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JAK2/STAT3通路参与过氧化氢抑制小鼠原代颗粒细胞增殖的研究
目的 通过过氧化氢(H2O2)处理体外培养的小鼠原代颗粒细胞(mGC),探讨JAK2/STAT3信号通路在H2O2抑制mGC增殖中的作用. 方法 应用H2O2、JAK2抑制剂AG490(不同浓度、不同作用时间)处理mGC;用CCK-8、增殖细胞核抗原蛋白(PCNA)水平检测细胞增殖情况,RT-PCR检测JAK2 mRNA水平,Western blot检测JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、Cyclin D1的蛋白表达水平. 结果 H2O2与AG490均以剂量和时间依赖方式降低mGC活率.750μmol/L的H2O2处理mGC 24 h明显降低细胞活率(P＜0.01),降低PCNA蛋白水平(P＜0.01),并下调JAK2 mRNA和蛋白表达水平(P＜0.01);80 μmol/L的JAK2抑制剂AG490可降低细胞活率(P＜0.01),且使细胞中的p-JAK2、JAK2、STAT3、p-STAT3、PCNA、Cyclin D1表达均下降(P＜0.05). 结论 H2O2抑制mGC增殖可能与JAK2/STAT3信号通路有关.
关键词： 过氧化氢 小鼠原代颗粒细胞 JAK2/STAT3信号通路 AG490 增殖 -
阻断JAK/STAT信号转导通路对克雷伯杆菌肺炎老龄大鼠生化和病理的影响
目的 观察信号转导阻滞剂AG490、雷帕霉素对克雷伯杆菌肺炎多器官功能障碍生化和病理的影响,探讨通过信号转导阻断的途径在治疗多器官功能障碍中的作用.方法 用气管插管法制作克雷伯杆菌肺炎老龄大鼠多器官功能障碍模型,分别进行AG490皮下注射、雷帕霉素灌胃,取外周血检测各生化指标以及血气分析.结果 AG490、雷帕霉素能明显减轻肺脏、心脏、肝脏等组织病理的损伤,并明显降低LDH、CK、CK-MB、ALT、AST的含量,提高PaO2,降低PaCO2.结论 阻滞剂AG490、雷帕霉素通过阻断JAK/STAT信号转导通路,能够抑制炎症反应的过度表达,对多器官功能障碍起到保护作用,为多器官功能障碍的治疗提供一条新的思路.
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AG490在人膀胱癌细胞株Pumc-91中STAT3的抑制作用
目的 研究不同孵育时间以及不同浓度的STAT3特异性抑制剂AG490作用于人移形上皮膀胱癌细胞株(pumc-91)中STAT3信号通路蛋白表达的条件优化.方法 分别在0、24、36、48、60h收集细胞并提取细胞蛋白,应用Western Blot对各组中STAT3的蛋白表达水平进行半定量分析;加入100μmol/L AG490作用于pumc-91细胞,分别用0、50、100、200μmol/L的AG490处理pumc-91细胞48h后,应用Western Blot检测各组中STAT3的蛋白表达水平.结果 STAT3蛋白的表达随AG490作用时间延长而逐步降低,在作用时间为48h时,差异有统计学意义(P＜0.05).STAT3蛋白的表达明显随AG490浓度的升高而逐步下降,在浓度为200μmol/L时差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 AG490通过抑制STAT3蛋白的表达,成功抑制了STAT3信号通路的活性,而且其抑制作用具有时间和剂量的依赖性,AG490在作用浓度为200μmol/L和作用时间为48h的条件下,有效的抑制了STAT3蛋白在pumc-91细胞系中的表达.
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AG490抑制K562细胞增殖和下调PHLPP蛋白的表达
本研究旨在探讨AG490抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡过程中p-Akt及PHLPP表达的变化.以不同浓度的AG490作用于人慢性髓系急性红白血病细胞株K562,采用WST-1法检测细胞的增殖活性,Annexin VFITC双染检测细胞凋亡,Western blot检测p-Akt、Akt、PHLPP蛋白表达水平的变化.结果表明,AG490以时间及浓度依赖性方式抑制K562细胞增殖,其48 h的IC50值为338.0 μmol/L；AG490 100 μmol/L诱导K562细胞凋亡,呈明显的时间依赖性；AG490 100 μmol/L作用于K562细胞后p-Akt及其调节蛋白PHLPP的表达水平呈时间依赖性方式下降,但是对总Akt的表达水平无明显影响.结论:AG490可能通过下调p-Akt的表达抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,但同时也可能通过下调p-Akt的调节蛋白PHLPP的表达水平而使AG490对K562增殖的抑制效果受限.
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高三尖杉酯碱联合AG490对HEL细胞JAK2-STAT5相关信号通路的影响
本研究旨在探讨高三尖杉酯碱( homoharringtonine,HHT)联合AG490对HEL细胞JAK2-STAT5信号通路的影响及其机制,为临床应用新方案治疗慢性骨髓增殖性肿瘤( MPN)提供理论依据.以20 ng/ml的HHT,100μmol/L AG490,20 ng/ml HHT+ 100 μmol/L AG490处理HEL细胞24、48、72小时以后,用MTT法和流式细胞术检测细胞生长抑制率和凋亡率,药物处理细胞24小时后用WB法检测JAK2突变激活的信号蛋白P-JAK2,P-STAT5以及BCL-xL表达的变化.结果表明,HHT以及AG490作用HEL24小时均能抑制其增长,Annexin V-PI双染流式细胞图显示均能明显诱导HEL早期凋亡,HHT更为明显；免疫电泳分析显示,P-JAK2和P-STAT5表达下调,而JAK2和STATS总蛋白水平稳定.结论:HHT联合AG490能明显抑制HEL细胞增殖并诱导凋亡,两者具有协同作用,其作用机制是HHT作为一种广谱的蛋白酪氨酸激酶抑制剂,协同AG490抑制JAK2突变引起的信号蛋白的酪氨酸位点的磷酸化,从而下调STAT5反应性基因的转录.
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p-STAT3在奥沙利铂致急性神经病理性疼痛中的作用
目的 :在本研究中,采用单剂量腹腔注射奥沙利铂诱发急性神经病理性疼痛为模型,观察p-STAT3信号分子的激活情况,并探讨JAK/STAT信号通路抑制剂AG490对该疼痛模型的影响.方法 :利用大鼠机械性缩足反射阈值(paw withdrawal threshold,PWT)和冷热刺激甩尾潜伏期(tail withdrawal latency,TWL)检测大鼠的疼痛行为学变化;采用免疫印记法和免疫荧光法检测大鼠脊髓p-STAT3的表达.结果:与对照组比较,奥沙利铂注射后第1～5天PWT和TWL(冷)显著性缩短(P<0.05),TWL(热)未见明显改变;脊髓p-STAT3的表达显著性增加(P<0.05).与奥沙利铂组比较,AG490组PWT和TWL(冷)显著性延长(P<0.05),而脊髓p-STAT3的表达显著性减少(P<0.05).结论:p-STAT3参与了奥沙利铂致急性神经病理性疼痛的形成,并且AG490可缓解奥沙利铂导致的急性神经病理性疼痛.
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JAK/STAT抑制剂在TNBS诱发大鼠结肠炎中的作用
目的:探讨抑制Janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)通路在大鼠结肠炎发病机制中的作用.方法:建实验性大鼠结肠炎模型后,给予JAK特异性抑制剂AG490和STAT抑制剂雷帕霉素(RPM),腹腔注射治疗1 wk后处死大鼠,观察结肠炎症改变并进行评分,采用蛋白印迹法(Western blot)检测MMP-1、MMP-2、MMP-3、TIMP-1蛋白表达:用明胶酶谱法检测结肠组织中MMP-2的活性.结果:与对照组相比,AG490治疗组肠道损伤积分降低(5.50±2.16分vs8.53±2.18分,P=0.012);RPM治疗组肠道损伤积分(5.17±1.80分)较对照组低(P<0.05).AG490组和RPM组MMP-1、MMP-2的蛋白质表达量均明显低于对照组(均P<0.05),而两实验组分别与对照组比较其MMP-3、TIMP-1蛋白质表达均无明显差异(均P>0.05).与对照组相比,两实验组MMP-2的活性均显著下降(P<0.05).结论:AG490和RPM通过阻断JAk/STAT信号通路的活化能缓解大鼠结肠炎.这一作用可能是通过抑制MMP-1、MMP-2的表达来实现的.
关键词： AG490 雷帕霉素 JAK/STAT信号转导通路 实验性结肠炎 基质金属蛋白酶 -
AG490联合健择对人胰腺癌细胞生长的影响
目的:探讨Janus激酶(JAK)特异性抑制剂AG490联合化疗药物健择对人胰腺癌细胞系SW1990的生长增殖及STAT3转导通路的影响和其机制.方法:人胰腺癌细胞系SW1990分为对照组、AG490组、健择组及AG490+健择处理组.培养48 h后,MTT法检测细胞增殖状态,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot和RT-PCR检测STAT3,Cyclin D1,Bcl-xL,Bax,Survivin的表达情况.结果:AG490组和健择组的细胞增殖明显低于对照组(2.20±0.25,230±0.220 vs 3.78±0.42,P＜0.05),凋亡率明显高于对照组(35.40%±3.08%,34.64%±1.38% vs 16.49%±1.45%,P＜0.05).并且,AG490+健择组细胞增殖(1.49±0.15)明显低于明显低于AG490或健择组(P＜0.05),而凋亡率(43.80%±1.57%)则明显高于AG490或健择组(P＜0.05).AG490处理SW1990 48 h后,p-STAT3表达明显低于对照组(13.83%±0.64% vs 79.87%±1.43%,P＜0.05),同时Cyclin D1(mRNA:15.63%±0.59% vs 43.83%±0.64%,P＜0.05;蛋白:17.50%±0.92% vs 49.87%±1.27%,P＜0.05),Bcl-xL(mRNA:13.93%±0.21% vs 75.70%±0.46%,P＜0.05;蛋白:34.17%±1.70% vs83.93%±0.80%,P＜0.05)和Survivin(mRNA:58.27%±0.42% vs 82.93%±1.68%,P＜0.05;蛋白:13.23%±1.03% vs 18.60±1.08%,P＜0.05)表达也明显降低,而Bax的表达则明显增高(mRNA:10.33%±1.18% vs 5.43%±0.70%,P＜0.05;蛋白:13.07%±1.04% vs 6.23%±2.40%,P＜0.05),健择处理组上述指标与对照组相似.结论:阻断STAT3信号转导通路可以抑制人胰腺癌细胞增殖,促进其凋亡,健择联合AG490能起协同作用.AG490联合健择可能为胰腺癌治疗提供新的思路.
关键词： 胰腺肿瘤 信号转导与转录激活因子3 AG490 增殖 凋亡 MTT法 流式细胞术 免疫印迹 逆转录-聚合酶链反应 -
黄芩苷对肝癌细胞SMMC-7721JAK-STAT-号通路STAT3的影响
目的:探讨黄芩苷对肝癌细胞SMMC-7721JAK-STAT信号通路STAT3的影响.方法:将肝癌细胞SMMC-7721分为4组:对照组、黄芩苷组、AG490组、黄芩苷+AG490组.应用RT-PCR法检测各组肝癌细胞SMMC-7721中STAT3 mRNA表达,Western blot法检测肝癌细胞SMMC-7721中STAT3、P-STAT3蛋白表达.结果:黄芩苷可以下调肝癌细胞SMMC-7721STAT3 mRNA表达,与对照组比较明显下降(0.505±0.111 vs 0.697±0.145,P＜0.05)；并可以降低STAT3蛋白的表达量(0.879±0.012 vs1.087±0.015,p＜0.05)；还可以抑制STAT3向活化形式P -S TAT3转化,与对照组比较P-S TAT3表达明显下降(0.983±0.085 vs l.103±0.074,P＜0.05),而与AG490联合应用后P-STAT3蛋白表达量较单用黄芩苷下降明显(0.756±0.103vs 0.983±0.085,P＜0.05).结论:黄芩苷能下调STAT3 mRNA表达水平,降低STAT3蛋白表达,还可以抑制STAT3向活化形式P-STAT3转化,与AG490有协同作用.黄芩苷可能通过抑制JAK-STAT信号通路发挥抗肿瘤作用.
关键词： 关键词:黄芩苷 肝癌 JAK-STAT信号通路 STAT3 AG490 -
JAK2/STAT3信号通路对RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响
目的 探讨JAK2/SATA3信号通路对核因子kB受体活化因子配体(Receptor activator of NF-κB Ligand,RANKL)诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化过程的影响.方法 用ATP竞争性JAK2激酶抑制剂AG490与RANKL同时处理RAW264.7细胞,倒置显微镜观察细胞形态的变化,抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant Acid Phosphatase,TRAP)染色法观察TRAP阳性破骨细胞形态并计数,采用反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测不同诱导条件下RAW264.7中破骨细胞标志分子TRAP、RANK(Receptor activator of NF-κB)、巨噬细胞标志分子CD11b和Emr1及转录因子活化T细胞核因子(Nuclear Factor of Activated T cells c1,NFATc1)的mRNA表达情况,细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit,CCK8)法检测AG490对RAW264.7细胞增殖的影响,同时应用Western blot法检测STAT3磷酸化情况.结果 ATP竞争性JAK2激酶抑制剂AG490可显著抑制RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞的分化,其作用机制主要是通过下调Ser727-STAT3磷酸化水平抑制RANKL诱导的RAW264.7细胞增殖、进而导致NFATc1转录因子表达水平下降有关.结论 JAK2/STAT3是破骨细胞前体细胞分化成熟过程中的关键信号通路,以此为靶向的特异性抑制剂AG490对于治疗以破骨细胞过度活化为主要特性的疾病具有潜在的应用前景.
关键词： 破骨细胞 AG490 RANKL RAW264.7 JAK2/STAT3 -
极限肝切除术后延长大鼠生存时间的研究
目的观察阿托伐他汀(Ato)及细胞因子阻断剂AG490对90%肝切除术后大鼠剩余肝细胞功能和存活率的作用.方法在标准90%肝切除后,大鼠随机分为3组,对照组不用任何药物;Ato组术前1d至术后3d胃管内注入阿托伐他汀(20mg/kg);AG490组术中至术后36h内每隔12h腹腔内注射AG490(1mg/kg),观察术后生存及肝再生情况.结果对照组大鼠24h内100%死亡.阿托伐他汀和AG490均明显地延长了90%肝切除术后大鼠的生存时间(25.6h和30.6h vs.10.7h,P<0.05).结论细胞因子阻断剂和阿托伐他汀能显著延长极限肝切除术后大鼠的生存时间,为重大肝手术患者术后保护肝功能提供了一定的理论依据.
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AG490对大鼠脑损伤后CD40和CD45表达及神经功能的影响
目的 探讨AG490对大鼠创伤性脑损伤后脑组织CD40、CD45表达以及神经功能状态的影响.方法 取健康雄性SD大鼠180只,随机分为假手术组、创伤组和AG490干预组,每组大鼠60只;各组根据脑损伤时间再分为6、12、24及72 h亚组(各15只).应用液压冲击法制备大鼠脑损伤模型,采用流式细胞术检测脑组织CD40、CD45的表达,采用大鼠神经功能缺损评分系统对神经功能状态进行评估.结果 ①创伤组伤后各时间点神经功能缺损评分均高于假手术组(P<0.05或P<0.01),其中6 h为高峰期,后呈现逐渐下降趋势.AG490干预组大鼠神经功能缺损评分均较创伤组低,24和72 h时间点差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).②创伤组脑组织CD40表达水平逐渐升高,24 h达高峰,然后开始降低;CD45表达持续增高,72 h高.与假手术组比较,各时间点CD40 、CD45表达差异均有统计学意义(P<0.01).AG490干预组各时间点CD40 、CD45表达水平均低于创伤组,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 创伤性脑损伤后,AG490可能通过降低脑组织CD40、CD45的表达促进神经功能的恢复.
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AG490抑制Jak2-STAT3信号通路调控骨髓间充质干细胞迁移、矿化及骨缺损愈合的机研究
目的 探讨Jak2-STAT3信号通路抑制剂AG490对骨髓间充质干细胞(bone marrowmesenchymal stem cell,BMSC)迁移、矿化及骨缺损愈合的调控机制.方法 应用甲基噻唑基四唑(methyl-thiazolyl tetrazolium,MTT)实验、细胞划痕实验及Transwell实验检测AG490对小鼠来源的原代BMSC增殖和迁移能力的调控.荧光定量PCR和蛋白质印迹法研究AG490调控BMSC增殖和迁移的相关基因及通路机制.通过茜素红染色及碱性磷酸酶活性实验探究AG490对BMSC矿化及成骨向分化能力的影响.构建小鼠股骨缺损模型,研究AG490对骨缺损愈合的影响及机制.结果 细胞划痕实验中第1、2天实验组[(12.42±7.50)％,(41.8±2.6)％]的细胞迁移率均显著小于对照组[(55.5±9.9)％,(86.9±8.7)％](P=0.006,P=0.005),Transwell实验中实验组[(22.8±5.9)个]中单位视野细胞迁移数显著少于对照组[(58.3±6.6)个](P=0.000).实验组MMP-7(0.5±0.1)、MMP-9 (0.1 ±0.1)及CXCR4 (0.35±0.07)的相对基因表达量均显著少于对照组[(1.1±0.1),(1.06±0.33),(1.08±0.13)] (P=0.0000,P=0.0003,P=0.0000).蛋白质印迹法结果中实验组磷酸化Jak2、磷酸化STAT3的蛋白表达在AG490的作用下与对照组相比受到明显抑制.BMSC矿化诱导14d后,实验组的碱性磷酸酶相对活性(8.0±2.1)较对照组(35.7±1.8)受到显著抑制(P=0.0005),实验组较对照组矿化结节小且数量较少.体内实验中,术后第5周时,实验组的相对骨密度显著低于对照组(P=0.0004).HE染色及免疫组化染色可见实验组中骨缺损断端处磷酸化Jak2、磷酸化STAT3和碱性磷酸酶阳性细胞较对照组稍多.结论 AG490可通过抑制Jak2-STAT3信号通路抑制BMSC的增殖、迁移和矿化,从而调控骨缺损愈合.
关键词： 细胞迁移分析 Jak2-STAT3信号通路 骨折愈合 AG490 -
AG490对成骨细胞和破骨细胞之间相互作用的影响
目的 体外建立MC3T3-E1细胞与RAW 264.7细胞间接共培养体系,观察AG490对共培养体系中破骨细胞形成的影响.方法 MC3T3-E1细胞经矿化诱导培养后,与RAW 264.7细胞进行间接共培养,经一定浓度AG490(1、5、10μmol/L)分别处理后,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,氮偶联法检测成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测成骨细胞相关基因骨保护素(OPG)、Ⅰ型胶原(COL1)、ALP、骨钙素(OCN)的表达,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和苏木素染色检测破骨细胞的形成,蛋白印迹法(Western blot)检测破骨细胞中RANK的表达.采用单因素方差分析和双因素方差分析对数据进行统计分析.结果 AG490下调MC3T3-E1细胞矿化过程中OPG、COL1、ALP、OCN mRNA的表达(FOPG=30.120,POPG,AG4901μmol/L=0.021、POPG,AG4905μmol/L=0.221、POPG,AG49010μmol/L=0.003;FALP=67.352,PALP,AG4901μmol/L=0.034、PALP,AG4905μmol/L=0.001、PALP,AG49010μmol/L=0.156;FCOL1=28.158,PCOL1,AG4901μmol/L=0.054、PCOL1,AG4905μmol/L=0.002、PCOL1,AG49010μmol/L=0.4;FOCN=125.375,POCN,AG4901μmol/L<0.001、POCN,AG4905μmol/L<0.001、POCN,AG49010μmol/L<0.001).与RAW264.7细胞单独培养作为对照组相比,MC3T3-E1细胞与RAW 264.7细胞间接共培养明显促进成熟破骨细胞的形成,AG490在这个过程中对破骨细胞的形成起到抑制作用(F=85.391,P共培养组-对照组<0.001,P共培养+AG490组-共培养组=0.035),同时与对照组相比,明显抑制破骨细胞中RANK蛋白的表达(FRANK=376.25,PRANK,AG4901μmol/L=0.468、PRANK,AG4905μmol/L=0.003、PRANK,AG49010μmol/L<0.001).结论 AG490抑制MC3T3-E1细胞成骨向分化,并通过影响OPG/RANKL/RANK信号轴的传递抑制成骨细胞与破骨前体细胞间接共培养过程中破骨细胞的形成.
关键词： 共同培养技术 核因子κB受体活化因子 AG490 成骨向分化 破骨向分化 -
AG490通过JAK-STAT信号转导系统对体外培养子宫内膜癌细胞凋亡的影响
目的 应用AG490作用于子宫内膜癌细胞系,观察其对癌细凋亡情况的影响.方法 运用不同浓度AG490处理细胞,作为实验组,不加入任何药物的细胞作为空白对照.流式细胞技术检测加入10μmol/L、20μmol/L、40μmol AG490对子宫内膜癌细胞作用48h后细胞的凋亡情况.S-P法检测AG490作用48h后,子宫内膜癌细胞IAK、p-Stat3、bcl-2表达情况并分析AG490对其表达的影响.结果 AG490促进子宫内膜癌细胞系凋亡并有浓度依赖效应.不同浓度AG490处理细胞后,s-p检测发现各个实验组中免疫组化结果JAN2、p-stat3、bcl-2蛋白表达水平降低00<0.05).结论 AG490可能成为治疗子宫内膜癌的新药物.
关键词： 子宫内膜癌 AG490 JAK2-STAT3 -
AG490提高极限肝切除术后大鼠存活率的机制
目的研究特异性炎症介质阻断剂AG490提高极限肝切除术后大鼠生存率的机制.方法将38只90%肝切除的雄性SD大鼠随机分为对照组(n=10)和AG490组(n=28),后者术中至术后36 h内每12 h向腹腔内注射AG490 1 mg·kg-1,观察术后生存率,检测各项肝功能及血糖指标.结果对照组与AG490组大鼠的术后存活率分别为0%和25%;AG490组大鼠的术后转氨酶和血糖水平明显优于对照组(P＜0.05),并且在48 h后胆红素水平明显下降(P＜0.05);两组大鼠的血清蛋白水平均缓慢下降但差异无显著性(P＞0.05).结论AG490可显著提高极限肝切除术后大鼠的生存率,该作用主要受益于其对剩余肝功能的保护,而非促进肝脏再生.
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苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞JAK-STAT信号通路的影响
目的 观察苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞JAK-STAT通路的影响.方法 苦参碱和/或JAK-STAT途径特异性抑制剂AG490培养肝癌细胞SMMC-7721,MTT法检测苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞株增殖的影响,RT-PCR法检测苦参碱对SMMC-7721细胞stat3、 stat5 mRNA表达的影响,Western blotting法检测苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5蛋白表达的影响.结果 苦参碱对肝癌细胞增殖的抑制率呈剂量和时间依赖性.苦参碱能下调stat3、 stat5 mRNA表达水平(P<0.05、0.01),降低STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量(P<0.05、0.01).AG490作用于SMMC-7721细胞后,star3、 stat5 mRNA和STAT3、STAT5蛋白的表达量与对照组比较无显著差异(P>0.05),P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量与对照组比较显著降低(P>0.05、0.01).与AG490组比较,AG490+苦参碱组stat3、 stat5 mRNA的表达量显著降低(P<0.05),STAT3、STAT5蛋白表达量显著降低(P>0.05),P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量无显著差异(P>0.05).与苦参碱组比较,AG490+苦参碱组stat3、 stat5 mRNA的表达量无显著差异(P>0.05),STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量无显著差异(P>0.05).结论 苦参碱能下调stat3、 stat5 mRNA表达水平,因而能降低STAT3、STAT5蛋白表达水平,抑制细胞JAK-STAT信号转导通路,从而抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖.
关键词： 苦参碱 JAK-STAT通路 增殖 AG490 -
p-STAT3通过上皮间质转化影响结肠癌的转移性研究
目的:研究p-STAT3的活化在结肠癌中的表达与Snail、MMP2的相关性,及其在离体细胞实验中激活受抑后对结肠癌细胞迁移能力的影响并探讨其机制.方法:免疫组织化学染色检测p-STAT3与Snail、MMP2的表达及其相关性,分析三者与TNM分期、远处转移、淋巴结转移及分化程度之间的关系;MTT实验筛选AG490对增殖无影响的浓度和时间,并用该浓度和时间进行后续实验;采用Western blot法检测AG490抑制p-STAT3活化后STAT3、Snail、MMP2蛋白表达情况;划痕实验观察p-STAT3活化受抑后,结肠癌细胞迁移情况.结果:免疫组织化学染色结果表明,p-STAT3的表达与Snail、MMP2均存在相关性,且均与淋巴结转移相关(P<0.05).在两个结肠癌细胞系中,通过MTT实验,选出10μM作为AG490的佳作用浓度,并采用该浓度进行后续实验.AG490抑制p-STAT3活化后Snail、MMP2表达明显下降,而STAT3总蛋白表达无明显变化.且当AG490抑制p-STAT3活化后,细胞的迁移能力明显下降.结论:p-STAT3可以通过上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)促进结肠癌的转移.
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JAK/STAT通路及其阻断剂AG490在淋巴瘤中的研究进展
JAK/STAT是多种细胞因子和生长因子信号转导的重要途径，参与细胞增殖、分化以及免疫调节等多个过程，在肿瘤中的持续性激活可促进肿瘤的发生发展。目前研究发现在淋巴瘤中有STAT3异常表达和活化，其活化与肿瘤生长、侵袭及转移有关。AG490是JAK2抑制剂，可有效地抑制其下游的STAT的活化，阻断JAK/STAT信号转导通路。既往研究证实AG490能抑制淋巴瘤细胞的增殖，促进其凋亡，可提高某些化疗药物的敏感性。本文就JAK/STAT通路及其阻断剂AG490在淋巴瘤中的研究进展作一综述。
关键词： JAK激酶 信号传导与转录激活因子3 AG490 淋巴瘤 肿瘤治疗 -
JAK2/STAT3信号转导通路在子宫内膜异位症发病过程中的作用
目的 研究JAK2/STAT3信号转导通路在子宫内膜异位症(EMS)发展过程中的作用.方法 将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、JAK2/STAT3通路抑制剂组(AG组),每组20只.模型组、AG组大鼠通过自身子宫内膜移植建立EMS模型.AG组造模前给予AG4901 mg/kg,手术后给予AG4904 mg/kg,每周2次,连续4周;模型组给予生理盐水.处理结束后记录各组大鼠异位内膜体积,计算异位内膜生长抑制率,HE染色观察病理改变;蛋白质印迹法(Western blot)检测内膜组织中p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3蛋白表达水平.结果 治疗后AG组异位内膜组织生长发育不良,异位内膜体积明显小于模型组,异位内膜生长的抑制率为65.66％.Western blot结果显示,EMS模型大鼠异位内膜病灶中JAK2、STAT3总蛋白及其磷酸化水平(p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3)明显高于假手术组;而AG组大鼠异位内膜病灶中JAK2、STAT3总蛋白及其磷酸化水平明显低于模型组.结论 JAK2/STAT3通路在EMS发病过程中可能发挥了重要作用,而抑制JAK2/STAT3信号通路则能够对EMS的治疗产生积极作用.
