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高效液相色谱法同时检测水飞蓟素和丹参酮
水飞蓟为菊科水飞蓟属植物,其有效成分为水飞蓟素又称西利马灵,是一类新型的具有C9 取代基的黄酮类化合物,即以二氢黄酮醇和苯丙素类衍生物缩合而成的黄酮木脂素类,主要含水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁和水飞蓟亭.丹参主要有效成分为丹参酮类化合物,包括丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮和二氢丹参酮Ⅰ.两种植物常同时在保健食品和药品中使用.我们应用高效液相色谱法同时检测丹参酮和水飞蓟素,取得了较为满意的实验结果.
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丹参酮提取物物理化学质量属性相关性分析＊
目的：探寻丹参酮提取物化学成分的含量与物理性质之间的相关性。方法：HPLC测定50批丹参酮提取物中隐丹参酮、丹参酮IIA的含量，经典方法测定物理性质，将成分含量与物理性质进行相关性分析。结果：两变量组组内的隐丹参酮与丹参酮IIA含量，D10、D50、D90之间，松装密度与振实密度，豪斯纳比率与压缩度指数均具有较强的相关性，休止角与均齐度、豪斯纳比率、压缩度指数具有一定的相关性，但相关性不强。两变量组的原始变量组间相关性系数大不超过0.400，相关性不强。经过典型相关分析，3对典型变量的相关性显著，相关系数分别为0.851，0.674，0.565。结论：对于丹参酮提取物的化学、物理质量属性，原始变量组内具有较好的相关性，但组间相关性较差。相比原始变量，典型变量呈现出了较好的组间相关性，表明丹参酮提取物的物理化学属性之间具有一定的相关性。
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中药单体治疗多囊卵巢综合征胰岛素抵抗的研究进展
多囊卵巢综合征是育龄期女性常见的内分泌紊乱性疾病，导致女性月经失调、不孕、心脑血管疾病、糖尿病、甚至肿瘤的发生，严重威胁女性及其子代的生殖健康，胰岛素抵抗是其发病机制的核心。中药单体成分改善 pCOS 胰岛素抵抗的作用机制具有多途径、多靶点的特点，表现为通过改善卵巢、卵巢外骨骼肌和脂肪组织胰岛素敏感性从而改善胰岛素抵抗，抑制炎症反应，影响脂肪因子，影响受体后糖代谢及细胞功能，但具体机制仍有待进一步研究探索。
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痹祺胶囊水提取物及其单体成分抗炎活性比较
目的:考察痹祺胶囊水提取物及其单体成分对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核/巨噬细胞株RAW 264.7炎症反应的保护作用,以确定痹祺胶囊中抗炎的主要活性成分,为质量控制标准升级提供依据.方法:利用LPS诱导RAW 264.7细胞建立体外急性炎症模型,给予痹祺胶囊水提取物及6种单体成分马钱子碱,士的宁,隐丹参酮,丹酚酸B,甘草苷,甘草酸治疗,痹祺胶囊水提取物质量浓度分别为0.25,0.5,1mg·L-1,各单体成分浓度分别为1×10-7,1×10-6,1 ×10-5 mol· L-1,治疗24 h后,采用Griess试剂法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)分别检测痹祺胶囊水提取物及各单体成分对LPS诱导RAW 264.7细胞分泌一氧化氮(N0)以及白细胞介素-6(IL-6)的影响.结果:与正常组比较,模型组RAW 264.7细胞NO,IL-6表达显著升高.与模型组比较,痹祺胶囊水提取物与隐丹参酮均能抑制NO和IL-6分泌;马钱子碱,士的宁,甘草苷和甘草酸均可抑制RAW 264.7细胞NO分泌.结论:痹祺胶囊水提取物中的主要抗炎成分是隐丹参酮,马钱子碱,士的宁.
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隐丹参酮对IGF-1促PC12细胞存活的作用及机制探讨
目的:研究隐丹参酮对类胰岛素样生长因子-1(IGF-1)促进PC12细胞存活的影响及可能机制.方法:首先采用剥夺血清造成细胞损伤模型确定IGF-1发挥促存活作用的剂量,然后不同剂量的隐丹参酮预先作用PC12细胞,再加入IGF-1处理,MTT检测隐丹参酮对IGF-1促PC12细胞存活的影响；Western blot检测隐丹参酮对IGF-t诱导其受体(1GF-IR)磷酸化及下游信号通路磷酯酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)及细胞外信号调节激酶(ERK) 1/2的影响.结果:MTT显示隐丹参酮能剂量依赖性地阻断IGF-1的促存活作用,抑制PC12细胞的增殖；Western blot结果显示IGF-1能明显诱导其受体(IGF-1R)磷酸化,而隐丹参酮则起抑制作用,并使下游Akt及ERK1/2的磷酸化水平下调,呈明显的剂量依赖性.结论:隐丹参酮可通过抑制IGF-1R及其下游信号分子Akt和ERK1/2的磷酸化,从而抑制IGF-1的促存活功能,发挥其自身抑制细胞存活,促使细胞凋亡的作用.
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双波长HPLC同时测定丹参中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA的含量
目的:建立双波长HPLC测定丹参中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA的含量的方法.方法:使用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水为流动相梯度洗脱,流速1 mL· min-1,检测波长245 nm (丹参酮Ⅰ)和269nm(隐丹参酮和丹参酮ⅡA).结果:隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA分别在各自进样量范围内与峰面积的线性关系良好,相关系数均在0.9997以上,各成分平均回收率均在98.0％ ～ 100.1％ (n =6),各成分回收率RSD均不过3.0.结论:该方法快速、准确、简便,可作为丹参中主要菲醌类成分的质控与评价方法.
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超高效液相色谱-质谱联用同时测定丹参中7种成分含量
目的:建立同时测定丹参中原儿茶醛,丹酚酸B,迷迭香酸,丹参酮Ⅰ,丹参酮ⅡA,隐丹参酮,二氢丹参酮7种成分含量的超高效液相色谱-质谱联用分析方法.方法:采用Hypersil Gold C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.9 μm),以0.1％甲酸溶液-甲醇为流动相梯度洗脱,流速0.3 mL· min-1,柱温30℃.采用电喷雾离子源(ESI),正负离子交替扫描模式,选择反应离子检测(SRM).结果:7种成分在1～460 μg·L-1有良好的线性关系,平均回收率83.41％ ～116.05％,检测限0.046～0.5μg·L1,RSD均＜4.7％.结论:该方法快捷、准确、重复性好、灵敏度高,可同时测定丹参药品中7种成分的含量,可用于丹参药材及其制剂的研究和质量控制.
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HPLC法测定丹参酮片中隐丹参酮含量
目的:探讨方法使用高效液相法测定其中隐丹参酮含量的方法.方法:用HPLC法对丹参酮片中隐丹参酮进行含量测定,并进行相关精密度、重复性、稳定性考察.结果:取丹参酮片3批样品,按上述方法分别测定,按外标法以峰面积计算样品中隐丹参酮的含量,结果分别为每片含隐丹参酮31.45,31.76,31.81 mg.结论:该方法用于考察丹参酮片中隐丹参酮含量有分离效果好、灵敏、准确等优点,可用于该产品的质量控制.
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指纹图谱法考察活络效灵丹加减方的不同提取工艺
目的:采用HPLC指纹图谱研究不同提取工艺对活络效灵丹加减方(HLXL)中化学成分变化的影响.方法:以獐牙菜苦苷、芍药苷、隐丹参酮和异欧前胡素等11个特征指纹峰为指标,采用HPLC分析测定,条件为YMC-Pack ODS-A色谱柱,流动相甲醇-水梯度洗脱,检测波长210 nm,流速0.8 mL· min-1,柱温30℃.系统考察不同溶剂(水、乙醇、丙酮)、不同提取方式(超声、回流、冷浸)及单提混合液和混提液对各特征指纹峰相对含量的影响.结果:不同工艺提取物中特征峰相对峰面积存在较大差异.溶剂种类和提取方式对HLXL成分的提取有较大影响.结论:该方法重复性、精密度、稳定性良好,可用于HLXL不同提取工艺的指纹图谱研究.
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冠心贴凝胶膏剂中丹参素等组分的经皮渗透试验
目的:探讨冠心贴凝胶膏剂中丹参素等有效组分的体外经皮渗透性能.方法:采用改良Franz扩散池法,选取生理盐水为吸收液,通过HPLC测定丹参素、阿魏酸、盐酸川芎嗪、隐丹参酮、丹参酮ⅡA等组分经大鼠皮的累积释放量和经皮渗透量,考察5种组分的经皮渗透性,色谱条件为Kromasil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),检测波长280 nm,流速1.0 mL· min-,流动相甲醇(A)-0.5％乙酸水溶液(B)进行二元线性梯度洗脱,柱温室温,进样量10μL.结果:冠心贴凝胶膏剂中各组分的累积释放量和经皮渗透量顺序为阿魏酸＞丹参素＞盐酸川芎嗪＞隐丹参酮＞丹参酮ⅡA,在24 h内各组分的累积相对经皮渗透率依次为73.09％,82.62％,82.89％,37.22％,24.80％.丹参素等5种组分经大鼠皮肤的累积释放率和累积经皮渗透率均符合Higuchi方程,相关系数均为0.999 9.结论:冠心贴凝胶膏剂中丹参素等组分具有较好的释药性能和经皮渗透性能.
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大生产中丹参提取物制备工艺优选
目的:对2010年版《中国药典》一部中丹参的2种提取物的制备工艺参数进行讨论,以便其更适应大生产的需要.方法:采用单因素试验法,以隐丹参酮、丹参酮ⅡA的含量为指标,探讨丹参酮提取物原料的前处理方法;以固含物总量、丹酚酸B含量为指标考察丹参水提的佳温度;以固含物总量、丹酚酸B含量、指纹图谱为指标确定丹参水提的原材料;运用指纹图谱技术确定丹参水提液的佳浓缩温度.结果:丹参酮提取物原料的前处理方式可由粗粉变更为切成1 ～2 cm的小段;丹参总酚酸提取物的原材料可采用丹参酮提取物的药渣,提取温度可由80 ℃修订为100℃,浓缩温度可由60℃修订为80℃.结论:优选的工艺条件稳定可行,可为丹参提取物的大生产参数修订提供实验依据.
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HPLC法测定丹参中丹参素、丹参酮ⅡA、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮的含量
目的:建立丹参中水溶性成分和脂溶性成分同时定量的方法.方法:高效液相色谱法,采用Shim-pack VP-ODS(150mm×4.6mm)C18色谱柱,以甲醇-0.5%冰醋酸溶液梯度洗脱,检测波长为281nm,柱温为35℃,流速为0.8ml/min.结果:丹参素、丹参酮ⅡA、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮回归方程的相关系数依次为0.9997,0.9997,0.9999和0.9994,四种成分精密度试验RSD＜2%,24h内稳定性试验RSD＜2%,加样回收率试验RSD＜5%.结论:通过对河南卢氏县14种丹参样品的含量进行测定,说明本方法切实可行、稳定可靠、且重现性好,为丹参的质量评价提供了依据.
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隐丹参酮通过下调CYP17基因及AR的表达改善多囊卵巢综合征高雄激素血症
目的:通过研究隐丹参酮对多囊卵巢综合征(PCOS)高雄激素血症的干预作用及可能的调控机制,为临床治疗PCOS高雄激素血症新药物的探索提供科学依据.方法:①体内实验研究隐丹参酮对PCOS高雄激素血症动物模型生殖内分泌功能的影响;②体外实验研究隐丹参酮对高雄激素血症细胞模型雄激素分泌功能的影响;③采用免疫组化及real-time PCR法对雄激素合成代谢相关酶及其编码基因进行检测.结果:隐丹参酮可以改善模型大鼠的动情周期、体质量、卵巢系数及卵巢形态,逆转大鼠血清睾酮(T),雌烯二酮(A2),促黄体生成素(LH),性结合球蛋白(SHBG)水平;抑制模型细胞株的雄激素分泌功能;其作用机制可能是通过下调CYP17基因及AR的表达实现的.结论:隐丹参酮可能具有潜在的治疗PCOS疾病的作用,值得进一步深入研究.
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卵泡膜细胞胰岛素抵抗及隐丹参酮的调控
目的:探索胰岛素抵抗的卵泡膜细胞对腺苷酸环化酶激活剂(Forskolin)的反应变化以及中药隐丹参酮对卵泡膜细胞甾体激素合成的调控作用.方法:采用猪卵巢卵泡膜细胞进行体外培养,应用渥漫青霉素(Wortmannin)诱导构建胰岛素抵抗的细胞模型,并应用隐丹参酮和Forskolin处理各组细胞,检测中药隐丹参酮和/或Forskolin作用后各组的培养液葡萄糖浓度和激素水平的变化以及胰岛素信号分子和甾体激素合成关键酶的mRNA表达变化.结果:卵泡膜细胞发生胰岛素抵抗后,睾酮(T)、孕酮(P)合成能力明显增强,17α羟化酶(CYP17)、3β -羟基甾脱氢酶(3β-HSD)、过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)、细胞色素芳香化酶(P450arom)和类固醇激素合成急性调节蛋白(STAR)的mRNA表达量增加,胰岛素抵抗卵泡膜细胞对Forskolin的生物效应反应性增强.中药隐丹参酮能够缓解卵泡膜细胞胰岛素抵抗,同时也降低了培养液中睾酮的水平和甾体激素合成酶CYP17和STAR的mRNA水平.结论:中药隐丹参酮能够降低由于卵泡膜细胞胰岛素抵抗所产生的功能异常,提示中药增敏剂可以用于多囊卵巢综合征的治疗,可以起到改善生殖功能的作用.
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RP-HPLC测定制萎扶胃丸中隐丹参酮和丹参酮ⅡA含量
目的采用反相高效液相色谱法测定制萎扶胃丸中隐丹参酮和丹参酮ⅡA 的含量。方法采用十八烷基键合硅胶柱分离隐丹参酮和丹参酮ⅡA,以乙腈-0.2%磷酸(60∶40)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长262 nm。结果隐丹参酮和丹参酮ⅡA 分别在0.0814～0.4072μg(r＝0.9997)、0.1636～0.818μg(r＝0.9995)范围内呈线性关系,平均回收率分别为99.70%(RSD＝1.37%)、99.22%(RSD＝0.94%)。结论本法简便、快速,可用于该产品的质量控制。
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羟丙基-β-环糊精对隐丹参酮的增溶作用及其包合物的制备
目的:制备隐丹参酮-环糊精包合物,提高隐丹参酮(CT)的溶出度.方法:绘制CT-羟丙基-β-环糊精(HPCD)相溶解度曲线,以确定包合比例;采用湿研磨法制备隐丹参酮-环糊精包合物;利用体外溶出度、差热分析、红外光谱等方法研究包合物的性质.结果:CT与HPCD的包合比例为1:1,CT-HPCD包合物在45 min的溶出度可达到原料药的21.6倍.结论:包合物能显著提高CT的溶出度,包合物包结作用的热力学键力是CT分子的羰基与HPCD分子的羟基形成氢键.
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均匀设计法优化超临界CO2流体萃取丹参中丹参酮工艺的研究
目的:探讨超临界CO2流体萃取法萃取丹参中丹参酮的佳工艺条件.方法:用高效液相色谱法测定丹参酮含量,以萃取物中3种丹参酮总含量为指标,采用均匀设计法对影响萃取结果的主要因素进行考察.结果:夹带剂用量对萃取结果影响为显著.佳萃取工艺参数为:萃取压力30 MPa;萃取温度40 ℃;分离釜Ⅰ压力6 MPa;分离釜Ⅰ温度50 ℃;夹带剂用量10%.结论:超临界CO2流体萃取法萃取丹参中丹参酮是一种切实可行的方法.所得萃取产物中丹参酮含量高,萃取时间短,操作简便.
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隐丹参酮对白血病细胞伊马替尼敏感性和P-糖蛋白表达作用的研究
隐丹参酮是丹参中主要的脂溶性活性化合物之一,对白血病等多种恶性肿瘤有显著的抑制作用,并可有效提高伊马替尼的化疗效果,但其发挥功能的分子机制仍未阐明.该文利用白血病细胞K562及其伊马替尼耐药株K562-R,系统研究了隐丹参酮对细胞伊马替尼的敏感性和P-糖蛋白表达的影响.利用MTT法检测隐丹参酮对伊马替尼增殖抑制功能的影响,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,Western blot检测细胞凋亡调控蛋白Caspase-3,Caspase-9,PARP的活性变化情况;梯度浓度的隐丹参酮处理细胞后,Western blot和流式细胞仪检测细胞中P-糖蛋白的表达水平变化,高效液相色谱法检测伊马替尼的胞内药物浓度的变化.结果隐丹参酮预处理后,显著增强了伊马替尼对K562和K562-R细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,细胞的促凋亡蛋白Caspase-3,Caspase-9,PARP的降解产物表达水平显著提高,与对照组相比有显著性差异(P＜0.01).而隐丹参酮对白血病细胞中P-糖蛋白表达和伊马替尼胞内药物积累没有影响.结果表明隐丹参酮可提高CML细胞对伊马替尼的化疗敏感性,其作用机制不依赖于对P-糖蛋白表达的抑制和胞内药物浓度的提高.
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丹参及其主要成分保肝作用的研究进展
丹参是临床常用的中药之一,丹参的药效物质基础主要包括脂溶性的丹参酮类和水溶性的丹酚酸类.丹参具有“祛瘀止痛,活血通经,清心除烦”等传统功效.现代药理学研究表明,丹参及其主要成分具有保护心脑血管的作用.近来研究显示,丹参及其主要成分对四氯化碳、D-氨基半乳糖、醋氨酚、酒精等制备的肝损伤模型也具有明显的保护作用.该文对丹参的保肝作用及其机制进行系统总结与展望.
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不同产地加工方法对山东丹参药材质量的影响
该文采用晒干、阴干、不同温度烘干及“发汗”处理加工丹参药材,并对切段样品和整体样品进行了晒干和阴干处理,通过测定药材中迷迭香酸、丹酚酸B、隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量,考察不同加工干燥方法及不同形式药材干燥对丹参药材质量的影响.结果表明:晒干样品中隐丹参酮、丹参酮ⅡA及迷迭香酸损失明显,但整体药材优于切段;烘干对丹参中水溶性成分影响较大,高温(80 ～ 100℃)易造成迷迭香酸和丹酚酸B的大量损失;丹参经“发汗”后,迷迭香酸含量降低,丹酚酸B无明显变化,而隐丹参酮和丹参酮ⅡA含量显著升高;阴干及低温烘干(40 ～60℃)有利于丹参中活性成分的保留,且阴干处理的切段样品与整体样品各成分含量无显著差异.因此,从各活性成分含量、节约生产成本等方面综合考虑,丹参药材的产地加工方法应以阴干或低温(40 ～60℃)烘干为宜.
