁移.
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脑得生胶囊对家兔血管成形术后内膜增殖及血管重构的影响
目的 探讨脑得生胶囊对家兔血管成形术后内膜增殖的抑制作用和血管重构的影响.方法 雄性大耳白兔30只,随机分成4组:对照组6只,拉伤组、高脂组、脑得生组各8 只.高脂组采用高胆固醇喂养,拉伤组、高脂组、脑得生组均采用腹主动脉内皮剥脱制作血管狭窄模型,之后行血管球囊扩张成形术,术后4 w处死动物,取血管成形术部位血管标本,进行HE染色及基质金属蛋白酶(MMP)2、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)1免疫组化染色.结果 高脂组内膜增生明显,内膜面积大而管腔面积小;脑得生组内膜面积较高脂组明显减小,管腔面积明显扩大,两组相比差异显著(P＜0.05).免疫组化染色:脑得生组MMP2和TIMP1阳性细胞吸光度(%)明显低于高脂组(P＜0.05).结论 脑得生胶囊具有抑制家兔血管成形术后的内膜增殖和血管重构的作用.
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大鼠髓核细胞原代培养及表型鉴定
目的:探讨Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶消化分离培养髓核细胞及免疫细胞化学表型鉴定的可行性.方法:无菌务件下分离SD大鼠凝胶状髓核,采用Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶消化分离髓核细胞并连续培养,倒置相差显微镜下观察,随后进行免疫细胞化学染色检测不同代次髓核细胞HIF-1、Ⅰ、Ⅱ型胶原、MMP2及蛋白聚糖的表达情况,并给予MTT法测定髓核细胞生长曲线.结果:Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶分离培养原代髓核细胞需要12d左右贴壁,达95％融合需要34d,而传代髓核细胞贴壁速率明显增快至10h,且其倍增时间约为2.5d;免疫细胞化学显示髓核细胞均表达HIF-1、Ⅰ、Ⅱ型胶原、MMP2和蛋白聚糖,且随着髓核细胞传代其HIF-1α、HIF-1p、Ⅰ型胶原及MMP2表达均增加,但Ⅱ型胶原表达降低,而蛋白聚糖表达无明显差异;MTr法显示随着髓核细胞传代其增殖有所减缓.结论:Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶可成功分离髓核细胞,提高培养效率,且HIF-1α、HIF-1β、Ⅰ、Ⅱ型胶原及MMP2可作为髓核细胞表型分子用于髓核细胞的鉴定.
