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电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠JAK2/STAT3 mRNA及神经元凋亡的影响
目的:观察电针对脑缺血再灌注损伤大鼠JAK2/STAT3 mRNA及神经元凋亡的影响,探讨电针抗神经元凋亡的机制.方法:将90只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组30只,每组按照再灌注时间分为再灌注后2、24、72h 3个亚组,各亚组大鼠均为10只,采取改良大脑中动脉线栓法(MCAO)复制局灶性脑缺血再灌注模型,缺血90min后再灌注.假手术组仅分离暴露右侧颈总动脉不插线栓.模型组和电针组按造模方法造模,造模成功后模型组不进行治疗干预,电针组采用韩氏电针治疗仪,2/15Hz疏密波,刺激百会穴与内关穴,持续30min.各亚组完成相应电针治疗后即断头取脑.运用TUNEL法检测凋亡阳性细胞数,RT-PCR检测JAKmRNA、STAT mRNA表达.结果:再灌注2h后,模型组和电针组之间凋亡阳性粒细胞数、JAK2 mRNA、STAT3mRNA均增高,两组差异无统计学意义,与假手术组比较有显著性差异(P＜0.01);再灌注24h、72h后,电针组较模型组差异有统计学意义(P＜0.05).结论:电针能通过抑制脑缺血再灌注损伤后JAK2/STAT3的过度表达达到脑保护、抗神经元凋亡的作用.
关键词： 电针 脑缺血再灌注 JAK2/STAT3 神经元凋亡 -
益肾活血方对早期糖尿病肾病大鼠肾组织JAK2/STAT3的影响
目的:探讨益肾活血方对早期糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织中JAK2/STAT3表达的影响.方法:用煎煮中药药液灌服DN模型大鼠,生化检测实验大鼠24h尿蛋白、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血浆白蛋白(ALB)、血糖；Leica Qwin Plus图像分析系统测量肾小球直径,肾小管短径和完整肾小管数目,并称取各组大鼠左肾重量、计算肥大指数；PAS染色观察大鼠肾脏病理；免疫组化( IHC)检测肾组织JAK2/STAT3表达.结果:益肾活血方能够降低实验大鼠肾组织JAK2/STAT3的表达,减少24h尿蛋白、Scr、BUN及血糖,升高ALB,缩小肾小球直径及肾小管短径,完整肾小管数量增加,肾脏病理改善,肾重及肥大指数减少,治疗组与模型组相比差异显著(P ＜0.05或P＜0.01).结论:益肾活血方可能通过影响DN大鼠肾组织JAK2/STAT3的表达,而改善上述生化指标,减轻肾脏病理损害.
关键词： 益肾活血方 糖尿病肾病 JAK2/STAT3 实验研究 -
氧化苦参碱对感染性休克大鼠肾组织JAK2/STAT3信号通路的影响
目的:观察氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对感染性休克大鼠肾组织JAK2/STAT3信号通路的影响.方法:采用大鼠盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)复制大鼠感染性休克模型,随机将56只SD大鼠分为假手术组、OMT对照组、模型组(CLP)、CLP+OMT高、中、低剂量组(52,26,13 mg·kg-1)、阳性对照组(CLP+地塞米松10 mg·kg-1).光镜下观察大鼠肾组织病理学改变,采用尿酶法测定血清尿素氮(BUN)含量,RT-PCR法测定肾组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β) mRNA的表达;Western blot测定肾组织JAK2,STAT3的表达;放射免疫分析法测定肾组织匀浆中TNF-α及IL-1β蛋白含量的改变.结果:不同剂量的OMT能抑制肾组织JAK2,STAT3的活化(P＜0.05),减少JAK2,STAT3的蛋白表达(P＜0.05)及TNF-α,IL-1β mRNA的表达(P＜0.05),降低肾组织匀浆中TNF-α及IL-1β的含量(P＜0.05),降低血清BUN含量(P＜0.05),改善肾组织充血、水肿和炎性细胞浸润等病变,并且该作用在OMT高、中剂量组与阳性对照组的结果相一致.结论:OMT能通过抑制JAK2/STAT3信号通路的活化,减少肾组织TNF-α,IL-1β等促炎因子的表达,进而对感染性休克大鼠肾损伤性病变发挥治疗作用.
关键词： 氧化苦参碱 感染性休克 肾损伤 JAK2/STAT3 -
JAK2抑制剂对食管癌细胞增殖、凋亡及COX-2表达的影响
目的 研究食管癌细胞Eca-109增殖、凋亡及COX-2表达与信号转导子和激活子3(STAT3)信号传导通路的关系,明确以JAK2/STAT3为靶向的信号转导在Eca-109细胞中的分子调控机制.方法 将JAK2抑制剂AG490作用于Eca-109细胞,用MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪、DNA琼脂糖电泳法及透射电子显微镜检测细胞凋亡;Westernblot法检测细胞中JAK2、p-JAK2、P-Stat3及COX-2的蛋白表达变化;RT-PCR检测COX-2 mRNA的变化.结果 AG490呈时间、剂量依赖性的抑制Eca-109细胞增殖并诱导凋亡,抑制JAK2/STAT3通路蛋白的表达,呈浓度依赖性地下调p-JAK2及p-Stat3蛋白的表达(P<0.05),并下调COX-2 mRNA及蛋白的表达(P<0.05).结论 JAK2/STAT3信号传导通路调控AG490对Eca-109细胞作用的细胞内信号传导机制,终通过下调COX-2表达影响Eca-109细胞的增殖并诱导凋亡.
关键词： Eca-109细胞 JAK2/STAT3 增殖 凋亡 COX-2 -
JAK2/STAT3信号通路对RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响
目的 探讨JAK2/SATA3信号通路对核因子kB受体活化因子配体(Receptor activator of NF-κB Ligand,RANKL)诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化过程的影响.方法 用ATP竞争性JAK2激酶抑制剂AG490与RANKL同时处理RAW264.7细胞,倒置显微镜观察细胞形态的变化,抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant Acid Phosphatase,TRAP)染色法观察TRAP阳性破骨细胞形态并计数,采用反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测不同诱导条件下RAW264.7中破骨细胞标志分子TRAP、RANK(Receptor activator of NF-κB)、巨噬细胞标志分子CD11b和Emr1及转录因子活化T细胞核因子(Nuclear Factor of Activated T cells c1,NFATc1)的mRNA表达情况,细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit,CCK8)法检测AG490对RAW264.7细胞增殖的影响,同时应用Western blot法检测STAT3磷酸化情况.结果 ATP竞争性JAK2激酶抑制剂AG490可显著抑制RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞的分化,其作用机制主要是通过下调Ser727-STAT3磷酸化水平抑制RANKL诱导的RAW264.7细胞增殖、进而导致NFATc1转录因子表达水平下降有关.结论 JAK2/STAT3是破骨细胞前体细胞分化成熟过程中的关键信号通路,以此为靶向的特异性抑制剂AG490对于治疗以破骨细胞过度活化为主要特性的疾病具有潜在的应用前景.
关键词： 破骨细胞 AG490 RANKL RAW264.7 JAK2/STAT3 -
IL-6通过JAK2/STAT3信号通路促进CD133-肺腺癌细胞(A549)获得干性特征
目的 研究白细胞介素6(IL-6)在成体肺腺癌A549细胞(CD133-细胞)干性转变中的作用及其机制.方法 CD133磁珠抗体分选成体A549细胞后,分别用浓度为0(对照)、10、20、40 ng/ml IL-6刺激24 h,采用克隆球形成实验检测细胞克隆球形成能力,通过Transwell迁移实验检测细胞的迁移能力,免疫印迹检测SOX2、磷酸化Janus激酶2(phosphorylated Janus kinase 2,p-JAK2)、磷酸化信号转导和转录激活子3(phosphorylated signal transducers and activators of transcription 3,p-STAT3)水平.结果 IL-6刺激可显著增加CD133-细胞的克隆球形成、迁移和SOX2的表达水平,显著上调p-JAK2的表达,且均呈一定剂量依赖性.IL-6刺激还可显著增加p-STAT3的表达,表达峰值出现在20 ng/ml组;40 ng/ml IL-6刺激时,p-STAT3表达水平低于10、20 ng/ml组,但仍显著高于对照组,与SOX2变化趋势一致.JAK2激酶抑制剂AG490可显著抑制IL-6诱导的STAT3磷酸化和SOX2表达升高.结论 在体外,IL-6可通过调节JAK2/STAT3信号通路促进CD133-肺腺癌细胞获得干性特征.
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依达拉奉对不同冷缺血时间大鼠移植供肝JAK2/STAT3信号通路的影响
目的 探讨依达拉奉对不同冷缺血时间大鼠移植供肝缺血再灌注损伤(IRI)后JAK2/STAT3信号通路的影响.方法 SD大鼠102只,随机分为假手术组、对照组及实验组.假手术组6只,游离肝脏,不进行移植;对照组及实验组各48只,2组各自按照不同冷缺血时间30 min、6 h、12 h、18 h分为4个处理亚组,每处理组供体、受体各6只.采用改良的"二袖套法"建立大鼠原位肝移植模型,供体采用腹主动脉灌注法,热缺血时间为3~5 min.供肝在不同冷缺血时间后,实验组分别于新肝血管开放前5 min经鼠尾静脉注射依达拉奉3 mg/kg;对照组分别注射生理盐水3 mg/kg.各组受体均于6 h后处死取材.采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测受体供肝组织中JAK2和STAT3 mRNA的相对表达量.结果 内参基因GAPDH与检测基因JAK2、STAT3扩增良好;在同一冷缺血时间,与对照组比较,实验组大鼠供肝基因JAK2/STAT3相对表达量均明显降低(P<0.05);随冷缺血时间延长,对照组JAK2、STAT3 mRNA和实验组STAT3 mRNA相对表达量均呈逐渐降低趋势,而实验组JAK2 mRNA相对表达量呈先增后降趋势(P<0.05).结论 依达拉奉对不同冷缺血时间移植供肝具有一定的保护作用.依达拉奉可延长供肝冷缺血时间至18 h,其机制可能与抑制肝细胞JAK2/STAT3信号转导通路有关.
关键词： 肝移植 活体供者 冷缺血 再灌注损伤 疾病模型 动物 大鼠 Sprague-Dawley JAK2/STAT3 依达拉奉 -
藕节对糖尿病肾病大鼠肾组织JAK2/STAT3及凋亡因子表达的影响
也页目的：探讨藕节对糖尿病肾病大鼠肾组织p-JAK2、p-STAT3及凋亡因子Bcl-2、Bax表达的影响。方法：健康雄性SD大鼠60只,随机选取10只为正常组( N组),其余采用单次腹腔注射链尿佐菌素( STZ,45 mg/kg)制作DN模型,造模成功后随机分为糖尿病肾病组(DN)、藕节小剂量组(RL,1.5 g·kg-1·d-1)、中剂量组(RM,3.0 g·kg-1·d-1)、大剂量组(RH,6.0 g·kg-1·d-1)及氯沙坦钾组(LP,30 mg·kg-1·d-1),均采用灌胃给药,N组和DN组给予等量蒸馏水。12周后检测大鼠生化指标；HE、Masson染色及电镜观察肾脏病理改变；免疫组化法测定p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2及Bax在肾组织表达情况；原位末端标记法( TUNEL)检测肾组织细胞凋亡情况。结果：实验12周末,与N组比较,DN组大鼠肾小球肥大、系膜基质增多、细胞凋亡明显,BUN、Scr、24 h尿蛋白定量明显升高(P<0.05),肾组织Bax、p-JAK2、p-STAT3表达明显上调,Bcl-2表达下调(P<0.05)；与DN组比较,藕节中、高剂量组肾脏病理改变减轻、细胞凋亡减少,24 h尿蛋白定量较DN组明显降低(P<0.05),但降尿蛋白作用弱于氯沙坦钾组,同时肾组织Bax、p-JAK2、p-STAT3表达下调,Bcl-2表达上调(P<0.05)。结论：藕节可能通过上调Bcl-2在肾组织的表达,下调Bax、p-JAK2、p-STAT3的表达,从而减少尿蛋白,延缓DN进展。
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青蒿素通过抑制JAK2/STAT3信号通路诱导肝癌细胞凋亡
目的 研究青蒿素对肝癌细胞中JAK2/STAT3信号通路活化的影响,探讨青蒿素抗肿瘤的相关机制.方法 选择15只6-8周龄的C57BL/6J小鼠,采用二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)腹腔注射和CCl4灌胃方法构建小鼠肝癌模型,随机分为PBS组、青蒿素组和青蒿素+pJAK2多肽组,另选5只正常小鼠作为空白组.PBS组和青蒿素组分别腹腔注射PBS及青蒿素(100 mg/kg),隔日作用,3周后处死小鼠;青蒿素+pJAK2多肽组应用pJAK2多肽[100 μmol/(L·kg)]隔日作用3次后,再联合青蒿素隔日作用3周,处死小鼠;分离肿瘤组织,Western blot检测肿瘤组织Caspase 3的表达,免疫荧光检测组织中p-JAK2及p-STAT3的表达.结果 成功构建小鼠肝癌模型,荷瘤小鼠经青蒿素作用后肿瘤组织Caspase 3蛋白表达显著增加(P ＜0.001).同时免疫荧光结果显示青蒿素组肿瘤组织中的p-JAK2及p-STAT3磷酸化水平较之PBS组明显降低;荷瘤小鼠经pJAK2多肽预处理后,青蒿素诱导荷瘤小鼠表达Caspase 3显著降低(P＜0.05),差异有统计学意义.结论 青蒿素通过抑制JAK2/STAT3信号通路活化诱导肝癌细胞凋亡,进而发挥抗肿瘤作用.
关键词： 肝癌 青蒿素 JAK2/STAT3 细胞凋亡 -
蛇床子素对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用及机制研究
目的：探讨蛇床子素( Osthole,Ost)对脂多糖( Lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤的作用及其机制。方法45只雄性C57小鼠随机分为3组：正常对照组(对照组),LPS组,Ost+LPS组( Ost组),每组15只。各组小鼠于腹腔注射LPS或生理盐水(50 mg/kg)6 h后,测定PaO2、PaCO2、pH,IL-6、IL-1β、TNF-α表达,JAK2、STAT3、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达量,观察肺组织病理变化和湿干比( W/D)。结果与LPS组比较,Ost组PaCO2、W/D,IL-6、IL-1β和TNF-α表达,p-JAK2和p-STAT3蛋白表达量和肺组织病理改变均明显降低,但PaO2和pH增高,而JAK2和STAT3表达无明显变化。结论 Ost预处理可通过抑制JAK2/STAT3信号通路激活而减轻LPS诱导的急性肺损伤。
关键词： 蛇床子素 脂多糖 急性肺损伤 炎症 JAK2/STAT3 -
促红细胞生成素预处理通过抗凋亡减轻肠缺血再灌注损伤
目的 探讨促红细胞生成素( Erythropoietin,EPO)预处理对大鼠肠缺血再灌注损伤的作用及机制. 方法 24只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组( Sham组)、肠缺血再灌注损伤组( IRI组)、促红细胞生成素预处理组(EPO组),每组8只. Sham组、IRI组手术前1 h给予生理盐水(5 000 U/kg,腹腔注射),EPO组缺血前1 h给予促红细胞生成素(5 000 U/kg,腹腔注射),IRI组和EPO组采用血管夹夹闭肠系膜上动脉,置于32 ℃温箱后45 min后松开血管夹. Sham组操作同上,但不夹闭肠系膜上动脉. 再灌注1 h后处死大鼠,收集血清和小肠标本. HE 染色后观察小肠病理学形态学变化,采用 Western blot 检测 EPOR、p-EPOR、JAK2、p-JAK2、p-STAT3、STAT3、Bax、Cleavage-caspase3、Bcl-2、Caspase3. 结果 与 Sham 组比较,IRI 组病理改变及 p-EPOR、p-JAK2、p-STAT3、Bax、Cleavage-caspase3表达明显增加( P <0. 05 ),Bcl-2、Caspase3 表达减少( P <0. 05 ). 与 IRI组比较,EPO组病理改变、Cleavage-caspase3蛋白表达减少(P<0. 05),p-EPOR、p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2、Caspase3表达明显增加(P<0. 05). 结论 促红细胞生成素预处理可通过诱导JAK2/STAT3 信号通路激活而抑制凋亡,减轻肠缺血再灌注损伤.
关键词： 促红细胞生成素 肠缺血再灌注损伤 凋亡 JAK2/STAT3 -
隐丹参酮联合顺铂抗非小细胞肺癌NCI-H1975细胞JAK2/STAT3机制研究
目的 探讨隐丹参酮与顺铂联合作用于非小细胞肺癌NCI-H1975细胞具有协同抗肿瘤效应及其可能的分子机制.方法 实验分为对照组、隐丹参酮组、顺铂组及隐丹参酮和顺铂联合用药组(以下简称联合用药组),CCK-8法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术测定细胞存活率及凋亡,免疫印迹技术检测用药后凋亡蛋白、抗凋亡分子蛋白表达水平、JAK2/STAT3蛋白及其磷酸化表达水平,激光共聚焦/荧光素酶检测STAT3细胞定位和转录活性.结果 (1)在各时间点,单药组及联合用药组存活率均低于对照组(P<0. 05);与对照组及单药组相比,联合用药组在各时间点均抑制NCI-H1975细胞增殖活性(P<0. 05);(2)联合用药组作用于NCI-H1975细胞24 h后,抗凋亡蛋白Bcl-2、Survivin表达水平下降(P<0. 01),Caspase3和Caspase9活性提高(P<0. 01),p-STAT3及p-JAK2表达水平下降(P<0. 01);(3)联合用药组作用于NCI-H1975细胞后,激光共聚焦检测提示细胞核内STAT3明显减少,核内STAT3活性降低.结论 隐丹参酮联合顺铂作用于非小细胞肺癌NCI-H1975细胞能发挥协同抗肿瘤作用,其机制与抑制信号通路JAK2/STAT3磷酸化表达水平有关.
关键词： 隐丹参酮 顺铂 非小细胞肺癌 JAK2/STAT3 -
JAK2/STAT3信号通路介导原花青素抗H9C2细胞缺氧/复氧损伤
本研究旨在探讨原花青素(proanthocyanidin,Pro)抗H9C2细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的机制,明确蛋白质酪氨酸激酶2/信号传导子与激活子3 (Janus kinase 2/signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3)信号通路在此过程中的作用.取对数生长期的H9C2细胞株,随机分为5组:对照组(Con)、H/R损伤组(H/R)、Pro处理组(H/R+Pro)、JAK2小干扰RNA处理组(H/R+Pro+JAK2 siRNA)和JAK2小干扰RNA对照组(H/R+JAK2 siRNA).Pro (40 μmol/L)预处理8h,H9C2细胞系缺氧2h、复氧4h后用MTT和TUNEL法分别检测各组细胞活力和凋亡率,用试剂盒检测超氧化物生成量,用Western blot法检测JAK2/STAT3通路相关分子,氧化应激指标及内质网应激相关蛋白的表达.结果显示,与H/R组相比,Pro处理可显著提高H/R处理的H9C2细胞活力,并降低细胞凋亡率,明显上调p-JAK2及p-STAT3水平,下调氧化应激指标超氧化物生成量及gp91phox蛋白表达量,下调内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78 (glucose-regulated protein 78,GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白(CCAAT/enhancer binding protein homologous protein,CHOP)及caspase-12的表达,而Pro以上保护作用均被JAK2 siRNA所抑制.本研究结果表明,Pro可通过JAK2/STAT3信号通路减轻H/R引起的H9C2细胞氧化应激与内质网应激损伤.本研究为阐明Pro的心血管保护作用及相关药物的开发提供了实验依据.
关键词： 原花青素 缺氧/复氧损伤 JAK2/STAT3 氧化应激 内质网应激 -
慢性脑缺血大鼠rhEPO经鼻给药激活JAK2/STAT3通路及对Bcl-2和Bax表达的影响
目的 探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对大鼠慢性脑缺血后JAK2/STAT3信号传导通路的影响,以及对Bcl-2和Bax表达的影响,分析rhEPO在慢性脑缺血中可能的作用机制.方法 将60只雄性成年SD大鼠,随机分为假手术组、2VO组(双侧颈总动脉结扎模型组)、2VO+ rhEPO组、2VO+ rhEPO+ AG490(JAK2特异性拮抗剂)组、2VO+ AG490组,每组12只.各组分别腹腔注射AG490(5 mg/kg)或等量的DMSO(AG490的溶媒),30 min后鼻腔缓慢注入rhEPO(150 U/125 μl)或等量生理盐水.造模后3d给药,每周1次,共8次.给药毕24 h后取脑组织标本,HE染色观察组织形态学变化.免疫组化法检测JAK2、P-JAK2(Tyr1007 1008)、STAT3、P-STAT3(Tyr705),以及Bcl-2、Bax蛋白的表达水平.原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞数.qRT-PCR法检测Bcl-2、Bax的mR-NA表达水平.结果 (1)与假手术组比较,2VO组中P-JAK2和P-STAT3表达增强,Bcl-2、Bax的表达上调(P均＜0.05).(2)与2VO组比较,2VO+ rhEPO组P-JAK2、P-STAT3蛋白表达增强,并上调Bcl-2的表达和下调Bax的表达(P均＜0.05).(3)与2VO+ rhEPO组比较,2VO+ rhEPO+ AG490组可抑制rhEPO诱导的P-JAK2、P-STAT3表达,下调Bcl-2表达和上调Bax表达(P均＜0.05).(4)2VO+ AG490组中P-JAK2、P-STAT3、Bcl-2、Bax的表达与2VO组和2VO+ rhEPO+ AG490组比较差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 rhEPO可能通过激活JAK2/STAT3信号转导通路,促进Bcl-2上调和Bax下调,减缓慢性脑缺血大鼠神经细胞凋亡.
关键词： 重组人促红细胞生成素 JAK2/STAT3 信号转导 慢性脑缺血 Bcl-2 Bax 细胞凋亡 -
JAK2／STAT3信号转导通路在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用
目的：探讨JAK2／STAT3信号转导通路在大鼠缺血性脑损伤中的作用。方法将54只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组（ I／R组）和JAK2／STAT3通路抑制剂组（ AG组），每组18只。采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注模型。 AG组于再灌注前5 min给予AG4901 mg／kg。制模成功后对大鼠进行神经功能缺损评分，采用TTC染色测脑梗死体积，原位缺口末端标记法测定脑细胞凋亡的变化，免疫组化和Western blot检测缺血周边区脑组织caspase－3及磷酸化STAT3（ p－STAT3）表达。结果与I／R组比较，AG组神经功能缺损评分、脑梗死体积及凋亡细胞数显著降低（均P＜0．05）。与I／R组比较，假手术组、AG组caspase－3免疫阳性细胞及p－STAT3蛋白表达均显著减少（均P＜0．05）。假手术组caspase－3免疫阳性细胞显著少于AG组（ P＜0．05）。结论 JAK2／STAT3信号通路参与了大鼠脑缺血再灌注的损伤，抑制JAK2／STAT3信号通路可以减轻 caspase－3的表达和缺血灌注损伤后神经细胞凋亡，改善神经功能缺损症状。
关键词： 缺血再灌注 JAK2/STAT3 细胞凋亡 Caspase-3 -
黄连素对四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用
目的 探讨黄连素对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制.方法 30只C57小鼠,♂,随机分为对照组、CCl4组和黄连素组,每组10只.黄连素组在CCl4注射前1h腹腔注射黄连素(10 mg·kg-1),CCl4组和黄连素组腹腔注射CCl4橄榄油溶液(0.5％,5 mL·kg-1),对照组腹腔注射橄榄油溶液(0.5％,5 mL·kg-1).24 h后麻醉下处死小鼠,收集血清和肝脏标本,采用生化检测ALT和AST,HE染色后观察肝脏病理学形态,Western blot检测JAK2和STAT3,p-JAK2和p-STAT3.RT-PCR和ELISA检测炎症因子白介素-6(IL-6)和白介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达和分泌.结果 与对照组相比,CCl4组病理改变明显增加,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达量明显增加,JAK2和STAT3表达无明显变化,IL-6、IL-8和TNF-α表达和分泌明显增加.与CCl4组相比,黄连素组病理改变明显减轻,p-JAK2、p-STAT3表达明显减少,IL-6、IL-8和TNF-α表达和分泌也明显减少,但JAK2和STAT3表达仍无明显变化.结论 黄连素预处理可通过抑制JAK2/STAT3信号通路激活而减少炎症反应,从而减轻CCl4诱导的急性肝损伤.
关键词： 黄连素 四氯化碳 急性肝损伤 炎症 JAK2/STAT3 -
罗格列酮预处理减轻肠缺血再灌注损伤
目的 探讨罗格列酮(rosiglitazone,RGZ)对大鼠肠缺血再灌注损伤的作用及其机制.方法 30只SD大鼠,♂,随机分成假手术组、缺血再灌注损伤组(IRI组)和罗格列酮预处理组(RGZ组).罗格列酮预处理组在手术前1h静脉注射罗格列酮(0.3 mg·kg-1),假手术组和IRI组在手术前1h静脉注射等量生理盐水.手术分离肠系膜上动脉,通过夹闭45 min、再灌注4h诱导缺血再灌注损伤.PAS染色观察肠道黏膜病理学形态学变化,RT-PCR和ELISA检测白介素6(IL-6)、干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNF-α).Western blot检测PPAR-γ,p-PPAR-γ,JAK2,p-JAK2,STAT3和p-STAT3的表达.结果 与假手术组相比,IRI组肠黏膜损伤明显增加,ELISA和RT-PCR显示IL-6,IFN-γ和TNF-α也明显上调,Westernblot检测结果显示,表达p-PPAR-γ,p-JAK2,p-STAT3明显增加,但PPAR-γ,JAK2和STAT3无明显变化.与IRI组相比,RGZ组小肠黏膜损伤明显减少、IL-6、IFN-γ和TNF-α表达降低,但p-PPAR-γ,p-JAK2和p-STAT3表达进一步增加,而PPAR-γ,JAK2和STAT3表达差异仍无统计学意义.结论 罗格列酮预处理可通过激活JAK2/STAT3信号通路抑制炎症反应,从而减轻肠缺血再灌注损伤.
关键词： 罗格列酮 肠缺血再灌注损伤 炎症 JAK2/STAT3 -
非诺贝特预处理对肾缺血再灌注损伤小鼠的保护作用
目的 探讨非诺贝特(fenofibrate,FENO)预处理对小鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法 建立小鼠肾缺血再灌注损伤模型.24只C57BL/6小鼠,♂,随机分为3个组(n=8),分别为假手术组(Sham组)、肾缺血再灌注损伤模型组(IRI组)和非诺贝特预处理组(FENO组).Sham组、IRI组和FENO组经不同方法处理后,经PAS染色观察肾脏病理学形态学变化,Western blot检测JAK2和STAT3,p-JAK2,p-STAT3,Caspase 3表达情况.结果 与Sham组相比,IRI组血清肌酐和血尿素氮水平明显升高,病理检查可见肾脏内肾小管上皮细胞肿胀坏死变多、蛋白管型形成明显,还可观察到炎症细胞浸润增加显著;Western blot显示p-JAK2和p-STAT3,蛋白表达量均明显增加,JAK2和STAT3表达无明显变化,但Caspase 3表达显著减少.与IRI组相比,FENO组血清肌酐和血尿素氮量明显下降,肾小管上皮细胞肿胀坏死减轻,炎症细胞浸润变少、蛋白管型形成减少,p-JAK2和p-STAT3表达明显降低,Caspase 3表达增加,JAK2和STAT3表达无明显变化.结论 FENO预处理小鼠可通过抑制JAK2/STAT3信号通路的激活从而减少肾小管上皮细胞凋亡,进而减轻肾缺血再灌注损伤.
关键词： 非诺贝特 肾缺血再灌注损伤 凋亡 JAK2/STAT3 -
IL-32α抑制胰腺癌细胞上皮间质转化和侵袭转移作用机制研究
目的 观察IL-32 α作用于人胰腺癌Panc-1、AsPC-1细胞后上皮间质转化(EMT)、侵袭转移及Jak2/STAT3信号通路的改变,并探讨其可能的作用机制.方法 采用RT-PCR、Western blot及细胞免疫荧光技术,检测不同浓度IL-32α处理24h后胰腺癌Panc-1、AsPC-1细胞的EMT相关标志物(E-cadherin、Vimentin、Zeb1)、侵袭转移相关分子标志物(MMP-2、MMP-9)mRNA与蛋白以及Jak2/STAT3信号通路相关蛋白p-Jak2、Jak2、p-STAT3、STAT3的表达情况.结果 RT-PCR及Western blot均显示胰腺癌Panc-1、AsPC-1细胞中E-cadherin的mRNA与蛋白表达水平均呈IL-32α剂量依赖性上调(均P＜0.05);Vimentin、Zeb1、MMP-2及MMP-9的mRNA与蛋白表达水平均呈IL-32α剂量依赖性下调(均P＜0.05);p-Jak2、Jak2、p-STAT3的表达水平均呈IL-32 α剂量依赖性下调(均P＜0.05),STAT3无明显改变(P＞0.05).细胞免疫荧光染色显示Vimentin蛋白表达于细胞质中,且荧光强度呈IL-32 α剂量依赖性下调(均P＜0.05).结论 IL-32α在一定剂量范围内以剂量依赖性的方式抑制胰腺癌Panc-1、AsPC-1细胞的EMT和侵袭转移,可能与抑制Jak2/STAT3信号通路有关.
关键词： 上皮间质转化 金属基质蛋白酶 IL-32α JAK2/STAT3 -
miR-135a靶向调节SP1对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨miR-135a通过靶向调节SP1对人骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞增殖和凋亡的影响.方法 收集人正常成骨组织和OS组织,培养正常成骨细胞(hFOB1.19)和OS细胞(MG-63),Real-time PCR法检测miR-135a和SP1的表达,Western blot法检测SP1表达.转染miR-135a mimics和inhibitor,MTT法和BrdU-ELISA法检测OS细胞增殖变化,Western blot法检测凋亡蛋白Bax、BCL-2和Caspase 3的表达.双荧光素酶报告基因检测miR-135a与SP1的靶定关系.Western blot法检测miR-135a对OS细胞中SP1表达的影响.Western blot法检测miR-135a对OS细胞中JAK2/STAT3表达的影响.结果 OS组织和细胞中miR-135a表达均显著降低,SP1表达均显著升高.转染miR-135a mimics可降低OS细胞活性,减少BrdU阳性标记率.同时,miR-t35a mimics增加OS细胞Bax和Caspase 3的表达,减少BCL-2的表达.miR-135a mimics降低荧光素酶报告基因的荧光强度,结合位点突变后荧光素酶活性升高.上凋miR-135a显著降低SP1的表达并降低JAK2和STAT3的磷酸化水平.miR-135a inhibitor作用均与mimics相反.结论 miR-135a可通过靶向调节SP1抑制人OS细胞增殖,诱导OS细胞凋亡,并下调JAK2/STAT3活化.
关键词： 骨肿瘤 骨肉瘤 miR-135a Sp1 JAK2/STAT3
