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胚胎透明带显微操作与单卵双胎妊娠
目的 探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)后单卵双胎妊娠与胚胎透明带显微操作的关系.方法 回顾分析在我院行IVF-ET后获得临床妊娠的1,099个周期,比较行胚胎透明带显微操作(ZPM)和未经显微操作的两组患者单卵双胎(MZT)妊娠的发生率.结果 IVF-ET后临床妊娠1,099周期中,MZT16周期,发生率为1.46%,占多胎的7.6%.显微操作组临床妊娠462周期,MZT6周期,发生率为1.30%;无显微操作组临床妊娠637周期,MZT10周期,发生率为1.60%,两组无显著差异(P＞0.05).结论 单卵双胎妊娠与胚胎透明带显微操作之间无密切联系,积极控制IVF-ET的多胎妊娠可能是减少单卵双胎的有效途径.
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体外受精-胚胎移植中移植胚胎透明带厚度变量与治疗结果的相关性研究
目的:观察移植胚胎透明带厚度变量(ZPTV)对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗结果的影响.方法:在232对夫妇进行251个IVF-ET治疗周期,电脑记录移植胚胎图象,应用胚胎测量软件进行透明带厚度的测量,计算ZPTV.结果:251个周期共移植747个新鲜胚胎,获临床妊娠109例(43%).妊娠周期与非妊娠周期的平均ZPTV值分别为18.4±6.0,16.0±5.6,差异显著(P<0.005).并根据移植胚胎的平均ZP TV值>20%胚胎数目0、1、≥2个将治疗周期分为3组,其临床妊娠率分别为27%、51%、55%( P<0.005),胚胎种植率分别为13%、25%、30%(P<0.001),均随移植胚胎数增加而显著升高.年龄<35岁组,移植周期的多胎妊娠率随平均ZPTV值>20%胚胎移植数(0、1、≥2)的增加而升高(29%、34%、62%),差异有显著性(P<0.05);但年龄≥35岁组(33%、20%、29%) ,无显著差异(P<0.05),移植胚胎形态等级和各年龄段妇女中移植胚胎平均ZPTV值均无显著差异(P>0.05).结论:移植胚胎的平均ZPTV值与胚胎种植率、临床妊娠率和多胎妊娠率密切相关,平均ZPTV是衡量胚胎质量的又一重要指标.
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精子透明带结合法优选精子行卵胞浆内单精子注射临床研究
目的 探讨采用精子透明带结合法优选的精子进行卵胞浆内单精子注射(ICSI)的临床意义. 方法 选取2010年6月至2012年2月因男方因素在本中心行ICSI治疗的夫妇54个周期,随机将患者分为研究组和对照组,各27例,研究组患者采用与透明带结合的精子进行ICSI,对照组采用常规方法进行ICSI,比较两组患者的受精率、卵裂率、优胚率及着床率. 结果 研究组与对照组女方年龄、不育年限、促性腺激素(Gn)支数、MII卵母细胞数、移植胚胎数目无显著性差异(P＞0.05)；两组临床妊娠率(59.26％ vs.48.15％),研究组高于对照组,但无显著性差异(P＞0.05)；两组的受精率(82.97％ vs.81.63％)、卵裂率(96.32％ vs.96.50％)无显著性差异(P＞0.05)；优胚率(66.12％ vs.50.78％)和可利用胚胎率(75.95％vs.66.32％)均显著高于对照组(P＜0.05). 结论 通过采用患者自体卵母细胞透明带结合的方法选择精子进行ICSI可以提高胚胎质量,增加可利用胚胎的数量,有助于改善临床妊娠结局.
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人未受精MⅡ期卵冻融过程中减数分裂纺锤体及透明带的变化
目的 观察人类MII期卵母细胞冻融过程中纺锤体及透明带的变化. 方法 50例非男性因素的不育妇女,将常规体外受精后未受精的MII期卵母细胞进行慢速冷冻/快速复苏,使用Polscope系统观察冻融过程中纺锤体及透明带的变化;将复苏存活的卵母细胞分别培养1、3、5 h后观察纺锤体的变化. 结果 95枚未受精卵中52枚冷冻前和冷冻过程中均能观察到纺锤体.卵母细胞进入复苏-1液后47.8%可观察到纺锤体,后逐渐消失.46枚复苏存活卵母细胞分三组体外培养,1 h纺锤体检出率为40.8%;3 h为100.0%;5 h为88.1%,差异具统计学意义.另外,冻融前后卵母细胞透明带的双折射性也发生了改变. 结论 卵母细胞的冻融过程会引起纺锤体及透明带的损伤,卵母细胞复苏后纺锤体进行重建.复苏后培养3 h左右纺锤体的重建率高.
关键词： Polscope系统 卵子冷冻 卵子复苏 纺锤体 透明带 -
异常透明带的相关因素分析
目的 分析卵母细胞透明带发育不良的相关因素. 方法 回顾性分析2015年10月至2016年7月于北京大学深圳医院生殖医学科行IVF治疗的患者共569个周期的临床资料,按是否出现透明带发育不良分为2组:出现卵母细胞透明带发育不良为A组,217个周期;卵母细胞正常为B组,352个周期.比较两组基本资料.再按年龄和卵巢功能分组来比较促排卵、获卵与受精情况,分析临床结局. 结果 A组与B组相比,年龄[(35.4±5.6)岁vs.(34.4±5.9)岁]、基础FSH[(9.37±5.37)U/L vs.(8.52±4.00)U/L]、AMH[(3.76±5.71) ng/ml vs.(4.68±4.12) ng/ml]均有统计学差异(P＜0.05),其中年龄是透明带发育不良的暴露风险因素[OR 1.036,95%CI(1.004-1.070)](P＜0.05).再按年龄及卵巢储备功能分组后,≥35~＜40岁卵巢储备良好组中的A组与B组相比,Gn天数[(11.7±2.8)d vs.(10.3±3.4) d]、Gn用量[(44.76±16.90)U vs.(34.22±17.44) U]、MII卵数[(6.0±4.1) vs.(9.0±6.1)]均有统计学差异(P＜0.05);≥40岁卵巢储备良好组中的A组与B组相比,Gn天数[(11.4±3.9)d vs.(9.4±3.4) d]、Gn用量[(49.24±27.51)U vs.(33.96±18.08)U]、MII卵数[(3.9±2.3) vs.(5.6±4.7)]及优质胚胎率(19.2% vs.40.9%)均有统计学差异(P＜0.05). 结论 年龄是影响卵母细胞透明带发育的独立暴露危险因素,随着年龄增大(≥35岁时),当患者卵巢储备良好时,Gn用量越多、时间越长,越容易引起透明带发育不良;且透明带发育不良的出现导致该组成熟卵数显著下降,影响促排卵效率;而当年龄≥40岁卵巢储备良好时,透明带发育不良组还会出现优质胚胎率下降.
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卵巢早衰实验动物模型的建立
目的探讨以透明带抗原建立自身免疫性卵巢早衰实验模型的方法.方法分别用合成的透明带的多肽片段、完全弗氏佐剂及三蒸水免疫实验组、佐剂对照组和空白对照组小鼠,并观察小鼠的性周期,用免疫荧光法检测小鼠外周血及卵巢中抗透明带抗体,在光镜及电镜下观察小鼠卵巢的组织学改变,观察小鼠的发病情况.结果实验组有70%小鼠表现为性周期紊乱,80%外周血、70%卵巢中出现抗透明带抗体,90%小鼠出现自身免疫性卵巢炎,均与对照组差异显著(P＜0.01).结论以透明带诱导自身免疫性卵巢早衰模型的发生率高,并且方法简单,是一种很好的实验方法.
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透明带结构与受精结局的关系分析
透明带(ZP)是自初级卵泡早期阶段,由卵子和颗粒细胞共同分泌形成,由4种糖蛋白(ZP1、ZP2、ZP3、ZP4)交联形成的具有双折射性的三维网状结构.ZP糖蛋白在与精子识别及结合过程中起着重要的作用[1],精子进入质膜后激活卵,触发皮质颗粒释放,改变ZP结构,引起ZP反应从而阻滞多精子进入,保证单精子受精.
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单个胚胎、精子或细胞的保存与寄送
鉴于当今仅一个细胞即可进行聚合酶链反应(PCR)分析研究[1-4];动物或少精症患者也可通过单个精子或生精细胞用于胞质内精子注射(ICSI)获得妊娠和胎儿出生[5.6];将小鼠的精子保存在70%的乙醇中1 d[7]或将小鼠的精子经冷冻处理后再进行ICSI也可完成受精并获得后代[8-9].因此,在某些情况下贮存或发送单个胚胎、精子或细胞供进一步的研究、分析及治疗是必要的.为此,我们采用拉长的细玻璃毛细管进行了胚胎、部分分割的半透明带、单个及数个精子和体细胞贮存在玻璃毛细管中邮寄到千里之外的实验.
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短时受精与"搭桥受精"
目前体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)已经成为治疗不育症为有效的方法之一.常规的IVF是将配子在体外自然配对完成受精,受精过程与体内存在很大差异,在体内能够达到受精部位与卵子接触的精子是有限的(数十条～数百条不等),这些精子在经过女性生殖器到达卵子周围的过程经历了严格的自然选择,应是"优质"精子,而IVF缺少对精子的自然选择.
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卵子受精早期现象的初步探讨
受精是一个复杂的过程,特征表现为多个连续步骤的串联反应.主要包括精子获能,精子和卵黄膜融合,卵母细胞恢复并完成减数分裂Ⅱ及排出第二极体,精子和卵母细胞的核开始去凝集,雄性和雌性原核形成,此后不久配子融合完成.
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人精子荧光原位杂交技术与男性不育
研究人类精子染色体非整倍体是当今生殖医学领域的又一热点.早在1978年人们就用去透明带的仓鼠卵做精子穿透试验,进行精子非整倍体的研究,此项研究方法学复杂,不适合大样本量研究.近十年来应用荧光原位杂交(fluores-cence in situ hybridization,FISH)技术可以对成千上万条精子进行检测,大大促进了精子非整倍体的研究.这项技术已用于许多男性不育的非整倍体率的研究.初的研究使用单色探针,其缺陷是不能区分精子染色体二体和二倍体.双色FISH就可鉴别二体和二倍体精子,近来的研究采用多色FISH,同时对精子的多条染色体进行非整倍体的研究,能够更全面地了解非整倍体率与男性不育的关系.
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精子免疫性不孕症辨治探讨
免疫性不孕症是妇产科的疑难病症,以免疫异常导致不孕为特征.免疫异常包括精子免疫和透明带免疫等,本文仅讨论精子免疫性不孕症辨治.中医虽无此病名,但在古医籍中有"不子"、"无子"、"绝产"、"断绪"等名.笔者通过临床实践认为该病以肾虚为本,瘀血、热毒为标,治疗以益肾、活血、清热解毒为大法.
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中药干预对卵巢颗粒细胞分泌功能及相关因子表达影响的研究进展
颗粒细胞(granulosa cell,GC)是卵巢中一类十分重要的细胞,它位于卵母细胞透明带的外侧,通常有多层,通过缝隙连接与卵母细胞相连,在卵母细胞体内外成熟过程中起着重要的作用[1].在卵泡的生长发育过程中,作为卵泡体细胞的颗粒细胞,通过细胞间的相互作用,对卵泡膜细胞和卵母细胞的发育、成熟及其功能起重要的调控作用,进而影响卵泡的启动、发育、成熟及闭锁的全过程[2,3].近年来,围绕中药干预改善卵巢颗粒细胞分泌功能及调控相关因子表达等方面,国内许多学者进行了一些探索,笔者现将近期实验研究进展综述如下.
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补肾健脾方对免疫性卵巢功能衰退小鼠性激素及卵子质量的影响
目的 探讨补肾健脾方治疗卵巢储备功能减退的可能作用机理.方法 60只小鼠随机分为空白组、模型组、倍美力组和补肾健脾方高、中、低剂量组,每组10只.除空白组外,其余各组建立免疫性卵巢功能衰退小鼠模型.于造模后1周开始补肾健脾方低、中、高剂量组分别给予浓度为0.54、1.08、2.16 g/ml的补肾健脾方灌胃,每次0.3ml,倍美力组给予倍美力片溶液(浓度0.002 mg/ml)0.3ml灌胃,空白组和模型组均予生理盐水0.3ml灌胃,连续90天,每周休息1天.测定各组小鼠血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)水平,测量卵巢重量并进行卵巢组织HE染色,计数卵母细胞数目,电镜下观察卵巢组织形态学改变.结果 与正常组比较,模型组小鼠血清FSH、LH水平明显升高,E2水平明显降低,卵巢重量降低,卵母细胞数减少(P＜0.01).与模型组比较,补肾健脾方高剂量组与倍美力组均能降低血清LH与FSH水平,升高E2水平,提高卵巢重量和卵母细胞数(P＜0.01).电镜显示,模型组小鼠的卵母细胞透明带厚度不均匀,边界不清晰,可见到髓样小体和许多微绒毛;补肾健脾方高剂量组和倍美力组小鼠的卵母细胞透明带厚度比较均匀,边界也比较清晰.结论 补肾健脾方可调节卵巢储备功能下降小鼠的生殖激素水平,提高卵子数量与质量,可能是其治疗卵巢储备功能减退的作用机理之一.
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去透明带方法的选择对小鼠早期胚胎体外培养的影响
目的 探讨去透明带方法的选择对小鼠早期胚胎体外培养的影响.方法 用孕马血清促性腺激素(PMSG)与人绒毛促性腺激素(hCG)对小鼠进行超数排卵后,取单细胞阶段受精卵,将其分为酸性台式液去透明带组(台式液组)、0.5％链霉蛋白酶去透明带组(链霉蛋白酶组)以及未去透明带组.体外培养,分别观察三组单细胞受精卵分裂为2-细胞受精卵的卵裂率.结果 台式液组、链霉蛋白酶组与未去透明带组的第一次卵裂率分别为65.1％、66.7％、66.1％,三组之间比较差异无统计学意义(0.950＞P＞0.900).结论 在体外培养条件下,用酸性台式液去透明带与0.5％链霉蛋白酶去透明带后受精卵均能进行正常分裂,此两种处理方法对受精卵早期发育均没有影响.
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1例射频消融术中急性心包填塞的急救护理
2012年2月,1例室上性心动过速患者在我院行射频消融术,术中并发急性心包填塞,经积极抢救和护理,效果满意,现报告如下.1病历简介患者,女,75岁,反复心悸5年余,于2012年1月确诊为阵发性室上性心动过速,2012年2月20日入院,行射频消融治疗.电生理检查为左侧旁道所致折返.但在送消融导管跨入主动脉瓣进入左心室时出现困难,在反复试送约10min时患者突然出现血压下降(80/50 mmHg),立即透视心脏,显示心影外侧搏动消失,搏动出现于心影内并可见随心脏搏动的半环状透明带,心尖部明显,诊断为急性心包填塞.立即给予多巴胺等血管活性药物并快速补液治疗.
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激光在生殖医学中的应用进展
随着显微激光医学和辅助生殖技术的发展,透明带激光孵化设备的问世,使激光用于生殖医学已成为现实.根据激光的传输形式,分为接触式和非接触式激光.接触式激光是通过玻璃纤维管输送激光至目标;非接触式激光是通过显微镜或水传播,直接作用于靶组织.两种方式的激光,均无热效应或突变效应.非接触式激光系统具有简洁、轻巧、适合各种显微镜的特点,是目前临床上使用多的系统.激光在生殖医学应用的初期,主要是用于辅助孵化(assisted hatching,AH),其机理是通过局部蛋白基质的光吸收作用,使胚胎透明带气化、溶解.由于使用激光具有控制精确、操作快速、安全等特点,近年来,被迅速用于生殖医学方面.本文就激光在生殖医学的应用进展,综述如下.
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三维透明带部分切割辅助胚胎孵化在助孕治疗中的应用
目前体外受精-胚胎移植(IVF-ET)植入失败率较高.有资料显示,在失败的病例中接近50%的胚胎发育是正常的,失败原因之一是透明带失去弹性、增厚或变硬,使胚胎不能从透明带中孵出.三维透明带部分切割(3D-PZD)法辅助孵化在国外已有文献报道[1],现将我们应用情况报道如下.
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齿轮状透明带卵母细胞受精失败分析
目的:研究齿轮状透明带卵母细胞的受精、胚胎发育和临床妊娠结局.方法:选取2010年1月至2016年12月在湖北医药学院附属人民医院生殖医学中心就诊且由于齿轮状透明带卵母细胞导致IVF治疗周期中完全受精失败的12例不孕患者和透明带形态正常治疗周期完全受精失败的82例患者为研究对象.将前者12例患者设为实验组,后者82例患者设为对照组.分析比较两组患者年龄、不孕类型、不孕年限、促排卵时间、Gn总用量、HCG日E2和LH水平、获卵数、MII卵数、卵裂率、优胚率、胚胎种植率、临床妊娠率等.结果:实验组患者ICSI受精率稍低于对照组ICSI受精率,其差异无统计学意义;实验组第5天囊胚形成率明显低于对照组第5天囊胚形成率,其差异具有统计学意义;其余各项指标两组差异均无统计学意义.结论:这类齿轮状透明带形态的卵母细胞常规体外受精会导致受精失败,早期识别此类卵母细胞并进行及时的补救ICSI,可以改善临床妊娠结局.
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男性不育与现代辅助生殖技术
辅助生殖技术概述辅助生殖技术是指运用医学技术和方法对配子、合子、胚胎进行人工操作,以达到受孕目的的技术.辅助生殖技术包括人工授精、体外受精-胚胎移植及各种衍生技术.1890年,人工授精首次被应用于临床.直至1907年,辅助生殖技术临床研究与基础研究工作才逐步深入开展起来.1978年,世界第一例体外受精婴儿Louise Brown在英国奥姆德总医院诞生,从此开启了辅助生殖技术新时代.时隔10年,我国大陆第一例试管婴儿诞生.目前,配子移植技术、显微镜下透明带钻孔技术、透明带部分切除、透明带下受精和单精子卵细胞浆内注射、配子和胚胎冻融技术、植入前遗传学诊断等技术也逐渐成熟并广泛应用于临床.
