两种人类体外受精实验室培养液质控方法敏感性的比较

目的探讨两种人类体外受精实验培养系统对培养液质量控制的敏感性差别.方法应用小鼠2-细胞胚胎发育实验(MEA)和人精子体外存活实验(HSMA),分别对人类体外受精实验使用培养液进行质量检测,检测结果进行χ2分析.结果2-细胞MEA组,检测20个批次的培养液中,合格10个批次,合格率为50%;相同培养液在HSMA中,合格率为80%;两者比较有显著性差异(P＜0.05).结论2-细胞MEA对人类体外受精实验室培养液中胚胎毒性物质的敏感性显著高于HSMA,MEA更适合于对培养液进行质量控制检测.

三种人精子优化方法对精子参数及获能比较研究

优化处理精子是决定卵细胞受精率高低，受精卵卵裂好坏的前提［1］，而提高精子体外活动能力又是精子能否具有受精能力的重要指标，精子在体外培养基中孵育一段时间后，充分获能才具有受精能力。本研究观察3种方法优化精子及精子在体外获能过程，探讨在体外受精(IVF)胚胎移植(ET)过程中较合适的精子处理方法。

苯扎溴铵对人精子线粒体功能的影响

苯扎溴铵(benzalkonium bromide,BKB)是一种常用的消毒防腐剂,现广泛用于皮肤、粘膜和手术器械的消毒.由于其具有较大的表面张力,对细胞膜具有破坏作用,而且具有较强的杀菌作用,因此本研究考虑将其开发为新型的杀精剂用于节育领域.

咖啡因对平阳霉素诱发人精子染色体畸变的影响

[目的] 探讨咖啡因对平阳霉素诱发人精子染色体畸变的影响.[方法] 人精子经平阳霉素(pinyangmycin,PYM)处理与去透明带地鼠卵受精,受精1 h 后加入咖啡因(caffeine,CAF)后处理,继而制备染色体进行核型分析.实验分为对照、CAF、PYM、PYM+CAF 4个组.[结果] CAF组、PYM组和PYM+CAF组染色体结构畸变精子率依次为27%、40%、76%;断裂均数依次为0.72、1.92、4.36上述各组参数均高于空白对照组(8.0%、0.14),差异有非常显著意义(P<0.01).与CAF组和PYM组比较,PYM+CAF组诱发的染色体型和染色单体型畸变均明显增加,以染色单体型增加更为明显(P<0.01).[结论] 咖啡因可诱发人精子染色体畸变,并有效地增强PYM对人精子染色体的诱变效应.

低温冷冻和孵育对人精子氧化应激水平的影响

目的:探讨低温冷冻和孵育对人精子氧化应激水平的影响.方法:60份精液,每份分成5份分别列入5组(处理前对照组、低温冷冻空白实验组、低温冷冻样本组、孵育空白实验组和孵育样本组).以晚期氧化蛋白产物(AOPP)为蛋白氧化指标,丙二醛(MDA)为脂质过氧化指标,用分光光度法分别检测AOPP和MDA的水平.结果:低温冷冻样本组MDA水平明显高于处理前对照组和低温冷冻空白实验组(P＜0.05),但AOPP水平无明显差异(P＞0.05).孵育样本组AOPP和MDA水平均高于处理前对照组、孵育空白实验组及低温冷冻样本组 (P＜0.05).结论:精子的低温冷冻和孵育,均存在氧化应激损伤.低温冷冻主要造成精子的脂质过氧化损伤,孵育可致精子的脂质过氧化损伤和蛋白氧化损伤.

人精子荧光原位杂交技术与男性不育

研究人类精子染色体非整倍体是当今生殖医学领域的又一热点.早在1978年人们就用去透明带的仓鼠卵做精子穿透试验,进行精子非整倍体的研究,此项研究方法学复杂,不适合大样本量研究.近十年来应用荧光原位杂交(fluores-cence in situ hybridization,FISH)技术可以对成千上万条精子进行检测,大大促进了精子非整倍体的研究.这项技术已用于许多男性不育的非整倍体率的研究.初的研究使用单色探针,其缺陷是不能区分精子染色体二体和二倍体.双色FISH就可鉴别二体和二倍体精子,近来的研究采用多色FISH,同时对精子的多条染色体进行非整倍体的研究,能够更全面地了解非整倍体率与男性不育的关系.

白芸豆植物凝集素对不同物种精子的凝集作用与抗孕效果研究

目的:观察和比较自白芸豆中提取的植物凝集素(PHA)对人、小鼠、牛、山羊和兔精子的凝集作用和整体给药的避孕和抗早孕作用.方法:体外实验中,在精液中加入不同浓度的PHA,对使不同物种精子发生凝集作用影响因素进行观察,高浓度PHA制动的精子用相应获能液洗涤后复苏;在体内实验中,对交配见阴栓后的雌鼠于不同时间一次性经阴道给予PHA;另外不同时间间隔对正常性周期小鼠多次给予PHA观察其避孕效果.结果:体外实验结果表明,人、小鼠和牛的精子在低浓度PHA(15.6～125μg/ml)作用下30 min就完全发生凝集,但不会致死,不同物种的精子凝集方式有所不同.凝集后的精子可以在窜温下(22±7℃)存活7～12h.而≥250 μg/ml的高浓度PHA会使这5种精子完全制动并发生不可逆致死.并且在低pH值时,精子存活时间明显缩短.体内实验结果表明经阴道给予PHA具有抗早孕的效果;每天经阴道给予PHA具有100%的避孕效果.结论:在体外实验中,云南大白芸豆植物凝集素具有广泛的精子凝集作用;在体实验证明PHA可有效用于避孕和抗早孕,因此PHA有可能开发成为具有外用避孕作用的药物.

"名人精子"也选秀?

近日,某女性杂志和某大型门户网站先后发布了"受女人欢迎精子"的排行榜,香港艺人刘德华、超级富豪比尔·盖茨、政治名人普京领衔前三甲.随后,该榜单被各大网站及媒体相继转载,"名人精子排名"一时成为公众关注的热点新闻.

抗人精子甘露糖受体抗血清对精子穿透实验的影响

目的 研究人精子甘露糖受体(MR)在精卵融合中的作用.方法 用亲合层析法分离纯化的人精子甘露糖受体来免疫Balb/c小鼠得到抗MR抗血清;用抗血清处理顶体反应后的人精子,并进行去透明带金黄地鼠卵的精子穿透实验(SPA),观察其体外受精情况.结果 抗MR抗血清可抑制人精子与去透明带金黄地鼠卵的结合与穿透,使卵子的受精率下降,具剂量依赖性.结论 人精子MR与精卵膜的识别与融合有关.

亚甲蓝对精子运动及质膜完整性的影响

体外研究发现亚甲蓝( methylene blue,MB)会抑制人精子的活力[1].为进一步研究MB对精子的毒性作用,我们通过低剂量MB与人精子共孵育2h的体外实验以及高剂量MB连续灌服大鼠14 d的在体实验,观察MB对精子生成、精子活力以及精子质膜完整性的影响.

菟丝子保护人精子冻存的初步研究

目的 中医具有完整的理论体系和大量的临床经验及有效药物,并在实践中证明确有成效.设想能利用中医理论指导,在中药中进行筛选精子冻存保护剂,不仅对辅助生殖具有重要意义,而且对发展现代中医,向多领域渗透以及对不育症患者都具有重要实用价值.方法 采用配对比较的实验方法.先通过预试验,选择相对较好的菟丝子液的浓度,为了减少多因素对实验的影响,保护液以甘油为主,并以三过蒸馏水、生理盐水、菟丝子水提浓缩液进行配置,保护液中的甘油含量均为14%,以是否含有菟丝子液区分为对照组与实验组保护液.并对数据结果进行统计,用配对t检验分析.结果 根据24份精液标本的检测数据,用SPSS软件进行配对组间分析,对两组精液标本的精子活率(a+b+c)进行统计比较,t=2.68,P＜0.01,具有显著统计学差异;对两组精液标本的精子活力(a+b)进行统计比较,t=2.45,P＜0.05,具有统计学差异.结论 根据研究的统计结果,表明菟丝子在保护精子免受冷冻损伤方面具有一定的应用价值,既可以提高冻存后精子的整体活率(P＜0.01),也可以增强精子冻存后的活力(P＜0.05).本实验为中医药与精子冻存相结合的广泛研究,提供了可行性事例;开创了中医与辅助生殖之间新的结合点.

081 Janus激酶/信号转导蛋白和转录激活蛋白家族在人精子的表达与活性

超声波对人精子单倍染色体的影响

采用人精子染色体离体测试系统,研究超声波对人精子单倍染色体的影响.受精前分别受黑自超声波照射10分、30分、60分和彩色多普勒照射10分、30分、60分的精子与正常组精子染色体核型比较,各组间结构畸变精子率、结构畸变率、断裂均数和性别比等参数差异不显著(P值>0.05),各组结构畸变主要为无着丝粒断片和染色体断裂,未发现稳定畸变.在空间峰值时间平均强度(I-SPTA)相差15倍(369 mw/cm2: 24 mw/cm2)的情况下染色体畸变率无明显升高,提示I-SPTA<369mw/cm2的超声波对人精子是安全的.

降钙素对人精子体外获能的影响

近年来,人类的精液质量明显下降,男性不育的发生率有增加趋势,而相关基础研究明显滞后[1],严重地阻碍了临床诊治水平的提高,男性不育成为一个迫切需要深入研究的问题[2],而精子的获能与活动能力是其受精能力的一个重要体现,绝大多数的男性不育患者表现为精子难以获能及活力低下.

荧光染色法分析17β-雌二醇对获能人精子细胞顶体反应及细胞外Ca2+和蛋白激酶C抑制剂的影响

目的:精子细胞功能受雌激素的调节,雌激素能促进精子蛋白酪氨酸磷酸化、获能和顶体反应,从而增强精子的受精能力.但有关雌激素诱导精子细胞发生顶体反应的信号途径尚未阐明.本实验于体外观察雌激素对人精子细胞顶体反应的影响,并初步探讨其可能的作用途径.方法:实验于2006-07/2007-04在成都医学院科研中心实验室完成.实验材料:实验所用49份精液标本来自年龄25～45岁、有正常生育史、身体健康的成年男性志愿者,其精液常规各项指标符合WHO制定的正常精液常规标准.实验方法:①应用FITC-PSA荧光染色法分析精子顶体反应率,以分光光度比色法测定顶体酶活性,观察雌激素类活性物质17β-雌二醇对获能人精子细胞顶体反应和顶体酶活性的影响.②取9份上游后精子细胞悬液,每份均分为2份,分别用含钙获能液(1 mmol/LCa2+)和无钙获能液(0 mmol/L Ca2+)调整密度.再将2份精子悬液均分为17β-雌二醇作用组和对照组,观察胞外钙离子对17β-雌二醇诱导顶体反应的影响.③取9份获能精子细胞悬液,每份均分为17β-雌二醇作用组、蛋白激酶C抑制剂作用组、17β-雌二醇+蛋白激酶C抑制剂作用组和空白对照组,观察蛋白激酶C抑制剂对17β-雌二醇诱导顶体反应的影响.④取10份获能精子细胞悬液,每份均分为17β-雌二醇作用组、雌二醇-牛血清白蛋白交联作用组和空白对照组.观察非透膜性大分子物质雌二醇-牛血清白蛋白交联物对人精子细胞顶体反应的影响.⑤采用流式细胞术检测精子膜雌激素受体,以初步探讨雌激素对人精子细胞顶体反应影响的作用途径.结果:①17β-雌二醇可促进精子细胞顶体反应,并增强精子细胞顶体酶的活性.②去除培养液中的Ca2+后,17β-雌二醇不能诱导精子细胞发生顶体反应.③蛋白激酶C抑制剂能明显降低17β-雌二醇所诱导的顶体反应.④雌二醇-牛血清白蛋白交联物亦能够促进精子细胞发生顶体反应,其作用与游离雌二醇无明显差异.⑤流式细胞仪检测显示,E2-BSA-FITC(异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白-雌二醇复合物)处理组和BSA-FITC(异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白)对照组间荧光强度均值差异有统计学意义.结论:雌激素对人精子细胞顶体反应有一定的促进作用,其作用途径之一可能是通过增强精子顶体酶活性来实现,此过程涉及了胞外Ca2+、蛋白激酶C及精子膜上的雌激素受体或雌激素结合位点的参与.

含雌激素的冷冻保护液对人精子冻贮效果的影响比较

[目的]探讨雌激素在各种冷冻保护液中对冻融后精子功能的影响.[方法]将正常人精液在4种不同冷冻保护液中进行冻贮.①单一甘油型冷冻保护液.②单一甘油型+雌激素冷冻保护液.③甘油混合型冷冻保护液.④甘油混合型+雌激素冷冻保护液.通过速冻法液氮冷冻24 h后对照分析精子功能.[结果]①单一甘油型+雌激素冷冻保护液在精液冻融后精子的复苏率及活力较单一甘油型有明显提高(P<0.05).②甘油混合型+雌激素冷冻保护液在精液冻融后精子的复苏率及活力较甘油混合型有明显提高(P<0.05).[结论] 雌激素加入人精液冷冻保护液中有提高精子功能的作用.

乙肝病毒基因经生殖细胞垂直传递研究进展

乙型肝炎是危害人类健康的全球性疾病.大量研究表明,乙肝病毒(HBV)基因能够整合到人精子基因组中;携带HBV的人精子能正常地完成受精过程;受精后,由人精子带人胚胎细胞中的HBV基因能够复制和表达.它可能造成的严重后果是:①成为HBV经生殖细胞垂直传播新途径;②HBV基因整合到宿主配子基因组可增加配子染色体的不稳定性,进而诱发配子染色体畸变,导致流产、死产和出生缺陷率增加;③随着胚胎发育和个体生长,潜藏在宿主基因组中的HBV基因有可能增加肝细胞肿瘤发生的风险.

IL-1对冷冻复温人精子顶体反应的影响

目的研究复温温度和白细胞介素-1(IL-1)对冷冻精子复温后存活率和顶体反应率的影响.方法采用精液速冻法,不同浓度IL-1作用于解冻后的精液,以三色染色法检测顶体反应率.结果对冻融精子37℃水浴复温效果优于41℃,10ng/ml、50ng/ml IL-1可减少精子存活率和顶体反应率.结论一定剂量IL-1可降低精子存活率和顶体反应率,可能是由于IL-1可使Na+-K+-ATP酶活性降低,而对丙二醛(MDA)无影响.

人血清白蛋白对人两类异常精液的精子优选

目的本文采用人血清白蛋白柱下游法对19例患者精液液化不良精子及19例精子凝集现象精液精子进行体外优选处理.方法洗涤后精子在含7.5%人血清白蛋白的Eark's液中下游.结果两种情况精子优选后精子活动率及a、b级前向运动精子百分率显著提高,精子畸形率显著下降,并有良好的活动精子回收率.结论人血清白蛋白柱下游法,方法简便稳定,效果良好.