首页 > 文献资料
-
流式细胞计数测定抗孕激素对猪卵巢细胞孕酮受体的影响
为了研究抗孕激素调节卵巢功能的机理,制备了人胎盘羊膜的双池培养系统.分离猪卵巢颗粒细胞和内泡膜细胞,分别种在羊膜两侧.在加入或不加RU486和ZK98.734时,两种细胞在促性腺激素刺激下共同培养.48 h后,应用流式细胞计数(FCM)测定两种细胞的孕酮受体(PR)和雌激素受体(ER);放射免疫法测定培养液中的孕酮(P)和雌二醇(E2)浓度.结果显示,抗孕激素增加两种细胞的PR含量,ER没有明显改变;颗粒细胞的P和E2分泌受到抑制,内泡膜细胞的P分泌也减少.提示P调节P本身的合成,这种旁分泌和自分泌作用是通过P控制PR上调的途径.这可能是抗孕激素对卵泡发育和甾体激素生成功能的抑制机理之一.
-
卵泡膜细胞胰岛素抵抗及隐丹参酮的调控
目的:探索胰岛素抵抗的卵泡膜细胞对腺苷酸环化酶激活剂(Forskolin)的反应变化以及中药隐丹参酮对卵泡膜细胞甾体激素合成的调控作用.方法:采用猪卵巢卵泡膜细胞进行体外培养,应用渥漫青霉素(Wortmannin)诱导构建胰岛素抵抗的细胞模型,并应用隐丹参酮和Forskolin处理各组细胞,检测中药隐丹参酮和/或Forskolin作用后各组的培养液葡萄糖浓度和激素水平的变化以及胰岛素信号分子和甾体激素合成关键酶的mRNA表达变化.结果:卵泡膜细胞发生胰岛素抵抗后,睾酮(T)、孕酮(P)合成能力明显增强,17α羟化酶(CYP17)、3β -羟基甾脱氢酶(3β-HSD)、过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)、细胞色素芳香化酶(P450arom)和类固醇激素合成急性调节蛋白(STAR)的mRNA表达量增加,胰岛素抵抗卵泡膜细胞对Forskolin的生物效应反应性增强.中药隐丹参酮能够缓解卵泡膜细胞胰岛素抵抗,同时也降低了培养液中睾酮的水平和甾体激素合成酶CYP17和STAR的mRNA水平.结论:中药隐丹参酮能够降低由于卵泡膜细胞胰岛素抵抗所产生的功能异常,提示中药增敏剂可以用于多囊卵巢综合征的治疗,可以起到改善生殖功能的作用.
-
小檗碱和葛根素对地塞米松诱导卵泡膜细胞胰岛素抵抗的影响
目的 探索地塞米松人工诱导猪卵泡膜细胞产生胰岛素抵抗,以及中药小檗碱和葛根素对胰岛素抵抗的卵泡膜细胞功能的调控作用.方法 收集新鲜猪卵泡膜细胞进行体外培养,经地塞米松作用48 h后,检测猪卵泡膜细胞对糖利用率情况.同时采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹技术(West blotting),检测小檗碱和葛根素对卵泡膜细胞内胰岛素信号传导分子和甾体激素合成的影响,采用化学发光法测定激素水平.结果 (1)地塞米松作用48 h后细胞内[3-<'3>H]标记的葡萄糖摄取量降低约1/2;细胞上清液葡萄糖含量升高约1/3.(2)RT-PCR和West blotting结果显示:卵泡膜细胞产生胰岛素抵抗后,胰岛素受体底物-1(IRS-1)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的mRNA和蛋白表达水平下降;过氧化酶活化增生受体(PPAR)γ和细胞色素P450 17羟化酶(CYP17)的mRNA或蛋白表达水平上升.应用中药小檗碱和葛根素进一步作用48 h后,抵抗细胞内的上述胰岛素信号分子和CYP17表达明显逆转.(3)猪卵泡膜细胞产生胰岛素抵抗后,睾酮(T,mg/L)水平模型组(0.82±0.20)较对照组(0.38±0.01)升高(P<0.05),小檗碱组(0.44±0.24)和葛根素组(0.45±0.21)比模型组降低(P<0.05).血清孕酮(P)水平各组未见明显变化(P>0.05).结论 卵泡膜细胞产生胰岛素抵抗后雄激素合成能力显著增强,中药小檗碱和葛根素能降低卵泡膜细胞的胰岛素抵抗程度和雄激素合成,提示中药增敏剂对多囊卵巢综合征的治疗有开发前景.
-
中药干预对卵巢颗粒细胞分泌功能及相关因子表达影响的研究进展
颗粒细胞(granulosa cell,GC)是卵巢中一类十分重要的细胞,它位于卵母细胞透明带的外侧,通常有多层,通过缝隙连接与卵母细胞相连,在卵母细胞体内外成熟过程中起着重要的作用[1].在卵泡的生长发育过程中,作为卵泡体细胞的颗粒细胞,通过细胞间的相互作用,对卵泡膜细胞和卵母细胞的发育、成熟及其功能起重要的调控作用,进而影响卵泡的启动、发育、成熟及闭锁的全过程[2,3].近年来,围绕中药干预改善卵巢颗粒细胞分泌功能及调控相关因子表达等方面,国内许多学者进行了一些探索,笔者现将近期实验研究进展综述如下.
-
黄体生成素在辅助生殖技术促排卵周期中的应用
在女性的排卵周期中,卵泡的正常发育是由垂体分泌的卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)和黄体生成素(luteinizing hormone,LH)两种激素控制的,两者对于正常卵泡雌二醇的生物合成都很重要,也就是所谓的"两种细胞,两种促性腺激素"学说,即FSH刺激卵泡发育,LH与卵泡膜细胞上的受体结合,激发雄激素前体从膜细胞转移至颗粒细胞,并通过FSH刺激芳香酶将雄激素转变为雌激素.
-
转化生长因子α、β1体外诱导人卵泡膜细胞的凋亡及调控
近年来的研究表明，卵泡膜细胞中产生的转化生长因子β1（TGFβ1）对卵巢功能有重要的调节作用。同时，TGFβ1和TGFα的同时存在，可诱导体外无血清培养的大鼠卵泡膜细胞发生凋亡［1］。本研究旨在探讨TGFβ1和TGFα与人卵泡膜细胞凋亡的关系，以及细胞内抑制凋亡基因bcl-2表达的变化。 一、资料和方法 1．研究对象：本研究收集子宫内膜癌、子宫颈癌患者共10例，平均年龄35～50岁。将经腹部行广泛子宫切除时从切除的卵巢中切下肉眼可见的大卵泡（直径约为15 mm）26个，立即置于预冷的磷酸缓冲液中。术中切除组织冰冻切片病理检查报告，10例患者的双侧卵巢均无癌细胞转移及病理性改变。手术于月经周期的第9～14天进行。 2.试剂：TGFα、TGFβ1购自美国R&D公司；抗bcl-2多克隆抗体购自北京中山生物公司；链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组织化学（SP）染色试剂盒购自福州迈新公司。 3.卵泡膜/间质细胞的获取和培养：参照Lobb等［2］的方法进行。用胶原酶1和牛胰腺DNaseⅡ消化，于37℃、5%二氧化碳箱内培养。
-
生长分化因子-9与卵泡发育
GDF-9属于TGF-β超家族,是卵母细胞产生的一种旁分泌因子,在卵巢组织中,GDF-9特定在卵母细胞中表达.除了原始卵泡外的所有卵泡发育时期中均检测GDF-9 mRNA.已有实验表明:GDF-9可以诱导原始卵泡募集并促进初级卵泡向小窦前卵泡期过渡,能够刺激卵丘细胞膨胀和产生透明质酸,诱导分化.由于GDF-9具有潜在的诱导原始卵泡生长发动以及促进初级卵泡及以后阶段生长与分化的作用,对GDF-9的深入研究必将增进对卵泡发育的进一步了解,指导临床生殖内分泌疾病的治疗.
-
RNA干扰对雄激素合成关键酶17α-羟化酶/17,20裂解酶作用的实验研究
目的:探讨细胞色素P450 17α-羟化酶/17,20裂解酶(CYP17)小干扰RNA (siRNA)对CYP17基因表达和多囊卵巢综合征(PCOS)卵泡膜细胞雄激素合成的抑制效果.方法:合成4条靶向CYP17基因的特异性siRNA和非特异性siRNA.将0.4μg携带报告基因增强型绿色荧光蛋白和CYP17基因的质粒和siRNA共转染入HeLa细胞,荧光显微镜观察及流式细胞术检测绿色荧光蛋白的表达反映对CYP17表达的影响,筛选抑制效果佳的siRNA.卵泡膜细胞取自PCOS患者和非PCOS妇女各5例,将筛选出的佳CYP17 siRNA以佳浓度转染人卵泡膜细胞,荧光定量实时逆转录多聚酶链反应检测CYP17 mRNA的表达,并且检测培养液中CYP17作用产物雄烯二酮和前体孕酮水平.结果:siRNA 1221处理后,HeLa细胞中外源性CYP17的表达显著降低,抑制率达50%,卵泡膜细胞中CYP17 mRNA水平和雄烯二酮产生降低,但与对照组比较,统计学上无显著差异.结论:RNA干扰技术可能提供一种PCOS高雄激素基因治疗的新方法.
-
不同浓度ox-LDL对大鼠原代卵泡膜细胞增殖及激素合成相关基因LXR-α和StAR表达的影响
目的· 初步探讨ox-LDL对大鼠卵泡膜细胞增殖和雄激素合成相关基因LXR-α和StAR表达的影响.方法· 免疫组化检测大鼠卵巢组织中LXR-α的表达.体外分离培养原代大鼠卵泡膜细胞,分别用25、50、100、150、200、300和400 mg/L的ox-LDL处理,用real-time PCR检测LXR-αmRNA的变化,用MTT检测细胞活力,用Western blotting检测LXR-α和StAR蛋白的表达.结果·ox-LDL对大鼠卵泡膜细胞增殖的影响和对LXR-α和StAR表达的调控呈现浓度依赖性变化.ox-LDL刺激24 h后,低浓度的ox-LDL(25~150 mg/L)可诱导卵泡膜细胞增殖,以100 mg/L的ox-LDL对卵泡膜细胞增殖的促进作用显著.而当ox-LDL浓度继续上升,细胞存活率下降,以400 mg/L的ox-LDL对卵泡膜细胞增殖的抑制作用显著.低浓度ox-LDL(25~150 mg/L)刺激,导致LXR-αmRNA的表达升高,其中150 mg/L ox-LDL对LXR-αmRNA的表达量影响显著.高浓度ox-LDL抑制LXR-αmRNA的表达,其中400 mg/L的ox-LDL对LXR-αmRNA的表达量影响显著.150 mg/L ox-LDL促进大鼠卵泡膜细胞LXR-α和StAR蛋白的表达上升,但150 mg/L ox-LDL对StAR蛋白表达的促进作用,与对照组相比,差异没有统计学意义;而400 mg/L ox-LDL能显著抑制大鼠卵泡膜细胞LXR-α和StAR蛋白的表达.结论·低浓度的ox-LDL可诱导卵泡膜细胞增殖,促进LXR-α和StAR的表达,而高浓度ox-LDL降低细胞活力,抑制LXR-α和StAR的表达.
关键词： 卵泡膜细胞 氧化型低密度脂蛋白 增殖 肝X受体 类固醇激素合成急性调节蛋白 -
花生四烯酸对小鼠卵泡衰老的影响
目的:研究花生四烯酸(arachidonic acid,AA)对小鼠卵泡发育的影响,探讨AA与卵巢早衰的关系.方法:10％ AA饲料喂食4周龄ICR雌鼠,4个月后观察小鼠子宫卵巢重量、卵巢组织脂肪酸分析、卵巢组织学改变.结果:10％AA组与对照组相比子宫卵巢体重下降;脂肪酸分析结果显示10％AA组卵巢n-6/n-3不饱和脂肪酸比值增大;光镜下,10％AA组可见卵巢退行性黄体增多、间质纤维化、卵巢闭锁卵泡所占比例增加.结论:喂食10％AA饲料可引起小鼠卵巢衰老.
-
清化瘀热方对大鼠卵巢膜细胞增殖与分泌及相关基因表达的影响
目的 多囊卵巢综合征(PCOS)是临床常见的伴有生殖功能障碍与糖代谢异常的内分泌紊乱综合征,近年来,炎症学说成为其研究热点.方法 本文通过IL-18对卵泡膜细胞雄烯二酮、17羟孕酮的分泌及其合成相关的关键酶、雄激素活性的影响,探讨其在多囊卵巢综合征发病过程中的作用；并用清化瘀热含药血清进行干预,探讨其对该病的干预作用.结果 与对照组(0pg/mL)相比,IL-18能够促进卵泡膜细胞的增殖,促进雄烯二酮、17羟孕酮的分泌,通过Western blot及PCR结果显示,IL-18能够增加与雄烯二酮、17羟孕酮合成有关的关键酶CYP11A1,CYP17A1的表达；此外IL-18还能够促进雄激素受体蛋白的表达.通过清化瘀热含药血清作用后,卵泡膜细胞雄激素分泌降低,相关合成关键酶的活性降低,雄激素受体AR活性降低.结论 IL-18参与了慢性炎症引起的PCOS.清化瘀热含药血清干预后,能够对多囊卵巢综合征的发病有一定的干预作用.
-
核受体激素NR4A1在人卵巢周期中的表达
目的 探讨核受体激素NR4A1在人卵巢周期中的表达和定位及其在卵泡发育中的调控机理.方法 收集18例月经规则的生育年龄妇女不同周期阶段的卵巢组织,采用免疫组织化学方法研究核受体激素NR4A1在卵巢中的表达.结果 NR4A1表达定位于颗粒细胞、卵泡膜细胞、黄体细胞胞浆,在成熟卵泡中卵泡膜细胞和颗粒细胞的表达量明显高于生长卵泡(P＜0.01);NR4A1在新鲜黄体细胞中表达量高,显著高于陈旧黄体细胞的表达水平(P＜0.01).结论 NR4A1可能在人卵泡细胞生长、分化和黄体凋亡过程中起调控作用.
关键词： 核受体激素 NR4A1 卵泡膜细胞 颗粒细胞 -
核受体NR4A1蛋白在大鼠卵泡发育中的定位及其表达规律
目的:通过研究核受体NR4A1蛋白在正常雌性SD大鼠不同卵巢功能周期和不同发育阶段卵泡及黄体细胞中的表达, 推测其在卵泡发育中的生物学作用. 方法:利用阴道涂片的方法,按不同的卵巢功能周期将实验大鼠24只分为四组,采集不同时期卵巢标本,采用免疫组织化学方法观察卵巢中NR4A1蛋白的定位及其表达情况.结果:NR4A1蛋白主要表达于卵巢卵泡膜细胞和黄体细胞胞质中,且在成熟卵泡卵泡膜细胞的表达量显著高于生长卵泡(P＜0.01);在新鲜黄体细胞中表达量高,显著高于动情前期和动情期的生长卵泡和成熟卵泡以及陈旧黄体细胞中的表达水平(P＜0.01). 结论:核受体NR4A1蛋白表达与卵泡的发育、成熟、闭锁、黄体萎缩有明显的相关性.
-
卵巢硬化性间质瘤的CT和MRl诊断
卵巢硬化性间质瘤（ovarian sclerosing stromal tumor，OSST）是一种罕见的卵巢良性肿瘤，属于性索间质肿瘤中卵泡膜细胞-纤维瘤的一个亚型，发病年龄可自幼女至绝经后妇女，但以青年女性多见，30岁以下发病占75.8％[1～3]。本次研究收集了6例经手术病理证实的OSST患者资料，对其临床资料和CT、MRI表现进行回顾性分析，以期提高对该病的认识和术前诊断的准确性。
-
卵泡膜纤维瘤的MRI表现与临床、病理分析
卵泡膜纤维瘤是起源于原始性腺中的性索及间质组织的良性肿瘤,含卵泡膜细胞和纤维细胞两种成份,是较少见的卵巢良性肿瘤.MRI对盆腔肿瘤的诊断有较高价值,笔者搜集经MRI检查的27例卵泡膜纤维瘤作一回顾分析,以提高对本病的认识.
-
多囊卵巢综合征卵泡膜细胞功能的研究
多囊卵巢综合征(PCOS)是女性常见的内分泌疾病之一,影响了6%-10%的育龄期妇女,PCOS卵巢的特性是卵泡内膜过度增生,而卵泡膜细胞是PCOS患者雄激素合成过多的原始来源之一.PCOS的卵泡膜细胞中CYP11A1、CYP17、StAR、3β-HSD表达增加.PCOS卵巢雄激素过多的发病机制中存在MAPK信号通路的改变,胰岛素能调控PCOS卵泡膜细胞甾体激素的合成,因此,对于PCOS卵泡膜细胞功能的研究将有助于此疾病的病因学和治疗学的发展.
关键词： 多囊卵巢综合征(PCOS) 卵泡膜细胞 甾体激素合成
